胆管癌组织中层粘连蛋白及67KDa层粘连蛋白受体的表达及其临床意义

目的探讨层粘连蛋白及67KDa层粘连蛋白受体的表达与胆管癌临床病理学行为的关系。方法应用S-P免疫组化法对52例人胆管癌组织中层粘连蛋白及67KDa层粘连蛋白受体的表达水平进行研究。结果层粘连蛋白及67KDa层粘连蛋白受体的高表达与胆管癌淋巴结转移呈明显相关,层粘连蛋白及67KDa层粘连蛋白受体阳性肿瘤淋巴结转移率(83%,55%)明显高于层粘连蛋白及67KDa层粘连蛋白受体阴性肿瘤(15%,20%,P<0.05),且层粘连蛋白及67KDa层粘连蛋白受体的表达与胆管癌组织学类型、分化程度亦存在明显相关(P<0.05)。结论层粘连蛋白及67KDa层粘连蛋白受体的表达在胆管癌淋巴结转移中起协同作用。

肝癌细胞67kDa层粘连蛋白受体的表达

背景与目的:本实验室最近发现人肝癌细胞SMMC-7721表达的67kDa层粘连蛋白受体(67kDaLamininreceptor,67LR)与层粘连蛋白的结合能力明显高于正常肝细胞L-02表达的67LR,而67LR在肝癌细胞和正常肝细胞中的表达水平尚不清楚。本研究旨在探讨67LR在肝癌细胞中的表达,及其与层粘连蛋白结合能力的关系。方法:以人肝癌细胞SMMC-7721、HepG2和正常肝细胞L-02为材料,采用131I标记的层粘连蛋白测定其与细胞的结合能力;采用流式细胞术和RT-PCR分析67LR蛋白和mRNA的表达水平。结果:(1)相同条件下SMMC-7721、HepG2细胞与层粘连蛋白特异结合量分别为(17.54±0.49)ng/105cell、(11.18±0.53)ng/105cell,而L-02细胞的特异结合量为(8.36±0.48)ng/105cell,表明肝癌细胞与层粘连蛋白的结合能力明显高于正常肝细胞(P<0.01);(2)流式细胞术分析,SMMC-7721细胞的67LR阳性表达率为34.7%,L-02细胞的67LR阳性表达率为55.3%,而HepG2细胞则几乎不表达67LR;(3)RT-PCR产物进行半定量分析发现,两株肝癌细胞的67LRmRNA表达水平明显高于L-02细胞。结论:肝癌细胞与层粘连蛋白的结合能力明显高于正常肝细胞L-02,而细胞膜表面的67LR水平却低于L-02细胞,提示SMMC-7721细胞67LR的亲和力可能高于L-02细胞,而且还涉及其它层粘连蛋白受体。

67kDa层粘连蛋白受体在胆囊癌中的表达及意义

目的:研究6 7kDa层粘连蛋白受体(6 7LR)在胆囊癌中的表达情况与其生物学行为之间的关系。方法:应用免疫组织化学SP法检测4 0例胆囊癌、2 1例慢性胆囊炎及9例胆囊腺瘤组织中6 7LR的表达。结果:胆囊癌组织中6 7LR阳性表达率为5 2 .5 0 % ,明显高于慢性胆囊炎(P <0 .0 1) ,而与胆囊腺瘤差异无显著性(P >0 .0 5 )。6 7LR阳性表达率淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者(P <0 .0 0 5 )。结论:6 7LR可能在促进胆囊腺瘤恶变以及胆囊癌细胞获得浸润。

67kD层粘连蛋白受体的克隆、表达及其对肝癌细胞侵袭能力的影响

探讨细胞膜表面 6 7kD层粘连蛋白受体 (6 7kDlamininreceptor ,6 7LR)在肝癌细胞侵袭转移中的作用 ,从肝癌细胞中提取RNA ,通过RT PCR扩增 6 7LR的前体——— 37kD层粘连蛋白受体前体(37kDlamininreceptorprecursor,37LRP)基因并定向克隆到真核表达载体pcDNA3.1 myc His(- )A ,采用脂质体将重组质粒转染到HepG2肝癌细胞中 ,通过G4 1 8筛选和RT PCR、流式细胞术鉴定 ,获得了细胞膜表面 6 7LR高表达 (阳性率为 6 9.2 % )和低表达 (阳性率为 1 1 .7% )的细胞克隆 ,采用体外细胞侵袭实验测定不同细胞的侵袭能力 ,发现膜表面 6 7LR高表达的细胞侵袭能力明显高于低表达及不表达细胞 ,说明 6

