67LR、MMP-7和TIMP-1在食管鳞癌组织中的表达及其意义

目的检测67 kD层粘连蛋白受体(67LR)、基质金属蛋白酶-7(MMP-7)和基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)蛋白在食管鳞癌组织中的表达,并探讨其临床病理学意义。方法应用免疫组化SP法检测56例食管鳞癌组织和26例非典型增生食管黏膜组织、23例正常食管黏膜组织中67LR、MMP-7和TIMP-1的表达,分析其与食管鳞癌的浸润深度、淋巴结转移的关系及其相关性。结果①癌组织和癌旁非典型组织中67LR、MMP-7和TIMP-1的表达均高于正常食管黏膜上皮组织(P<0.01);②侵及黏膜下、浅肌层、深肌层和外膜的食管鳞癌组织中,67LR蛋白阳性率组间差异无显著性(P>0.05);MMP-7蛋白表达率依次增高,组间差异有显著性(P<0.01);TIMP-1蛋白阳性率依次降低,组间差异有显著性(P<0.05)。③伴有淋巴结转移和无淋巴结转移的两组食管鳞癌组织间,67LR、MMP-7和TIMP-1蛋白阳性率之间差异均有显著性(P<0.05或P<0.01)。④在食管鳞癌组织中,67LR的表达与MMP-7呈正相关、与TIMP-1呈负相关(P<0.05);MMP-7的表达与TIMP-1无相关性(P>0.05)。结论①67LR、MMP-7、TIMP-1异常表达可能参与食管鳞癌的发生发展过程。②MMP-7、TIMP-1异常表达与食管鳞癌浸润有关,而67LR异常表达与食管鳞癌浸润无关。③67LR、MMP-7、TIMP-1异常表达与食管鳞癌淋巴结转移有关。④67LR、MMP-7、TIMP-1在食管鳞癌的发生发展及浸润、转移过程中可能起协同作用,联合检测其变化可预测食管鳞癌的恶性生物学行为。

胃癌组织中67LR和半乳糖凝集素3基因mRNA的表达

目的:探讨67000层黏连蛋白受体(67LR)mRNA和半乳糖凝集素3(galectin-3)mRNA在胃癌组织中的表达及意义。方法:采用原位杂交方法检测78例胃癌组织中67LR和galectin-3mRNA的表达情况。结果:胃癌组织中67LR、galectin-3mRNA阳性率分别为60.3%(47/78)、83.3%(65/78),高于正常胃黏膜组织中的20.0%(4/20)、25.0%(5/20)(χ2分别为10.336,26.592,P均<0.01)。胃癌组织中67LR、galectin-3mRNA的阳性表达与患者的年龄、性别、Lauren分型无关(P均>0.05);67LRmRNA的表达与胃癌组织分化程度有关(χ2=7.770,P<0.05),而galectin-3mRNA的表达与胃癌组织分化程度无关(χ2=1.505,P>0.05);在有淋巴结转移的癌组织中2者表达均增高(χ2=7.595,11.440,P<0.01);随浸润深度的增加和PTNM分期的升高,2者表达均增强(67LR:χ2=11.153、12.747;galectin-3:χ2=10.986、11.440,P均<0.01)。胃癌组织中67LR mRNA与galectin-3mRNA表达存在正相关(r=0.260,P<0.05)。结论:胃癌组织中67LR及galectin-3的表达可能在基因转录水平已经上调,2个基因可能参与了胃癌的发生、发展,与胃癌的侵袭、转移密切相关。

胃腺癌组织中67LR的蛋白表达及其意义

目的:探讨67LR蛋白在胃腺癌组织中的表达及其意义。方法:采用免疫组化SP法检测46例胃腺癌组织及其切端正常胃黏膜组织中67LR的蛋白表达。结果:正常胃黏膜组织及胃腺癌组织中67LR蛋白的阳性表达率分别为21.74%(10/46)和71.74%(33/46),2者相比,差异有显著性(P<0.01)。淋巴结转移组67LR蛋白的阳性表达率为92.00%(23/25),无淋巴结转移组其阳性表达率为66.67%(14/21),2组相比,差异有显著性(P<0.05)。结论:67LR蛋白的异常表达与胃腺癌的发生、发展及转移有关。

层连蛋白受体67LR在胶质瘤细胞增殖中作用的研究

脑胶质瘤是颅内常见恶性肿瘤,常规的治疗手段很难将其完全治愈。67 kD层连蛋白受体(67 kDlaminin receptor,67LR)属于高亲和,非整联蛋白家族成员,试验表明,该蛋白在许多癌细胞表面过量表达,并且其表达水平与肿瘤细胞的粘附、增殖、分化、迁移、信号转导及转移能力密切相关。本试验利用shRNA干扰、RT-PCR、免疫细胞化学和MTT等技术通过下调67LR基因的表达来探讨其在胶质瘤细胞中的表达情况,及其对胶质瘤细胞增殖能力的影响。结果发现,相对于正常脑组织,67LR在脑胶质瘤细胞表面大量表达。采用shRNA下调其表达后发现胶质瘤细胞的增殖能力明显降低。结果表明,67LR在胶质瘤细胞表面的过表达与此细胞的增殖能力呈明显相关。

