2021-2022年河南省猪细小病毒1~7型检测与分析

旨在了解猪细小病毒1~7型(PPV1~PPV7)在河南省的流行情况。利用PCR检测了2021-2022年河南省猪场送检的748份样品,并对检测数据进行了分析。结果表明,PPV1/2/3/5/6/7在河南省各地区一年四季广泛流行,而秋、冬季节是感染高峰期,PPV2(16.04%)的感染率最高,PPV7(15.11%)次之。产房仔猪未检出PPV1/3/5,PPV2/6/7在各生长阶段猪群中均有检出,患呼吸系统疾病的保育和育肥猪中PPV各型检出率均较高,尤以PPV2常见。PPV2和PPV7在口腔液、血样、肺脾淋巴结中检出率均较高,血样中较低,PPV3常存在于血清和组织中,PPV5多见于口腔液,PPV6多见于血样。研究证实,除PPV4未检出外,其他6种PPV在河南均存在,并且多与其他病原混合感染,PPV2、PPV7可与多种病原混合感染,PPV7与PCV2混合感染最常见。

猪细小病毒7型荧光定量PCR检测方法的建立与应用

猪细小病毒7型(PPV7)是近年来新发现的一种新型PPV。目前,缺乏更为高效的针对PPV7的检测方法,为了建立能够快速检测PPV7的方法,本研究根据PPV7 NS1基因的保守区序列,设计1对特异性引物及TaqMan探针。经过各反应条件的优化,初步建立了一种便捷、灵敏、能够快速准确检测PPV7的荧光定量PCR(qPCR)方法,并对其特异性、敏感性、稳定性以及与SYBR GreenⅠqPCR检测方法的符合率进行检测与对比。结果显示,该方法除对PPV7的基因组DNA有特异性扩增,对猪伪狂犬病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、日本乙型脑炎病毒及PPV1核酸均无交叉反应,特异性较强。该方法对重组质粒标准品检测限为1.76拷贝/μL,而常规PCR方法检测限为1.76×10^(2)拷贝/μL,表明本研究建立的方法敏感性较高。该方法对不同浓度质粒标准品的组内和组间重复性试验变异系数均小于1.7%,重复性较好。利用本研究建立的qPCR方法和SYBR GreenⅠqPCR方法对采自福建地区的150份样品进行检测,结果显示,两种检测方法的阳性率分别为24.67%(37/150)和6.67%(10/150),二者的总符合率为80.67%(121/150)。表明本研究建立的qPCR方法可以用于临床样品的检测。本研究建立的qPCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性稳定性好,为PPV7的流行病学调查及检测提供了新的技术支撑。

猪细小病毒7型VP2蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

为了表达猪细小病毒7型(PPV7)VP2蛋白(由Cap基因编码)并制备其多克隆抗体,试验从GenBank数据库中下载PPV7 Cap基因序列,选择不同毒株的高频序列作为目的基因序列,使用T4 DNA连接酶将目的基因与pET-32a表达载体连接,将连接产物转化至DH5α感受态细胞中,并使用IPTG对重组菌进行诱导,对表达的重组蛋白进行可溶性分析与纯化并通过Western-blot检测重组蛋白的反应原性,用纯化后的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体并分别通过间接ELISA方法、Western-blot检测多克隆抗体的效价及其与重组蛋白的反应性。结果表明:诱导后的重组菌在56 ku处出现明显条带,重组蛋白主要以包涵体的形式表达;纯化后的重组蛋白为单一条带,质量浓度为0.46 mg/mL,能与His标签抗体特异性结合;制备的多克隆抗体的效价为1∶51200,能与重组蛋白特异性结合。说明PPV7 VP2蛋白获得了成功表达,该蛋白具有良好的反应原性和免疫原性,所制备的多克隆抗体效价较高。

线粒体DNA耗竭综合征7型的多学科诊疗一例

一例3岁4月龄女性患儿,共济失调伴极重度感音神经性听力下降2年,为改善听力就诊于我院。基因检测提示TWNK基因c.1186C>T(p.P396S)和c.1357C>T (p.R453W)复合杂合变异,经多学科团队共同讨论,考虑诊断为线粒体DNA耗竭综合征7型(肝脑型)可能性大,患者已有神经系统受累,暂无肝功能不全的证据,人工耳蜗植入术疗效不确定,全身麻醉将加快脑病进展、并可能导致多器官功能衰竭,考虑围术期安全性问题,家长暂不考虑听力干预,予辅酶Q10、叶酸、左卡尼汀、复合维生素口服对症支持治疗。

