奥美拉唑对甲氨蝶呤及其代谢物7-羟基甲氨蝶呤在大鼠体内代谢动力学的影响

目的研究联合使用奥美拉唑(OME)对甲氨蝶呤(MTX)及其代谢物7-羟基甲氨蝶呤(7-OH MTX)药物代谢动力学的影响。方法将12只大鼠随机分为MTX组(MTX 100 mg·kg^(-1))和联合用药组(MTX100 mg·kg^(-1),OME 20 mg·kg^(-1)),静脉给药。于不同时间点进行眼底静脉丛采血,分离血浆,甲醇沉淀蛋白后用LC-MS/MS法检测MTX和7-OH MTX浓度。色谱柱为Hedera ODS-2 C_(18),流速0.35 mL·min^(-1),流动相为甲醇和0.2%甲酸水,梯度洗脱。质谱采用ESI正离子模式,检测离子m/z 455.0→308.1(MTX),m/z 471.1→324.1(7-OH MTX)和m/z 441.3→294.1(内标氨蝶呤)。通过Winnonlin软件非房室模型计算药动学参数。结果 MTX和7-OH MTX在10～5000 ng·mL^(-1)内与峰面积线性关系良好(R^2> 0.99),批内和批间精密度RSD均小于15%,准确度在88%～109%。与MTX组比较,联合用药组MTX的C_(max)、t_(1/2)、AUC显著增加,清除率降低26%,排泄延迟,而7-OH MTX的C_(max)显著降低,MRT延长。结论 OME对MTX在体内的代谢与消除有一定影响,提示临床在两者合用时需密切关注MTX的血药浓度和毒副反应。

LC-MS/MS法检测血液恶性肿瘤患者血清中甲氨蝶呤及其代谢物7-羟基甲氨蝶呤的浓度

目的:采用高效液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)法检测血液恶性肿瘤患者血清中甲氨蝶呤(MTX)及其代谢物7-羟基甲氨蝶呤(7-OH MTX)的浓度。方法:选取2017年1月~2018年12月进行大剂量MTX(HDMTX,1.5~2.0 g·m-2)化疗的血液恶性肿瘤患者共12例,于HDMTX滴注结束后第0,24,48,72,96 h分别取静脉血2 ml,LC-MS/MS法同时检测血清中MTX及7-OH MTX的浓度。结果:HDMTX滴注结束后0,24,48,72,96 h MTX浓度分别为(21.292±17.574),(0.438±0.860),(0.067±0.075),(0.020±0.002),(0.008±0.002)μmol·L-1,7-OH MTX浓度分别为(5.586±2.668),(1.136±1.593),(0.279±0.367),(0.097±0.128),(0.040±0.051)μmol·L-1,其中0 h时MTX浓度大于7-OH MTX,而24~96 h各时间点MTX浓度均小于7-OH MTX,7-OH MTX/MTX浓度比值分别是2.6,4.2,4.9和5.0。结论:HDMTX滴注结束24 h后,体内代谢物7-OH MTX浓度高于MTX数倍,提示检测7-OH MTX浓度具有一定的临床意义。

LC-MS/MS法测定人血清中甲氨蝶呤及其代谢产物7-羟基甲氨蝶呤的浓度

目的:建立测定人血清中甲氨喋呤及其代谢产物7-羟基甲氨喋呤的浓度的LC-MS/MS法,并应用于临床治疗药物监测。方法:采用D3-甲氨蝶呤同位素内标,血清样品经含内标乙腈沉淀蛋白处理。HPLC色谱柱为Sepax GP-pHenyl,柱温35℃,流速0.3 ML·min^(-1),流动相为0.1%甲酸和乙腈,梯度洗脱。质谱检测方式为ESI正离子模式,MRM扫描,监测甲氨蝶呤m/z 455～308,7羟基甲氨蝶呤m/z 471～324,D3甲氨蝶呤(内标)m/z 458～311。结果:甲氨蝶呤浓度在5～4 000 ng·ml^(-1)范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 9),7-羟基甲氨蝶呤浓度在1～800 ng·ml^(-1)范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 7)。甲氨蝶呤及7-羟基甲氨蝶呤日内及日间RSD<9.0%。甲氨蝶呤平均回收率为94.34%～115.08%,7-羟基甲氨蝶呤平均回收率为96.41%～103.04%。结论:本方法简便、准确、快速,适用于甲氨喋呤及其代谢产物7-羟基甲氨喋呤的血药浓度测定。

