胆固醇7α-羟化酶在毕赤酵母中的异源表达

胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)是胆固醇分解为胆汁酸的限速酶,其催化胆固醇为7α-羟基胆固醇,7α-羟基胆固醇是重要的甾体药物及中间体。以人源CYP7A1作为研究对象,首先构建了重组毕赤酵母/pPIC3.5K-CYP7A1;然后对7α-羟化酶进行分子改造,之后将酶与不同来源NADPH细胞色素氧化还原酶(CPR)适配,以提高目的产物7α-羟基胆固醇的产量。其中突变体G485A将7α-羟基胆固醇的产量提高了8.70%;5种不同来源的CPR与CYP7A1共表达毕赤酵母菌株均可提高7α-羟基胆固醇的产量,并且罗汉果(Siraitia grosvenorii)来源的CPR(SgCPR)与CYP7A1适配性最好,使7α-羟基胆固醇的产率提高了82.26%;在以上研究的基础上,构建突变体G485A与SgCPR共表达毕赤酵母菌株,最终7α-羟基胆固醇的产量提高了133.79%,其产量为0.25 mg/L。实验在毕赤酵母中成功异源表达人源胆固醇7α-羟化酶,并通过分子改造及与不同来源CPR适配的方法提高了7α-羟基胆固醇的产量。

胆固醇7α-羟化酶基因与妊娠期增重及妊娠结局相关性研究

目的:分析孕前体重指数(BMI)正常的单胎初产妇,胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)基因与妊娠期增重及妊娠结局相关性。方法:选择孕前BMI正常的单胎初产妇494例,根据是否合并妊娠期糖尿病(GDM)分为健康组(278例)与GDM组(216例),两组均行CYP7A1基因-204A/C多态性检测,在产前1周收集血液样本常规行空腹血糖(FBG)、血脂指标检测,并统计两组妊娠期增重程度与妊娠结局,进一步分析CYP7A1基因-204A/C多态性与妊娠期增重、不良妊娠结局等指标的相关性。结果:健康组CYP7A1基因-204A/C多态位点的等位基因A、C频率分别为56.12%、43.88%,GDM组分别为58.80%、41.20%,两组基因频率分布符合Hardy-Weinberg平衡原理(P>0.05)。GDM组甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、FBG水平高于健康组,妊娠期增重以及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平低于健康组(均P<0.05);各基因型亚组间比较,健康组的CC基因亚组FBG水平低于AA基因亚组,AC基因亚组的HDL-C水平高于AA基因亚组(均P<0.05);GDM组的CC基因亚组妊娠期增重小于AA基因亚组(P<0.05)。两组产妇再按照妊娠期增重标准不同进行分组,在妊娠期增重≤14.0 kg组中,CC基因型亚组的TG水平明显高于AA基因型亚组,且巨大儿发生率明显高于AA基因型亚组(均P<0.05);在妊娠期增重>14.0 kg组中,CC基因型亚组的FBG水平明显小于AA基因型亚组(P<0.05)。Pearson相关性分析,CC基因型与妊娠期增重呈负相关性(r=-0.339,P=0.004),与妊娠不良妊娠结局呈正相关性(r=0.214,P=0.011)。结论:CYP7A1-204A/C基因多态性或导致CYP7A1酶的表达或活性改变,可能对产妇妊娠期增重和新生儿不良妊娠结局产生影响。然而其调控机制较为复杂,尚需要更多研究来加以证实,以方便后期更好地进行妊娠期营养管理和母婴保健。

