SRP72基因突变致骨髓衰竭综合征1型1例

骨髓衰竭综合征1型(BMFS1)是一种罕见的骨髓衰竭性疾病,由SRP72(NM_006947.4)基因突变所致,需要进行造血干细胞移植(HSCT)治疗。基因检测对该病的诊断和治疗方法选择至关重要。本文报道1例由SRP72基因c.1502+1G>A自发突变致BMFS1的患儿,并顺利实施HSCT治疗,患儿最终痊愈。本研究发现的c.1502+1G>A变异,未检索到与BMFS1相关的文献报道。本例患儿的发现扩展了SRP72基因致病性变异谱和表型谱,为BMSF1的早期诊断和正确治疗的选择提供了典型案例。

FAM72基因家族与肝细胞癌预后及免疫浸润的相关性分析

目的探讨FAM72基因家族在肝细胞癌(HCC)中的表达情况及其与预后、免疫浸润的相关性。方法应用TCGA分析FAM72基因家族在HCC中的表达情况、与不同临床特征间的差异及其预后价值;TCGA和Kaplan⁃Meier plotter分析FAM72基因家族对HCC患者总生存期的影响;STRING构建FAM72基因家族蛋白相互作用网络;ssGSEA分析FAM72基因家族与免疫浸润细胞间的相关性;GEPIA分析FAM72基因家族与免疫细胞分子标志物及免疫检查点的相关性。结果HCC中FAM72⁃D的表达量显著高于正常肝组织(P<0.05)。FAM72A⁃D高表达组患者总生存率显著低于低表达组(P<0.05)。单因素/多因素回归分析和ROC曲线提示FAM72A⁃D可以作为影响HCC患者预后的独立危险因素(P<0.05)。蛋白互作网络分析结果提示FAM72A⁃D与多种蛋白一起参与HCC的发生发展。免疫浸润分析结果显示FAM72A⁃D表达水平与多数免疫细胞浸润水平及免疫细胞分子标志物有关,且与免疫检查点(PD⁃1、PD⁃L1、CTLA⁃4)有正相关关系。结论FAM72基因家族在HCC组织中高表达,并与免疫浸润、不良预后相关,可作为HCC预后的预测指标。

非洲猪瘟病毒p72基因的纳米金探针研究

对22株发表的非洲猪瘟病毒(ASFV)p72基因序列进行比较,找出其中的高保守性区域,各设计、合成1条与保守区域互补的5′生物素标记及3′烷巯基修饰短链寡核苷酸探针,并将烷巯基修饰的探针吸附到纳米金颗粒上,制备纳米金标记探针。PCR扩增出的p72基因中的651 bp保守核酸序列,变性后与上述生物素探针及标记纳米金探针进行杂交,杂交产物加入吸附链霉亲和素的酶标板,利用亲和原理,捕获杂交产物,银染增强法对纳米金标记探针进行信号放大。结果表明:制备的纳米金探针经银染放大后,在酶标板中形成肉眼可见的黑色沉淀,可有效检测扩增出的p72基因,检测核酸浓度达到10 fmol·L-1,可用于ASFV快速诊断。

人热休克蛋白72基因的克隆、原核表达与纯化

目的 克隆人热休克蛋白 72 (HSP72 )基因 ,原核表达并纯化蛋白产物 ,以探讨其生物学功能 .方法 从热休克的人肝癌细胞株 SMMC- 772 1中 ,用 RT- PCR方法扩增得到HSP72基因并克隆到原核表达载体 p QE- 30中 ,在大肠杆菌JM10 9中用 IPTG诱导下表达的蛋白经 FPL C梯度洗脱和Sephacryl S2 0 0凝胶过滤纯化 ,经 SDS- PAGE电泳后转印到NC膜上 ,用 anti- HSP72单抗作探针 ,进行 Western blot鉴定 .结果 克隆的基因序列分析结果与有关报道一致 ,所构建的 p QE- 30 HSP72载体在大肠杆菌中表达出与预期大小相符的 Mr为 72 0 0 0的蛋白 ,经鉴定确系 HSP72蛋白 .结论 克隆了人 HSP72基因 ,并对该基因进行了原核表达与纯化 。

中国汉族女性中G72基因与精神分裂症的关系

目的研究在中国汉族女性中NMDA受体途径重要基因G72与精神分裂症的关系。方法在545名中国汉族女性(精神分裂症患者260例,正常对照285例)中对位于G72基因的3个单核苷酸多态性位点(rs3916965、rs3916967和rs2391191)进行基因分型和连锁不平衡分析。结果遗传标记rs3916967的等位基因G(P=0.0386)和rs2391191的等位基因A(P=0.0096)均与精神分裂症相关。此外,由3个单核苷酸多态性位点构建的单倍型分析表明,单倍型GAG在病例-对照组中表现出统计学差异(P=0.0024)。结论在中国汉族女性中,G72基因是精神分裂症的一个重要易感基因,在后续的研究中有必要对本结果进行进一步的验证。