叶酸受体及二氢叶酸还原酶与人乳腺癌细胞MCF-7/ADR多药耐药的关系

目的以人乳腺癌多药耐药细胞系MCF-7/ADR及其敏感亲本系MCF-7为对象,探讨叶酸受体(FOLRα)及其下游基因二氢叶酸还原酶(DHFR)的表达与乳腺癌细胞多药耐药的关系。方法 MTT法测定阿霉素的细胞毒性作用及DHFR抑制剂对MCF-7/ADR细胞多药耐药的逆转作用;RT-PCR检测细胞FOLRα和DHFR mRNA的表达水平;免疫细胞化学检测FOLRα、P-gp的表达水平。结果 MCF-7细胞增殖速度快于MCF-7/ADR细胞,MCF-7细胞FOLRα mRNA转录水平较MCF-7/ADR细胞高,而MCF-7/ADR细胞DHFR mRNA较MCF-7细胞转录水平高;免疫细胞化学显示MCF-7细胞FOLRα的表达高于MCF-7/ADR细胞,而MCF-7/ADR细胞P-gp的表达较MCF-7细胞高;MCF-7/ADR对甲氨蝶啶无耐药性,甲氨蝶啶对MCF-7/ADR细胞多药耐药有逆转作用。结论 MCF-7/ADR细胞FOLRα的表达水平下调可能与细胞增殖水平有关,其下游基因DHFR表达水平与MCF-7/ADR细胞的MDR可能存在相关性。

LC-MS/MS法测定骨肉瘤患者血清中甲氨蝶呤及其代谢产物7-羟基甲氨蝶呤的浓度

目的:建立测定人血清中甲氨喋呤及其代谢产物7-羟基甲氨喋呤浓度的LC-MS/MS法,并应用于骨肉瘤患者大剂量甲氨蝶呤化疗后的治疗药物监测,为临床合理用药提供依据。方法:以氨基蝶呤作为内标,血清样品经含内标甲醇沉淀蛋白处理。色谱柱为Agilent Zorbax Eclipse Plus C_(18);柱温35℃;流速0.4 mL·min^(-1);流动相为含0.1%甲酸的水溶液和含0.1%甲酸的乙腈溶液,梯度洗脱。质谱检测方式为电喷雾离子阱正离子模式,MRM扫描,监测甲氨蝶呤m/z 455.098→308.000,7-羟基甲氨喋呤m/z 471.187→324.100,氨基蝶呤m/z 441.198→294.100。结果:甲氨蝶呤浓度在2~1000 ng·mL^(-1)(r=0.9985),7-羟基甲氨蝶呤浓度在20~10000 ng·mL^(-1)(r=0.9984)与峰面积线性关系良好。甲氨蝶呤、7-羟基甲氨蝶呤日内及日间RSD≤6.21%。甲氨蝶呤、7-羟基甲氨蝶呤的平均回收率分别为102.83%~119.34%、88.41%~95.37%。结论:本方法简便、准确、快速,适用于甲氨喋呤及其代谢产物7-羟基甲氨喋呤的血药浓度测定。

