刺葡萄VdERD6L15基因克隆及功能分析

【目的】探究VdERD6L15在刺葡萄果实生长发育中的功能,从湘刺1号中克隆VdERD6L15基因及其启动子,进行基因功能研究和启动子活性分析。【方法】克隆VdERD6L15基因CDS序列,并对CDS进行生物信息学分析;构建VdERD6L15表达载体,并通过瞬时转化烟草确定VdERD6L15基因编码蛋白的亚细胞定位;同时,通过在己糖缺陷型酵母菌株EBY.VW4000中异源表达VdERD6L15探究其功能;此外,通过启动子截短试验确定VdERD6L15启动子的核心区域。【结果】成功克隆刺葡萄VdERD6L15基因编码序列,该编码序列长1461 bp,可编码486个氨基酸,具有膜蛋白特征,属于单糖转运蛋白家族。亚细胞定位试验确认VdERD6L15蛋白主要定位于液泡膜上。通过在酵母菌株EBY.VW4000中进行异源表达,验证了VdERD6L15具有转运葡萄糖的能力。利用PlantCARE数据库对VdERD6L15启动子顺式作用元件进行分析,发现其主要包含光响应元件、干旱胁迫和激素响应元件。通过GUS染色分析,进一步确定候选基因VdERD6L15启动子的关键调控区域位于-500 bp到-1000 bp之间。【结论】VdERD6L15是一个定位在液泡膜上的糖转运蛋白,具有转运葡萄糖的功能;VdERD6L15启动子的核心元件位于ATG上游500~1000 bp之间。

一个成株抗白粉病小麦-簇毛麦T2DS·2V#6L易位系的选育

白粉病是威胁全球小麦生产的一种严重病害,从小麦野生近缘种发掘成株抗白粉病基因资源对培育持久抗性品种十分重要。本研究从硬粒小麦-簇毛麦01I139(V#6)双二倍体AABBVV-3与普通小麦NAU0686杂交、回交的后代中鉴定到一个小麦-簇毛麦2V#6(2D)异代换系11-2V-1,利用11-2V-1在染色体2V和2D之间产生重组,将11-2V-1与高感白粉病普通小麦NAU0686杂交,F_(1)自交。利用GISH/FISH和分子标记对F_(2)世代131个单株进行分子细胞学鉴定,获得了小麦-簇毛麦T2DS·2V#6L易位系11-2V-2、2V#6S端体系11-2V-3和2V#6L端体系11-2V-4新种质。白粉病抗性鉴定发现,所有F_(2)单株苗期均高感小麦白粉菌生理小种E09,但成株期含有2V#6和2V#6L染色体臂的所有单株均表现高抗(IT=1~2),而仅含有2V#6S染色体臂或无外源染色体的单株均高感白粉病(IT=7~9),表明簇毛麦01I139的2V#6L染色体臂上携带成株抗白粉病基因,该基因可能与小麦-簇毛麦T2BS·2V#5L易位系携带的Pm62是等位基因。遗传效应分析表明,T2DS·2V#6L易位染色体在小麦背景传递正常,对主要农艺性状没有显著的负向影响,对穗长、每穗粒数和单株粒重还表现出一定程度的正向效应。因此,本研究创制的成株抗白粉病T2DS·2V#6L易位系11-2V-2为小麦抗白粉病育种提供了新抗源,也为后续簇毛麦2VL上优异基因遗传定位和图位克隆奠定了基础。

