6p25.3杂合缺失伴15q部分三体患者1例的临床表型与遗传学分析

目的探讨1例6p25.3杂合缺失伴15q部分三体患者的临床表型及遗传学特征。方法选取2021年5月14日就诊于郑州大学第一附属医院遗传与产前诊断中心的1例发育异常患者为研究对象。收集患者临床资料,应用染色体G显带核型分析和拷贝数变异测序(CNV-seq)技术对其进行遗传学分析。结果患者主要临床特征为完全性子宫纵隔、阴道纵隔、左眼球萎缩、手指和脚趾异常以及精神发育迟滞。患者核型分析结果为46,XX,der(6)t(6;15)(p25.3;q26.1)。CNV-seq结果提示其染色体6p25.3区和15q26.1q26.3区分别存在1.20 Mb的杂合缺失和10.20 Mb的重复,其中杂合缺失片段包含FOXQ1基因,可能与患者左眼发育异常相关,重复片段与15q26过度生长综合征96.16%的区域重叠(包括IGF1R基因),可能与患者苗勒氏管发育异常、手指和脚趾异常、精神发育迟滞相关。结论染色体6p25.3区杂合缺失和15q26.1q26.3区重复可能是导致患者异常临床表型的遗传学病因。

胃粘膜肠化生组织YNZ22基因杂合缺失及p53基因突变、蛋白表达的研究

为探讨YNZ2 2基因杂合缺失 (LOH)及 p5 3基因突变、蛋白表达在胃粘膜肠上皮化生中的作用 ,应用PCR RFLP、PCR SSCP及免疫组化技术检测了不同类型肠化生组织中YNZ2 2基因LOH、p5 3基因素 5～ 8外显子突变及其蛋白表达。结果显示 ,YNZ2 2LOH率为 19.4% (6 / 31) ,p5 3突变率为 2 9.8% (14/ 47) ,p5 3蛋白表达率为 10 .0 % (6 / 6 0 )。将肠化生分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型 ,发现Ⅲ型肠化生中 p5 3突变率及其蛋白阳性表达率分别为5 7.1% (8/ 14)和 2 7.8% (5 / 18) ,均显著高于Ⅰ (18 2 % )、Ⅱ型肠化生 (2 .4% ) (均P <0 .0 5 )。p5 3蛋白表达与 p5 3基因突变显著相关 (P <0 .0 5 ) ,YNZ2 2LOH与 p5 3突变及蛋白表达无显著相关性 (P >0 .0 5 )。提示 ,YNZ2 2基因LOH及 p5 3基因异常可能在胃粘膜肠化生的发生及其癌变中起一定作用 ,p5 3基因有可能成为胃癌早期诊断的分子指标。

肝细胞癌17p13.3位点杂合缺失及其临床意义

目的探讨染色体17p13.3位点杂合缺失与肝细胞癌临床病理参数的关系。方法采用PCR扩增肝细胞癌组织和癌旁正常肝组织17p13.3位点的3个微卫星标志,即D17S643,D17S926和D17S1574,并比较和确定杂合子等位基因缺失。结果 3个微卫星标志总的杂合率为89.8%(79/88),杂合缺失率为41.7%(33/79);杂合缺失与肝细胞癌门静脉癌栓和肝内转移明显相关(P<0.01)。结论染色体17p13.3位点杂合缺失是肝细胞癌最常见的遗传学事件之一,该位点的缺失与肝癌门静脉癌栓和肝内转移密切相关。

以VNTR作为多态标记检测人类白血病p53基因杂合子性缺失

用ＰＣＲ－ＶＮＴＲ多态分析，以白血病缓解期患者的骨髓有核细胞作为胚系对照，对２７例急性白血病患者进行ｐ５３基因杂合子性缺失进行检测，结果发现在２７例中１３例呈异质性，其胚系的多态性率为４８．２％（３／２７）。对１３例胚系的ＶＮＴＲ呈多态性的白血病患者（ＡＬＬ１０例，ＡＭＬ３例），进一步进行白血病细胞与胚系的ＰＣＲ－ＶＮＴＲ配对分析，结果发现１例ＡＬＬ患者白血病细胞的ＶＮＴＲ异质性消失，而呈均一性。提示此例ＡＬＬ患者ｐ５３基因缺失一条等位基因，呈ＬＯＨ。结果提示ｐ５３基因功能失活在急性淋巴细胞白血病的发病中可能起一定的作用。