SMMC-7721肝癌细胞67kD层粘连蛋白受体的分离纯化

分离纯化肝癌细胞的 6 7kD层粘连蛋白受体 (6 7LR) ,以便进一步研究 6 7LR的结构、功能及其在肝癌浸润、转移过程中的作用 .以SMMC 772 1肝癌细胞和L 0 2正常肝细胞为材料 ,采用13 1I标记的层粘连蛋白测定其与细胞的结合能力 ;亲和层析法分离纯化层粘连蛋白受体 ,用SDS PAGE、放射自显影及体外竞争结合实验进行鉴定 .在相同条件下SMMC 772 1肝癌细胞与层粘连蛋白特异结合量为 17 5 4± 0 4 9ng 10 5细胞 ,而L 0 2正常肝细胞与层粘连蛋白的特异结合量为 8 36± 0 4 8ng 10 5细胞 .经过亲和层析 ,从SMMC 772 1肝癌细胞和L 0 2正常肝细胞均可获得纯化受体 ,SDS PAGE显示为单一条带 ,分子量为 6 7kD ,放射自显影及体外竞争结合实验表明其具有较强的与层粘连蛋白结合的活性 .体外竞争结合实验表明 ,SMMC 772 1肝癌细胞层粘连蛋白受体 (772 1LnR)的抑制率可达到 96 2 7± 2 2 9% ,而L 0 2正常肝细胞层粘连蛋白受体 (L 0 2LnR)的抑制率为 4 8 71± 3 79% ,这说明 772 1LnR与层粘连蛋白的亲和力明显高于L 0 2LnR(P <0 0 0 1) .结果表明 ,与L 0 2肝细胞比较 ,SMMC 772 1肝癌细胞具有与层粘连蛋白较强结合能力的特异受体 ,并从肝癌细胞膜上分离纯化到与层粘连蛋白有较强亲和力的 6

67kD层粘连蛋白受体对HepG2细胞增殖的影响

目的探讨67kD层粘连蛋白受体(67LR)与肝癌细胞生长增殖的关系。方法流式细胞术检测67LR转染的HepG2细胞稳定株细胞膜表面67LR的表达,采用CCK-8试剂盒测定细胞生长曲线,将不同细胞接种于裸鼠皮下,观察其成瘤能力的差异,采用免疫组织化学分析细胞增殖核抗原Ki-67的表达。结果67LR高表达的HepG2细胞株其细胞增殖速度明显降低,从第2d开始有明显差异(P<0.01,n=3),在裸鼠体内成瘤能力下降,瘤体平均质量仅为对照组的35.7%,为67LR低表达组的42.9%(P<0.01,n=10)。移植瘤的Ki-67表达明显减少。结论67LR可以降低肝癌细胞的生长增殖。

肝癌细胞67kD层粘连蛋白受体N-糖链结构与功能的变化

探讨肝癌细胞与正常肝细胞 6 7kD层粘连蛋白受体 (6 7LR)N 糖链结构与功能的差异 .采用流式细胞术检测SMMC 772 1肝癌细胞和L 0 2正常肝细胞膜表面 6 7LR的表达 ,并分别从这 2株细胞分离纯化到高亲和力的 6 7LR ,利用凝集素结合分析其糖链结构 ,并用肽 N 糖苷酶水解N 糖链 ,观察糖链在与层粘连蛋白结合过程中的作用 .结果发现 ,L 0 2细胞膜表面 6 7LR表达的阳性率为5 5 3% ,而SMMC 772 1细胞为 34.7% ,这两株细胞 6 7LR与伴刀豆素 (ConA)的结合能力无显著差异 ,但SMMC 772 1细胞的 6 7LR与麦胚凝集素的结合能力明显高于L 0 2细胞的 6 7LR ,说明 2株细胞 6 7LR的糖链结构存在显著差异 .当N 糖链被切除后 ,SMMC 772 1细胞的 6 7LR与层粘连蛋白的结合能力明显下降 ,而L 0 2细胞则没有变化 .这些资料表明 ,SMMC 772 1肝癌细胞和L 0 2正常肝细胞与层粘连蛋白结合能力的差别 ,以及两株细胞的 6 7LR与层粘连蛋白结合能力的不同 ,很可能是由于这两株细胞的层粘连蛋白受体的N