ERCC6L蛋白在胃癌组织中的表达变化及其与临床病理特征和预后的关系分析

目的探究ERCC6L蛋白在胃癌组织中的表达变化及其与临床病理特征和预后的关系。方法选取南通大学附属启东医院2015年4月至2017年5月行手术治疗的150例胃癌病人为研究对象,收集胃癌组织及癌旁非肿瘤组织,采用实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)及免疫组织化学法检测ERCC6L mRNA及蛋白表达水平,分析其与临床病理特征关系;采用Kaplan-Meier法分析ERCC6L蛋白表达与病人预后的关系;采用Cox回归分析影响胃癌病人预后的相关因素。结果胃癌组织中ERCC6L mRNA的相对表达量1.60±0.53显著高于癌旁非肿瘤组织1.01±0.12(t=13.30,P<0.001)、ERCC6L蛋白阳性表达率均显著高于癌旁非肿瘤组织(P<0.05)。ERCC6L蛋白表达与淋巴结转移、肿瘤浸润深度、TNM分期、远处转移、分化程度有关(P<0.05)。胃癌组织ERCC6L阳性表达病人5年总生存率(19.57%)显著低于ERCC6L阴性表达病人(60.34%,P<0.05)。ER⁃CC6L阳性表达、淋巴结转移、TNMⅢ~TNMⅣ和低分化均是影响胃癌病人不良预后的独立危险因素(P<0.05)。结论ERCC6L在胃癌组织中高表达,与分化程度、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期、远处转移及预后密切相关,是影响胃癌病人预后的独立危险因素。

烟碱转运候选基因NtABCG6L生物信息学及表达特征分析

为预测前期筛选到的可能影响烟草烟碱含量的NtABCG6L基因是否具有转运烟碱功能,本研究采用生物信息学方法对NtABCG6L基因的启动子序列以及编码蛋白的理化性质和结构进行分析,利用软件对烟碱与NtABCG6L蛋白进行分子对接,并分别在烟株打顶0、7、14、21 d取根、茎、叶测定烟碱含量和NtABCG6L基因的相对表达量,以分析NtABCG6L基因表达量与烟碱转运效率的关系。结果表明,NtABCG6L基因共编码729个氨基酸;NtABCG6L蛋白分子量为81.29 kDa,理论pI值为8.97,含有ABC_transporter-like_ATP-bd、ABCG_dom、ABC_2_trans结构域,二级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲组成,存在跨膜结构,主要定位在细胞膜上,预测NtABCG6L是一个跨膜转运蛋白。NtABCG6L蛋白与烟碱可以通过氢键结合,结合能为-2.95。NtABCG6L基因主要在烟草根部表达,打顶14 d表达量最高,其表达量与烟碱转运系数呈显著正相关关系,初步推测NtABCG6L基因参与了烟碱的转运过程。本研究结果可为进一步采用基因编辑技术明确其功能提供依据。

2018款奥迪A6L车载导航定位不准确

本文针对2018年款奥迪A6L车主反映的车载导航定位不准确问题进行了详细的诊断与分析。处理R50天线插头针脚后,故障得到了解决。并强调了在面对新车故障时,应进行全面的故障排查,而不是仅仅依赖于替换部件。

Protex 6L直接酶解红豆粉提取红豆肽的研究

采用Protex 6L直接酶解红豆粉的方法提取红豆肽,通过响应曲面分析得出Protex 6L蛋白酶提取红豆蛋白的最佳条件:pH为9.4,加酶量为3.14%,温度为60℃,时间为3.5h,料液比为1∶6.9(g/mL)。并采用凝胶层析过滤色谱分析了不同水解时间水解物分子量的变化,发现红豆蛋白中存在一些不容易被Protex 6L酶解的成分,红豆粉的Protex 6L酶解过程是一个不均匀的过程。

SNF2家族新成员Ercc6l的cDNA克隆与表达分析(英文)

SNF2家族蛋白在基因组复制、修复与表达中具有重要作用 .报道了SNF2家族新成员Ercc6l (excisionrepaircross complementingrodentrepairdeficiency,complementationgroup 6 like)的cDNA克隆、特性与表达分析 .通过表达序列标签 (EST)搜索和组装 ,获得了cDNA全长 4 0 0 2bp的新基因Ercc6l (GenBankAcc .NoAY172 6 88) ,然后通过RT PCR在小鼠胚胎心脏成功克隆了该基因 .Ercc6l在小鼠基因组中由两个外显子和一个内含子组成 ,定位于X染色体 ,最大开放阅读框 (ORF)编码一个含 12 4 0个氨基酸的假定蛋白质 .该假定蛋白质含有SNF2蛋白的 8个保守基序 (SNF2结构域 ) .通过与SNF2家族各亚家族的成员进行多重比对 ,初步确认Ercc6l属于ERCC6亚家族成员 .将Ercc6l编码区克隆到pEGFP C3然后转染HeLa ,3T3和B16细胞 ,融合蛋白主要定位于胞浆 .BLAST搜索检索出 6 9条小鼠EST与Ercc6l同源 ,这些EST主要来自胚胎和肿瘤组织 .对小鼠不同发育时期的多种组织进行RT PCR ,发现Ercc6l在胚胎期强表达 ,出生产后表达显著下调 .

