GP73及其相关miRNA在肝癌中的研究进展

高尔基体蛋白73(Golgi protein 73,GP73)是位于顺式高尔基体膜上的糖基化跨膜蛋白,其在肿瘤的发展进程中具有重要作用,是肿瘤治疗的潜在靶标。目前研究表明,GP73可作为辅助诊断肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的血清学标志物。随着GP73的深入研究,与GP73有关的微RNA(microRNA,miRNA)也逐渐被挖掘出来。GP73相关miRNA与多种肿瘤的发生、发展密切相关,其中miR-212、miR-27a等miRNA能抑制HCC的侵袭及转移,GP73与miR-27b、miR-493-5p等能作为HCC患者预后的生物标志物。因此,GP73相关miRNA用于肝癌的诊治是有前景的。本文总结了GP73及其相关miRNA在肝癌发展中的作用以及机制,希望为肝癌的机制研究和诊疗提供思路。

CT扫描联合肿瘤标志物AFP-L3、GP73诊断原发性肝癌的价值探讨

目的:探讨联合运用CT增强扫描与ELISA法检测血清肿瘤标志物甲胎蛋白异质体(alpha-fetoprotein isoforms,AFP-L3)、高尔基体蛋白73(golgiprotein 73,GP73)浓度诊断原发性肝癌(primary hepatic carcinoma,PHC)的临床价值。方法:选取214例原发性肝细胞癌患者(PHC组)和242例良性肝病患者(良性肝病组)纳入本研究,分析所有病例的CT增强扫描结果以诊断PHC,并采用ELISA法检测患者血清AFP-L3、GP73浓度。分别探讨单独运用CT扫描、肿瘤标志物浓度检测及联合运用两种技术诊断PHC的价值。结果:良性肝病组肝硬化和脂肪肝患者的AFP-L3、GP73浓度分别为(25. 97±14. 55) ng/ml和(23. 78±12. 61)ng/ml、(57. 83±28. 56) ng/ml和(64. 43±26. 35) ng/ml,差异无统计学意义(P> 0. 05); PHC组病灶直径≤3 cm和>3 cm患者的AFP-L3、GP73浓度分别为(84. 20±76. 54) ng/ml和(158. 67±150. 56) ng/ml、(113. 34±90. 46) ng/ml和(210. 26±180. 61) ng/ml,差异有统计学意义(P <0. 05)。CT、AFP-L3、GP73对良性肝病组肝硬化、脂肪肝患者诊断的特异性和PHC组病灶直径≤3 cm、>3 cm诊断的灵敏度分别为78. 50%、85. 93%、67. 42%、88. 00%; 84. 11%、87. 41%、80. 90%、84. 80%; 80. 37%、80. 74%、78. 65%、80. 80%;三者联合诊断的特异性和灵敏度为76. 63%、79. 26%和88. 76%、91. 20%。结论:联合运用CT扫描及肿瘤标志物检测两种技术明显提高了PHC的诊断准确率。

N-糖基化修饰蛋白gp73与肝硬化患者Child-Pugh的关系

目的评价N-糖基化修饰蛋白gp73的血清水平与肝硬化患者Child-Pugh之间的关系及其可能的临床意义。方法所观察的患者均为2009年1月~2010年10月在北京地坛医院门诊及住院肝硬化患者,所有患者均为HBsAg阳性。观察患者共610例,其中男性患者448例,年龄17~82岁,平均48岁;女性患者162例,年龄18~76岁,平均55岁。入组肝硬化患者的Child-Pugh分级主要依据血清白蛋白、总胆红素、凝血酶原活动度、腹水及肝性脑病评价等5项指标。血清gp73浓度采用ELISA法检测。结果伴随肝功能衰退,血清gp73水平也相应升高。血清gp73水平Child-Pugh为C级的患者（255.78 ng/mL±100.89 ng/mL）显著高于B级（203.30 ng/mL±99.15 ng/mL）和A级的患者（125.28 ng/mL±67.05 ng/mL）。血清gp73与白蛋白之间呈显著负相关（r=-0.52,P〈0.0001）。结论 HBV感染肝硬化患者血清gp73水平随肝功能恶化而升高。