67kD层粘连蛋白受体在三种卵巢癌细胞株中表达的研究

目的检测三种不同来源卵巢癌细胞株中67kD层粘连蛋白受体(67kD LN-R)的表达,探讨其在卵巢癌侵袭转移中的作用。方法体外培养腹水来源的人卵巢癌细胞株HRA、SKOV 3及性实体瘤来源的人卵巢腺癌细胞株3AO。以免疫组化和逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测各细胞株中67kD LN-R蛋白表达及其mRNA水平。结果三种细胞的胞膜及胞浆中67kD LN-R蛋白均呈阳性表达,但HRA、SKOV 3明显强于3AO细胞,差异有显著性(P均<0.05);HRA、SKOV 3均可见明显的474bp的67kD LN-R特异性条带,其mRNA分别为1.156、1.081;3AO特异性条带极弱,其mRNA为0.358;前两者与后者相比,差异有显著性(P均<0.05)。结论67kD LN-R在卵巢癌侵袭转移中发挥重要作用。

人67KDa层连蛋白受体前体蛋白的基因克隆、表达及其免疫原性

［摘 要］目的 克隆、表达人67KDa层连蛋白受体前体蛋白（67KDa laminin receptor precursor，LRP）并检测其免疫原性。方法 应用RT－PCR从胃癌细胞9GC7901中扩增编码LRP的cDNA，将其按照T-A克隆法重组入pUCm－T载体并进行DNA序列测定。采用DNA重组技术构建原核表达载体pQE30-LRPP；用M15/pQE系统表达6×组氨酸与 LRP的融合蛋白，并以 SDS－PAGE和Western blot鉴定所获融合蛋白。用含融合蛋白的聚丙烯酸胺凝胶颗粒免疫小鼠，以 Westem blot检测小鼠血清的抗体活性。结果 DNA测序结果证实所扩增的cDNA片段与 LRP的基因序列完全相符。SDS－PAGE检测显示，经IPTG诱导2h后，M15/pQE30－LRP总蛋白中出现一条34KDa的新生蛋白带，Western blot进一步证实该新生蛋白为融合蛋白。其免疫小鼠血清经 Western blot检测仅识别SGC7901细胞中一条大小约为42KDa的蛋白带；其血清即使被稀释2000倍，仍然显示与靶蛋白有较强的结合活性。结论 成功地克隆、表达了人LRP，并具有良好的免疫原性。

人喉鳞癌细胞67-KD层粘连蛋白受体的表达

目的观察 6 7-KD层粘连蛋白受体 (6 7-KDlamininreceptor,6 7-KDLN -R)在人喉鳞癌细胞中的表达情况 ,并分析其表达与临床病理特征间的关系。 方法采用免疫组化SP方法检测 30例喉鳞癌原发灶和其中的 3例颈淋巴结转移灶石蜡标本中 6 7-KDLN -R的表达。 结果 6 7-KDLN -R在喉鳞癌原发灶中的阳性率为5 6 .7% (1 7/ 30 )。转移淋巴结的免疫反应结果与原发部位的免疫反应结果相一致。 6 7-KDLN -R的表达与肿瘤的分化程度密切相关 ,分化差者其表达水平更高 (P <0 .0 5 )。与无颈淋巴结转移的喉鳞癌细胞相比 ,有颈淋巴结转移喉鳞癌细胞 6 7-KDLN -R的表达水平更高 (P <0 .0 5 )。 结论 6 7-KDLN -R在喉鳞癌分化、增殖、浸润及转移中起重要作用。