Protex-6L碱性蛋白酶酶解绿豆分离蛋白的工艺研究

选用Protex-6L蛋白酶对绿豆分离蛋白进行酶法水解生成肽和氨基酸。以水解度为考察指标,对其酶解工艺进行优化。基于单因素实验,考察了酶解参数:pH、酶解温度、底物浓度、加酶量、酶解时间等对酶解的影响,利用designexpert软件设计响应面对酶解条件进行优化分析,并在最优条件下通过SephadexG-75分析水解产物的分子量分布。结果表明:pH8.85、酶解温度57.34℃、底物质量分数7.00%、加酶量6884.36U/g、酶解时间4.19h,此条件下的绿豆分离蛋白的水解度(DH)为36.60%。水解得到的小肽分子量大部分都小于4000u。

发育相关基因Ercc6l的分子克隆与表达分析及其在酒精致畸中的作用

背景与目的 :在GeneBank中筛选新的小鼠发育相关基因 ,研究其在酒精致畸中的作用。材料与方法 :利用EST介导的基因克隆和表达谱分析进行新基因克隆、表达和同源性分析 ;利用RT-PCR、绿色荧光蛋白标记基因转染、全胚胎原位杂交、石蜡切片原位杂交和Northern杂交进行新基因的验证、亚细胞和组织定位及其在酒精致畸中的表达变化研究。结果 :成功克隆小鼠基因Ercc6l,其在胚胎期正常组织中强表达 ,在新生鼠表达明显减弱 ,在成年鼠几乎不表达。酒精染毒体内、外实验均显示畸变胚胎Ercc6l的表达显著降低。结论 :Ercc6l是小鼠胚胎发育相关基因 ,同时是酒精致畸作用的分子靶点。

山羊痘病毒A6L基因的克隆及序列分析

为了分析山羊痘病毒A6蛋白的分子特征,本试验提取了山羊痘病毒古浪分离株的基因组DNA,设计引物进行PCR扩增,克隆A6L基因的DNA序列。将PCR产物连接到pGEM-T Easy载体后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆进行序列测定,利用生物信息学软件对A6L基因序列进行预测分析。结果显示,A6L基因序列含有1个由1 128个核苷酸组成的开放阅读框,编码375个氨基酸残基组成的多肽,蛋白质分子质量的理论值为43.68ku,理论等电点为7.50。该蛋白的二级结构中,α螺旋占53.30%,β折叠占10.24%,其余39.46%为无规则卷曲。多序列比对分析结果显示,不同羊痘病毒分离株A6L序列高度保守,同源性在97%以上。上述研究结果为进一步研究A6蛋白的生物学功能和羊痘病毒早期蛋白的分子相互作用奠定了基础。