口腔鳞癌染色体3p14-24区域不同位点杂合缺失的分析

目的 探讨 3号染色体短臂 14 2 4区域等位基因杂合缺失与口腔鳞癌临床相关因素之间的关系 ,以及抑癌基因在口腔鳞癌发生发展中的作用。方法 采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析方法 ,检测 40例口腔鳞癌及正常组织中 3p14 2 4等位基因的杂合性缺失。结果 40例口腔鳞癌组织中 3p2 4位点EAβMD有 2 4例为信息个体 ,12例出现杂合缺失 ,杂合缺失率为 5 0 %,EAβH有 15例出现杂合缺失 ,杂合缺失率为 6 2 5 %;3p2 1位点杂合缺失率为 0 0 7%;3p14位点杂合性缺失率为 0 13%。 3p2 4杂合缺失与口腔鳞癌临床分期关系明显 ,Ⅲ -Ⅳ期晚期鳞癌的杂合缺失率高于Ⅰ -Ⅱ期早期鳞癌 ,两组间有差异 (P <0 0 5 ) ;口腔鳞癌高分化组的杂合缺失率明显低于中低分化组 ,其差异有显著性意义 (P <0 0 1) ;淋巴结转移阴性与阳性组的杂合缺失率有显著性意义 (P <0 0 1)。结论 3p2 4杂合缺失在口腔鳞癌中普遍存在 ,从而说明 3p2 4位点处存在着某些与口腔鳞癌发生发展有关的抑癌基因 。

染色体17p^(13.1)位点杂合缺失与乳腺癌生物学行为及预后的关系

目的 探讨染色体 17p13 .1位点杂合缺失 (LOH )与乳腺癌生物学行为及预后的关系。方法 应用PCR 限制性片段长度多态性分析 (PCR RFLP)的方法 ,检测 60例原发性乳腺癌患者 17号染色体短臂 17p13 .1位点LOH。结果 经PCR扩增、酶切和电泳分离 ,在 17p13 .1位点共筛选出信息个体 3 8例 ,LOH发生频率为 42 .1% (16/3 8)。在Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期乳癌中LOH阳性率分别为 5 6.0 %和 15 .4% ,有显著性差异 (P <0 .0 5 )。而该位点LOH与淋巴结转移及ER、PR水平无明显相关。分析 17p13 .1位点LOH与预后的关系发现 ,LOH阳性乳腺癌患者术后生存期明显较LOH阴性患者短 (P <0 .0 1)。结论 17p13 .1位点LOH多发生在乳腺癌病变早期 ,检测该位点LOH有可能成为判断乳腺癌预后的 1个新的分子生物学指标。

食管癌患者3p25等位基因杂合缺失的初步研究

目的 :检测 35例食管癌患者 3p2 5 D3S10 38染色体位点的杂合缺失 ,为寻找此位点附近潜在的抑癌基因奠定基础。 方法 :微卫星 DNA- PCR-银染法检测 3p2 5 D3S10 38位点杂合缺失。结果:3p2 5 D3S10 38位点有 11例存在杂合缺失 (L OH) ,L OH率为 31.4 % ,此位点杂合缺失在各民族中均存在。结论:3p2 5 D3S10 38存在杂合缺失且有一定发生频率 ,可能与食管癌的发生有关 ,值得继续研究。

脑胶质瘤患者染色体3p24等位基因杂合缺失的研究

目的 :从分子水平上探索胶质瘤的发生机理 ,为胶质瘤的诊断、预后提供有意义的指标 ,并且为基因治疗胶质瘤提供理论依据。方法 :应用 PCR技术配合限制性片段长度多态性 (RFL P)分析 ,对胶质瘤 3号染色体短臂3p2 4两个 DNA标志不同位点的杂合缺失 (L OH)进行检测。结果 :2 7例胶质瘤标本中在 EAβH位点发现 6个信息个体中有 3例显示杂合缺失 ,杂合缺失率为 3/ 6 ,而 EAβ MD位点未发现杂合缺失。 结论 :胶质瘤中未发现 3p2 4EAβ MD等位基因的杂合缺失 ,说明该基因可能不参与胶质瘤的发生发展过程 ;3p2 4EAβ H等位基因的杂合缺失存在于 级和 级胶质瘤中 。

胶质瘤染色体1p和19q杂合性缺失与O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶p53和Ki-67蛋白表达的关系

目的探讨胶质瘤染色体1P和19q杂合性缺失（LOH）与O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶（MGMT）、p53和Ki-67蛋白表达的关系。方法采集146例胶质瘤（45例少突胶质细胞瘤、42例少突星形细胞瘤和59例星形细胞瘤）的肿瘤组织和血液标本，采用聚合酶链反应结合变性高效液相色谱技术检测染色体1P和19qLOH，免疫组化法检测肿瘤组织中MGMT、p53和Ki-67蛋白的表达，并进一步分析其与胶质瘤临床病理特征的关系。结果少突胶质细胞肿瘤和星形细胞瘤中，lpLOH的发生率分别为59．8％和33．9％，差异有统计学意义（P=0．002）；lp和19qLOH的发生率分别为42．5％和16．9％，差异有统计学意义（P=0．001）。MGMT低表达和Ki-67高表达多发生于少突胶质细胞肿瘤中，发生率分别为65．5％和54．0％，而p53高表达多发生于星形细胞瘤和少突星形细胞瘤中，发生率为75．2％。在87例少突胶质细胞肿瘤中，lpLOH和MGMT蛋白低表达多发生于Ⅱ级少突胶质细胞肿瘤中，发生率分别为72．5％和87．5％，而p53和Ki-67蛋白高表达多发生于Ⅲ级少突胶质细胞肿瘤中，发生率分别为83．0％和76．6％。lp和19qLOH在非颞叶和颞叶肿瘤的发生率分别为55．6％和21．2％（P=0．002）。lpLOH与19qLOH、MGMT蛋白表达与p53蛋白表达、MGMT蛋白表达与Ki-67蛋白表达、1p和19qLOH与p53蛋白表达、1PLOH与Ki-67蛋白表达均有关（均P〈0．05）。结论1p和19qLOH及MGMT、p53和Ki-67的蛋白表达与胶质瘤的临床病理学特征有关，检测其LOH状态和表达水平对胶质瘤的诊断和治疗具有指导作用。