胆固醇7α-羟化酶基因A-204C单核苷酸多态性及其与血浆血脂的关联

为探讨胆固醇7α-羟化酶基因(CYP7A1)多态性与中国四川汉族人群的分布及其与冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary heart disease,CHD)易感性的关系,对183例CHD患者和101例对照用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)进行CYP7A1基因A-204C基因座Eco31I酶切多态性分析。结果可见CYP7A1基因A-204C多态基因座等位基因C、A频率在CHD组和正常对照组分别为0.840、0.160和0.822、0.178,基因频率分布符合Hardy-Weiberg平衡定律。CYP7A1基因A-204C多态基因座基因型频率,等位基因A、C频率在CHD患者组和正常对照组间比较差异无显著性(P>0.05),但冠心病患者组中AA,AC,CC3种基因型之间总胆固醇(TC)的差异具有显著性(P<0.05),AA基因型患者的高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平较AC,CC基因型患者显著降低(P<0.05);而对照组中CC,CA基因型个体间总胆固醇(TC)水平差异有显著性(P<0.05)。中国汉族与白种人CYP7A1基因A-204C多态基因座等位基因频率比较,两者差异具有显著性(P<0.01)。提示CYP7A1基因A-204C多态基因座多态性与CHD无相关性,但与总胆固醇存在较密切的关联(P<O.05),在CHD患者组AA基因型中高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平显著下降(P<0.05)。

中链甘油三酯对小鼠胆固醇代谢和胆固醇7α-羟化酶表达的影响

目的研究中链甘油三酯对小鼠胆固醇代谢的影响及可能的机制。方法分别用AIN-93G配方饲料(BC),含1%胆固醇的AIN-93G配方饲料(Chol),含1%胆固醇和14%富含豆蔻酸的长链甘油三酯(LCT)的AIN-93G配方饲料(Chol+LCT),含1%胆固醇和14%的中链甘油三酯(MCT)的AIN-93G配方饲料(Chol+MCT)喂养C57小鼠6周,每组15只。观察血清总胆固醇(TC)、肝脏胆固醇含量、机体总胆汁酸含量以及肝脏胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)的表达。结果Chol+MCT组小鼠血清TC低于(P<0.01)、肝脏胆固醇高于(P<0.01)、机体总胆汁酸含量低于(P<0.01)、CYP7A1表达低于(P<0.01)Chol组小鼠;Chol+MCT组小鼠血清TC低于(P<0.01)、机体总胆汁酸含量以及CYP7A1表达高于(P<0.01)Chol+LCT组小鼠、肝脏胆固醇含量不变。结论MCT对机体胆固醇水平的影响与CYP7A1表达有关。

胆固醇7α-羟化酶基因研究进展

胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)是胆汁酸经典合成途径中的限速酶,对维持机体胆固醇代谢平衡起关键作用。目前已知CYP7A1基因的表达受包括该基因自身的多态性在内的多种因子调控。CYP7A1代谢途径作为脂类代谢通路的重要一部分,其活性发生改变后可能会引起与脂类代谢紊乱有关的胆结石、胆囊癌和心血管疾病等。就有关CYP7A1基因的最新研究进展进行了较系统的综述。

阻塞性胆汁淤积大鼠肝脏胆固醇7α-羟化酶和核受体FXR、SHP表达变化

目的:通过建立梗阻性黄疸动物模型,观察胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7alpha-hydroxylase,CYP7A1)、类法尼醇X受体(farnesoid Xreceptor,FXR)及小异源二聚体伴侣受体(small heterodi mer partner,SHP)的表达变化,并分析CYP7A1和FXR、SHP之间的关系。方法:采用胆总管结扎术制备大鼠梗阻性黄疸模型,分别于术后1、3、14 d麻醉后放血处死。取大鼠肝脏,抽提总RNA,采用实时定量RT-PCR检测CYP7A1 mRNA表达;提取肝细胞核蛋白,采用蛋白质印迹技术检测FXR和SHP蛋白表达。结果:与假手术对照组相比,梗阻性黄疸组大鼠肝细胞CYP7A1 mRNA表达明显增强,FXR和SHP蛋白表达同步降低,差异均有统计学意义(P<0.001,P<0.05)。结论:CYP7A1表达增强可能与FXR、SHP表达减弱有关。

胆固醇7α-羟化酶调节的研究进展

胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)是在肝脏合成并促使胆固醇转化成胆酸的限速酶,对维持体内胆固醇代谢平衡起到关键作用。CYP7A1基因表达受脂代谢相关的多个核因子的精细调控,诸如HNF4a,LXR,FXR,SHP和FGF15/19及相关激素等其他因子,以维持胆固醇代谢平衡;多种中药及饮食成分对CYP7A1的基因表达也有明显调节作用,进而影响血脂代谢。本文就近10年来有关CYP7A1调节的研究进展综述如下。