血清AFP-L3、GP73检测联合CT扫描在肝细胞癌诊断中的价值

目的:检测肝病患者血清中甲胎蛋白异质体(AFP-L3)和高尔基体蛋白73(GP73)浓度,分析肝病患者病灶CT平扫加增强扫描后经处理技术得到二维及三维重建图像,探讨联合运用AFP-L3、GP73浓度检测与CT扫描两种技术在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)诊断中的价值。方法:采用酶联免疫吸附法检测肝病患者血清AFP-L3、GP73浓度,运用受试者工作特征曲线(recover operation characteristic,ROC)确定AFP-L3、GP73浓度诊断HCC的cut-off值。分析141例肝病患者总共164个病灶的CT扫描后经处理技术得到二维及三维重建图像而诊断HCC,探讨采用AFP-L3、GP73浓度测定与CT增强扫描及这两种方法联合应用在HCC的检出与定性诊断方面的价值。结果:HCC组AFP-L3浓度(113.58±63.62)ng/ml明显高于良性肝病组[(23.19±34.54)ng/ml,P<0.001],绘制AFP-L3浓度诊断HCC的ROC曲线,AFP-L3浓度38.47ng/ml为诊断HCC的cut-off值,诊断敏感性为81.08%,特异性为88.06%,诊断正确率为87.23%;HCC组GP73浓度(126.55±49.56)ng/ml明显高于良性肝病组[(56.97±26.48)ng/ml,P<0.001],绘制GP73浓度诊断HCC的ROC曲线,GP73浓度69.44ng/ml为诊断HCC的cut-off值,诊断敏感性为75.68%,特异性为91.04%,诊断正确率为88.65%。CT扫描诊断HCC的灵敏度为82.43%,特异度为91.04%,诊断正确率为90.07%。联合AFP-L3、GP73浓度检测与CT扫描诊断HCC的灵敏度为85.14%,特异度为92.53%,诊断正确率为92.19%。结论:联合运用血清AFP-L3、GP73浓度检测及CT扫描两种技术对HCC诊断灵敏度、特异度、诊断正确率较运用单一技术均有所提高,联合运用两种技术对HCC的准确早期诊断具有积极的意义。

病毒性肝炎及肝癌患者血清GP73的表达及意义

目的探讨血清高尔基体蛋白73(GP73)在病毒性肝炎及肝癌患者中的表达及临床意义。方法病例资料来源于2013-2015年首都医科大学附属北京同仁医院。应用双抗体夹心ELISA方法测定192例健康对照组、118例乙型肝炎组、131例丙型肝炎组和78例肝癌组患者的血清GP73水平。结果乙型肝炎组、丙型肝炎组和肝癌组患者的GP73浓度均明显高于健康对照组,差异均有显著统计学意义(P<0.01);在乙型肝炎患者中,HBe Ag阳性组GP73浓度和HBV-DNA含量明显高于HBe Ag阴性组,差异均有显著统计学意义(P<0.01);肝癌组患者的GP73与甲胎蛋白(AFP)呈正显著相关性(r=0.433,P<0.01)。结论与健康对照组比较,GP73在不同肝炎组及肝癌组患者中均明显增高,且随着疾病进展,GP73有明显增高趋势,表明血清GP73测定在病毒性肝炎及肝癌的诊断及监测疾病进程中具有重要意义。

