白纹伊蚊CYP6N3基因启动子序列的分子克隆与功能分析

根据本室已获得的白纹伊蚊CYP6N亚家族新成员CYP6N3全长cDNA的 5′ 末端核苷酸序列 ,设计 2个反向特异引物 (GSP1和GSP2 ) ,利用 4种限制性内切酶DraⅠ、EcoRⅤ、PvuⅡ和StuⅠ分别消化白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株高分子量基因组DNA ,消化产物与适配子连接产生 4种消化的DNA库 ,并分别以此为模板 ,进行基因步移。用特异引物GSP1与适配子引物AP1进行第 1步PCR扩增 ,然后再以第 1步PCR产物为模板、用内部特异引物GSP2与内部适配子引物AP2进行第 2次PCR扩增。将扩增产物进行T A克隆及测序。结果显示 :分别以DraⅠ、EcoRⅤ、PvuⅡ和StuⅠ消化的DNA库为模板而获得 4个长短不一的DNA序列 :80 6bp、 2 190bp、 3 0 76bp和 2 2 0 6bp ,它们均包括有CYP6N3全长cDNA5′ 非翻译区序列及氨基端开头 10个氨基酸的编码序列 ;在其ATG上游序列中均存在有若干个典型的TATA盒、Barbie盒和 或CCAAT盒、抗氧化剂反应元件或外源化合物反应元件。表明本实验已成功地获得了白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP6N3基因 4个上游启动子区序列 ,并分析、讨论了它们在蚊虫中细胞色素P45

白纹伊蚊细胞色素P450 CYP6N3基因的原核表达及鉴定

目的 对白纹伊蚊细胞色素P4 5 0CYP6N3基因进行原核表达 ,以获得高效表达蛋白。方法 根据CYP6N3基因的全长cRNA为模板进行RT -PCR。产物经T -A克隆测序鉴定后 ,亚克隆入原核融合表达载体 pGEX - 4T - 1(含有编码 2 6KDaGST的基因序列 )中 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中进行原核表达。将细菌总蛋白进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 ,通过Westernblot分析鉴定目的蛋白的位置 ,并运用核酸蛋白分析仪扫描凝胶以确定表达产物的含量。结果 获得了高效表达的融合蛋白GST -CYP6N3,表达量占菌体总蛋白的 37 4 9%。结论 本实验成功地异源表达了白纹伊蚊CYP6N3基因 ,为体外重建细胞色素P4 5 0CYP6N3单加氧酶系 。

胆机摩机电路的精髓：6N3 SRPP输出器

纵观现代音响器材,似乎在CD机中装入电子管是件不成体统的事,市场上有胆后级出售,也有胆前级出售,但是胆CD机就少见了.恐怕只有1994年利达公司(Tenosics)的CDP-511胆CD机和至高(IAO)推出的CD-101胆CD机.

白纹伊蚊细胞色素P450 CYP6N3基因分子进化机制初探

为了初步探讨白纹伊蚊细胞色素P450 CYP6家族新基因分子进化机理,根据已获得的白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株一新的细胞色素P450CYP6基因cDNA片段,设计反向引物,进行5’-cDNA末端快速扩增（rapid amplification of cDNA ends,RACE）;以正向引物进行3’-RACE。然后分别进行克隆、测序和鉴定。根据获得白纹伊蚊CYP6家族新成员全长cDNA序列,运用PC/GENE软件分析其5’-UTP区DNA序列相似性及编码区氨基酸残基相似性、构建系谱树。结果获得的3个全长序列中5’-UTP区DNA序列完全相同;编码区氨基酸残基相似性为3/497或4/497个氨基酸差异,而且此种差异均位于蛋白质功能非保守的基因区域;构建的系谱树显示CYP6N3基因与冈比亚按蚊CYP6N1-2亲缘关系最近,而与致倦库蚊的CYP6E1、CYP6F1亲缘关系较远。说明白纹伊蚊CYP6N3基因较致倦库蚊的CYP6E1、CYP6F1基因更为古老;白纹伊蚊CYP6N3各等位基因变异体是通过整个CYP6N3基因座的新近复制而产生。