儿童人腺病毒7型肺炎临床预后不良的危险因素分析及相关预测模型构建

目的探讨儿童人腺病毒7(HAdV-7)型肺炎临床预后不良的危险因素及构建相关预测模型。方法选择2018年1月至2022年1月广西壮族自治区柳州市人民医院就诊的160例HAdV-7型肺炎患儿,按照预后情况分为预后良好组(130例)和预后不良组(30例)。分析儿童HAdV-7型肺炎预后不良的危险因素,并建立风险预测模型,绘制受试者操作特征曲线检验模型预测效果。结果预后不良组发热≥38.5℃时间长于预后良好组,C反应蛋白(CRP)、乳酸脱氢酶(LDH)、降钙素原(PCT)、天冬氨酸转氨酶(AST)高于预后良好组,胸腔积液占比高于预后良好组(P<0.05)。CRP(OR=1.314)、LDH(OR=1.018)、PCT(OR=7.268)、AST(OR=1.148)、胸腔积液(OR=31.406)是儿童HAdV-7型肺炎预后不良的独立危险因素(P<0.05)。预测模型方程为Y=-43.761+0.273×CRP+0.018×LDH+1.983×PCT+0.138×AST+3.447×胸腔积液。模型的曲线下面积为0.979(95%CI:0.950~1.000),灵敏度为93.3%,特异度为95.4%,约登指数为0.887,截断值0.360。结论儿童HAdV-7型肺炎预后不良与CRP、LDH、PCT、AST、胸腔积液有关,以此构建预测模型,能有效预测儿童HAdV-7型肺炎的预后情况。

副猪嗜血杆菌血清7型crp基因缺失株的部分生物学特性

副猪嗜血杆菌(HPS)是引起猪格拉瑟病(Glasser’s disease)的病原菌,给全球和中国规模化养猪业造成了重大经济损失。副猪嗜血杆菌血清型众多,其中血清7型是近年来分离比例越来越高的血清型,也是危害越来越严重的血清型。crp是最重要的系统调控因子之一,在细菌感染过程中对细菌适应环境变化起着至关重要的作用。为了筛选副猪嗜血杆菌血清7型crp基因缺失弱毒株,采用自然转化法构建了副猪嗜血杆菌血清7型临床分离株HPS7的crp基因缺失株,对HPS7及其crp基因缺失株的生长特性、生物膜形成、抗药性、毒力等进行了研究。结果表明,HPS7的crp基因缺失后,生长显著减慢,自凝速度减慢,生物膜形成能力明显减弱,对大部分抗生素的抗性降低,对豚鼠的毒力降低。以上结果说明crp基因对HPS7的生长、抗药性、毒力均有明显影响。本研究结果为筛选副猪嗜血杆菌血清7型弱毒株提供了参考。

马乳头瘤病毒7型的鉴定及遗传进化分析

乳头瘤病毒(Papillomaviruses,PVs)是一类入侵上皮细胞的病原体,可感染人、马等多种动物,已鉴定的马乳头瘤病毒(Equus caballus papillomavirus,EcPV)有9种,包括EcPV-1~9型,国内仅报道马携带EcPV-1。为调查EcPV在北疆地区纯血马中的流行情况,对北疆3个不同地区采集的242份纯血马鼻拭子和精液样品进行PCR检测,结果显示,在3份马匹精液样品中检出EcPV-7,阳性率为1.2%(3/242),提示该病毒可通过垂直传播。利用特异性引物PCR扩增得到其中1份阳性样品中EcPV-7的全基因组序列,并将该样品中的相应毒株命名为XJ-ZS1。同源性分析结果显示,鉴定的XJ-ZS1与瑞士EcPV-7参考株(登录号JX035935)全基因组中不同基因核苷酸序列同源性在98.9%~100%之间,氨基酸序列同源性在98.2%~100%之间,其中XJ-ZS1 L1基因与EcPV-7参考株L1基因核苷酸同源性为98.2%~98.9%,表明XJ-ZS1为EcPV-7新变异株。遗传进化分析结果表明,鉴定的XJ-ZS1与瑞士EcPV-7亲缘关系较近,处于独立进化分支,与瑞士EcPV-3、德国EcPV-6参考株同处于Dyorho乳头瘤病毒属进化分支,提示EcPV-7可能是通过纯血马贸易进入我国。结果首次报道国内马匹中存在EcPV-7,为我国EcPV-7的流行病学研究提供了基础数据。