GP73与肝癌关系的研究进展

肝癌是一种恶性程度高、进展快的肿瘤。因其早期常无明显症状,一旦发现已多属晚期,虽经积极治疗,其预后仍差。肝炎、肝硬化和肝癌的关系密切,特别是慢性病毒性肝炎导致的肝硬化,更是肝癌的危险因素。AFP是目前世界公认的诊断肝癌的血清标记物,但因其敏感性和特异性不高,时有误诊漏诊,故并不令人满意。GP73是新近发现的一种肝癌相关蛋白,它在人体的多种组织中均可表达,但在肝细胞中几乎不表达。最近研究表明GP73在肝炎、肝硬化和肝癌中均有明显表达,尤以肝癌最为显著,肝硬化次之。因此,对肝炎后肝硬化患者用GP73进行监测,对肝癌的早发现、早诊断、早治疗具有十分重要的意义。GP73对肝癌的敏感性和特异性均优于AFP,若两者联合应用则更可提高对早期肝癌的诊断率。GP73有望成为最具潜力的诊断肝癌的一个新的血清标记物。

转化生长因子β上调肝癌中GP73表达的分子机制

目的:研究转化生长因子β(TGF-β)在翻译水平、转录水平对肝癌细胞表达高尔基蛋白73(GP73)的影响。方法:用不同时间(0、1、2、4、8 h),不同浓度(0、1、2 ng/mL)的TGF-β1刺激转染了pcDNA3-Flag-GP73、pcDNA3-Flag-V质粒的HepG2细胞,分别用免疫印迹检测细胞内GP73蛋白水平变化,荧光定量PCR检测细胞内GP73 mRNA表达水平变化;双萤光素酶报告基因检测TGF-β1能否激活GP73基因启动子。结果:在TGF-β1的刺激下,细胞GP73蛋白及mRNA水平均明显上调;TGF-β能激活GP73启动子且使其活性增强6倍左右,但对GP73启动子突变体无作用。结论:TGF-β能在蛋白水平、mRNA水平影响GP73的表达,GP73是TGF-β作用的靶分子。

血清GP73在常见恶性肿瘤中的表达水平

目的:评估血清高尔基体糖蛋白73(GP73)检测在常见恶性肿瘤患者临床诊断中的应用价值。方法:收集282例各类恶性肿瘤患者和30例正常对照组血清,利用酶联免疫分析和化学发光法分析分别对血清GP73和其它肿瘤标志物进行定量检测,分析不同恶性肿瘤患者血清GP73含量以及与其他肿瘤标志物的关系。结果:原发性肝癌、肺癌、胰腺癌及胆管癌中血清GP73明显高于正常对照组,有统计学意义(U分别为105.0、223.5、175.5和180.5,P<0.01);而其它恶性肿瘤患者血清GP73与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);GP73与其它肿瘤标志物进行相关分析,在原发性肝癌患者血清GP73与AFP呈弱相关(r=0.137);在肺癌患者血清GP73与CEA、NSE呈弱相关(r分别为0.129和0.071);在胰腺癌患者中,GP73与CA19-9的r为0.149,两者呈弱相关。结论:血清GP73在原发性肝癌、肺癌、胰腺癌及胆管癌中表达上调,可作为临床诊断的实验室标志物。

HBV DNA、AFP 、GP73在慢性乙型肝炎病情严重程度及肝纤维化诊断中的应用价值研究

目的:探究乙型肝炎病毒(HBV) DNA、甲胎蛋白(AFP)、高尔基体跨膜糖蛋白73(GP73)在慢性乙型肝炎(CHB)病情严重程度及肝纤维化诊断中的应用。方法:选择CHB患者160例,根据标准将患者病情严重程度分为轻度、中度、重度和肝衰竭,根据Masson染色进行纤维化分级,S2～S4为纤维化。选择同期健康者作为对照组。检测所有患者外周血HBV DNA、AFP、GP73水平。结果:CHB患者的AFP、GP73水平显著高于对照组(P<0.05),并且随着严重程度增加,AFP、GP73的水平也显著升高(P<0.05)。随着CHB患者肝脏纤维化程度的增加,HBV DNA、AFP、GP73的水平显著升高(P<0.05)。AFP、GP73与CHB病情严重程度和纤维化程度均呈现显著正相关关系(P<0.05),HBV DNA与纤维化程度呈正相关关系(P<0.05)。AFP、GP73对CHB病情严重程度的AUC分别为0.711和0.729。HBV DNA、AFP、GP73对CHB肝纤维化程度的AUC分别为0.704、0.745和0.758。结论:AFP、GP73与CHB病情严重程度和纤维化程度呈现正相关,并且其对CHB病情和纤维化具有一定的诊断价值。HBV DNA对CHB患者肝纤维化程度有也具有一定的价值。