MMP-9和层粘连蛋白受体在乳腺癌组织中的表达及其与转移和预后的关系

背景与目的:以往对乳腺癌细胞外基质与肿瘤转移及患者预后之间关系的研究尚少,且结论不一。本研究探讨乳腺癌组织中基质金属蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)及层粘连蛋白受体(lamininreceptor,LM-R)表达与肿瘤转移及患者预后的关系。方法:应用免疫组化方法检测80例乳腺癌组织及10例乳腺增生病组织中MMP-9、LM-R的表达,并用计算机图像分析系统测定表达的吸光度值。采用t检验、方差分析及相关分析方法分析它们与肿瘤转移和患者预后的关系。结果:乳腺癌组织中MMP-9表达显著高于乳腺增生病(t=8.87,P<0.05);在乳腺增生病组织中,LM-R表达于基底膜及部分腺泡和导管的腔缘,在乳腺癌组织中表达于细胞质及胞膜;17例癌间质血管基底膜有LM-R表达的癌组织中,LM-R表达高于血管基底膜无LM-R表达组(t=2.02,P<0.05);LM-R表达与组织学分级有关,分化低者,表达水平高(F=3.27,P<0.05);MMP-9及LM-R表达均与淋巴结转移有关,它们在有3个以上淋巴结转移组的表达低于3个以下及无转移组(tMMP-9=3.42,tLM-R=4.31,P<0.05),原发灶与转移灶的表达呈正相关(rMMP-9=0.654,rLM-R=0.755,P<0.001);MMP-9与孕激素受体负相关性(r=-0.363,P<0.05);MMP-9与LM-R之间呈正相关(r=0.503,P<0.01)。

胆管癌细胞层粘连蛋白受体表达下调对蛋白水解酶MMP-2、MMP-9 mRNA表达的影响

研究层粘连蛋白受体 (lamininreceptor,LNR)反义寡核苷酸硫代修饰片段 (AS OD)对人胆管癌QBC939细胞MMP 2、MMP 9基因表达的调节。应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法分析 12 μmol/L浓度的LNRAS OD在作用 72h后对QBC939细胞MMP 2、MMP 9mRNA表达水平的影响。结果显示 ,LNRAS OD能明显抑制人胆管癌细胞表达MMP 2、MMP 9的作用 ,与正常对照相比 ,其MMP 2、MMP 9mRNA相对丰度分别下降了 33 2 %和 2 3 9% (P <0 0 5 )。研究表明 ,LNRAS OD是胆管癌细胞表达MMP 2和MMP 9基因的调节剂 ,能抑制胆管癌细胞MMP 2、MMP 9基因的表达。

层粘连蛋白及其受体在人正常绒毛、葡萄胎组织中的表达及意义

目的 探讨层粘连蛋白 (LN) ,层粘连蛋白受体 (LN R)与葡萄胎发生的关系。方法 采用免疫组织化学方法 ,观察正常人胚胎早期绒毛、葡萄胎组织中LN、LN R的表达情况。结果 LN在正常绒毛组织、葡萄胎组织基底膜着色呈连续线状 ,其表达与妊娠周数有关 ,随着妊娠周数的增加LN的表达呈下降趋势。正常绒毛组织、葡萄胎组织中LN R的表达位于上皮组织细胞膜上 ,呈阳性包绕状 ,且在偏离基底膜细胞表面着色较深。结论 推测LN R在细胞膜表面的分布可反映细胞的生长、浸润的方向 ,葡萄胎组织中LN、LN R的表达在研究葡萄胎发病机制上有一定的参考价值。

层粘连蛋白受体单克隆抗体对人肺癌细胞形态、粘着及铺展的影响

应用体外细胞培养，观察了层粘连蛋白受体单克隆抗体（ＭｃＢ＿１）加入培养液或预处理人肺巨细胞癌（ＰＧ）和肺腺癌（ＰＡａ）后某些生物学行为的改变。在体外ＭｃＢ＿１预孵育可抑制ＰＧ和ＰＡａ在层粘连蛋白基质上的粘着和铺展。培养液中加入ＭｃＢ＿１经扫描电镜观察，ＭｃＢ＿１明显改变该两种细胞的表面形态。说明层粘连蛋白受体在肿瘤浸润和转移中可能起重要作用。层粘连蛋白受体单克隆抗体在阻断肿瘤转移的发生上可能具有应用价值。

