射频连接器和射频电缆国际标准提案系列报道(三) IEC 61169-4:2008 7-16型射频连接器国际提案介绍

介绍了制定IEC 61169—4:2008际准的背景、必要性及其主要技术指标,及7-16型连接器产品的特点及其应用。为更好地执行该标准,针对一些常见问题进行了说明。

HPV16 E7蛋白阳性和阴性乳癌组织中Rb和P16蛋白的表达

目的:研究人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7蛋白阳性(E7+)和阴性(E7-)乳癌组织中Rb和P16蛋白的表达及意义。方法:以经PCR筛选证实的HPV16 DNA阳性的56例乳癌组织(经Western blotting证实42例HPV16E7+,14例E7-)为研究对象,采用Western blotting方法检测癌组织中Rb和P16蛋白的表达。结果:HPV16E7+、HPV16E7-乳癌组织中,Rb蛋白阳性率分别为9.5%(4/42)、50.0%(7/14),P16蛋白阳性率分别为85.7%(36/42)、21.4%(3/14),HPV16E+和E7-乳癌组织中P16和Rb蛋白阳性率差异均有统计学意义(χ2=20.525,10.898,P均<0.001)。HPV16E7+乳癌组织中,Rb和P16蛋白表达有关(rp=0.792,P=0.003);HPV16E7-乳癌组织中,Rb和P16蛋白表达无关(P=0.182)。结论:HPV16E7可通过降解Rb,促进P16蛋白表达,从而在乳癌发生发展中发挥作用。

HPV16 E7蛋白阳性和阴性乳癌组织中细胞周期调控相关基因蛋白的表达

目的:研究人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7蛋白阳性(E7+)和阴性(E7-)乳癌组织中细胞周期调控相关基因蛋白表达的变化。方法:56例乳癌组织经PCR筛选证实HPV16 DNA阳性,其中42例HPV16 E7+,14例E7-。采用Western blotting方法检测癌组织中细胞周期调控相关基因蛋白CyclinA、CyclinD、CyclinE、P21和P27的表达。结果:42例HPV16E7+乳癌组织中,CyclinA、CyclinD、CyclinE、P21和P27蛋白阳性率分别为97.6%(41/42)、76.2%(32/42)、92.9%(39/42)、9.5%(4/42)和40.5%(17/42);14例HPV16E7-乳癌组织中,CyclinA、CyclinD、CyclinE、P21和P27蛋白阳性率分别为64.3%(9/14)、78.6%(11/14)、57.1%(8/14)、50.0%(7/14)和42.9%(6/14)。与HPV16E7-乳癌组织相比,HPV16E7+乳癌组织中CyclinA和CyclinE蛋白表达均上调(χ2分别为12.196,9.929,P均<0.01),P21表达下调(χ2=10.898,P<0.01),而CyclinD和P27的表达均无明显变化(χ2分别为0.033,0.025,P均>0.05)。结论:HPV16E7可通过统计量上调CyclinA和CyclinE表达以及下调P21表达而在乳癌发生发展中发挥重要作用。

不同地区HPV16 E7基因的克隆及序列差异分析

采用PCR扩增、pGEM T载体克隆和核苷酸序列分析的方法对一例武汉地区及两例五峰县高发区宫颈癌患者体内HPV16型的E7基因编码区进行序列分析并与野生型 (德国标准株 )及已发表的HPV16湖北株 (HPVHB)进行了比较。结果发现武汉地区HPV16型E7基因仅第 5 4位出现一个同义突变 ,而高发区HPV16型E7基因存在差异 ,第 77位氨基酸由精氨酸 (Arg)变为半胱氨酸 (Cys) ,第 96位由谷氨酰氨酸 (Gln)变为精氨酸 (Arg) ,E7蛋白的二级结构及亲、疏水性也相应改变 。

HPV16 DNA阳性乳腺良、恶性病变组织中E6和E7蛋白的表达

目的:研究人乳头瘤病毒16型(HPV16)DNA阳性乳腺良、恶性病变组织中E6和E7蛋白的表达情况。方法:以经PCR筛选证实的HPV16DNA阳性的56例乳癌和41例乳腺良性病变组织为研究对象,采用Westernblotting方法检测HPV16E6和E7蛋白。结果:56例HPV16DNA阳性乳癌组织中,HPV16E6、E7和E6/E7共表达阳性率分别为67.9%(38/56)、75.0%(42/56)和57.1%(32/56);41例HPV16DNA阳性乳腺良性病变组织中,HPV16E6、E7和E6/E7共表达阳性率分别为36.6%(15/41)、43.9%(18/41)和24.4%(10/41)。HPV16DNA阳性乳癌组织中E6、E7和E6/E7共表达阳性率均高于乳腺良性病变组织(χ2分别为9.34,9.70,10.34,P均<0.01)。HPV16DNA阳性乳癌组织中E6、E7和E6/E7共表达阳性率与患者年龄和肿瘤组织学类型无关(P均>0.05),但与淋巴结转移有关(χ2分别为3.88,15.86,9.34,P均<0.05)。结论:HPV16E6和E7蛋白在乳癌发生发展中具有重要作用,并与乳癌淋巴结转移有关。

人乳头瘤病毒16型E7过表达细胞的鉴定及其迁移效应的影响

鉴定人乳头瘤病毒16型早期蛋白7(HPV16E7)过表达细胞及其迁移效应的影响,为后续基于HPV16E7靶向分子作用机制的研究奠定工作基础。脂质体转染法将本室保存的pcDNA3.1⁃HPV16E7重组真核表达质粒分别转染人胚肾293T细胞(HPV16型DNA阴性)、宫颈癌SiHa细胞株(HPV16 DNA阳性),转染48 h后收集细胞,提取RNA,RT⁃PCR扩增相应的目的基因,Western Blotting和间接免疫荧光实验检测HPV16E7目的蛋白在细胞中的表达。转染24 h的细胞进行细胞划痕和Transwell实验,检测过表达细胞迁移行为的变化。RT⁃PCR结果显示:分别从E7质粒转染的293T、SiHa细胞的cDNA中,均可扩增到250 bp的目的条带;Western Blotting分析结果显示:以HPV16E7单克隆抗体为检测抗体,转染细胞的裂解液中均能在相对分子质量(Mr)约为15000处出现特异性目的条带;间接免疫荧光结果显示:转染细胞中均能检测到目的绿色荧光,且分布于胞浆及细胞核周围;细胞划痕和Transwell实验结果显示:转染E7细胞的迁移效应显著提高。本研究证实了HPV16E7转染细胞后可成功表达,且过表达细胞明显促进了细胞迁移行为,为后续基于HPV16E7迁移相关分子机制及靶向干预等研究奠定了前期工作基础。