非洲猪瘟P72基因在Bac to Bac系统中的表达及抗原性鉴定

本研究旨在通过在Bac to Bac系统中表达非洲猪瘟病毒(ASFV)的P72基因,为进一步研究P72基因的结构、功能和免疫学特性奠定基础。本研究从含P72全长基因的菌株pGEX-6p-1-P72中扩增出P72基因全序列1941bp,将扩增的基因连接于pFastBac HTa杆状病毒载体中,构建重组质粒pFastBac HTa-P72,转化至感受态DH10Bac中,获得重组杆粒rBac-mid-P72,再将其转染至Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。经Western blotting和夹心ELISA分析,结果表明,P72在昆虫细胞Sf9中获得正确表达,重组P72蛋白可被特异性兔抗ASFV P72血清、P72单抗识别。结果提示,Bac to Bac系统表达的P72重组蛋白特异性强、活性稳定,具有良好的抗原性,为快速诊断ASF提供良好的候选抗原。

锦鲤疱疹病毒ORF72基因克隆及结构功能分析

于辽宁丹东采集感染锦鲤疱疹病毒的活鲤Cyprinus carpio样品,经DNA提取、PCR扩增、重组质粒构建步骤成功克隆锦鲤疱疹病毒ORF72基因,并利用生物信息学软件分析ORF72蛋白结构与功能,构建系统进化树。结果显示:ORF72基因开放阅读框共1113bp,编码蛋白由370个氨基酸组成,理论相对分子质量为40.5KD;ORF72蛋白主要由α螺旋、β折叠、无规则卷曲3种二级结构组成;N端35个氨基酸序列为信号肽序列。跨膜结构分析表明:ORF72蛋白无跨膜区,保守结构域预测表明ORF72含有一个保守结构域,抗原表位分析表明,抗原性较好。结构预测显示:ORF72氨基酸序列存在2个潜在的N-糖基化位点、1个潜在的O-糖基化位点、19个潜在的磷酸化位点。系统进化树分析发现,其与锦鲤疱疹病毒美国株、以色列株属同一分支。

精神分裂症与G72基因多态性的关联分析

目的:探讨精神分裂症与G72基因多态性的关系,是否有混合家族史精神分裂症在G72基因多态性的区别。方法:采用聚合酶链反应技术分别检测162例无混合家族史精神分裂症、62例有混合家族史精神分裂症、88名正常对照的G72基因单核苷酸多态性rs947267、rs2181953,进行关联分析。结果:不同性别及发病年龄的无混合家族史精神分裂症组与对照组rs947267、rs2181953基因型及等位基因分布差异均无显著性(P均>0.05);不同性别及发病年龄的有混合家族史精神分裂症组与对照组rs947267基因型及等位基因分布差异无显著性(P>0.05);不同性别及早发型(发病年龄≤25岁)有混合家族史精神分裂症组与对照组rs2181953基因型及等位基因分布差异无显著性(P>0.05);晚发型(发病年龄>25岁)有混合家族史精神分裂症与对照组rs2181953基因型及等位基因分布差异显著(χ2=9.121,P=0.01与χ2=6.804,P=0.01),基因型A/A、T/T及等位基因A、T的OR值分别为7.083(P=0.007)、0.357(P=0.049)、2.531(P=0.009)、0.395(P=0.009)。结论:G72基因多态性可能与晚发型有混合家族史精神分裂症存在关联,其中rs2181953的A/A基因型与A等位基因是危险因子。

牦牛HSP72基因的结构及生物信息学分析

克隆测序了牦牛HSP72基因的全序列,并分析了该基因的结构,以及HSP72蛋白的氨基酸组成、等电点、亚细胞定位、跨膜区、疏水/亲水区、结构域、特征位点、密码子偏好性、二级结构等蛋白质性质。结果表明:牦牛的HSP72基因序列全长为1926bp,无内含子,共编码641个氨基酸;牦牛的HSP72基因和HSP72蛋白与普通牛、猪、人相比存在着一定差异,这可能是导致他们之间对温度适应性差异的主要原因之一。

精神分裂症与G72基因多态性的关联

目的:探讨在云南省汉族人群中D-氨基酸氧化酶激活基因(G72)多态性与精神分裂症的关联性。方法:采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态(PCR-RFLP)方法,在云南汉族276例精神分裂症患者和312例健康对照者中进行G72基因3个多态位点(rs9558562,rs45476401,rs3918341)的分型。结果:各位点在病例组和对照组中基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡。无论在男女混合样本,还是分别在男性、女性样本中,rs9558562,rs45476401,rs3918341在病例组和对照组间的等位基因频率分布差异均无显著性(P均>0.05)。结论:G72基因rs9558562,rs45476401和rs3918341多态与云南汉族精神分裂症发病无显著相关。