METTL3在同型半胱氨酸诱导小鼠胰岛β细胞自噬中的作用

背景:高同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)血症与胰岛β细胞功能密切相关,但其具体分子机制尚不完全明确。目的:探讨METTL3在Hcy诱导小鼠胰岛β细胞自噬中的作用。方法:取第3,4代小鼠胰岛β细胞进行实验。①细胞模型建立和分组:对照组细胞不加入Hcy,Hcy组细胞加入浓度为100µmol/L Hcy干预48h;②按Lipofectamine^(TM) 2000说明书将过表达质粒Ad-METTL3及si-METTL3转染小鼠胰岛β细胞,设计3种不同干扰片段,PCR验证、筛选出干扰效率最好的干扰片段;③转染后实验分组:对照组、Hcy组、Ad-NC(阴性对照)+Hcy组、Ad-METTL3+Hcy组、si-NC(阴性对照)+Hcy组和si-METTL3+Hcy组;④采用qRT-PCR及Western blot检测细胞中METTL3及细胞自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、p62的表达;ELISA法测定胰岛素水平来评价胰岛β细胞胰岛素分泌能力;分别过表达和干扰METTL3后检测细胞自噬相关蛋白及胰岛素水平。结果与结论:①与对照组相比,Hcy组自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ的表达水平升高(P<0.05),而p62表达明显降低(P<0.05),胰岛素分泌能力明显下降(P<0.05);②与对照组相比,Hcy组中METTL3蛋白及mRNA水平表达均降低(P<0.05);③胰岛β细胞中沉默METTL3后,Hcy进一步上调了细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ的表达(P<0.05),而p62表达显著下降(P<0.05),细胞中胰岛素水平增加(P<0.05);过表达METTL3后,Hcy则使LC3Ⅱ/Ⅰ表达显著降低且p62表达则增高(P<0.05);④结论:METTL3参与了Hcy诱导的胰岛β细胞自噬调控,对胰岛素的分泌发挥着调控作用。

重新认识6N3——深入探讨前级的选管、设计和改进

6N3这只管子对发烧友来说已经是再熟悉不过了，很多胆机发烧友多多少少都用这只管子做过前级或用来做功放的电压放大级。网上和报刊上关于6N3的个人制作、电路图到处都是。读者可能会问：“既然这样，你为什么要写这篇文章呢，会有人看吗？”其实，笔者写这篇文章的目的与别人不一样，他们大多是介绍哪个电路声音好、怎样制作……对于大多数“菜鸟”来说，只是画画一样，有什么画什么，对电路的每一元器件的取值一概不知，这样做出来的机器会好声吗？

采用6N3和12AU7的差分输入胆前级

不少发烧友在制作胆前级时，都喜欢选用一些经典名机的线路，诸如麦景图、马兰士、马蒂斯、ARC、猫王、和田茂氏等。不可否认，这些线路的成熟度与完成度相当高，声音表现也早有定评，只需备齐靓料，照图施工，是不难做出一台不错的前级的。但仔细看看这些发烧友心目中的名机，其线路架构基本雷同，差不多都是两级共阴放大，级间阻容耦合再加入环路负反馈。当这些名机线路图拿在手里、看在眼里的时候，总有几分似曾相识的感觉，以致不少初入门的动手派发烧友干脆就误认为，胆前级来去就只有这几个线路架构，没什么大的变化了。

6N3电子管前级制作心得

电子管6N3是旁热式氧化物阴极双三极管，具有良好的线性，可在高频领域作电压放大，主要用于军事通讯设备，以及早期民用电子管电视机高频头线路。其主要品牌有国产6N3，产地有北京、上海、曙光等，国外有饿罗斯的6H3和美国的5670以及西电的396A等。近些年来，随着胆机的复兴和不断研发，不少厂家和发烧友将6N3用于音响领域，取得了较好的效果。很多音响爱好者手中都有这只管子，很想赏识此管的魅力。为此，

