微小RNA-let-7a对黑素瘤细胞系A375细胞凋亡的影响

目的 研究微小RNA（microRNA）-let-7a对黑素瘤细胞系A375细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 采用实时荧光定量PCR法（TaqMan探针法）检测microRNA-let-7a在A375细胞及黑素细胞的表达差异;然后用microRNA-let-7a的模拟物转染A375细胞,流式细胞仪检测其凋亡的改变;最后采用Western印迹检测转染后半胱天冬酶-3（caspase-3）蛋白的变化.结果 与黑素细胞相比,microRNA-let-7a在A375细胞中表达下降了0.462倍;采用microRNA-let-7a的模拟物转染后,与阴性对照（细胞凋亡率16.9%）相比,A375细胞凋亡（细胞凋亡率47.4%）增加;转染后caspase-3蛋白表达下调.结论 microRNA-let-7a可促进黑素瘤细胞系A375的凋亡,同时下调caspase-3蛋白的表达.

肺纤维化患者血清MicroRNA let-7、MicroRNA-29表达及其临床意义

目的:探讨肺纤维化患者血清MicroRNA let-7、MicroRNA-29表达及其临床意义。方法:收集2019年4月-2021年2月我院就诊的肺纤维化患者43例作为研究组,同时收集50例健康体检患者作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组血清MicroRNA let-7、MicroRNA-29表达水平。采用Pearson相关分析研究组患者血清MicroRNA let-7、MicroRNA-29的表达水平与炎症指标、肺功能的相关性。应用ROC曲线分析血清MicroRNA let-7、MicroRNA-29表达水平对肺纤维化患者的预测诊断价值。结果:研究组患者肺功能指标一秒用力呼气容积/用力肺活量(FEV_(1)/FVC)、一氧化碳弥散量占预计值的百分比(DLco%pred)、动脉血氧分压(PaO_(2))均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组患者血清MicroRNA let-7、MicroRNA-29相对表达水平均显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组患者血清MicroRNA let-7、MicroRNA-29的表达水平与FEV_(1)/FVC、DLco%pred、PaO_(2)均呈正相关(P<0.05)。血清MicroRNA let-7、MicroRNA-29及两者联合对肺纤维化患者诊断效能的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.743 (95%CI:0.574-0.914),0.761 (95%CI:0.597-0.926),0.848 (95%CI:0.699-0.997)。血清MicroRNA let-7和MicroRNA-29联合应用对肺纤维化的诊断价值优于两者单一应用。结论:肺纤维化患者血清MicroRNA let-7、MicroRNA-29表达水平比正常人显著降低,且与肺功能指标呈正相关性,两者联合应用可提高预测诊断价值,可作为预测肺纤维化患者及其病情评估的生物学指标。

叶下珠复方Ⅱ号对肝癌HepG2细胞lncRNA CCAT1表达的调控作用

目的:探讨叶下珠复方Ⅱ号通过抑制长链非编码RNA(lncRNA)结肠癌相关转录因子1(CCAT1)的表达,恢复小分子RNA let-7a(microRNA let-7a)的表达,从而发挥抗肝癌的作用机制。方法:应用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测正常肝细胞LO2与肝癌HepG2细胞lncRNA CCAT1的表达,比较2种细胞的表达差异。采用噻唑蓝(MTT)比色法测定肝癌HepG2在不同浓度的叶下珠复方Ⅱ号与5-氟尿嘧啶(5-FU)作用24,48,72 h后细胞增殖的情况。体外培养肝癌HepG2细胞,设空白组,叶下珠复方Ⅱ号高、低质量浓度组(1.6,0.8 g·L^(-1)),应用Real-time PCR检测各组lncRNA CCAT1,microRNA let-7a和其靶基因高迁移率蛋白A2(HMGA2),N-RAS基因(N-RAS)mRNA表达改变;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组HMGA2和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的蛋白表达。结果:与LO2细胞比较,肝癌HepG2细胞lncRNA CCAT1的表达明显上调(P<0.05)。通过MTT比色实验测定出叶下珠复方Ⅱ号和5-FU作用于肝癌HepG2细胞的半数抑制浓度(IC_(50))分别为1.649,0.044 648 g·L^(-1);与空白组比较,叶下珠复方Ⅱ号高、低质量浓度组(1.6,0.8 g·L^(-1))均可抑制肝癌HepG2细胞增殖(P<0.05),叶下珠复方Ⅱ号高质量浓度组(1.6 g·L^(-1))最为显著。Real-time PCR结果显示,与空白组比较,叶下珠复方Ⅱ号高、低质量浓度组(1.6,0.8 g·L^(-1))lncRNA CCAT1的表达明显抑制(P<0.05),高质量浓度组microRNA let-7a表达明显上调(P<0.05),叶下珠复方Ⅱ高、低质量浓度组HMGA2 mRNA表达均明显下调,高质量浓度组N-RAS mRNA表达明显下调(P<0.05)。Western blot结果表明,与空白组比较,叶下珠复方Ⅱ号高、低质量浓度组(1.6,0.8 g·L^(-1))的HMGA2,Cyclin D1蛋白表达均明显下调(P<0.05)。结论:叶下珠复方Ⅱ号可以通过抑制HepG2细胞lncRNA CCAT1表达,恢复microRNA let-7a表达,并抑制其下游相关靶基因的mRNA和蛋白表达,进而抑制肝癌细胞增殖,发挥抗肝癌作用。