调控毛囊生长CCDC72基因启动子克隆及萤光素酶报告基因载体的构建

目的对新发现的调控毛囊生长相关的CCDC72基因启动子序列进行分析,克隆并构建不同长度启动子萤光素酶报告基因载体。方法运用在线软件Cister对CCDC72基因5’端2000bp进行启动子特征分析;以人毛乳头细胞基因组DNA为模板进行PCR扩增目并进行测序鉴定,再以扩增产物为模板PCR得到不同长度的启动子片段,并测序,将获得启动子片段插入pGL3-Basic载体。结果序列分析发现起始密码子ATG上游的-1^-200bp及-600^-1000bp的区域内存在多个顺式作用元件,成功获得1924bp扩增片段,并构建了4个不同长度的CCDC72启动子报告基因载体。结论上述载体的成功构建及序列分析为进一步研究CCDC72基因的启动子活性及基因表达调控奠定了基础。

陆地棉转录因子GhWRKY72基因克隆及表达分析

为研究WRKY转录因子在棉花中的功能及分子特征,本试验以陆地棉(Gossypium hirsutum L.)‘中棉19’为试验材料,克隆获得了转录因子基因GhWRKY72,并对其进行生物信息学及表达模式分析。结果表明:GhWRKY72开放阅读框为1578 bp,编码525个氨基酸;序列比对发现其氨基酸序列与海岛棉GbWRKY72转录因子基因同源性高达89.23%;在高盐(NaCl)或干旱(甘露醇)非生物胁迫下,GhWRKY72基因均可做出响应,尤其在盐胁迫条件下,该基因表现上调表达趋势;同时GhWRKY72基因的表达受茉莉酸(JA)、水杨酸(SA)和乙烯(ACC)诱导及黄萎病病菌(Verticillium dahliae)处理的影响,其中ACC、SA和黄萎病病菌处理均能诱导GhWRKY72上调表达。本研究可为理解WRKY基因家族在棉花抗逆和抗病过程中的作用机制提供参考。

驴源马疱疹病毒8型ORF72基因原核表达及多克隆抗体制备

为了获得驴源马疱疹病毒8型ORF72基因编码的糖蛋白D(glycoprotein D,gD)和多克隆抗体,试验根据GenBank上公布的EHV-8 gD基因序列,设计了特异性引物,使用PCR方法扩增得到主要抗原区和跨膜区片段共960 bp,并构建pET-32a-gD960原核表达载体。将重组质粒pET-32a-gD960转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导并优化表达,获得gD重组蛋白,利用SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定表达产物。使用包涵体蛋白纯化试剂盒纯化gD重组蛋白,并免疫小鼠,共免疫3次,每次间隔2周。三免2周后,通过Western-blot对鼠抗EHV-8 gD多克隆抗体进行鉴定,并使用间接ELISA测定其效价。结果表明:试验成功构建EHV-8 gD960基因表达载体并获得gD重组蛋白,gD重组蛋白分子质量约为65 ku,与预期大小相符,且特异性良好。小鼠血清中鼠抗EHV-8 gD960多克隆抗体效价为1∶16 000,该多克隆抗体可以与EHV-8 gD960蛋白发生免疫反应。说明成功表达了EHV-8 gD960重组蛋白并制备了多克隆抗体,多克隆抗体的效价较高,免疫原性较好。

白颖苔草UDP-糖基转移酶UGT72B3基因的克隆与耐盐性分析

土壤盐渍化是影响植物生长的重要因素。糖基转移酶是植物中重要的次生代谢调节者,参与逆境胁迫的响应。以来自河北黄骅地区盐碱地的耐盐型白颖苔草为材料,利用RACE技术克隆得到UDP-糖基转移酶家族基因CrUGT72B3全长,其开放阅读框长1434 bp,编码477个氨基酸。表达模式分析表明,CrUGT72B3基因在盐胁迫处理下有较强的响应表达。对过表达CrUGT72B3基因的拟南芥种子和幼苗进行耐盐性评价,均发现CrUGT72B3基因提高了拟南芥的盐敏感性。同时,在盐胁迫过表达CrUGT72B3基因拟南芥中发现,胁迫响应相关基因和苯丙烷代谢通路相关基因的表达均显著低于野生型,推测CrUGT72B3基因通过调节盐胁迫响应基因和苯丙烷代谢途径来影响拟南芥的耐盐性。初步判定CrUGT72B3基因参与了白颖苔草盐胁迫响应的分子调控,为CrUGT72B3基因后续功能的深入研究奠定了重要基础。