胃癌组织中层黏连蛋白受体67LR和半乳糖凝集素-3蛋白的表达

目的:了解胃癌组织中67000层黏连蛋白受体(67LR)和半乳糖凝集素-3(Galectin-3)蛋白的表达情况。方法:用免疫组织化学SP法检测82例胃癌组织和20例胃癌手术远端切缘正常胃组织中67LR蛋白和Galectin-3蛋白的表达,并分析其与胃癌患者临床病理特征的关系。结果:胃癌组织中67LR蛋白的阳性表达率为59.8%,Galectin-3蛋白的阳性表达率为84.1%,均高于相应的正常胃黏膜组织中的阳性表达率(30.0%和35.0%)。胃癌组织中67LR与Galectin-3蛋白的阳性表达率与患者的年龄、性别、Lauren分型无关;67LR蛋白的阳性表达率与胃癌的组织分化程度有关(P<0.05),Galectin-3蛋白的阳性表达率与胃癌的组织分化程度无关;有淋巴结转移的癌组织中两者的阳性表达率均高于无淋巴结转移组(P<0.05);随着肿瘤浸润深度的增加,两者的阳性表达率均明显增高(P<0.05)。胃癌组织中67LR与Galectin-3的表达呈正相关(P<0.05)。结论:67LR及Galectin-3蛋白阳性表达率与胃癌的侵袭、转移密切相关。

67LR的结构和功能及其与表没食子儿茶素没食子酸酯的相互作用

相对分子质量为67 000的层粘连蛋白受体(67LR)是一种细胞外基质的非整合素型表面受体,在肿瘤细胞中表达明显高于正常细胞。它是由一种小分子多肽——相对分子质量为37 000的层粘连蛋白受体前体(37LRP)通过脂肪酸乙酰化转变而来。67LR广泛参与肿瘤细胞的生长、转移、侵袭和凋亡过程,不仅是层粘连蛋白的受体,还可作为其他多种病毒和朊蛋白的受体。67LR是表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)主要的膜表面受体,EGCG通过与67LR相互作用调控Toll样受体、MAPK和NF-κB等信号转导通路,对肿瘤的生长、转移抑制以及促凋亡有显著作用。文章综述了近年来关于67LR及其与EGCG相互作用机制的研究进展。

EGCG对舌鳞癌细胞CAL-27的EGFR、67LR及VEGF表达的影响

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对舌鳞癌细胞CAL-27的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、相对分子质量为67 000的层粘连蛋白受体(67 000 dalton lamininreceptor,67LR)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor receptor,VEGF)表达的影响,从而揭示EGCG抑致舌鳞癌细胞增殖的可能机制。方法:不同浓度EGCG处理CAL-27细胞24h后,MTT法检测细胞增殖活性;RealTime PCR法和Western Blot法分别检测CAL-27细胞EGFR、67LR、VEGF的mRNA及蛋白表达情况;Western Blot法检测磷酸化EGFR(p-EGFR)的蛋白表达水平。结果:EGCG浓度依赖性抑制CAL-27细胞的增殖,且抑制其EGFR、67LR、VEGF的mRNA和蛋白、p-EGFR的蛋白表达。结论:EGCG能影响EGFR、67LR及VEGF的转录和翻译水平以及p-EGFR蛋白表达,这可能是EGCG抑制舌鳞癌细胞CAL-27增殖的重要机制。

下调67LR对U251细胞系增殖的影响和对MAPK信号通路的作用

目的针对67LR设计高效的shRNA干扰质粒研究其对胶质瘤细胞增殖的影响以及对MAPK信号通路的作用,深入探讨67LR蛋白在胶质瘤细胞中的作用。方法首先对脑胶质瘤细胞系U251进行培养与转染,再进行细胞增殖检测实验,并使用Quantitative real-time PCR测定mRNA的表达量;使用Western blot检测67LR对MAPK信号通路中蛋白的影响。结果当转染下调67LR蛋白的干扰质粒48 h后,恶性胶质瘤细胞系U251增殖能力显著减弱,与对照组细胞的增殖能力存在显著差异。qRT-PCR结果显示,下调67LR的表达,导致U251细胞中MKPs变化,并且不同类MKPs的变化情况不一致。Western blot实验结果表明在脑胶质瘤细胞U251中,下调67LR的表达,导致磷酸化ERK1/2的表达下降;67LR对PI3K-m TOR信号通路没有影响。MMP-2是67LR的一个靶基因,在U251细胞系中,MMP-2参与了由67LR介导的信号转导通路。结论在脑胶质瘤细胞系U251中,下调67LR的表达会引起MMP-2表达的下降,表明MMP-2是67LR的一个靶基因,在U251细胞系中,MMP-2参与了由67LR介导的信号转导通路。