GP73参与肝癌索拉菲尼获得性耐药的初步研究

目的:探讨高尔基蛋白73(GP73)是否参与调控肝癌索拉菲尼获得性耐药。方法:构建索拉菲尼获得性耐药细胞株;采用蛋白免疫印迹技术检测野生型HepG2细胞及索拉菲尼获得性耐药细胞株中GP73的表达水平;在野生型HepG2细胞中转染GP73,或索拉菲尼耐药细胞株中敲低GP73,24 h后加入不同浓度的索拉菲尼处理细胞,MTT法检测细胞存活。结果:GP73在肝癌索拉菲尼耐药细胞株中高表达;HepG2细胞中过表达GP73能够降低细胞对索拉菲尼的敏感性;耐药细胞株中敲低GP73之后能够升高细胞对索拉菲尼的敏感性。结论:GP73的高表达能够降低HepG2细胞对拉菲尼的敏感性。

慢性乙肝不同炎症分级患者的肝功能、纤维化指标和GP73检测及临床意义

目的分析慢性乙肝不同炎症分级患者的肝功能、纤维化指标检测及高尔基蛋白73(GP73)表达情况,探究其检测价值,为临床诊断及预后判断提供参考依据。方法选择2016年2月至2019年5月在西安市第八医院治疗的慢性乙肝患者94例为研究对象。常规进行肝组织活检,根据检测结果按照不同炎症分级将患者分为轻度炎症组(G0~G1级)及中重度炎症组(G2~G3级),每组47例。检测分析两组患者血清胆汁酸(TBA)、甲胎蛋白(AFP)、总胆红素(TBil)、碱性磷酸酶(ALP)、丙氨酸转氨酶(ALT)、白蛋白(ALB)、纤维化指标[Ⅲ型前胶原N端肽(PⅢNP)、Ⅳ型胶原蛋白(Ⅳ-C)、透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)]及GP73水平,并分析GP73对肝纤维化的诊断价值。结果轻度炎症组患者的血清TBA、AFP、TBil、ALP、ALT水平分别为(13.72±3.07)μmol/L、(16.47±3.48)ng/mL、(20.47±2.85)μmol/L、(159.58±8.53)U/L、(69.83±5.82)U/L,明显低于中重度炎症组的(34.56±7.45)μmol/L、(22.38±5.76)ng/mL、(29.45±4.81)μmol/L、(187.42±12.24)U/L、(89.16±8.94)U/L,而ALB为(56.37±4.48)g/L,明显高于中重度炎症组的(38.62±2.21)g/L,差异均有统计学意义(P<0.05);轻度炎症组患者的PⅢNP、Ⅳ-C、HA、LN水平分别为(36.71±6.48)ng/mL、(104.32±5.08)ng/mL、(113.35±15.56)ng/mL、(134.83±14.54)ng/mL,明显低于中重度炎症组的(71.45±6.96)ng/mL、(129.46±5.82)ng/mL、(147.12±17.68)ng/mL、(160.64±15.79)ng/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);轻度炎症组患者GP73表达水平为(76.71±14.58)ng/mL,明显低于中重度炎症组的(161.96±21.47)ng/mL,差异有统计学意义(P<0.05);血清GP73浓度与纤维化分级呈正相关性(r=0.32,P<0.05);血清GP73诊断纤维化(≥S2)的敏感性为62.50%,特异性为80.00%,血清GP73诊断炎症(≥G2)敏感性为53.20%,特异性为80.21%。结论慢性乙肝患者随着其炎症反应加重,肝功能指标、纤维化指标及GP73蛋白的表达水平也随之增长;加强患者肝功能、纤维化指标及GP73检测能够早期诊断炎症反应,有助于及时监测肝功能损害情况,以便判断预后。