G72基因与抑郁症的关联研究

目的探讨抑郁症与G72基因多态性的关系,以及是否有混合家族史的抑郁症其G72基因多态性有无区别。方法应用聚合酶链反应技术分别检测符合《中国精神障碍分类与诊断标准》的100例无混合家族史抑郁症、50例有混合家族史抑郁症、86名正常对照的G72基因的单核苷酸多态性rs947267、rs2181953 ,并进行关联分析。结果 (1)女性无混合家族史抑郁症组与对照组rs947267基因型及等位基因分布频率,差异均有统计学意义(P=0 .017、P=0 .008) ,基因型A/A、等位基因A、C的OR值分别为0 .300(P=0 .010)、0 .456(P=0 .008)、2 .195(P=0 .008) ,而男性差异均无统计学意义(P>0 .05) ;(2)不同性别无混合家族史抑郁症组与对照组rs2181953基因型及等位基因分布,差异均无统计学意义(P>0 .05) ;(3)不同性别有混合家族史抑郁症组与对照组rs947267、rs2181953基因型及等位基因分布,差异均无统计学意义(P>0·05)。结论 G72基因多态性可能与女性无混合家族史的抑郁症患者存在关联,其中rs947267的C等位基因是危险因子。

C9ORF72基因突变在额颞叶痴呆-肌萎缩侧索硬化症中的致病机制及临床特征研究进展

额颞叶痴呆(FTD)和肌萎缩侧索硬化症(ALS)的致病机制、病理及临床特征有较多相似之处,被归为神经退行性疾病中一类特殊的谱系疾病,统称为FTD-ALS。C9ORF72基因突变是FTD-ALS患者中常见的致病基因,其致病机制尚不完全清楚,已有研究表明FTD-ALS涉及多种致病机制。临床上存在C9ORF72基因突变的FTD-ALS患者在病理及临床表型上具有显著异质性。文中对国内外C9ORF72基因突变的致病机制、临床特征及治疗研究进展进行综述。

D18S872基因座在汉、维、蒙古、回族群体中的遗传多态性研究及其应用

目的 调查D18S872基因座在成都汉族 ,新疆维族和蒙古族 ,甘肃回族 4个民族中的遗传多态性 ,获得群体遗传学基本数据。 方法 等位基因分型标准物制备采用分子克隆技术 ,样本基因分型采用PCR和PAG垂直电泳技术、银染显色方法。 结果 获得D18S872基因座等位基因分型标准物及该基因座在 4个群体中的遗传学数据。 结论 结果表明D18S872基因座在法医学个人识别和亲子鉴定中有一定的应用价值。

P53基因Arg72Pro单核苷酸多态性与青海地区人群胃癌易感性的相关性分析

目的:探讨p53基因Arg72Pro单核苷酸多态性与青海地区人群胃癌易感性的关系。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测青海地区84例健康对照者和123例胃癌患者中P53基因Arg72Pro的不同基因型及等位基因。结果:青海地区胃癌患者中p53基因Arg/Arg、Pro/Arg、Pro/Pro的频率分别为36.5%、47.2%和16.3%,健康对照组中的频率为21.4%、50%、28.6%,Arg/Arg基因型与在胃癌患者中明显增高,对照组和胃癌组间有明显差异(P<0.05),胃癌组中Arg/Arg基因型与在低分化腺癌及淋巴结转移组中明显增高并且存在相关性(P<0.05)。结论:p53基因Arg72Pro单核苷酸多态性与青海地区人群胃癌易感性存在相关性,携带P53基因Arg72Pro野生型纯合子(Arg/Arg)可能是青海地区发生胃癌、胃低分化腺癌及癌淋巴结转移的危险因素。

CYP72B1基因和AUR3基因响应光、生长素和油菜素内酯的转录调控机制研究

为研究光、生长素和油菜素内酯在基因层次上的互作机制,开发了转录调控元件识别工具OCMMat,其中,在对共表达基因信息和直系同源基因信息进行整合时,利用了转录调控元件在直系同源基因启动子中的富集性.利用该方法发现,CYP72B1基因和AUR3基因启动子含有3个相同的调控模序GAGACA、AAGAAAAA、ATCATG,它们分别承担了AuxRE元件、GT元件和GT辅助元件的功能.其中,ATCATG模序是目前尚未报道过的调控元件,与AAGAAAAA模序的距离相对恒定.基于调控元件识别结果,构建了CYP72B1基因和AUR3基因响应光、生长素和油菜素内酯的转录调控模型,模型显示:光信号和生长素、油菜素内酯信号在CYP72B1基因和AUR3基因的转录调控元件上相互交叠,而生长素和油菜素内酯信号则在转录因子ARF水平上相交.