基因步移在分离蚊虫细胞色素P450启动子中的应用及意义

【目的】快速扩增出白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP 6N3基因 (CYP 6N3)上游启动子区序列。【方法】根据本室已获得的白纹伊蚊CYP 6N亚家族新成员CYP6N3全长cDNA的 5′ 末端核苷酸序列 ,设计 2个反向特异引物 (GSP1和GSP2 ) ,利用 4种限制性内切酶 DraⅠ、EcoRⅤ、Pvu Ⅱ和 StuⅠ分别消化白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株高分子量基因组DNA ,消化产物与适配子连接产生 4种消化的DNA库 (DL1、DL2、DL3及DL4) ,并分别以此为模板 ,进行基因步移。用特异引物GSP1与适配子引物AP1进行第 1步PCR扩增 ,然后再以第 1步PCR产物为模板、用内部特异引物GSP2与内部适配子引物AP2进行第 2次PCR扩增。【结果】第 1步PCR结果显示 :在上述 4种消化文库中分别扩增出约 80 6、2 190、2 2 0 6和 3 0 76bp的特异条带 ;第 2步PCR结果与第 1次PCR相类似 ,但各泳道主带扩增效率明显升高。【结论】本实验已成功地获得了白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株 CYP6N3上游启动子区核苷酸序列及其 4种限制性内切酶图谱。此外还对基因步移法在昆虫细胞色素P45 0多样性及其参与杀虫剂抗性分子机理研究中的意义进行了讨论。

湖羊肌肉和皮下脂肪组织的脂肪酸组成研究

选取5月龄、10月龄、18月龄公羊及4岁母羊各10只，共40只湖羊作为试验动物，按常规方法屠宰后取各试验动物股三头肌和臀部皮下脂肪，用气相色谱法分析不同年龄湖羊肌肉脂肪和皮下脂肪组织的脂肪酸组成．在2种脂肪组织中分别检测到32种脂肪酸，其中均以油酸（C18：1）、棕榈酸（C16：0）和硬脂酸（C18：0）3种脂肪酸含量最高，占总脂肪酸比例为74．20％～79．74％；年龄对大部分脂肪酸有显著影响．2种脂肪组织中短链、中链、长链脂肪酸分别占总脂肪酸的0．2％～0．5％，4％和95％左右，并且随着年龄的增长长链脂肪酸中总十八碳脂肪酸含量（C18s）增加而总十六碳脂肪酸（C16s）下降．肌肉中饱和、单不饱和与多不饱和脂肪酸的含量分别为44．17％～45．14％，45．72％～46．87％和8．17％～10．14％；皮下脂肪中饱和脂肪酸含量比肌肉高而多不饱和脂肪酸比肌肉低．随着年龄的增长2种组织饱和脂肪酸含量均增加，多不饱和脂肪酸在5到10月龄间增长，之后降低．肌肉和脂肪的P／S值分别为0．18～0．23和0．13～0．20，年龄对该值的影响同多不饱和脂肪酸；总n3和n6不饱和脂肪酸的含量受年龄影响也与多不饱和脂肪酸相同，2种脂肪组织的n0／n3值为0．64～0．82和0．94～1．46，随着年龄增长而增加，但5月龄与10月龄之间没有显著差异．

C_3N_6H_6(H_3BO_3)_2的合成及晶体结构

以三聚氰胺和硼酸为原料在水溶液中反应合成出了一种新的BCN化合物先驱体C3N6H6(H3BO3)2。XRD表征结果表明三聚氰胺和硼酸的最佳配比为1∶3(物质的量比)。用单晶X-射线衍射分析法测定了该化合物的晶体结构。该化合物属单斜晶系,空间群为P21/C,晶胞参数为a=0.3597(7)nm,b=2.0105(4)nm,c=1.4112(3)nm,α=90,°β=92.07(3),°γ=90,°V=1.0199(3)nm3,Z=4,D c=1.627g.cm-3,μ(MoKα)=0.144mm-1,F(000)=520。晶体结构经全矩阵最小二乘法修正,最终可靠因子R1=0.0519,wR2=0.1361。该化合物是由C3N6H6分子和H3BO3分子通过氢键加合组装形成的三维超分子结构化合物。