1027和RAD7型测氡仪测氡效果的研究与评价

采用1027型和RAD7型连续测氡仪对比测量某房间的氡气含量。结果发现,对于同一房间,1027型连续测氡仪不论采用哪种工作状态(enable和disable),测量数据和RAD7型连续测氡仪测量数据差别都很大;1027型测氡仪测量数据稳定性差,波动较大,RAD7型连续测氡仪测量数据稳定性好,波动较小;湿度对2种仪器的影响都很大。

儿童重症7型腺病毒肺炎45例临床分析

目的总结儿童重症7型腺病毒肺炎的临床特点,以期为临床的诊断治疗提供经验。方法回顾性分析2019年2~6月确诊为重症7型腺病毒肺炎患儿的临床资料。结果45例患儿中男女比为3:2,中位年龄为14个月,均有反复高热、咳嗽、肺部湿啰音,平均热程为14±4 d,发热至呼吸困难的中位时间为8 d,发热至需要呼吸机机械通气的平均时间为11.6±2.5 d。WBC无明显升高,以中性粒细胞为主;血红蛋白、白蛋白轻度下降;血小板、纤维蛋白原正常;天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、降钙素原及C反应蛋白均升高。混合病原体检出率为84%。胸部影像学改变以双肺渗出为主(64%)。支气管镜下表现为支气管内膜炎、气管软化、塑形支气管炎。呼吸系统并发症发生率为100%,肺外并发症主要累及循环系统(47%)、消化系统(36%)和神经系统(31%)。16例患儿的给药方案为静脉注射丙种球蛋白(IVIG)每日400 mg/kg,连用5 d,平均热程为16±5 d;29例患儿的给药方案为IVIG每日1 g/kg,连用2 d,平均热程为13±4 d;两种给药方案治疗患儿的平均热程比较差异有统计学意义(P=0.046)。总病死率为11%。结论儿童重症7型腺病毒肺炎病情重,并发症发生率高,病死率高,需早诊断,早治疗。

Nd替代La对La-Mg-Ni系A_2B_7型贮氢电极合金性能的影响

用冷坩锅磁悬浮熔炼方法制备了La0.7-xNdxMg0.3(NiCoAl)3.5(x=0,0.1,0.3,0.5,0.7)贮氢电极合金,采用X射线衍射Rietveld法、三电极体系及扫描电镜研究合金的相结构和电化学性能以及电极的表面状态。Rietveld法分析表明:合金为多相结构,主相均为Ce2Ni7型六方相,还包括CaCu5型六方相、PuNi3型菱方相、MgCu2型立方相及CrB型正交相;且随着Nd含量x的增加,主相含量增加,相应CaCu5型和MgCu2型相含量降低,PuNi3型相含量则在一定范围内波动;且各组成相单胞体积均呈线性降低趋势。p—c—t曲线显示,合金放氢平台区域变窄,平台压力升高,平台先稍有倾斜后逐渐平坦。电化学性能测试显示,最大放电容量基本呈线性递减;活化性能优异;高倍率放电性能先提高后稍有降低;循环稳定性得到改善。

La-Mg-Ni系A_2B_7型贮氢合金的结构与电化学性能

合金结构研究表明，La2-xMxNi7（x=0．3-0．8）主要由Ce2Ni7，Gd2C07，PuNi3型物相组成。合金中Mg含量对合金相结构有着重要影响，主相的晶胞参数随Mg含量（x）的增加呈线性减小，合金的吸放氢平台也随之升高。电化学测试表明，随合金中Mg含量的增加，合金电极的放电容量先增大后减小，合金电极的循环稳定性呈恶化趋势，La1.4M0.6Ni7合金电极具有最高的电化学放电容量（378mAh·g^-1），La1.6M04Ni7合金电极具有最佳的循环稳定性（S270=81％）。合金电极的高倍率放电性能（HRD）随Mg含量的增加而增大。当合金中Mg含量较低时（x≤0．5），合金电极反应速度控制步骤为氢在合金体相中的扩散；当Mg含量较高时（x≥0．5），合金电极反应速度控制步骤转变为电极表面的电荷转移。