甲氨蝶呤联合超声监视下清宫与甲氨蝶呤、子宫动脉栓塞术联合清宫治疗停经7周内Ⅱ-Ⅲ型CSP的效果对比分析

目的对比分析甲氨蝶呤(methorexate,MTX)联合超声监视下清宫与甲氨蝶呤、子宫动脉栓塞术(uterine artery embolization,UAE)联合清宫治疗停经7周内Ⅱ-Ⅲ型剖宫产瘢痕妊娠(ceasarean scarpregnancy,CSP)的效果。方法回顾性分析我院自2016年1月—2017年12月收治的停经7周内Ⅱ-Ⅲ型CSP患者的临床资料,按随机、平衡、对照原则分别筛选69例MTX+清宫治疗患者作为A组,68例MTX+UAE+清宫治疗患者作为B组,对比两组治疗成功率、一般治疗情况及术后并发症发生率,并统计两组月经周期恢复时间、血β-hCG恢复至正常时间、疤痕妊娠病灶消失时间。结果两组术后恢复良好,术中、术后均未发生不可控制宫腔出血现象,胎囊组织均全部清出,A组术中出血量、子宫切除发生率、发热、术后盆腹腔疼痛及肝功能损伤发生率均低于B组,术后第1天血β-hCG下降超过50%及治疗成功率、住院时间均高于B组,且该组月经周期恢复时间、血β-hCG恢复至正常时间、疤痕妊娠病灶消失时间亦较B组短(P﹤0.05)。结论于停经7周内Ⅱ-Ⅲ型CSP患者而言,行MTX+清宫治疗或可在不增加出血风险基础上避免UAE相关并发症及副反应。

青藤碱对淋巴瘤Daudi细胞增殖及α7nAChR表达的影响

【目的】探讨青藤碱(SIN)对Burkkit淋巴瘤Daudi细胞增殖及α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)表达的影响。【方法】采用CCK-8法观察Daudi细胞的生长特点。分别以青藤碱及对照药物烟碱(Nic)、甲氨喋呤(MTX)干预48 h后,采用CCK-8法检测各组Daudi细胞增殖情况,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测Daudi细胞α7nAChR蛋白表达,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测α7nAChR mRNA表达。【结果】与空白对照组比较,青藤碱抑制Daudi细胞增殖,增加细胞早期凋亡率;Nic促进Daudi细胞增殖,降低凋亡率;MTX抑制Daudi细胞增殖,增加凋亡率。Western blot和RT-PCR检测发现青藤碱降低Daudi细胞α7nAChR蛋白和mRNA表达,Nic增加Daudi细胞α7nAChR蛋白和mRNA表达,MTX对Daudi细胞中α7nAChR蛋白和mRNA表达没有明显影响。【结论】青藤碱对Burkkit淋巴瘤Daudi细胞增殖具有抑制作用并抑制α7nAChR表达,与MTX抗淋巴瘤细胞增殖的机制不同。

七元瓜环对抗癌药物甲氨蝶呤的溶解性及溶出度的影响研究

以七元瓜环为主体,抗癌药物甲氨蝶呤为客体,利用1H NMR技术和紫外可见吸收光谱法研究了七元瓜环(Q[7])对甲氨蝶呤(MTX)的分子识别作用,同时利用相溶解度及溶出度法考察了Q[7]对MTX溶解度及溶出度的影响。结果表明:MTX与Q[7]可形成2∶1的主客体复合物,平衡常数为(9.55±0.37)×1011L2.mol-2。Q[7]能增加MTX的溶解度及溶出度,并且Q[7]对MTX的增溶效果受体系的酸碱性影响。最后用1H NMR法进一步证实了主客体的作用模式。