一株鸭源H3N6亚型禽流感病毒遗传进化分析

从活禽交易市场健康鸭体内分离到一株H3N6亚型禽流感病毒,命名为A/Duck/Guangdong/E9/2012(H3N6),这是该亚型禽流感病毒在我国广东地区的首次分离报道。为分析其遗传进化特征,对该病毒全基因组序列进行了测定,进行了遗传进化分析。结果显示,其HA裂解位点附近的氨基酸序列为PE-KQTR↓GLF,只含有1个碱性氨基酸,符合低致病性禽流感病毒的HA裂解位点氨基酸序列的分子特征;其HA基因与2011年蒙古国分离的鸭源A/Duck/Mongolia/OIE-7457/2011(H3N5)禽流感病毒的HA基因同源性最高,其NA基因与2011年蒙古国分离的鸭源A/Duck/Mongolia/OIE-7438/2011(H4N6)禽流感病毒的NA基因同源性最高。全基因组分子遗传进化分析结果显示,其8个基因均属于欧亚谱系的禽源进化分支。

纯Fe触媒体系下C_3N_6H_6对宝石级金刚石生长的影响

采用温度梯法在纯铁触媒体系下,通过掺入三聚氰胺(C_3N_6H_6)进行宝石级金刚石的合成,探究氮氢对合成宝石级金刚石的形貌、颜色影响。实验结果表明在纯铁触媒的体系中,随着三聚氰胺添加量的增加,宝石的颜色由棕黄色变为浅绿色;红外光谱检测显示,随着三聚氰胺添加量的增加,样品中氮得得含量逐渐增多,并且伴随着宝石级金刚石从样貌形态及内在物质含量上发生了明显变化。

C_2H_5N_4^+-C_6H_3N_3O_7^-氢键相互作用的理论研究

运用密度泛函理论方法,在B3LYP/6-311++G**水平上对4-氨基-1,2,4-三唑阳离子(AT)和2,4,6-三硝基苯酚阴离子(PA)形成的氢键二聚体进行理论计算研究.计算得到4种稳定结构的氢键复合物及最稳定异构体D1的振动频率、电子吸收光谱与热力学性质.结果表明,氢键复合物中存在较强的N—H…O与C—H…O红移氢键.经过基组重叠误差和零点振动能校正后,D1的氢键相互作用能为-30.71kJ/mol.热力学计算显示,在298.15K和标准状态下,D1气态氢键复合物分子的形成过程是放热、熵减小的非自发过程,但在低温下能自发进行.D1分子的标准摩尔生成焓和标准摩尔生成自由能分别为98.7,474.4kJ/mol.

00Cr25Ni6Mo3N不锈钢脆性的原因分析

通过对某企业生产的00Cr25Ni6Mo3N双相不锈钢检验发现,不同锻件的冲击功差异很大。然后对冲击功低的00Cr25Ni6Mo3N双相不锈钢进行力学性能试验和组织分析,造成冲击功低的根本原因是在锻造过程中产生了金属间析出相;而导致金属间析出相产生的原因是锻造工艺控制不当,热处理不能消除由锻造工艺不当造成的缺陷,而严格控制锻造加热制度对扼制金属间析出相意义更大。

