2′,7′-二氯-5(6)-异硫氰基荧光素的合成和表征

异硫氰酸荧光素(FITC)是一种重要的荧光探针。以4-硝基邻苯二甲酸和4-氯间苯二酚为原料,通过缩合、还原和异硫氰酸化制备了2′,7′-二氯-5(6)-异硫氰基荧光素,总收率达34.78%。产物结构经过了红外光谱、核磁共振谱和质谱的确证。产物荧光性能经荧光光度计测定,结果表明其荧光性能优于FITC。

2’,7’-二氯荧光素荧光法测定环境样品中微量As(Ⅲ)的研究

本文报道了以 2’,7’ -二氯荧光素为指示剂 ,荧光法间接测定微量 As3+ 的新方法。在 p H=5 .5～ 7.5中性缓冲介质中 ,I2 与 2’,7’ -二氯荧光素反应 ,使 2’ 7’ -二氯荧光素的荧光猝灭 ,当加入 As3+与 I2 反应使体系荧光增强 ,体系激发波长和发射波长分别为λex=5 0 8nm,λem=5 2 4nm。As3+含量在 1.0～ 80 μg· L- 1范围内呈良好线性关系 ,检测限为 1.0 μg·L- 1 。该方法灵敏度高 ,选择性好 ,用于工业废水和河水样品微量 As3+ 的测定 ,结果满意。

以溴化钾-溴酸钾-2′,7′-二氯荧光素为试剂对痕量水杨酸的间接荧光测定法

在pH为3.8～7.0范围内，利用Br2（0.5 mol/L H2SO4介质中，Br－与BrO-３反应生成）与2′,7′－二氯荧光素反应，使2′,7－二氯荧光素荧光猝灭。当加入水杨酸时，水杨酸的溴代反应使体系荧光增强，建立了荧光法间接测定痕量水杨酸的新方法。该体系激发波长，发射波长分别为雃x505nm, ?em520nm。水杨酸浓度在2.0～48.0靏/L 范围内呈线性关系；检出限为2.0靏/L 。本法选择性好，用于脚癣药水中水杨酸的测定，结果满意。

2,7-二氯荧光素与蛋白质相互作用的分光光度法研究

首次采用分光光度法研究了模拟生理条件(pH7.4Tris-HCl缓冲溶液,离子强度I=0.1)下2,7-二氯荧光素与牛血清白蛋白(BSA)相互作用的情况。研究结果表明两者相互作用形成稳定的复合物,最大吸收波长为509nm,与2,7-二氯荧光素的最大吸收波长502nm比较,红移了7nm;两者之间主要通过静电引力结合,但并不排除疏水作用力和氢键;两者之间的结合数为32。

国产荧光素钠注射液中杂质的检测及结构鉴定

目的对国产荧光素钠注射液中的杂质进行分离及结构鉴定。方法采用RP HPLC法对荧光素钠注射液进行成分分析并用硅胶柱色谱法对主要杂质进行分离,根据质谱和核磁共振谱数据进行结构鉴定。结果和结论荧光素钠注射液中含有6羟基7磺酸基9(邻羧基苯基)3H口占吨3酮、6羟基9(邻乙氧基羰基苯基)3H口占吨3酮和2(2,4二羟基苯甲酰基)苯甲酸等杂质。

2’,7’-二氯-5(6)-羧基荧光素的合成及其荧光性能研究

以偏苯三酸酐、4-氯间苯二酚为原料,在ZnCl2催化下反应得到2’,7’-二氯-5(6)-羧基荧光素混合物,并用柱色谱进行异构体分离。对取代基团对其荧光性能影响的研究发现,顶环上引入氯使其最大荧光激发波长和荧光发射波长发生红移,荧光强度有所增加;底环上引入羧基,其Stokes位移和荧光量子产率略有降低,但该活性基团的引入将更有利于对生物体进行检测。由此表明,2’,7’-二氯-5(6)-羧基荧光素有望用于荧光探针。

