胃癌组织TGF-β1、Smad7与ki-67mRNA表达及其相关性分析

目的:探讨TGF-β1、Smad7与ki-67 mRNA在胃癌中的表达及其相关性。方法:手术切除经病理证实为胃癌组织标本60例,正常胃组织20例,采用RT-PCR技术检测TGF-β1 mRNA、Smad7 mRNA和ki-67mRNA表达水平。结果:TGF-β1、Smad7和ki-67 mRNA在正常胃组织中的相对含量均低于胃癌组织中的表达(P<0.05);三者在高中分化胃癌组织的相对含量均低于低分化胃癌组织(P<0.05);TGF-β1 mRNA、Smad7mRNA和ki-67 mRNA在无淋巴结转移者的表达低于有淋巴结转移者;TNM分期:Ⅰ+Ⅱ期的表达低于Ⅲ+Ⅳ期(P<0.05);TGF-β1 mRNA、Smad7 mRNA、ki-67 mRNA三者在胃癌中的表达经直线相关分析显示呈正相关。结论:TGF-β1、Smad7与ki-67 mRNA的表达与胃癌的发生、发展及分化程度密切相关。

定量检测HCMV pp67 mRNA快速诊断人巨细胞病毒活动性感染

目的 建立实时荧光定量逆转录PCR（Real time RT-qPCR）方法,检测外周血中人巨细胞病毒（HCMV）pp67mR-NA的拷贝数,用于临床快速诊断HCMV活动性感染。方法采用RT-qPCR测定86份癌症患者外周血标本中的HC-MVpp67mRNA拷贝数,并与HCMVpp65抗原血症检测及HCMV分离培养的实验结果进行比较。结果 86例癌症患者中,HCMV病毒分离检测阳性率3.49%（3例）;实时荧光定量RT-PCR检测阳性率17.44%（15例）,灵敏度为100%,特异性为85.54%;HCMV pp65抗原血症检测阳性率为10.47%（9例）,灵敏度为66.7%,特异度为92.8%。两者比较差异有统计学意义（P〈0.05）。通过受试者工作特征（ROC）曲线分析,RT-qPCR检测每2×105个外周血白细胞中HCMV拷贝数的截断点值为201.5;此病毒拷贝数可作为诊断HCMV活动性感染的参考阈值。结论 应用RT-qPCR检测HCMV活动性感染,灵敏度高、特异性好;并能够为抗病毒治疗供重要的参考依据。

更昔洛韦治疗婴儿人巨细胞病毒感染的预后评估指标的探讨

目的探讨IE mRNA和pp67 mRNA在更昔洛韦治疗后的人巨细胞病毒(HCMV)感染患儿中的表达情况。方法在接受更昔洛韦治疗前,治疗2周和停药4周时检测HCMV患儿总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL);丙氨酸转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)及荧光定量PCR的方法检测HCMV-DNA拷贝数,IE mRNA和pp67 mRNA的表达采用实时荧光定量PCR法进行检测。结果更昔洛韦治疗2周后,患儿肝功能及血HCMV-DNA均较治疗前降低,停药4周后TBIL、DBIL、ALT、ALP及HCMV-DNA拷贝数均较治疗前显著降低,但是与治疗2周比较差异无统计学意义。治疗后2周,仍有12例患儿血液中表达pp67 mRNA,表达量显著低于治疗前的pp67mRNA表达量,但检测不到患儿表达IE mRNA。停药4周,pp67 mRNA阳性表达的患儿数量显著低于治疗2周的患儿数量,有3例患儿表达微弱的IE mRNA。2个基因的mRNA表达量与治疗2周比较差异无统计学意义。结论在更昔洛韦治愈患儿,HCMV-DNA检测呈现阴性时,应再进行病毒mRNA检测,对RNA表达阳性的患儿,应该加强随访与复查,预防病毒复发。

SAT法检测人巨细胞病毒pp67 mRNA在人类免疫缺陷病毒合并人巨细胞病毒感染患者临床诊疗中的价值探讨

目的探讨实时荧光核酸恒温扩增检测技术(simultaneous amplification and testing,SAT)检测人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)基质表层蛋白pp67(phosphoprotein67,pp67)mRNA在人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)合并HCMV感染患者临床诊疗中的价值。方法利用SAT技术构建检测HCMV pp67 mRNA的方法,评估SAT法检测HCMV pp67 mRNA重复性、特异性以及检测下限;收集HIV阳性HCMV活动性感染患者69例、HIV阳性HCMV非活动性/潜伏感染154例、HIV阴性HCMV非活动性/潜伏感染79例患者的血清、肺泡灌洗液、脑脊液等样本进行HCMV pp67 mRNA检测,评估特异度、灵敏度、正确率、阴性预测值、阳性预测值以及约登指数,评估HCMV pp67 mRNA在辨别HCMV活动性感染中的临床价值。结果SAT法检测HCMV pp67 mRNA的精密度(变异系数<10%)可满足临床检测要求,与其他病原体无交叉反应,特异性良好,试剂检测下限为400 copies/mL;特异度87.55%,灵敏度60.87%,正确率81.46%,阴性预测值0.88,阳性预测值0.59以及约登指数0.48;SAT法检测HCMV pp67 mRNA结果阳性率与临床诊断结果差异无统计学意义(P=0.894)。结论SAT法检测HCMV pp67 mRNA可用于HCMV活动性感染的辅助诊断。

肾移植术后巨细胞病毒感染的pp67 mRNA检测及其临床意义

目的 采用核酸基础序列扩增法 (NASBA)检测巨细胞病毒晚期mRNA基因编码的基质蛋白 pp67的表达 ,探讨pp67对肾移植术后HCMV活动性感染及指导抗病毒治疗上的作用。方法 择近期 5 0例肾移植患者进行 pp67检测并随访观察 ,与现用的CMV抗原血症法比较 ,了解pp67与HCMV活动性感染及CMV病的关系。 结果 5 0例患者中共 5例出现CMV病 ,其CMV Ag与 pp67均呈阳性 ,pp67阳性组中CMV抗原指数显著高于pp67阴性组 ,CMV Ag与pp67平均出现阳性时间无差异 ,以pp67作为抗病毒治疗指标可以明显缩短用药时间 ,pp67比CMV Ag在抗病毒治疗后更早转阴。结论 pp67更准确地反映了肾移植术后HCMV的活动性 ,能更好的指导临床抗病毒用药。