原发性肝癌患者血清AFP、AFU、TSGF、GP73水平变化及其CT特征分析

目的探讨原发性肝癌(PLC)患者血清甲胎蛋白(AFP)、α-L-岩藻糖苷酶(AFU)、肿瘤特异性生长因子(TSGF)、高尔基体蛋白73(GP73)水平变化及其电子计算机断层扫描(CT)特征,分析总结其临床诊断价值。方法选取2017年3月至2019年3月铜川市妇幼保健院接诊的62例PLC患者为研究组,选取我院同期接诊的31例肝脏良性病变患者为对照A组,31例健康者为对照B组。患者入院后,检测并比较三组受检者血清AFP、AFU、TSGF、GP73的水平及其CT特征。结果研究组患者的血清AFP、AFU、TSGF、GP73水平[(335.92±68.44)μg/L、(71.26±12.02)U/L、(75.23±16.51)U/mL、(221.31±47.33)μg/L]明显高于对照A组[(53.24±12.67)μg/L、(42.14±9.46)U/L、(52.88±11.19)U/mL、(139.28±35.15)μg/L]和对照B组[(6.90±3.88)μg/L、(25.12±8.38)U/L、(38.14±8.30)U/mL、(67.58±19.74)μg/L],对照A组患者的血清AFP、AFU、TSGF、GP73水平又明显高于对照B组,差异均有统计学意义(P<0.05);研究组患者的血清AFP、AFU、TSGF、GP73检测阳性率分别为61.29%、72.58%、64.52%、75.81%,明显高于对照A组的16.13%、22.58%、29.03%、35.48%和对照B组的6.45%、9.68%、12.90%、16.13%,对照A组患者的血清AFP、AFU、TSGF、GP73检测阳性率又明显高于对照B组,差异均有统计学意义(P<0.05);CT、血清AFP、AFU、TSGF、GP73检测的灵敏度分别为76.12%、64.83%、73.21%、64.35%、82.52%,特异度为93.29%、76.42%、77.68%、82.41%、84.80%,准确度为89.30%、72.13%、76.01%、72.84%、82.73%,CT联合四项指标检测的灵敏度、特异度、准确度分别为97.79%、98.70%、98.50%,明显高于单独检测,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论血清AFP、AFU、TSGF、GP73检测水平及CT扫描对PLC患者有一定诊断价值,联合检测可以有效提高诊断准确度。

GP73中和抗体抑制MCD饮食诱导的非酒精性脂肪肝机制研究

目的研究高尔基体蛋白73(GP73)中和抗体在由蛋氨酸和胆碱缺乏(MCD)饮食诱导的非酒精性脂肪肝(NAFLD)发生过程中的功能机制。方法小鼠经MCD饮食和GP73中和抗体干预后,检测血清总胆固醇(TC)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、三酰甘油(TG)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)总含量;肝组织脂质蓄积程度由ORO染色和HE染色进行观察;qRT-PCR检测肝组织ACC1、HMGR、TIMP1、TGF-β的基因表达情况;Western blot检测肝组织α-SMA和SREBP1蛋白表达水平。结果GP73中和抗体会降低由MCD饮食诱导的血清ALT、AST积累(P<0.001),提高血清TG、TC的水平(P<0.001);肝组织HGMR(P<0.001)、TGF-β(P<0.05)、ACC1(P<0.01)的基因表达水平和α-SMA(P<0.05)、SREBP1(P<0.05)蛋白表达水平出现下降,改善脂肪堆积。结论GP73中和抗体通过减缓肝脏纤维化进程,减轻肝脏脂质蓄积,抑制MCD诱导的NAFLD的形成。