荧光猝灭法测定痕量六价铬

基于六价铬与碘化钾反应生成了单质碘 ,碘可以使 2′ ,7′ 二氯荧光素 (DCF)发生荧光猝灭 ,从而间接测定六价铬。六价铬浓度在 0 .2 0～ 2 .5 0 μg/2 5ml范围内 ,荧光强度差值与六价铬浓度呈线性关系 ,线性回归方程ΔF =12 .12C + 0 .19,相关系数r =0 .9993,检出限为 0 .10 μg/2 5ml。方法简便、灵敏度较高 ,已用于合成样中六价铬的测定 ,回收率在 10 0 %～ 10 3% 。

二氯荧光素荧光法测定十二烷基磺酸钠

研究了2′,7′-二氯荧光素(2′,7′-Dichlorofluorecei)荧光法测定十二烷基磺酸钠(Sodium laurylsulfonate,DOSO3Na)。在pH7.20KH2PO4-Na2HPO4缓冲溶液中,DOSO3Na与2′,7′-二氯荧光素反应,使体系荧光强度增加,体系激发和发射波长分别为498nm和532nm,DOSO3Na含量在0～85μg/mL范围内,荧光强度ΔF呈良好的线性关系,检出限为0.0576μg/mL。方法用于环境水样中DOSO3Na的测定,分析结果与亚甲蓝方法测定结果吻合。

分子荧光探针在一氧化氮分析中的应用进展

近年来,分子荧光探针被广泛地应用于生理内源性一氧化氮的分析测定.本文介绍和评述了包括芳香邻二氨类、Fe2+-配合物类以及2,7-二氯氢化荧光素等分子荧光探针在一氧化氮分析方面的应用及研究进展.引用文献63篇.

基于1,3-二氯-7-羟基-9,9-二甲基-2(9H)-吖啶酮(DDAO)的近红外荧光探针研究进展

1,3-二氯-7-羟基-9,9-二甲基-2(9H)-吖啶酮(DDAO)是一种优异的近红外荧光染料,具有近红外发射、低pK_(a)值(≈5.0)、高水溶性以及高量子产率(Φ=0.39),近年来在荧光探针领域受到广泛关注.研究证明,以该染料设计合成的荧光探针可以在温和的水溶液中工作,具有反应迅速、选择性和灵敏度高、检测限低以及比色信号变化明显等优异的传感性能.此外,该类探针的细胞毒性低,对于活细胞和生物体的检测具有显著的应用价值.综述了基于DDAO及其衍生物的荧光探针的研究进展,主要包括探针在生物酶、活性氧、活性氮、蛋白质以及Pd^(0)的识别检测中的分子设计、作用机理和应用,并对该类荧光探针的发展前景进行了展望.

mIL-21基因转染的Sp2/0瘤苗细胞的抗肿瘤机制探讨

目的:探讨小鼠IL-21瘤苗-Sp2/0-mIL-21抗肿瘤效应的机制。方法:用流式细胞术检测Sp2/0-mIL-2瘤苗细胞表面MHC-Ⅰ类分子及CD80分子的表达。以瘤苗细胞接种BALB/c小鼠,以CFSE,7-AAD标记,用流式细胞术检测NK细胞、CTL的细胞毒活性。观察肿瘤组织中淋巴细胞的浸润。用RT-PCR检测肿瘤组织中CXC家族趋化因子I-TAC的表达。结果:与对照组相比,瘤苗细胞膜表面MHC-Ⅰ类分子的表达明显上调。瘤苗接种组小鼠NK细胞、CTL的细胞毒活性明显增强。病理分析发现,肿瘤组织中有较多的淋巴细胞浸润并检测到干扰素诱导的T细胞α趋化因子(I-TAC)的表达上调。结论:肿瘤细胞瘤苗Sp2/0-mIL21可增强小鼠的细胞免疫作用,其抗肿瘤机制可能与T细胞的增殖、活化,促进NK细胞的分化成熟,淋巴细胞向肿瘤组织浸润,以及增强NK细胞和CTL的细胞毒活性有关。