层粘连蛋白受体及微血管密度与甲状腺癌转移的关系

目的 探讨微血管密度 (MVD)层粘连蛋白受体(L N- R)表达水平及其与甲状腺癌转移的关系。方法 采用免疫组织化学 SP法检测 33例原发性甲状腺癌中 L N - R的表达及 MVD计数。结果 33例原发性甲状腺癌中 L N- R表达阳性者 19例 ,表达率为 5 7.6 %。在有转移的 14例甲状腺癌中 12例 L N - R表达阳性 ,表达率为 85 .7%。在无转移的19例中 ,L N- R表达阳性者 7例 ,表达率为 36 .8%。在有转移的甲状腺癌中 L N- R阳性表达率明显高于无转移的甲状腺癌 (P<0 .0 0 1)。MVD计数在有淋巴结转移的甲状腺癌中为 88.6 9± 18.2 6 ,在无转移的甲状腺癌中为 31.18± 14.42 ,后者 MVD计数明显低于前者 (P<0 .0 0 1)。在无淋巴结转移的甲状腺癌中 L N- R表达阳性者的 MVD计数为 43.16±10 .71,明显高于 L N- R表达阴性者 (P<0 .0 5 )。结论 L N- R表达及 MVD计数与甲状腺癌的侵袭转移有关 。

层粘连蛋白及其受体在妊娠滋养细胞肿瘤中的表达及意义

目的 了解葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒毛膜癌组织中层粘连蛋白(L N )及其受体(L N - R)的表达,并探讨L N、L N - R与妊娠滋养细胞肿瘤(GTT)侵袭和转移的关系。方法 以4 4例恶性GTT为研究组,2 4例葡萄胎为对照组,采用免疫组化方法对两组患者首次清宫标本组织进行L N,L N- R检测。结果 L N在绒毛膜癌组织中临床分期越晚,表达率越高,其表达与绒毛膜癌细胞的浸润转移以及恶性程度有一定关系。结论 化疗对L N、L N- R在妊娠滋养细胞肿瘤中的表达有一定的影响,推测L N和L N- R在妊娠滋养细胞肿瘤抗侵袭和转移治疗方面具有潜在的应用价值。

绝经后女性盆底脏器脱垂患者阴道前壁组织中层粘连蛋白、胶原蛋白及雌激素受体的表达

目的研究绝经后女性盆底脏器脱垂患者阴道前壁组织中层粘连蛋白(LN)、胶原蛋白及雌激素受体(ER)的表达。方法选择2016年1月至2018年12月于上海市嘉定区妇幼保健院因绝经后盆底脏器脱垂行阴式全子宫切除术+阴道壁修补术的40例患者作为观察组;另选择同期因其他子宫良性病变行阴式子宫全切术的40例患者作为对照组。术前采用酶联免疫吸附试验检测2组患者血清LN水平;术中取2组患者阴道前壁组织,采用荧光定量聚合酶链反应法检测LN mRNA表达,采用免疫组织化学法检测LN、胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ及ER表达。结果术前,观察组与对照组患者血清LN水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。观察组患者阴道前壁组织中LN mRNA的相对表达量显著低于对照组(P<0.05)。观察组和对照组患者阴道前壁组织中LN阳性表达率分别为12.5%(5/40)、27.5%(11/40),观察组患者阴道前壁组织中LN阳性表达率显著低于对照组(χ2=45.262,P<0.01)。观察组患者阴道前壁组织中胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ及ER表达评分均显著低于对照组(P<0.05)。结论LN、胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ及ER在绝经后女性盆底脏器脱垂患者阴道前壁组织中的表达降低,推测绝经后女性盆底脏器脱垂与以上因素有关。

层粘连蛋白受体及其在肿瘤转移中的作用

本文重点介绍近几年来国内外有关层粘连蛋白受体的研究进展:层粘连蛋白受体的分离纯化及理化性质;它在正常细胞中的功能,尤其是在癌转移中的作用。