Cr^(3+)与EGCG共同作用对牙龈成纤维细胞67LR和EGFR表达的影响

目的:分析表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)与Cr3+共同作用,对牙龈成纤维细胞(HGF)的EGCG受体67LR和表皮生长因子受体(EGFR)的影响。方法:EGCG与Cr3+共同作用牙龈成纤维细胞24 h后,用Real-time PCR法检测mRNA表达,运用Western印迹法分析蛋白表达。结果:EGCG能抑制HGF细胞表面受体67LR mRNA以及蛋白水平的表达,加入Cr3+后减弱了EGCG对细胞67LR mRNA和蛋白的影响。EGCG作用24 h能降低EGFR mRNA和蛋白的表达,Cr3+(<200μmol/L)会减弱EGCG抑制EGFR的作用。结论:EGCG能降低HGF细胞67LR和EGFR的表达。加入Cr3+后对细胞67LR无明显影响,但降低细胞EGFR的表达。

人67kD层粘连蛋白受体在毕赤酵母中的表达及活性分析

为实现人67kD层粘连蛋白受体(Human 67kD Laminin Receptor,67LR)蛋白的分泌表达,采用DNA重组技术将67LR cDNA片段插入分泌型酵母表达载体pPIC9K中,构建了相应的重组表达质粒pPIC9K-67LR并在GS115毕赤酵母菌株中表达,每升培养基经亲和层析可纯化目的蛋白12.56mg。纯化的目标蛋白能够与肺癌A549细胞竞争性结合其配体分子LN-1,具有相应的生物学活性,从而为深入研究人67LR的结构与功能奠定了基础。

全反式维甲酸对U251细胞系增殖和MAPK信号通路的影响

目的探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)对U251细胞系增殖和MAPK信号通路的影响。方法使用不同浓度的ATRA溶液对脑胶质瘤细胞U251进行孵育,检测ATRA对U251细胞增殖的影响,并通过qRT-PCR与Western blot方法检测MKPs与MAPK信号通路中各蛋白的变化。结果与对照组相比,ATRA可以有效的抑制脑胶质瘤细胞U251的增殖,并且具有浓度依赖性。qRT-PCR结果显示,采用不同浓度ATRA孵育48h后,MKPs mRNA的表达发生改变,但是MKP-5变化情况与下调67LR表达时不同,说明2种方法对MAPK信号通路作用的主要区别是对MKP-5的调控。Western blot实验结果表明,ATRA孵育48h后,MAPK信号通路中各蛋白的磷酸化发生变化,说明ATRA通过控制MAPK信号通路中蛋白的磷酸化程度对U251细胞系进行调控。结论维甲酸通过与不同的维甲酸受体相结合,发挥其生理作用,对脑胶质瘤细胞U251进行调控。ATRA可通过降低磷酸化ERK1/2的表达来抑制肿瘤的增殖,且能调控3种蛋白的磷酸化,说明MAPK信号通路在肿瘤增殖过程中发挥重要作用。

层黏连蛋白受体参与缺氧诱导胃癌多药耐药的机制研究

目的:研究缺氧对胃癌细胞对于化疗药物敏感性的影响以及层黏连蛋白受体在缺氧诱导的胃癌MDR中的作用和分子机制。方法:MTT比色法、Annexin V/PI染色法和阿霉素的蓄积和潴留实验检测胃癌细胞在缺氧和常氧状态下对化疗药物敏感性的差异;Western blot和半定量RT-PCR检测缺氧条件下胃癌细胞中67Kda层黏连蛋白受体(67Kda laminin receptor,67LR)的表达;Western blot、半定量RT-PCR方法检测缺氧条件下胃癌细胞系SGC7901中67LR的表达和活性;利用siRNA干涉67LR的表达,MTT比色法、AnnexinV/PI染色法检测缺氧条件下调下胃癌细胞系67LR的表达对化疗药物敏感性的影响。结果:缺氧能够显著降低胃癌细胞对化疗药物的敏感性,以及化疗药物诱导的凋亡和药物在细胞内的潴留和蓄积;缺氧能够显著上调67LR的表达和转录活性;67LR siRNA能够抑制LR的表达;抑制67LR的表达能够显著逆转缺氧诱导的胃癌的MDR表型。结论:缺氧能够增加胃癌细胞对于化疗药物的抵抗,通过上调67LR表达,加剧了缺氧诱导的胃癌多药耐药表型,抑制67LR的表达能够逆转缺氧诱导的胃癌多药耐药的发生。

日本发现茶多酚抗癌中介蛋白质

日本九州大学研究生院立花宏文副教授于3月中旬发现了绿茶的主要活性成分--EGCG发挥抗癌作用的中介蛋白质,对于开发治疗癌症新药具有一定帮助.