维生素C与宫颈癌HeLa细胞凋亡关系的研究

目的:探讨维生素C是否能诱导实体肿瘤宫颈癌HeLa细胞凋亡,及其作用机制。方法:采用不同浓度的维生素C处理HeLa细胞不同时段,显微镜下观察细胞的形态学变化;噻唑蓝(MTT)法和流式细胞分析法测定细胞生长抑制情况;检测不同浓度的维生素C[(0.25-4)mmol/L]处理细胞15min、30min、1h、2h、5h、8h、12h、24h不同时段后细胞内过氧化氢(H2O2)水平变化情况。结果:0.25mmol/L维生素C对HeLa细胞生长无明显影响,而0.5mmol/L维生素C处理HeLa细胞24h后细胞的生长受到抑制,表现出细胞凋亡的特征,MTT检测此时细胞的存活率只有59.94%,随着维生素C浓度的增加和作用时间的延长效果更加明显,与流式细胞分析的结果一致。用DCFH-DA标记细胞,检测细胞内H2O2水平,发现不同浓度维生素C处理HeLa细胞15min后,除0.25mmol/L组外,其他组的细胞内H2O2水平比对照组升高(4mmol/L组为对照组的162.46%),且呈现明显的剂量依赖性,持续到30min达到高峰(4mmol/L组为为对照组的174.55%),1h后检测细胞内H2O2水平已下降,以后各时间段检测到的细胞内H2O2水平均比对照组低。结论:低浓度维生素C(≤0.25mmol/L)单独处理实体肿瘤宫颈癌HeLa细胞不能抑制其生长,而较高浓度(0.5mmol/L)维生素C能诱导HeLa细胞凋亡,且与细胞内H2O2水平改变有密切关系。H2O2积累是维生素C诱导肿瘤细胞凋亡途径中的早期事件。

不同荧光染料对3种储存温度下血小板的标记效果

目的:研究5-氯甲基荧光素二乙酸酯(CMFDA)、碘代3,3'-二己氧基羰花青[DiOC_(6)(3)]和抗血小板膜糖蛋白(GP)Ibβ抗体衍生物对3种储存温度下血小板的标记效果,以期找出1种受温度因素影响小的血小板荧光标记物。方法:取C57小鼠的全血制备富血小板血浆,分3组(室温组、4℃组和冷冻组)保存。保存24 h后,每组血小板分成3等份,分别用CMFDA、DiOC_(6)(3)以及抗GPIbβ抗体衍生物标记,流式细胞术检测各标记物的阳性率以及平均荧光强度(MFI);同时用流式细胞术检测血小板表面Annexin V和CD62P以评估血小板的凋亡和活化情况。结果:冷冻组血小板的CMFDA和DiOC_(6)(3)的阳性率以及MFI均低于室温组及4℃组。冷冻组血小板的Annexin V和CD62P阳性率均高于室温组和4℃组。抗GPIbβ抗体衍生物对3组血小板标记的阳性率以及MFI无明显差异。结论:CMFDA和DiOC_(6)(3)对冷冻组血小板的标记效果差于室温组和4℃组,考虑与冷冻组血小板的凋亡率和活化率高有关;抗GPIbβ抗体衍生物对3组血小板标记效果无明显差异,可以考虑作为荧光标记物应用于比较室温、4℃和冷冻保存血小板功能的相关实验。

荧光猝灭法测定痕量六价铬

本文研究了用荧光猝灭法测定痕量六价铬。本方法是基于六价铬与碘化钾反应生成了单质碘,碘可以使2’,7’-二氯荧光素(DCF)发生荧光猝灭,从而间接测定六价铬。六价铬浓度在0.20-2.50μAg/25ml范围内,荧光强度差值与六价铬浓度呈线性关系,线性回归方程△F=12.12C+0.19,相关系数γ=0.9993,检测限为0.1μg/25mL。本法简便、灵敏度高,已用于合成样中六价铬的测定,回收率在100～103％,结果令人满意。

减少好氧-厌氧废水处理系统剩余污泥的研究——Suguru Takano,et al．The 10th APCChE Congress，Kitakyushu，Japan，2004．A-165

