6A8 cDNA编码一种α-甘露糖苷酶

目的 探讨6A8cDNA编码的蛋白质的性质。方法 依据ConA的配体是甘露糖,而α-甘露糖苷酶的作用是修剪细胞糖蛋白聚糖中甘露糖的原理,采用细胞免疫荧光染色法以及激光共聚焦显微镜观察经转染6A8cDNA正义或反义重组表达载体后,细胞结合ConA的强弱,验证6A8cDNA编码的蛋白质是否为一种α-甘露糖苷酶。结果 COS-7细胞和人鼻咽癌细胞株CNE-2L2转染pRc/CMV-正义6A8cDNA后与ConA结合减弱,而与单抗6A8染色增强;CNE-2L2细胞转染pRc/CMV-反义6A8cDNA后,与ConA结合增强,而与单抗6A8染色减弱。结论 6A8cDNA编码的蛋白质可能为一种α-甘露糖苷酶,它可被单抗6A8识别。

转导反向6A8α-甘露糖苷酶cDNA对抗Fas抗体诱导Jurkat细胞凋亡的影响

用梯形DNA电泳与Gimsa染色研究人T细胞瘤细胞株Jurkat在转导编码人 6A8α 甘露糖苷酶基因的反向cDNA后 ,对抗Fas抗体诱导凋亡敏感性的变化 ,并用间接免疫荧光染色 (流式细胞仪 )检测细胞表面Fas分子的表达。结果表明 ,抗Fas抗体诱导细胞 2 4h后 ,野生型及转导空载载体的Jurkat细胞出现明显的梯形DNA ,两者之间无明显差异 ,但转导反向 6A8cDNA的细胞未见明显的梯形DNA。Gimsa染色结果显示转导反向 6A8cDNA的Ju rkat细胞中凋亡细胞数明显减少 ,而转导空载载体则无影响。Jurkat细胞为Fas(CD95 ,Apo 1)全阳性细胞 ,转导反向 6A8cDNA或空载载体对Fas表达阳性率与Fas表达强度无明显影响。以上结果提示 ,转导编码 6A8α 甘露糖苷酶基因的反向cDNA使人T细胞株Jurkat对抗人Fas抗体诱导的凋亡作用产生耐受。

SKW6细胞在转导6A8α-甘露糖苷酶反义cDNA后对抗Fas抗体诱导的凋亡

鉴于蛋白质糖基化的重要生物学意义，以腺相关病毒为载体，把编码 ６Ａ８ α－ 甘露糖苷酶的ｃＤＮＡ ３’端１３５８ｂｐ的反向片段转导入ＥＢ病毒转化的Ｂ细胞株ＳＫＷ６， 探讨６Ａ８ α-甘露糖苷酶表达抑制对抗Ｆａｓ抗体诱导凋亡的影响．反义６Ａ８转导成功及 表达用 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交及ＲＴ－ＰＣＲ检测， ６Ａ８ α－甘露糖苷酶表达用 Ｃｏｎ Ａ结合试验检测． Ｇｉｅｍｓａ染色， Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ染色及梯形 ＤＮＡ电泳显示， Ｆａｓ抗体能诱导 ＳＫＷ６细胞凋亡，但 ６Ａ８ α－甘露糖苷酶表达抑制的细胞对Ｆａｓ抗体诱导的凋亡发生抵抗，而转导正义 ６Ａ８ 或空载载体则无影响． ６Ａ８ α－甘露糖苷酶表达状况对 ＳＫＷ６细胞表面 Ｆａｓ分子表达没有影响．