适合中国人的理想腹膜透析剂量—6L/d与8L/d的比较

NKF -DOQI推荐 ,持续不卧床腹膜透析 (CAPD)患者适宜的腹膜透析剂量应使总Kt/V至少达到每周 2 .0。而在我国香港 ,患者应用较低的透析剂量 ,预后优于西方国家的患者。目的 探讨适合中国人的理想腹膜透析剂量。方法 利用尿素动力学模型 ,在氮平衡的基础上 ,比较每天透析 6L和 8L的持续不卧床腹膜透析 (CAPD)患者透析充分性的各项判断指标。结果 2 6例每天透析 6L和 4 5例每天透析 8L的患者参与此项研究。 6L组患者蛋白质摄入 (DPI)和蛋白分解率 (nPCR)分别为 (0 .91± 0 .36 )g/kg/d和 (0 .89± 0 .2 4 )g/kg/d ,处于氮平衡状态 ,实际Kt/V和理论Kt/V无显著差异 ;8L组患者DPI和nPCR分别为 (0 .79± 0 .2 2 )g/kg/d和 (0 .86± 0 .15 )g/kg/d ,处于负氮平衡 ,实际Kt/V高于理论Kt/V。 6L组患者尿量较多 [6L ,(6 35± 5 91)ml/dvs 8L ,(2 6 9± 35 2 )ml/d],而超滤量较少 [(46 3± 5 12 )ml/dvs (86 2± 4 15 )ml/d],但总的体液的排出量 [6L ,(10 98± 5 2 3)ml/dvs 8L ,(1131± 4 5 1)ml/d]没有明显差异。两组患者在高血压、贫血、钙磷代谢紊乱、酸中毒的纠正和生活质量、营养状况等方面均无显著差异。结论 在患者目前的饮食蛋白摄入水平下 ,每天 6L的透析剂量能够满足小分子溶质清除。随着患者残余肾?

靶向ATP6L的RNA干扰抑制乳腺癌细胞的体外侵袭能力

目的:通过靶向ATP6L的RNA干扰抑制质子泵的功能,检测MCF-7/ADR乳腺癌细胞的体外侵袭情况。方法:采用有效ATP6L干扰片段及干扰对照分别转染MCF-7/ADR细胞,通过荧光分光光度计检测BCECF与细胞分泌上清孵育后在不同激发光激发后发射的荧光量;用实时荧光定量PCR检测细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达情况;用明胶酶谱方法检测细胞分泌上清中的MMP-2活性;用细胞侵袭实验(Transwell)检测细胞体外侵袭能力。结果:在MCF-7/ADR细胞中,下调ATP6L基因的表达可以使细胞的泌H+能力减弱;细胞中MMP-2表达水平无变化;细胞分泌上清中的MMP-2活性减弱;细胞的体外侵袭能力下降。结论:靶向ATP6L的RNA干扰可抑制质子泵的功能,从而抑制MCF-7/ADR乳腺癌细胞的体外侵袭能力。

ERCC6L在结直肠肿瘤中的表达及其对结直肠肿瘤细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨DNA解旋酶ERCC6L在结直肠肿瘤中的表达及其对结直肠肿瘤细胞增殖和侵袭的影响。方法利用GEPIA和UALCAN数据库分析ERCC6L在结直肠肿瘤组织中的表达情况;通过实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、蛋白质印迹(Western blotting)和免疫组织化学检测ERCC6L在结直肠肿瘤组织和细胞中的表达;分别用CCK8和侵袭实验检测ERCC6L对结直肠肿瘤细胞增殖和侵袭的影响。结果 ERCC6L在结直肠肿瘤组织和细胞系中高表达(P<0.05);用siRNA干扰ERCC6L表达后,结直肠肿瘤细胞的增殖和侵袭能力被显著抑制。结论 ERCC6L促进了结直肠肿瘤细胞的增殖和侵袭,有可能成为癌症治疗的潜在新靶点。

Spag6L基因表达抑制对小鼠精母细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨Spag6L基因在小鼠精子发生中的表达情况以及抑制其表达对GC-2 spd精母细胞增殖和凋亡的影响。方法:提取出生后第8、16、20、28、42天的小鼠睾丸组织RNA,采用逆转录PCR和实时荧光定量PCR(qPCR)检测分析Spag6L基因的表达情况;制备干扰Spag6L基因表达的慢病毒并转染GC-2 spd细胞;qPCR法筛选有效抑制Spag6L基因表达的稳定细胞株;采用细胞计数板和流式细胞术分析Spag6L基因表达抑制对GC-2 spd细胞增殖活性、凋亡和细胞周期的影响;Western印迹检测Spag6L基因沉默对促凋亡因子Bax及抗凋亡因子Bcl-2表达的影响。结果:小鼠出生后第8天睾丸组织中Spag6L基因少量表达,且随睾丸发育而逐渐升高;与对照组相比,GC-2 spd细胞中抑制Spag6L基因表达导致细胞活性降低(P<0.01),细胞阻滞于G1期,并且Bax蛋白表达显著升高而Bcl-2蛋白表达降低(P<0.01),诱导细胞凋亡。结论:Spag6L基因通过调节精母细胞的细胞周期、增殖和凋亡,参与小鼠精子发生。