腺病毒7型急性呼吸道感染暴发流行的流行病学调查

目的调查某单位由腺病毒7型引发的呼吸道传染病疫情。方法用现场流行病学调查、临床检查和实验室检测等方法,对1起由腺病毒7型引发的呼吸道传染病疫情进行调查。结果 2013年1月13日～2013年2月4日,共有1400人的某单位突发呼吸道传染病疫情,其中440例（31.43%）出现急性呼吸道感染,主要症状有咳嗽（95.45%）,381例有咽痛（86.59%）,375例咳白痰（85.23%）;全部有咽部充血;白细胞计数在（4.00～9.00）×109/L范围内有283例（64.32%）;肝功异常36例（8.18%）;肺炎支原体抗体阳性患者74例（16.82%）;存在肺部CT异常266例（60.45%）;腺病毒基因阳性111份（25.23%）,其中82份（73.87%）标本的反应产物经测序证实为腺病毒7型。均经过抗感染及抗病毒治疗好转出院。结论此次疫情主要是由腺病毒7型引发的急性呼吸道感染,具有传播快、感染率高的特点,多为轻症呼吸道症状。

A_2B_7型La_(0.75)Mg_(0.25)Ni_(3.5-x)Al_x(x=0～0.3)合金相结构及电化学性能

采用感应熔炼方法制备了A2B7型La0.75Mg0.25Ni3.5-xAlx(x=0,0.02,0.060.1,0.3)四元贮氢合金,系统研究了Al元素部分替代Ni对A2B7型La0.75Mg0.25Ni3.5合金相结构及电化学性能的影响。X射线衍射(XRD)分析表明:La0.75Mg0.25Ni3.5由单一La2Ni7相组成;Al元素加入后,开始出现CaCu5型LaNi5相,当x=0.3时,LaNi5相成为合金的主相。Rietveld分析表明:随着Al含量的增加,LaNi5相逐渐增多,Al的加入利于CaCu5型LaNi5相的形成。电化学测试表明:Al替代Ni对A2B7型合金La0.75Mg0.25Ni3.5电极活化性能影响不大;而最大放电容量随Al在La0.75Mg0.25Ni3.5-xAlx合金中替代量的增加而减小。当放电电流密度为1600mA/g时,合金的倍率放电性能由68.8%(x=0)增加到81.16%(x=0.1)然后减小到65.67%(x=0.3)。此外,La0.75Mg0.25Ni3.5-xAlx合金电极循环稳定性先增加而后下降。x=0.06时合金电极容量保持率最大(S100=85.21.%)。

猪细小病毒7型SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立

为建立猪细小病毒7型(PPV7)的快速定量检测方法,本研究根据PPV7(KU563733.1)基因序列设计一对特异性引物,扩增155 bp的PPV7衣壳蛋白基因,构建重组质粒pClon007-PPV7,以其作为标准品建立了PPV7的SYBR GteenⅠ荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法在5.00×10~9拷贝/μL^5.00×10~3拷贝/μL范围内呈良好的线性关系。该方法对猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病毒、乙脑病毒、口蹄疫病毒常见病原的检测均无特异性扩增,仅PPV7出现特异性扩增;该方法检测灵敏度可达5.00×10~1拷贝/μL;批内和批间变异系数均低于1%,具有较高的重复性和稳定性。对临床样品的检测结果显示,所建立的荧光定量PCR阳性检测率为71.88%,比普通PCR法检测的阳性率提高了约4.55%。该研究方法的建立为PPV7提供了一种新的快速定量检测技术。

盐酸阿比朵尔抗腺病毒7型的实验研究

目的:明确抗病毒新药盐酸阿比朵尔体外抗腺病毒7型(ADV-7)的作用方式。方法:主要通过观察细胞病变效应(CPE)、噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性、病毒滴定3种方法从药物抗病毒生物合成、药物直接杀伤病毒以及药物抗病毒吸附3方面检测盐酸阿比朵尔的作用方式。结果:盐酸阿比朵尔对ADV-7无直接杀伤作用,也不能阻止ADV-7的吸附和穿入,各用药组均出现典型的CPE,但盐酸阿比朵尔能明显抑制ADV-7的生物合成作用,对细胞的半数毒性浓度(CC50)为85.37 mg/L,对ADV-7的半数有效浓度(IC50)为15.39 mg/L,治疗指数(TI)为5.55,且随着药物浓度的增加,病毒所致的CPE效应逐渐减弱,培养液中的病毒滴度也逐渐降低,而病毒抑制率则明显升高。结论:盐酸阿比朵尔在体外通过抑制病毒生物合成而发挥抗ADV-7的作用,其具体作用机制有待进一步研究。