GP73的血清学分析以及联合AFP在HCC中的诊断价值

目的探讨不同人群血清中GP73水平及分析GP73和AFP联合检测对原发性肝细胞癌诊断的临床价值。方法收集119例原发性肝癌患者、50例肝硬化患者、114例慢性乙肝患者、6例慢性乙肝携带者及139例健康人血清,采用ELISA的方法对每个样本中GP73含量进行检测,结合各项临床指标进行统计学分析。结果血清GP73水平在健康人群中呈正态分布,而且在男性与女性之间无统计学差异(P>0.05)。分析HCC组血清中GP73水平发现,男性患者高于女性患者(P=0.013),伴有肝硬化的患者高于无肝硬化的患者(P=0.002),肿瘤直径>3cm的患者高于肿瘤直径≤3cm的患者(P=0.041),而GP73水平与HCC患者的年龄、AFP、ALT、AST、巴塞罗那(BCLC)分级、是否HBV感染、肿瘤数目无显著相关性。血清中GP73检测的阳性临界值为61.93ng/mL。根据这一临界值得出,GP73诊断HCC患者的灵敏度和特异度分别为58.82%和98.56%。GP73阳性率较高的是肝硬化患者组(86%)和慢性乙肝患者组(76.32%),HCC组的阳性率为58.82%,健康人群的GP73阳性率为1.44%,慢性乙肝携带者中未检出阳性样本。结合临床数据,GP73联合AFP检测的阳性率为82.35%。结论GP73在HCC患者血清中表达较高,将其作为一种肝癌血清标志物具有很好的研究价值;血清中GP73联合AFP检测的方法可有效提高对HCC的诊断率,从而避免漏诊现象的发生,对HCC的诊断具有重要的参考价值。

探讨血清生长分化因子15(GDF-15)、血清高尔基体蛋白73(GP73)、甲胎蛋白(AFP)对肝细胞癌的诊断价值

观察血清生长分化因子15(GDF-15)、血清高尔基体蛋白73(GP73)、甲胎蛋白(AFP)对肝细胞癌诊断价值。方法 将(2020年01月-2022年01月)肝细胞癌30例为肝癌组,另30例肝硬化为硬化组,30例慢性肝炎为肝炎组,30例健康无异常为健康组。分析四组血清GDF-15、GP73、AFP水平,统计肝癌组不同分期患水平,明确诊断价值。结果 肝癌组血清GDF-15、GP73、AFP各指标高于硬化组高于肝炎组与健康组,四组比较,(P<0.05)。肝癌组C期及D期AFP、GDF-15水平高于他期,(P<0.05)。GDF-15+AFP联合与GDF-15+GP73+AFP联合诊断准确率高于单一诊断及GDF-15+GP73联合、GP73+AFP联合,(P<0.05)。结论 肝细胞癌血清GDF-15、GP73、AFP水平高,联合检测具有较高诊断价值。