胆固醇7α-羟化酶基因多态性与儿童血脂水平的关系

目的:探讨胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)基因多态性与儿童血脂水平的关系。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)对216例健康儿童CYP7A1基因的A-204C基因座进行Eco31Ⅰ酶切多态性分析,血脂测定在全自动化分析仪上进行。结果:研究人群中CYP7A1基因的三型频率分别为:AA型6.0%,AC型26.4%、CC型67.6%。AA基因型在LDL-C,TC,Lp(a)水平上均低于其他基因型,并且其差异具有显著性(P<0.05)。CC基因型在HDL-C水平上均高于其他基因型,且其差异具有显著性(P<0.05)。三型在ApoA上两两之间均存在显著性差异,而在TG中无显著性差异。结论:CC基因型在研究人群中所占的比例最高,AA基因型所占的比例最小。CYP7A1的基因多态性与儿童的血脂水平存在密切的关系。

胆固醇7α-羟化酶基因多态性与小儿血脂的关系

目的:探讨胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)基因多态性与湖北儿童血脂水平的关系。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)对216例健康儿童CYP7A1基因的A-204C基因座进行Eco31I酶切多态性分析,血脂测定在全自动化分析仪上进行。结果:研究人群中CYP7A1基因的3型频率分别为:AA型6.0%,AC型26.4%、CC型67.6%。AA基因型在LDL-C,TC,Lp(a)水平上均低于其他基因型,并且其差异具有显著性。CC基因型在HDL-C水平上均高于其他基因型,并且其差异具有显著性。3型在ApoA上两两之间均存在显著性差异,而在TG中无显著性差异。结论:CC基因型在研究人群中所占的比例最高,AA基因型所占的比例最小。CYP7A1的基因多态性与儿童的血脂水平存在密切的关系。

胆固醇7α-羟化酶基因——204A/C基因多态性与胆石病及血清脂质水平相关性的meta分析

目的评价CYP7A1-204A/C基因多态性与胆石病风险及血清脂质水平之间的相关性。方法通过纳入排除标准,获取符合要求的文献;根据研究间的异质性,确定使用随机效应模型或固定效应模型,使用Rev Man对数据进行分析。结果使用5篇文献评估CYP7A1-204A/C基因多态性与胆石病风险间的关系,涉及病例组人群830名,对照组健康人群882名。结果显示,CYP7A1-204A等位基因导致GSD风险提高5%(OR=1.05,95%CI:0.91~1.22,P=0.48),提高幅度不显著。以种族进行的亚组分析后,仍未见显著差异。使用4篇文献对CYP7A1-204A与血清脂质水平的相关性进行分析,涉及病例组人群802名,健康对照组人群691名。所有对象均为亚洲人。数据整合结果显示,AC基因型比AA基因型人群TG水平更高,差异显著(MD=-0.42,95%CI=-0.76~0.08,P=0.01)。显示AC基因型比AA基因型人群TG水平更高,差异显著(MD=-0.42,95%CI=-0.76~0.08,P=0.01)。CC基因型病例组人群的LDL-C显著高于AA基因型病例组人群(MD=-0.40,95%CI=0.06~0.73,P=0.02);AA基因型比CC基因型对照组人群有着更高的TC水平(MD=-0.35,95%CI=-0.60~0.10,P=0.007);AC基因型对照组人群的TG水平高于CC基因型对照组人群,差异显著(MD=-0.35,95%CI=-0.61^-0.08,P=0.01);对比对照组人群的CC基因型,AA基因型人群的HDL-C水平更高(MD=-0.15,95%CI=-0.21~0.09,P=0.0000098)。结论 CYP7A1-204A/C多态性与GSD风险在亚洲人群中无相关性;但是,CYP7A1-204A/C多态性与血清脂质水平有显著相关性。