大剂量甲氨蝶呤治疗骨肉瘤患者时甲氨蝶呤及其代谢产物血药浓度与不良反应相关性研究

目的分析骨肉瘤患者使用大剂量甲氨蝶呤(HD-MTX)治疗后肝损伤、骨髓抑制与甲氨蝶呤(MTX)及7-羟基甲氨蝶呤(7-OHMTX)血药浓度之间的相关性,探讨同时监测MTX和7-OHMTX血药浓度对MTX毒副作用预判的临床意义。方法回顾分析28例接受HD-MTX治疗的骨肉瘤患者,HD-MTX滴注完成后24 h和48 h,分别采用高效液相色谱质谱联用法(HPLC-MS/MS)同时测定MTX和7-OHMTX血药浓度,并收集HD-MTX化疗后1周内肝功能和骨髓抑制指标,分析MTX和7-OHMTX血药浓度、7-OHMTX/MTX之比、MTX与7-OHMTX血药浓度之和与患者肝损伤、骨髓抑制的相关性。结果肝损伤严重程度(丙氨酸氨基转移酶,ALT)、血红蛋白(HGB)下降程度与48 h7-OHMTX/MTX比值有显著相关性(P <0.05);白细胞(WBC)下降程度与24 h 7-OHMTX/MTX比值有相关性,但差异无统计学意义(P=0.059),中性粒细胞(NE)下降程度与7-OHMTX/MTX比值无相关性。结论 48 h 7-OHMTX/MTX比值对于预测MTX所致急性药物性肝损伤的发生更具临床意义。

7-羟基甲氨蝶呤体内浓度与甲氨蝶呤临床结局相关性的系统评价

目的系统评价甲氨蝶呤代谢产物7-羟基甲氨蝶呤(7-OHMTX)体内浓度与临床结局的相关性,为临床实施治疗药物监测提供循证医学证据。方法系统检索PubMed、EmBase、Cochrane Central Register of Controlled Trials、中国期刊全文数据库、万方数字化期刊全文数据库中收录的报告7-OHMTX体内浓度与临床疗效或安全性的观察性研究,时限为建库至2021-06-11。2名作者独立筛选文献,根据预先设计的提取表独立提取数据。分别采用纽卡斯特-渥太华量表评价队列研究与病例-对照研究的质量,采用预后研究偏倚风险评价工具评价预后因素研究。对相关结局指标进行描述性分析。本研究严格遵从《系统综述和荟萃分析优先报告的条目》指南开展。结果共纳入9项观察性研究,合计480例患者。6项研究为急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿,2项研究为骨肉瘤,1项研究为类风湿关节炎(RA)成人患者。对于ALL,纳入研究均报道安全性结局,3项研究提示7-OHMTX浓度与血清肌酸酐水平升高具有显著相关性,1项研究表明7-OHMTX/MTX浓度的比值与骨髓抑制、肝损伤呈负相关,2项研究发现发生口腔黏膜炎的患者中7-OHMTX/MTX浓度比值显著低于未发生组。对于骨肉瘤,纳入研究均报道安全性结局,1项研究提示7-OHMTX/MTX的AUC比值与丙氨酸氨基转移酶(GPT)水平正相关,而1项研究显示7-OHMTX浓度降低与GPT升高、血红蛋白浓度下降显著正相关。对于RA,1项研究报道有效性结局,提示患者肿胀和疼痛/压痛指数的改善程度与尿液中7-OHMTX低排泄水平相关。结论ALL或骨肉瘤患者中7-OHMTX体内浓度与药物不良反应存在相关性,RA患者中7-OHMTX体内浓度可能与疗效相关。

