LC-MS/MS法测定骨肉瘤患者血清中甲氨蝶呤及其代谢产物7-羟基甲氨蝶呤的浓度

目的:建立测定人血清中甲氨喋呤及其代谢产物7-羟基甲氨喋呤浓度的LC-MS/MS法,并应用于骨肉瘤患者大剂量甲氨蝶呤化疗后的治疗药物监测,为临床合理用药提供依据。方法:以氨基蝶呤作为内标,血清样品经含内标甲醇沉淀蛋白处理。色谱柱为Agilent Zorbax Eclipse Plus C_(18);柱温35℃;流速0.4 mL·min^(-1);流动相为含0.1%甲酸的水溶液和含0.1%甲酸的乙腈溶液,梯度洗脱。质谱检测方式为电喷雾离子阱正离子模式,MRM扫描,监测甲氨蝶呤m/z 455.098→308.000,7-羟基甲氨喋呤m/z 471.187→324.100,氨基蝶呤m/z 441.198→294.100。结果:甲氨蝶呤浓度在2~1000 ng·mL^(-1)(r=0.9985),7-羟基甲氨蝶呤浓度在20~10000 ng·mL^(-1)(r=0.9984)与峰面积线性关系良好。甲氨蝶呤、7-羟基甲氨蝶呤日内及日间RSD≤6.21%。甲氨蝶呤、7-羟基甲氨蝶呤的平均回收率分别为102.83%~119.34%、88.41%~95.37%。结论:本方法简便、准确、快速,适用于甲氨喋呤及其代谢产物7-羟基甲氨喋呤的血药浓度测定。