Cu(C_6H_9N_3O_2)_2C_(l2)对小麦的生态毒理效应

以冬小麦为实验材料,比较研究了(1)不同浓度配合物对小麦生长的影响;(2)相同浓度的CuC l2、配体C6H9N3O2和配合物Cu(C6H9N3O2)2C l2对冬小麦种子萌发、苗期生长及其保护酶活性的影响。结果表明:与对照相比,(1)不同浓度新配合物对小麦生长具有不同程度的抑制作用,随着浓度的增高抑制作用逐渐增大;(2)CuC l2、配合物Cu(C6H9N3O2)2C l2对小麦种子总淀粉酶活性、蛋白酶活性、萌发率、生长势、根长、株高、总生物量均具有显著的抑制作用,配合物Cu(C6H9N3O2)2C l2的抑制作用小于CuC l2,而配体C6H9N3O2对上述生物学参数具有促进作用;(3)CuC l2、配合物Cu(C6H9N3O2)2C l2处理引起膜脂过氧化,显著的提高了幼苗的M DA浓度,导致SOD、POD、CAT活性降低,CuC l2的抑制作用大于配合物Cu(C6H9N3O2)2C l2,而配体C6H9N3O2处理对SOD、POD、CAT活性的提高有促进作用。上述结果说明C6H9N3O2对CuC l2生理胁迫具有保护作用,结合态的Cu2+(配合物Cu(C6H9N3O2)2C l2)的毒性显著的降低。在此基础上探讨了配合物抑制小麦生长发育的生物学机制。

传统氢键(X-H…Y)还是X-H…π相互作用？--无机苯与卤化氢相互作用本质的量子化学研究

在MP2/6-311++G**水平对无机苯(B3N3H6)与卤化氢HX(X=F,Cl,Br,I)相互作用体系进行了系统研究.结果表明在B3N3H6-HX(X=F,Cl,Br,I)体系的平衡几何结构中,HX的H原子倾向于指向B3N3H6环上的N原子,且从HF到HI相互作用强度依次减弱.与苯-卤化氢体系比较,除与HF相互作用B3N3H6较C6H6强外,其余体系B3N3H6均较C6H6弱(结合能数值相差4kJ/mol左右).对称匹配微扰理论(SAPT)能量分解结果说明静电、诱导和色散力对描述B3N3H6-卤化氢体系的相互作用都很重要,从HF到HI静电能占总吸引作用能的百分比逐渐减少,色散能占总吸引作用能的百分比逐渐增加,这种变化趋势与苯-卤化氢体系比较类似,表明B3N3H6与卤化氢的相互作用随着卤素原子序数的递增,传统氢键作用趋势减弱,X—H…π相互作用趋势增强.

三聚氰胺(C_3N_6H_6)的高压Raman与压致结构相变研究

本文在8 7GPa压力范围内研究了三聚氰胺(C3N6H6)的高压原位Raman光谱。通过内、外Raman活性模的压致效应,发现在1 5GPa和6 0GPa压力下该分子晶体发生了压致结构相变。用空间群相关原理确认在1 5GPa压力下它从单斜相转变为三斜相;在6 0GPa压力下又发生了另一次结构相变。然后在室温高压条件下对三聚氰胺进行了原位同步辐射能量散射x-ray衍射实验(EDXD),在14 7GPa压力范围内,观察到常压下为单斜晶系的三聚氰胺经历了两次压致结构相变。在1 3GPa下,三聚氰胺分子晶体从单斜相转变为三斜相;在8 2GPa又转变为正交相。本实验结果为利用三聚氰胺碳氮有机分子晶体高温高压合成超硬C3N4共价晶体的研究提供了重要信息。

气相色谱-质谱联用法测定鸡肉中三聚氰胺

三聚氰胺（英文名Melamine），俗称蜜胺，分子式：C3N6H6，化学名称是2，4，6-三氨基-1，3，5-三嗪，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，重要的氮杂环有机化工原料。三聚氰胺不是食品原料，也不是食品添加剂，禁止人为添加到食品中。

反相高效液相色谱法测定饲料中三聚氰胺的含量

三聚氰胺（Melamine），别名又称蜜胺、氰尿酰胺、三聚氰酰胺，一种重要的氮杂环有机化工原料。为纯白色单斜晶体，分子式为C3N6H6，结构式如图1。比重1．573（14℃），熔点354℃，沸点升华。能溶于甲醛、乙酸、热乙二醇、甘吡啶，微溶于水及醇，不溶于醚、苯和四氯化碳，与盐酸、硫酸、硝酸、乙酸、草酸等都能形成盐。