表皮生长因子蛛毒素受体7次跨膜结构域1通过血管内皮生长因子信号通路调控胃癌迁移的机制研究

目的探究表皮生长因子蛛毒素受体7次跨膜结构域1(ADGRL4)通过血管内皮生长因子(VEGF)信号通路调控胃癌迁移的机制。方法将正常胃黏膜上皮细胞GES⁃1、胃癌细胞SGC⁃7901、HGC⁃27、Hs⁃746T传代培养后,检测ADGRL4表达量。将胃癌SGC⁃7901细胞分为对照组、过表达组、沉默组。对照组转染空载体,过表达组转染ADGRL4上调质粒,沉默组转染ADGRL4沉默质粒。分析并比较3组胃癌细胞侵袭、迁移数及VEGF信号通路蛋白表达量。结果与正常胃黏膜上皮细胞GES⁃1比较,胃癌细胞SGC⁃7901、HGC⁃27、Hs⁃746T中ADGRL4表达量均上升(P<0.05);与胃癌细胞HGC⁃27、Hs⁃746T比较,胃癌细胞SGC⁃7901中ADGRL4表达量较高(P<0.05),故选择SGC⁃7901进行后续实验。与对照组比较,过表达组ADGRL4表达量上升,沉默组ADGRL4表达量下降(P<0.05);与过表达组比较,沉默组ADGRL4表达量下降(P<0.05),说明ADGRL4转染成功。与对照组比较,过表达组细胞侵袭数、迁移数、基质金属蛋白酶(MMP)⁃2、MMP⁃9、VEGF、血管内皮生长因子受体⁃2(VEGFR⁃2)表达量上升,E⁃钙黏蛋白(E⁃cadherin)表达量下降,沉默组细胞侵袭数、迁移数、MMP⁃2、MMP⁃9、VEGF、VEGFR⁃2表达量下降,E⁃cadherin表达量上升(P<0.05);与过表达组比较,沉默组细胞侵袭数、迁移数、MMP⁃2、MMP⁃9、VEGF、VEGFR⁃2表达量下降,E⁃cadherin表达量上升(P<0.05)。结论胃癌细胞经下调ADGRL4干预后,侵袭、迁移数减少,迁移、侵袭相关蛋白表达量得到调节,其机制可能与VEGF通路受到抑制有关。

结直肠癌肿瘤细胞ELTD1基因表达水平及蛋白定位研究

目的研究ELTD1基因在人结直肠正常上皮细胞和肿瘤细胞之间的表达差异,明确其表达蛋白的细胞定位。方法分别抽提对数生长期的人结直肠癌Lo Vo细胞株和正常上皮细胞NCM460细胞株的总RNA,RT-PCR半定量技术扩增靶基因ELTD1和内参基因B2M(β2微球蛋白)的mRNA,利用ELTD1/B2M光密度比值来表示细胞ELTD1 mRNA的相对表达量;Western blot法检测2种细胞株靶蛋白ELTD1和内参蛋白GAPDH,利用ELTD1/GAPDH比值来表示ELTD1蛋白的相对表达量;间接免疫荧光技术检测Lo Vo细胞ELTD1蛋白的细胞定位。结果 Lo Vo细胞和NCM460细胞的ELTD1/B2M灰度比值分别为0.83±0.07和0.11±0.04,ELTD1/GAPDH灰度比值分别是0.74±0.1和0.12±0.04,差异有统计学意义(P<0.05),荧光显微镜下,可见黄绿色荧光信号定位于细胞膜。结论 ELTD1基因在正常上皮NCM460细胞极低表达,而在人结直肠癌Lo Vo细胞株高表达,ELTD1蛋白定位于细胞膜,ELTD1是一种有助于结直肠癌的早期诊断、靶向治疗、疗效判断及预后的潜在生物标志分子。

水稻OsGPCR基因的克隆及遗传转化分析

G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptors,GPCR)基因家族是目前已知最大的膜受体超家族,参与生物的生长发育调控和激素应答.通过RT-PCR分离了水稻中一个具有7次跨膜(Seven transmembrane,7TM)结构域的OsGPCR候选基因;分析该基因启动子序列,发现它含有赤霉素GA应答相关元件.为分析其功能,分别构建OsGPCR过表达和RNA干涉载体,并通过农杆菌介导法转化获得转基因水稻植株.实验结果表明,较之野生型,过表达转基因植株对赤霉素反应更敏感,RNA干涉植株则反之.