胰腺癌中p33^(ING1b)基因变化及其表达研究

目的 检测胰腺癌中p33ING1b蛋白表达及基因变化情况,以了解p33ING1b在肿瘤发生过程中的作用。方法 采用免疫组化、聚合酶链反应单链构象多态性技术(PCR SSCP)和杂合型缺失(LOH)技术,检测胰腺癌中p33ING1b表达及p33ING1b基因变化情况。结果 ING1b蛋白的阳性表达率为85% (34/40),SSCP显示在40例病例中仅1例突变,LOH率为60.9% (14/23)。结论 突变与缺失表达并不是p33ING1b的主要失活形式,染色体改变可能导致p33ING1b功能下降,从而引发肿瘤发生。

食管癌中3p24和11p15.5染色体位点潜在抑癌基因的研究

目的 :探讨 3p2 4染色体位点的杂和缺失和 11p15 .5位点的点突变同食管癌之间的相关性 ,寻找这两个位点中潜在的抑癌基因 ,并希望通过此研究能为最后确定该基因的功能奠定基础。 方法 :用 PCR- RFL P法检测3p2 4染色体的三个位点 (EAβ MD、EAβ H、EAβ R)上等位基因的杂合缺失情况 ,PCR- SSCP法检测 11p15 .5位点的点突变。 结果 :经 RFL P法显示 :在 3p2 4的 EAβ MD位点 ,杂合缺失率为 75 % ,EAβ H位点的杂合缺失率为5 0 % ,EAβ R位点的杂合缺失率为 6 .2 5 % ;SSCP法未发现 11p15 .5位点存在点突变。 结论 :EAβ MD和 EAβ H位点的杂合缺失率较高 ,此两位点可能存在抑癌基因 。

食管腺癌与鳞癌中H-ras12位点突变与P53Exon4杂合缺失探讨

应用ＰＣＲ／ＲＦＬＰ、ＰＣＲ／ＳＳＣＰ方法对２２例食管癌及癌旁组织（８例腺癌、１４例鳞癌）Ｈ－ｒａｓ１２位点突变、Ｐ５３Ｅｘｏｎ４杂合缺失规律进行了探讨。结果发现，２２例食管癌组织中发生Ｈ－ｒａｓ１２位点突变６例（６／２２、２７．２％）、Ｐ５３Ｅｘｏｎ４杂合缺失５例（５／２２、２２．７％），与癌旁组织比有显著差异（Ｐ＜０．０１）。８例腺癌与１４例鳞癌中两种基因变化无差异。两种基因改变在食管癌标本中散在分布，无标本同时具有两种基因变化。Ｈ－ｒａｓ改变与Ｐ５３缺失相比无明显优势表现，反之亦然。研究表明，二种基因的改变可能在食管癌的的致病过程中起协同作用，也可能受不同致病因子影响而有不同表现。Ｈ－ｒａｓ基因突变、Ｐ５３基因杂合缺失可能是食管癌癌变机理之一。

5-脱氧氮杂胞苷逆转食管鳞癌细胞系p16基因转录表达研究

目的:探讨5种食管鳞癌细胞株中p16基因转录失活以及去甲基化药物对其作用的机制。方法:采用细胞培养、PCR、DHPLC、MSP、Northern印迹、MTT等方法,检测EC1,EC18,EC109,TE1,TE10食管鳞癌细胞株中p16基因的缺失、突变、甲基化状态和p16的转录表达,观察去甲基化药物5脱-氧氮杂胞苷对p16基因转录表达和细胞增殖能力的影响。结果:除了EC1,其余4种食管鳞癌细胞株均检测出p16基因的不同变化:纯合缺失(EC18),纯合型甲基化(EC18,EC109),杂合型甲基化(TE1,TE10),且纯合缺失的发生率较低(20%),甲基化的发生率较高(80%),经过5-Aza-CdR处理,可见2株发生了杂合型甲基化的TE1和TE10细胞p16基因的转录表达得到了逆转。结论:不同食管鳞癌细胞株p16基因转录失活的原因是不同的,启动子区甲基化为主要原因,其中杂合型甲基化可以被去甲基化药物5-脱氧氮杂胞苷逆转,使p16的转录表达上调。

抑癌基因CHD5在大肠癌组织中的定量表达

大肠癌的发生和发展是癌基因和抑癌基因共同作用的结果，其中抑癌基因的杂合缺失起主导作用。CHD5基因定位于1号染色体短臂3区6带（1p36），通过p19^Arf／p53通路调控细胞增殖、衰老和凋亡，可能是整个抑癌体系的上游基因。大肠癌亦有1p36高频杂合缺失现象，提示该区域可能存在抑癌基因。