猪链球菌种及其1、2、7型多重PCR检测方法的建立与应用

【目的】建立致病性猪链球菌种及其1、2、7型的快速多重PCR检测方法,并进行初步的临床应用。【方法】根据猪链球菌种特异的gdh基因序列及其1(14)、2(1/2)、7型特异的cps1I、cps2H、cps7H基因序列,分别设计4对引物,通过对单个基因PCR和多重PCR扩增条件、反应体系的优化,建立了快速检测猪链球菌种及其1(14)、2(1/2)、7型的4重PCR方法。利用保存的猪链球菌不同血清型菌株和其他相关标准菌株作为参考菌株,对建立的多重PCR方法进行特异性和敏感性试验。用所建立的4重PCR方法对河南省不同地市的39份猪扁桃体样品进行检测,并选取部分样品的PCR产物进行测序验证。【结果】所建立的4重PCR方法特异、敏感,对猪链球菌2型的最低检出水平为2.52×103CFU/mL。临床检测及测序结果显示,该多重PCR准确性较高。【结论】建立的4重PCR方法可用于猪链球菌主要致病血清型的快速检测。

A2B7型La0.75Mg0.25Ni3.5-xFex(x=0～0.3)贮氢合金相结构及电化学性能研究

采用感应熔炼方法制备了La_(0.75)Mg_(0.25)Ni_(3.5-x)Fe_x(x=0,0.05,0.1,0.2,0.3)四元贮氢合金,系统地研究了合金B侧Fe对Ni部分替代对合金相结构及电化学性能的影响。X射线衍射(XRD)分析表明,La_(0.75)Mg_(0.25)Ni_(3.5-x)Fe_x由(La,Mg)2Ni7相(包括Gd2Co7型高温相和Ce2Ni7型低温相)组成。此外,随着Fe元素的加入,该类合金中出现CaCu5型LaNi5相,且随着Fe含量的增加而增多。电化学测试表明,随Fe含量的增加,合金电极活化次数变化不大,而其最大放电容量呈现先增后减的趋势,合金的最大放电容量由x=0.05时的376.21mAh.g-1下降到x=0.3时的340.89mAh.g-1;合金的高倍率放电性能随着Fe含量的增加而降低,当电流密度为900mA.g-1时,合金的高倍率放电性能由83.66%(x=0)减小到62.23%(x=0.3);循环稳定性先增加后下降。

猪链球菌7型的分离鉴定及药敏试验

某猪群暴发类似猪链球菌病,为确诊和防制该病,通过将病料接种到血液营养琼脂培养基和TSA培养基分离细菌,对分离菌株进行生化鉴定和PCR鉴定,并接种小白鼠进行动物试验和药敏试验。结果表明,分离的细菌为猪链球菌7型,对小白鼠具有致病性,且对恩诺沙星和头孢唑啉高度敏感。该结果对临床防制猪链球菌病具有参考意义。

WJ-7型无砟轨道扣件扣压力损失的室温蠕变试验研究

为了探讨室温（常温）蠕变对无砟轨道扣件扣压力损失的影响,通过试验研究分析室温蠕变对WJ-7型扣件扣压力的损失。分别进行保持扣件变形不变与保持初始扣压力不变的2组（各5套扣件）试验,在组装好的扣件相应位置埋设压应力传感器以测量扣件扣压力,在保持一定扣压力情况下,用T形螺栓螺母位移的变化表示弹条的蠕变变形量,对比分析2种情况下扣件蠕变规律及其对扣压力的影响。试验表明：在初始扣压力为10 kN,分别保持扣件弹条变形不变和保持扣件扣压力不变情况下,弹条蠕变分别为1.45 mm和2.12 mm,若都转化成扣压力的损失,则分别为1.00 kN和1.46 kN,且二者蠕变都是前期快后期慢,但后者蠕变时间更长,且蠕变量更大；在无车辆荷载作用下,轨下垫板变形是弹条变形的1/50~1/80,对弹条蠕变变形的影响可以忽略。

人类疱疹病毒7型南京株的分离及初步鉴定

从１例健康成人及３名肾病患儿唾液中分离出人类疱疹病毒７型（ＨＨＶ－７）的南京地方株（ＹＹ）。并根据其在植物血凝素（ＰＨＡ）预激活的脐带血单个核细胞上生长与细胞病变效应的特点，采用电镜观察，特异性单克隆抗体ＫＲ－４间接免疫荧光染色，对ＳＵＰＴ１、ＨＳＢ－２。