高尔基蛋白73、甲胎蛋白异质体3、甲胎蛋白和α-L-岩藻糖苷酶在肝脏疾病中的诊断价值

目的比较高尔基蛋白73(GP73)、甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)、甲胎蛋白(AFP)和α-L-岩藻糖苷酶(AFU)在不同肝脏疾病患者中的意义及其单项或联合检测诊断肝癌的价值。方法对2013年1-12月收治的272例肝癌患者、203例肝硬化患者、248例慢性肝炎患者及210例健康体检者血清中的GP73、AFP-L3、AFP和AFU水平进行检测。非正态分布的数据多组间比较采用Kruskal-Wallis H检验,组间两两比较采用Mann-Whitney U检验,率的比较用卡方检验。ROC曲线绘制分别以健康人组和非肝癌组(健康体检、慢性肝炎、肝硬化)为对照。联合指标先进行Logistic拟合后再做ROC曲线。结果 GP73水平肝硬化组[177.0(116.0,247.0)ng/ml]较肝癌组[141.0(83.3,218.8)ng/ml])和慢性肝炎组[151.0(83.0,235.3)ng/ml]高(U=22 116.5、21 052.0,P均<0.05);AFP-L3和AFP在肝癌组中的水平[11.3(4.3,21.2)%,78.4(7.1,2455.8)ng/ml]明显高于肝硬化组[6.0(4.0,8.0)%,10.0(3.8,49.5)ng/ml]和慢性肝炎组[7.0(5.0,9.0)%,18.8(4.4,79.6)ng/ml](P均<0.05)。以健康人血清样本为对照绘制的诊断肝癌的ROC曲线,GP73、AFP-L3、AFP和AFU的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.827、0.817、0.901和0.680。由此可知在鉴别健康人和肝癌患者方面,前3者比AFU有较高的准确性。以非肝癌患者血清样本为对照绘制的诊断肝癌的ROC曲线,4个指标对应的AUC分别为0.573、0.734、0.753和0.552,可见AFP-L3和AFP对于诊断肝癌有一定的准确性,其敏感性和特异性达到最大时的cut off值依次为8.55%(56.6%,84.9%),49.88 ng/ml(57.7%,80.9%)。结论 GP73的上升与肝损伤及长期纤维化有关,其在诊断肝脏疾病中有较好的敏感性,AFP-L3和AFP在诊断肝癌方面特异性较好,AFP-L3和AFP两者联合应用可提高肝癌的诊断敏感性至62.1%。

血清中磷酯酰肌醇蛋白聚糖-3及高尔基体蛋白-73异常表达对肝癌的诊断价值

目的 ：探究肝组织及外周血磷酯酰肌醇蛋白聚糖-3（phosphatidylinositol proteinglycan 3,GPC3）及高尔基体糖蛋白-73（Golgi protein 73,GP73）高表达对肝癌的诊断价值。方法 ：用ELISA法检测39例肝癌患者及31例肝硬化患者外周血GPC3及GP73浓度,RT-PCR法检测两组患者肝组织中GPC3 m RNA及GP73 m RNA表达水平,比较研究肝癌及肝硬化患者外周血、肝组织中GPC3及GP73的表达差异,分层分析此两种蛋白表达与肝癌不同临床分期、病理分级的相关性。结果：肝癌组外周血GPC3、GP73浓度分别为（16.81±0.56）μg/L、（115.92±7.01）ng/ml,肝硬化组外周血GPC3、GP73浓度分别为（7.41±0.25）μg/L、（64.63±3.07）ng/ml,肝癌组外周血GPC3、GP73浓度均显著高于肝硬化组（P〈0.001）。GPC3值为9.3μg/L时诊断肝癌的灵敏度和特异度分别为89.74%和96.77%,阳性预测值97.20%,阴性预测值88.20%;GP73截断值为77.68 ng/ml时,其诊断肝癌的灵敏度92.31%,特异度83.87%,阳性预测值87.80%,阴性预测值89.70%。肝癌组GPC3 m RNA和GP73 m RNA相对表达量分别为8.91±3.70、68.41±32.86,肝硬化组GPC3 m RNA和GP73 m RNA相对表达量分别为3.04±0.58、2.32±0.25,肝癌组GPC3 m RNA、GP73 m RNA表达均高于肝硬化组（P均〈0.05）。上述结果可知肝癌患者癌组织GPC3、GP73 m RNA表达水平与外周血相应蛋白浓度一致。肝癌患者中外周血GP73、GPC3蛋白浓度及组织m RNA表达水平与年龄、性别、肿瘤大小及肝癌临床分期间无统计学意义;而肝癌患者GPC3表达与病理分级间存在统计学差异,病理分级为3级的肝癌患者GPC3表达水平低于1-2级患者。结论：GP73、GPC3在肝癌患者中表达明显增高,且灵敏度高于AFP,而特异度与其相当,有望成为一种新的、较好早期诊断HCC的血清标志物;另外,GPC3表达对肝癌细胞的分化程度有一定的指示作用。

