人CXC型趋化因子受体CXCR6真核表达载体的构建及生物学功能研究

目的:克隆和构建带人CXC型趋化因子受体6(CXCR6)基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-CXCR6,分析瞬时转染CXCR6基因对人乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移能力的影响。方法:Trizol一步法抽提人外周血单个核细胞(PBMC)总RNA,RT-PCR扩增CXCR6全长基因,克隆入T载体,测序,双酶切连入真核表达载体pcDNA3.1(+),酶切鉴定。将构建好的pcDNA3.1(+)-CXCR6瞬时转染MDA-MB-231细胞,RT-PCR和Western blotting鉴定重组质粒的表达。利用微孔隔离小室检测转入人CXCR6基因的MDA-MB-231细胞的迁移能力。结果:扩增出人CXCR6基因全长,测序结果和GenBank记载完全一致,成功克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)。瞬时转染pcDNA3.1(+)-CXCR6显著增强MDA-MB-231细胞的迁移能力。结论:成功构建带有人CXCR6基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-CXCR6,为CXCR6在肿瘤学中的研究奠定基础。

CXCL16及其受体CXCR6在中重度牙周炎患者牙龈组织中的表达

目的：观察趋化因子CXCL16及其受体CXCR6在中重度牙周炎牙龈组织和健康牙龈组织中的表达及相互关系。方法：收集辽宁省人民医院口腔科门诊就诊和住院患者的牙龈组织79例,其中健康牙龈组40例,中、重度牙周炎组39例,年龄35-74岁。采用免疫组织化学染色法观察牙龈组织中CXCL16和CXCR6的阳性细胞百分率和染色强度。采用SPSS15.0软件包对数据进行统计学分析。结果：与健康牙龈组相比,CXCL16在中重度牙周炎组中的表达显著升高（P〈0.05）,CXCR6在中重度牙周炎组中的表达较健康牙龈组显著升高（P〈0.05）。经相关性分析,CXCLl6与CXCR6在中重度牙周炎患者牙龈组织中的表达呈正相关（r=0.580,P〈0.05）;而在健康牙龈组织中,两者的表达无相关性。结论：趋化因子CXCLl6及其受体CXCR6可能与牙周炎的发病有关,两者在牙周炎的发病过程中可能共同发挥作用。

CXCL16/CXCR6与炎症性疾病

多种临床疾病(包括肿瘤的发生)与炎症相关,因而趋化因子及其受体愈来愈受到广泛关注。近年有研究发现:人CXC型趋化因子配体16(CXC chemokine ligand16,CXCL16)及其受体CXC型趋化因子受体6(CXC chemokine receptor6,CXCR6)在肾炎、肺部疾患、动脉粥样硬化、冠状动脉疾病、类风湿性关节炎等多种炎症性病变组织中表达;并且,在前列腺癌、结肠癌、乳腺癌等炎症相关肿瘤的肿瘤细胞或浸润性淋巴细胞上也有表达。CXCL16通过CXCR6介导免疫细胞向病变组织趋化,影响疾病转归,甚至参与肿瘤细胞增殖或血管生成。对CX-CL16/CXCR6的深入研究,将为炎症性疾病的诊断和炎症相关肿瘤的预后提供参考。