基于7-OHMTX血药浓度监测初步构建大剂量化疗延迟排泄Logistic回归预测模型

目的:探讨甲氨蝶呤(MTX)代谢产物7-羟基甲氨蝶呤(7-OHMTX)血药浓度监测在成人血液恶性肿瘤患者大剂量甲氨蝶呤化疗(HD-MTX)延迟排泄预测中的应用。方法:收集某三甲医院进行HD-MTX治疗的137例次成人急性淋巴细胞白血病与非霍奇金淋巴瘤患者相关信息,利用SPSS 25.0软件,分析MTX延迟排泄与人口统计学特征(性别、年龄、疾病种类、体质指数)、MTX化疗的输液时长、用药剂量、给药前血液学、肝肾功能指标(WBC、HB、PLT、N、ALT、AST、Ccr、BUN)、血药浓度相关性,并建立延迟排泄预测模型。结果:单因素分析结果显示,44 h或68 h 7-OHMTX血药浓度、7-OHMTX/MTX血药浓度比值、诊断、输液时长、化疗前AST值等与延迟排泄有显著相关性(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,延迟排泄仅与7-OHMTX44 h血药浓度(P<0.001)或7-OHMTX68 h血药浓度(P=0.001)呈正相关,与7-OHMTX/MTX44 h或7-OHMTX/MTX68h血药浓度比值(P<0.001)呈负相关,44 h/68 h延迟排泄预测模型ROC曲线的AUC值分别为0.949/0.962。结论:高浓度7-OHMTX、低比值7-OHMTX/MTX是MTX化疗延迟排泄的危险因素,通过测定44 h或68 h 7-OHMTX浓度及其与MTX比值,均可以较好地预测MTX排泄延迟,44 h预测模型较68 h预测模型可以提前24 h预警,便于临床及时调整亚叶酸钙(CF)解救方案,更具有临床价值。

基于7-羟基甲氨蝶呤血药浓度监测的大剂量化疗骨肉瘤患者肝功能损伤预测模型构建

目的:探讨甲氨蝶呤(MTX)代谢产物7-羟基甲氨蝶呤(7-OHMTX)血药浓度监测在接受大剂量甲氨蝶呤化疗(HD-MTX)的骨肉瘤患者肝功能损伤预测中的应用。方法:采用自建的高效液相色谱法同时测定患者不同时间点MTX及7-OHMTX血药浓度,收集患者相关信息,利用SPSS 22.0软件,考察性别、年龄、体质量、身高、体表面积、MTX剂量以及化疗后不同时间点MTX血药浓度、7-OHMTX血药浓度、7-OHMTX/MTX浓度比值与化疗所致急性肝功能损伤相关性。结果:在不干涉原治疗方案的情况下,有24例患者47例次行大剂量甲氨蝶呤化疗数据纳入分析。单因素分析结果显示,化疗引起的急性中重度肝功能损伤与7-OHMTX_(5 h)、7-OHMTX_(12 h)、7-OHMTX_(24 h)、7-OHMTX_(48 h)、7-OHMTX/MTX_(5 h)、7-OHMTX/MTX_(12 h)、7-OHMTX/MTX_(24 h)、7-OHMTX/MTX_(48 h)这8个指标正相关(P<0.05);经过标准方案解救治疗的骨肉瘤患者,急性肝功能损伤与延迟排泄无显著相关性(P>0.05)。多因素Logistic回归分析显示,仅MTX化疗剂量及7-OHMTX血药浓度分别纳入5,12,24,48 h这4个时间点的回归方程,与中重度肝功能损伤呈正相关(P<0.01),肝功能损伤预测模型受试者工作曲线(ROC)曲线下面积(AUC)分别为0.795,0.861,0.780,0.789。结论:高剂量的MTX、高浓度7-OHMTX是HD-MTX肝功能损伤的独立危险因素,通过测定不同时间点(5,12,24,48 h)7-OHMTX浓度,均可以较好地预测中重度肝功能损伤。在其他指标不变的情况下,MTX剂量每增加1 g·m^(-2),肝功能损伤风险增加2倍左右,7-OHMTX_(5 h)、7-OHMTX_(12 h)、7-OHMTX_(24 h)、7-OHMTX_(48 h)每增加1μmol·L^(-1),肝功能损伤风险分别增加1.070,1.058,1.131,1.866倍。5 h预测模型预警时间最早,12 h预测模型为最佳模型,7-OHMTX血药浓度5,12,24,48 h肝功能损伤预警值分别为20.36,33.37,4.54,0.47μmol·L^(-1)。