铅对原代培养小鼠肝细胞胆固醇7α-羟化酶基因表达影响

目的探讨醋酸铅对培养的小鼠肝细胞中胆固醇7α-羟化酶基因表达的作用,为解释铅与血脂之间的关系提供理论依据。方法提取20只昆明小鼠的肝细胞,进行离体培养,以不同剂量的醋酸铅作为处理因素,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测胆固醇7α-羟化酶基因的mRNA表达,并进行比较。结果不同剂量的醋酸铅对胆固醇7α-羟化酶基因转录水平的影响不同。高、中剂量组与对照组的差异均具有显著性(P<0.05或P<0.01),表现为随着染毒剂量的增加,胆固醇7α-羟化酶的mRNA表达量逐渐下降。结论醋酸铅作为一种暴露因素对胆固醇7α-羟化酶基因的表达有抑制作用。

孕期和哺乳期大鼠肝脏胆酸和胆酸调控法尼醇X受体、小异二聚体伴侣受体和胆固醇7α-羟化酶的变化

目的研究健康SD鼠在妊娠和哺乳期肝脏胆酸代谢基因的变化。方法取孕10、14、19d及产后1、7、14、21d的大鼠肝脏,检测胆酸水平和肝脏法尼醇X受体(FXR)、小异二聚体伴侣受体(SHP)、胆固醇7α-羟化酶(Cyp7α1)的表达。用Western blot法测Cyp7α1的蛋白表达情况。结果孕晚期健康大鼠,肝脏中胆酸及Cyp7α1表达不升高;哺乳期的大鼠,肝脏胆酸增加,FXR表达升高;在孕晚期及哺乳期靶基因SHP表达均高于对照组,且其表达高峰期是第孕19天,其值可达对照组的6倍之多。结论健康大鼠在产后肝脏胆酸合成增加,而孕期减少,可能与Cyp7α1、FXR及SHP表达有关。

以调节胆固醇7α-羟化酶为靶点的功能性食品研究进展

胆固醇7α-羟化酶(Cholesterol 7-alpha hydroxylase,CYP7A1)在维持胆固醇代谢动态平衡时起重要的作用。通过概述CYP7A1的调控机制,综述近年来报道的益生菌、膳食纤维、多酚类物质等功能性食品对CYP7A1基因表达的调节和影响,展望以CYP7A1为靶点的降胆固醇功能性食品的开发前景,旨在为筛选以CYP7A1为靶点的功能性食品提供参考。

阿尔茨海默病患者7α-羟化酶基因多态性与血脂关系的研究

目的探讨胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)基因多态性与阿尔茨海默病(AD)的关系。方法用PCR-RFLP方法分析7α-羟化酶A-204C多态性。结果A-204C多态性基因型频率、等位基因A、C频率在组间比较差异无显著性(P>0.05),但基因型为CC的AD患者,其TC和LDL-C水平显著高于基因型为AC的AD患者(P<0.05)。结论7α-羟化酶A-204C多态性与AD无相关性(P>0.05),但患者组CC基因型与TC、LDL-C水平密切相关(P<0.01)。

胆固醇7α-羟化酶在胆汁淤积中的调节机制研究进展

胆汁淤积是由多种原因所致的胆汁酸异常积聚,临床表现为黄疸或黄斑瘤等。胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)是体内催化胆固醇合成胆汁酸的限速酶,其活性与胆汁酸的合成量密切相关。机体中由法尼酯衍生物X受体(FXR)介导的法尼酯衍生物X受体/小异二聚体伴侣(FXR/SHP)信号通路和法尼酯衍生物X受体/成纤维细胞因子19/成纤维生长因子受体4(FXR/FGF19/FGFR4)信号通路以及由孕甾烷X受体(PXR)介导的信号通路是重要的胆固醇7α-羟化酶调节路径。上述通路通过调节胆固醇7α-羟化酶的活性,调控胆汁酸的合成,进而维持胆汁酸的内平衡。本文就近年来有关胆汁淤积中胆固醇7α-羟化酶的调节机制研究进行综述,为探索临床治疗胆汁淤积的靶点提供了参考。