新辅助化疗对大肠腺癌组织中的CXCL6、CXCL16表达的影响及其临床意义

目的研究分析术前术后大肠腺癌病理组织中趋化因子CXC趋化因子配体6(CXCL6)、CXC趋化因子配体16(CXCL16)差异性,探究新辅助化疗的疗效及治疗机制提供新的靶点。方法选取术前经过辅助化疗术后有完整病理的98例患者,均为大肠腺癌中分化,Duke分期均在Ⅲ期,经过新辅助化疗大肠腺癌新鲜标本30例,5例未经过新辅助化疗的大肠腺癌新鲜组织作为对照组。运用免疫组化(SP)法检测新辅助化疗患者术前术后及术后化疗反应强弱患者的病理标本中CXCL6、CXCL16表达。运用Western blot半定量分析患者中CXCL6/CXCL16的含量。分析CXCL16、CXCL6在经过新辅助化疗的大肠腺癌术前术后在癌组织及癌周组织中的表达情况以及大肠癌组织中CXCL6、CXCL16升高水平与化疗反应效果的关系。结果5年总生存率为60.00%(57/95)。随着肿瘤对新辅助化疗反应性减弱,患者5年死亡率明显升高。与管家基因蛋白甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)相比的相对灰度值统计结果显示,CXCL6和CXCL16在对照组的表达分别为(1.25±0.19)、(0.22±0.03),均低于反应中度/完全患者的(1.87±0.14)、(0.51±0.07),CXCL16在反应不良及反应轻度患者表达(0.43±0.09)高于对照组的(0.22±0.03),差异具有统计学意义(P<0.05)。CXCL16在反应不良/轻度患者的表达低于反应中度/完全患者,差异具有统计学意义(P<0.05)。术后癌组织与癌周组织中CXCL6的0、1、2级阳性率分别为(208±26)、(151±39)、(97±26)%均高于术前的(32±15)、(29±13)、(56±21)%,CXCL16的0、1、2级阳性率分别为(228±36)、(198±46)、(123±21)%均高于术前的(77±27)、(86±38)、(87±32)%,差异均具有统计学意义(P<0.05)。见表1、2。同时通过单因素方差分析(ANOVA)发现,CXCL6在新辅助化疗治疗前及治疗后不同反应患者之间比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。新辅助化疗治疗效果越好,治疗后CXCL6阳性率越高。CXCL16在新辅助化疗治疗前不同反应患者中的阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05),而CXCL16在新辅助化疗治疗后不同反应患者中的阳性率比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论大肠腺癌经过新辅助化疗后趋化因子CXCL6、CXCL16水平升高,且与化疗反应效果有关,同时由于新辅助化疗效果和患者预后(5年生存率)有明确关系,该项可能会为化疗效果检测提供新的检测指标。

乙肝病毒X蛋白可通过调控CXC趋化因子受体6表达促进肝癌细胞的侵袭和转移

目的探究乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)通过调控CXC趋化因子受体6(CXCR6)对肝癌HepG2细胞生长和凋亡的作用。方法按处理方式不同将HepG2细胞分成Control组、NC组(转染阴性对照质粒)、HBx组(转染HBx mimics)、HBx+si-CXCR6组(共转染HBx-mimics和CXCR6 siRNA)。二苯基四氮唑溴盐(MTT)、流式细胞术、Transwell实验分别检测细胞增殖、凋亡率、迁移和侵袭情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中CXCR6和HBx蛋白表达。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验。结果HBx组CXCR6、HBx蛋白表达及细胞增殖水平高于Control组和NC组[(0.49±0.05)比(0.27±0.04、0.26±0.03)、(0.59±0.05)比(0.32±0.04、0.30±0.05)、(0.96±0.07)比(0.66±0.03、0.62±0.03),t=5.951、5.732、7.304、8.195、6.823、7.495,P<0.05]。HBx+si-CXCR6组CXCR6蛋白表达及细胞增殖水平低于HBx组(0.18±0.02比0.49±0.05、0.63±0.02比0.96±0.07,t=9.971、7.851,P<0.05)。HBx组细胞增殖水平、迁移率、侵袭数高于Control组和NC组[(0.96±0.07)比(0.66±0.03)、(0.62±0.03)、(46.38±0.06)%比(20.21±0.04)%、(23.23±0.03)%、(78.53±0.06)比(36.19±0.02)、(39.18±0.03),t=7.914、7.833、628.583、614.025、1159.529、1024.361,P<0.05],细胞凋亡率低于Control组和NC组[(1.33±0.16)%比(5.84±0.11)%、(6.63±0.39)%,t=40.232、51.381,P<0.05]。HBx+si-CXCR6组细胞增殖水平、迁移率、侵袭数低于HBx组[(0.63±0.02)比(0.96±0.07)、(19.41±0.05)%比(46.38±0.06)%、(33.51±0.04)%比(78.53±0.06)%,t=8.025、603.548、1120.846,P<0.05],细胞凋亡率高于HBx组[(4.66±0.36)%比(1.33±0.16)%,t=45.715,P<0.05]。结论乙肝病毒X蛋白可通过提高CXCR6表达促进肝癌细胞的侵袭和转移。