目前，来自废水处理厂的剩余污泥的处理已经成为废水处理过程中的一个严重问题。一般，剩余污泥采用填埋、焚烧、发生沼气等方法处置。这些方法都存在这样或那样的缺点．解决这一问题的根本方法是减少废水处理过程中污泥的产生量。在本研究中，提出了一种减少生物污泥产生量的废水处理系统。在该废水处理系统中的微生物要交替经历好氧、厌氧过程。

流式细胞术检测中性粒细胞产生活性氧方法学探讨

目的：建立用流式细胞术检测人外周血中性粒细胞（polymorphonuclear cells,PMN）产生活性氧（reactive oxygen species,ROS）的方法。方法：健康人外周全血或用Percoll分离的PMN,加探荧光针双氢罗丹明123（DHR123）或2′,7′-二氯荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）作用15 min,再加佛波醇酯（phorbo 12-myristate 13-acetate,PMA）于37℃作用5－90 min后,用流式细胞仪检测PMN内的罗丹明123（rhodamine 123,RHO）或氧化型二氯荧光素（dichlorofluorecin,DCF）的荧光强度,以反映PMN内ROS产生的水平。结果：以DHR123为荧光探针时,PMA刺激全血或分离PMN产生ROS的时间动力学相似,在37℃作用5－60 min ROS量呈递增趋势,且在60 min左右达到峰值,60－90 min时渐下降。以DCFH-DA为荧光探针时,PMA刺激全血PMN产生ROS,在37℃作用5 min时反应生成ROS量达到峰值,随后出现明显递减趋势,而PMA刺激分离PMN产生ROS在5－30 min逐渐增高并在60－90 min达平台期。实验中还发现甲醛试剂可以降低RHO的荧光强度。结论：采用流式细胞术检测PMN产生ROS是一种简便、可靠、稳定的方法。

适合海洋微藻活体染色的方法评价

为了评估一种快速简单用以确定海洋微藻细胞活性的技术,针对船舶压载水中常见的3个门类中11种10～50μm单细胞微藻用中性红(NR)、5-氯甲基荧光素二乙酸酯(CMFDA)、荧光素二乙酸酯(FDA)三种染料进行染色,通过光镜和荧光显微镜对染色结果进行测定。结果表明,NR(中性红)是检测本实验中全部海洋微藻藻株细胞活性的最佳染料,染色最佳浓度为1/10 000,染色时间为30min;5-氯甲基荧光素二乙酸酯(CMFDA)、荧光素二乙酸酯(FDA)和双荧光染色对海洋微藻藻株活细胞着色时间短,染色效果明显,但其应用具有局限性,适用于检测本实验中甲藻门(塔玛亚历山大藻、链状亚历山大藻、微小原甲藻、利玛原甲藻、东海原甲藻、米氏凯伦藻)和绿藻门(青岛大扁藻和杜氏盐藻)的活性,染色最佳浓度为5μmol/L FDA+2.5μmol/L CMFDA,染色时间为10min,但不适用于检测硅藻门的细胞活性。因此,中性红更适合检测船舶压载水中微藻活细胞,根据光镜下微藻细胞着色情况而判断细胞活性。

流式细胞术检测NK细胞的细胞毒作用的两种方法比较

目的:比较并优化流式细胞术检测人NK细胞体外细胞毒功能的方法。方法:采用Calcein-AM释放法或CFSE/7-AAD法分别对靶细胞进行标记,按10∶1和20∶1效靶比与7例NK细胞在37℃5%CO2培养箱共培养4 h,流式细胞术测定两种不同标记方法的靶细胞死亡率。结果:各实验组中CFSE/7-AAD法检出的靶细胞死亡率均高于Calcein-AM释放法,在低效靶比、弱细胞毒作用条件下,差异具有统计学意义。细胞毒作用较弱时,Calcein-AM释放法平均荧强度变化不显著、结果误差较大;而CFSE/7-AAD法则能更加敏感地检出靶细胞的死亡率。结论:CFSE/7-AAD法能够特异、灵敏地检出NK细胞的细胞毒活性,所获得的结果更为可靠。