肝癌标志物高尔基体蛋白73基因在大肠杆菌中的表达

目的克隆、表达和鉴定肝癌标志物高尔基体蛋A73（G1773）基因序列（1028～1327bp）。方法应用Biosun生物学软件分析GP73全序列，预测其抗原表位，将GP73蛋白基因克隆到表达载体PGEX-4T-2上，构建重组表达质粒PGEX-4T-2／GP73,转化大肠杆菌BL21，异丙基-β—D-硫代半乳糖吡喃糖苷（WFG）诱导表达，利用GST亲和层析柱对重组蛋白进行纯化．并用蛋白印迹分析技术（Western blot）和酶联免疫吸附测定方法（ELISA）检测其抗原性．并与商品化的GP73抗原进行比较。结果本研究纯化的GP73蛋白在大肠杆菌中获得高效表达，SDS～聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）显示其相对分子质量为37kD，与预计大小一致。Western blot和ELISA实验证实，纯化的GP73蛋白具有良好的抗原性。结论本研究成功克隆和表达了GP73序列．为制备抗体和肝癌诊断试剂的研发奠定了实验基础。

血清甲胎蛋白联合高尔基体蛋白73对原发性肝癌的诊断价值

目的探讨血清甲胎蛋白(AFP)联合高尔基体蛋白73(GP73)对原发性肝癌(PHC)的诊断价值。方法回顾分析115例PHC患者、104例良性肝脏疾病患者、89例健康对照者的血清AFP、GP73检测结果,其中AFP测定采用电化学发光法,GP73测定采用酶联免疫吸附试验(ELISA)。结果 1三组血清AFP、GP73水平相比差异有统计学意义(P<0.05),PHC组血清AFP、GP73水平显著高于良性肝脏疾病组(P<0.05),良性肝脏疾病组血清AFP、GP73水平显著高于健康对照组(P<0.05)。2血清AFP、GP73诊断PHC的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.797(95%CI,0.691~0.859)、0.903(95%CI,0.838~0.925),血清GP73诊断PHC的AUC显著大于血清AFP(P<0.05)。3血清AFP诊断PHC的最佳cut-off值为187.7μg/L,其对应的灵敏度、特异度分别为77.4%、94.3%。血清P73诊断PHC的最佳cut-off值为143.1μg/L,其对应的灵敏度、特异度分别为84.3%、95.3%。4采用平行试验对血清AFP、GP73进行联合分析,其灵敏度、特异度分别为94.8%、92.7%。AFP、GP73联合检测诊断PHC的灵敏度显著高于单独检测血清AFP、GP73(P<0.05),而特异度与单独检测血清AFP、GP73比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论单独检测血清AFP、GP73诊断PHC的灵敏度较低,当两者联合时可以显著提高其诊断灵敏度,而同时特异度无显著下降,从而有利于PHC的诊断与鉴别诊断。

丙型肝炎病毒对高尔基体蛋白73表达的影响

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)对高尔基体蛋白73(GP73)表达的影响。方法选取2015年3月至2016年12月期间上海市浦东新区公利医院收治的68例HCV患者为研究对象,以同期74例健康体检者为对照组,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两组受检者血清中GP73的含量,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫印迹法检测Huh7.5.1细胞中GP73 m RNA和蛋白的表达情况,ELISA检测细胞上清中GP73的含量,用SPSS19.0软件进行统计学分析。结果 HCV组患者的GP73血清含量为(146.5±12.8)ng/m L,明显高于健康对照组的(45.2±2.7)ng/m L,差异有统计学意义(P<0.05);感染HCV的Huh7.5.1细胞中GP73 m RNA和蛋白相对表达量分别为(1.204±0.143)和(1.174±0.136),明显高于对照细胞的(0.306±0.019)和(0.298±0.015),差异均具有统计学意义(P<0.05);HCV感染的细胞上清中GP73含量为(85.6±10.3)ng/m L,明显高于对照细胞的(39.5±8.3)ng/m L,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 HCV可能通过上调GP73的表达来参与HCC的形成,但HCV调节GP73表达的具体分子机制尚待进一步研究。