全新奥迪A6L轿车之电子控制技术的飞跃

全新奥迪A6L已经是车系的第七代产品，从内外设计到动力系统再到安全科技，最新一代奥迪A6都有着创新性的表现。其电子控制技术，包括发动机，变速器，舒适性配置及信息娱乐系统方面都有了进一步的提升。

非洲猪瘟病毒MGF110-5L-6L蛋白诱导宿主细胞翻译阻滞和应激颗粒形成的作用机制

【背景】非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染引发的一种猪烈性传染病,是全球公认的养猪业“头号杀手”,至今尚无安全有效的疫苗和药物。病毒作为专性细胞内寄生物,必须通过“劫持”宿主翻译系统为病毒蛋白合成服务。其中翻译起始因子eIF2α作为翻译调控的核心节点,控制细胞应激反应和翻译重编程走向,对病毒毒力、嗜性、致病性及免疫逃逸等具有重要影响,eIF2α磷酸化调控无疑是病毒与宿主细胞竞争翻译资源的重要阵地之一。然而,关于ASFV编码蛋白与eIF2α磷酸化作用关系的认知极度匮乏。【目的】探究非洲猪瘟病毒MGF110-5L-6L蛋白对宿主细胞翻译阻滞和促进应激颗粒形成的作用机制,为深入揭示非洲猪瘟病毒的致病机制研究提供科学依据。【方法】在前期利用荧光素酶报告基因载体和绿色荧光报告载体,筛选发现外源表达MGF110-5L-6L极显著上调eIF2α磷酸化水平的基础上。选择猪肺泡巨噬细胞3D4/21和猪肾细胞PK-15作为研究用细胞系,利用质粒转染和特异性化学药物处理等方法,结合免疫印迹和激光共聚焦显微镜等检测技术,验证了MGF110-5L-6L蛋白与eIF2α磷酸化及其下游翻译效应之间的功能关系。随后,通过生物信息学网站预测、亚细胞定位和功能分析等,研究了MGF110-5L-6L蛋白与诱导细胞应激之间的相关性。【结果】证实外源表达ASFV多基因家族蛋白MGF110-5L-6L能够显著增强细胞内eIF2α磷酸化水平及激活转录因子ATF4表达量,诱导综合应激反应的发生;还可诱导细胞发生内质网应激和未折叠蛋白反应,并通过活化PERK和PKR激酶来诱发eIF2α的磷酸化,进而导致细胞蛋白翻译阻滞和应激颗粒形成。进一步证实,MGF110-5L-6L蛋白含有两个高度保守的半胱氨酸基序,且主要定位于内质网,少量分布于高尔基体、线粒体和溶酶体,还可诱导高尔基体和过氧化物酶体的亚细胞定位及形态出现显著改变,提示其可能通过影响内质网腔中氧化还原稳态、蛋白分泌途径或相关膜性细胞器发生等创造应激条件。【结论】报道了ASFV早期蛋白MGF110-5L-6L的结构、亚细胞定位及其潜在功能特征,揭示了MGF110-5L-6L蛋白与eIF2α磷酸化和宿主细胞蛋白翻译系统之间的功能关系,为深入认识ASFV的病原生物学与致病机制提供了新的科学参考。

惠普6L激光打印机输纸故障排除三例

惠普6L激光打印机是目前使用范围比较广泛的优质实用的打印机之一,其输出质量优良,价格较低,故障较少,维修相对比较方便,因此得到众多的使用者的青睐。但在使用过程,由于操作技术、材料及机器本身的一些原因,难免也会发生一些故障,例如在输纸方面,问题就比较多,当然。

HP 6L激光打印机常见故障维修

HP 6L激光打印机使用范围广泛，具有输出质量优良、故障少、维修相对方便等特点。其改进机型HP1000系列激光打印机，与HP 6L在原理和结构上相似，故障与维修方法基本相同。本文介绍其常见故障的维修办法。