CXC趋化因子配体16/CXC趋化因子受体6在结肠癌组织的表达及对结肠癌增殖、侵袭、转移能力的影响

目的观察CXC趋化因子配体16（CXCL16）/CXC趋化因子受体6（CXCR6）在结肠癌中的表达及其对结肠癌增殖、侵袭、转移的影响。方法免疫组织化学方法检测CXCL16/CXCR6在结肠癌组织、癌旁组织及3种结肠癌细胞SW480、LoVo、HCT116的表达；反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测CXCL16和CXCR6 mRNA的表达；通过CXCR16-RNA慢病毒载体转染SW480细胞，利用噻唑蓝（MTT）实验及Transwell实验分析CXCL16/CXCR6对结肠癌细胞增强、侵袭、转移能力等影响。结果在56例结肠癌组织中，CXCL12阳性表达48例，CXCR6阳性表达47例，阳性表达率分别为85.7%、83.9%，远高于癌旁组织（26.7%、33.3%），差异有统计学意义（χ^2=18.542，P=0.005；χ^2=19.464，P=0.005）。CXCL16和CXCR6在结肠癌细胞株SW480、LoVo、HCT116均呈阳性表达，差异无统计学意义。RT-PCR结果显示，CXCL16 mRNA、CXCR6 mRNA表达在癌组织的表达高于癌旁组织，差异有统计学意义（t=2.592，P=0.008；t=2.364，P=0.003）。CXCL16 mRNA、CXCR6 mRNA在3种癌细胞株中均呈高表达，差异无统计学意义（P=0.232）。经慢病毒载体转染后，MTT实验结果显示，CXCL16-短发卡RNA（shRNA）实验组增殖显著降低，与对照组比较，差异有统计学意义（P=0.002）。Transwell实验结果显示，实验组、对照组中迁移至下室的细胞数分别为（14.2±1.68）×10^5、（28.7±2.02）×10^5个，差异有统计学意义（t=3.022，P=0.001）。结论CXCL16/CXCR6可能参与结肠癌的增殖、侵袭转移过程。

CXCL6基因在大鼠睾丸组织发育过程中的表达

目的检测CXCL6基因在大鼠发育睾丸组织中的表达,探讨该基因在精子发生过程中的作用。方法取三组不同窝别来源,出生2到65日龄之间,21个时间点的雄性大鼠的睾丸组织,采用Real-time PCR方法检测CXCL6基因的转录表达。采用免疫组织化学染色的方法检测65日龄大鼠睾丸组织中CXCL6的表达情况。结果CXCL6基因m RNA表达在大鼠出生后第2天呈高表达,随后开始迅速下降,在第8天下降到最低值,一直持续到第16天。从第20天起迅速线性升高表达,在第29天达到整个发育过程的最高值之后开始下降。第35天可见CXCL6基因的表达再次呈现升高趋势,在第45天形成一个小高峰表达之后,维持一定的表达量持续至第65天。免疫组织化学染色结果显示,CXCL6蛋白在精母细胞边缘和圆形精子以及长形精子处表达。结论CXCL6基因可能参与精原干细胞的增殖过程,并且可能在圆形精子的形成以及精子成熟的过程中发挥作用。

CXC型趋化因子配体16在强直性脊柱炎中的表达及机制

目的 探讨人CXC型趋化因子配体16(CXCL16)及其受体CXC型趋化因子受体6(CXCR6)在强直性脊柱炎(AS)发病中的表达及作用机制。方法 通过实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)技术和酶联免疫吸附试验(ELISA)对AS患者外周血及关节液进行CXCL16表达的分析;通过流式细胞术,检测AS患者和对照组外周血淋巴细胞和单核细胞中CXCR6和CXCL16的表达量;趋化实验研究不同浓度的CXCL16对AS患者关节液和外周血中淋巴细胞的趋化作用。结果 AS患者受累关节局部滑液中CXCL16蛋白浓度[(357.90±60.44) pg/ml]以及血浆中CXCL16蛋白浓度[(175.10±13.28) pg/ml]与健康对照组[(122.80±21.42) pg/ml]比较均明显升高(P<0.01);在外周血淋巴细胞中AS患者CXCR6的表达量为(48.63±2.60)%,明显高于健康对照组[(37.70±2.37)%,P<0.01];CXCL16对AS患者关节积液中的淋巴细胞趋化能力明显高于外周血。结论 趋化因子CXCL16及其受体CXCR6在AS患者关节积液和外周血中的表达明显高于对照组,可为AS的免疫治疗提供新的治疗靶位和方法。