一例17α-羟化酶缺乏症患者的护理

先天性肾上腺皮质增生症（CAH）是一组因肾上腺皮质激素合成途径中酶缺陷引起的疾病,属常染色体隐性遗传病。其中21-羟化酶缺乏最常见,约占90%;其次是11β-羟化酶缺乏,约占5%;而17α-羟化酶缺乏症相对少见[1]。自1966年由Bigliefi等[2]报道第一例患者至今，

胆固醇7α-羟化酶的研究进展

胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase, CYP7A1)是催化胆固醇在肝脏分解为胆汁酸的限速酶,受多种因子调控,以维持胆固醇代谢平衡,多种中药及饮食成分对CYP7A1的基因表达有明显调节作用,影响血脂代谢,本文就CYP7A1基因的研究进展综述如下。

正常孕妇及妊娠糖尿病患者胆固醇7α-羟化酶基因-204A/C多态性的研究

目的 探讨胆固醇7α-羟化酶基因(CYP7A1)-204A/C单核苷酸多态性与妊娠糖尿病(GDM)患者及正常孕妇血脂水平等的关系。方法 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测1 037例正常妊娠者和627例GDM患者CYP7A1-204A/C基因多态性。酶法测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和血糖(Glu),化学发光法测定血浆胰岛素(Ins)。免疫透射比浊法测定载脂蛋白A1(apoA1)和B(apoB)水平。结果 CYP7A1-204A/C多态位点等位基因A、C频率在GDM组和对照组分别为0.586、0.414和0.557、0.443。两组人群基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律。CYP7A1-204A/C多态性基因型频率、等位基因A、C频率在GDM组和正常对照组间比较差异无统计学意义。正常妊娠对照组CC基因型者较AA型者血浆apoA1水平增高,Ins和HOMA-IR水平降低(P均<0.05);正常妊娠对照组中非肥胖亚组CC基因型者血浆TG水平较AA基因型者增加(P<0.05)。在GDM组CYP7A1基因-204A/C多态性AA基因型者较CC型者孕期增重增加(P<0.05)。结论 CYP7A1基因-204A/C多态性与GDM无关联,但GDM患者CYP7A1基因-204A/C多态性与孕期增重密切相关。该基因位点的变异在正常妊娠孕妇中与血浆apoA1、胰岛素和HOMA-IR水平密切相关,在非肥胖正常妊娠人群中与血浆TG水平增高密切相关。

CYP17A1基因TAC329AA纯合突变致17α-羟化酶缺陷症一例家系研究

目的 通过对一个 17α 羟化酶缺陷症家系的临床和分子生物学研究 ,探讨其分子机制。方法 针对在本中心就诊的一个 17α 羟化酶缺陷症家系 ,全面收集患者及其家庭成员的临床和实验室资料 ,同时采用PCR和亚克隆测序方法检测 17羟化酶基因 (CYP17A1)序列。结果 患者临床及内分泌功能检查完全符合 17α 羟化酶缺陷症。CYP17A1基因序列分析发现 ,第 6号外显子 3 2 9位密码子发生了TAC3 2 9AA突变 ,引起Tyr3 2 9Lys错义突变和以后的移码突变。患者为纯合突变 ,患者的父母均为携带该突变基因的杂合子。结论 本研究的这个家系 ,CYP17A1基因突变是 17α 羟化酶缺陷症的致病基因。CYP17A1第 6号外显子 3 2 9位密码子TAC被AA替代为一新的纯合突变类型。

蚯蚓冻干粉对高血脂小鼠胆固醇7α-羟化酶基因的调节作用

以高脂饲料饲喂昆明种小鼠构建高血脂小鼠模型,灌胃给予高、中、低剂量(0.4、0.2和0.1 g/kg)蚯蚓冻干粉,每天一次,同时饲喂高脂饲料,共饲养10周。提取小鼠肝脏总RNA,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测胆固醇7α-羟化酶(CYP7α1)的mRNA水平。结果表明,实验组小鼠的CYP7α1 mRNA相对含量显著高于高脂饲料组小鼠,提示蚯蚓冻干粉能够降低高血脂小鼠血浆胆固醇水平可能与上调肝CYP7α1 mRNA的表达有关。