钴-60伽玛射线诱导淋巴细胞γH2AX表达的研究

采用流式细胞术检测60Coγ-射线照射后γH2AX表达的量效和时程关系,同时探讨紫外线联合60Coγ-射线照射后γH2AX的表达情况。结果表明,不同剂量60Coγ-射线照射后γH2AX表达量与照射剂量之间呈现明显的剂量效应关系。4 Gy 60Coγ-射线照射后,γH2AX的表达在1 h达到峰值,随后逐渐减少。与假照组相比,单纯紫外线照射组γH2AX表达增加,一直稳定维持约6 h左右,随后开始减少。紫外线联合60Coγ-射线照射组与单纯60Coγ-射线照射比较,γH2AX的表达无显著性差异。结果提示采用流式细胞术检测γH2AX的表达估算受照剂量具有可行性,该法有望成为估算辐射剂量的新方法。

醋酸棉酚诱导三株宫颈癌细胞DNA双链断裂研究

本文作者研究醋酸棉酚(gossypol acetic acid,GAA)对3株宫颈癌细胞Hela、Siha、C-33A的DNA双链断裂(double-strand break,DSB)机制。MTT法检测GAA对3株宫颈癌细胞的体外增殖的影响;单细胞凝胶电泳实验检测GAA对3株宫颈癌细胞造成的DNA双链断裂;免疫组织化学法检测GAA诱导3株宫颈癌细胞产生的磷酸化组蛋白γH2AX焦点。GAA(0~160μmol/L)以时间和浓度依赖方式抑制3株宫颈癌细胞的生长。2.5~40μmol/L的GAA作用24 h,或20μmol/L的GAA作用3~48 h,CASP软件分析显示,彗星细胞的头部DNA百分含量减少,尾长、彗星长度、尾部DNA百分含量、尾矩和Olive尾矩增加;而免疫组织化学染色结果显示,γH2AX阳性细胞率呈浓度、时间依赖性增加。3株细胞对GAA的敏感性呈现一定差异性。GAA抗肿瘤的作用机制为诱导细胞DSB,其中GAA诱导C-33A的DSB作用最强,Siha次之,Hela最弱。

低浓度玉米赤霉烯酮对TM3细胞增殖及γH2AX焦点形成的影响

为探讨玉米赤霉烯酮(ZEA)的雄性生殖毒性及其机理,本试验研究了低质量浓度ZEA暴露对小鼠睾丸间质细胞株TM3细胞增殖及核内γH2AX荧光焦点产生的影响。以TM3细胞为材料,加入不同质量浓度的ZEA,设0,5,10,20μg/L ZEA染毒组,培养72h后,应用噻唑蓝比色法检测TM3细胞增殖活力,观察细胞周期分布及其调控蛋白Cyclin D1、CDK4表达情况,同时应用免疫荧光、蛋白免疫印迹法检测TM3细胞中γH2AX含量的变化。结果显示,染毒72h后,低质量浓度的ZEA对TM3细胞的生长具有明显的促进作用,检测细胞周期发现10μg/L ZEA染毒组G1/G0期细胞分布百分比显著下降(P<0.05),S期细胞分布百分比显著升高(P<0.05),20μg/L ZEA染毒组G1/G0期细胞分布百分比极显著下降(P<0.01),S期细胞分布百分比显著升高(P<0.05);通过免疫荧光发现,5μg/L ZEA染毒组中部分细胞开始出现1至2个荧光焦点,与对照组相比,10μg/L ZEA染毒组和20μg/L ZEA染毒组出现γH2AX荧光焦点的细胞数量明显增多,荧光焦点数呈极显著升高(P<0.01);同时通过蛋白免疫印迹法发现,ZEA能够促进γH2AX蛋白表达量的增加,对细胞周期调控相关蛋白Cyclin D1、CDK4的表达也有明显的促进作用。低质量浓度的ZEA有促进细胞增殖的作用,并可诱发TM3细胞的DNA双链断裂,呈剂量-效应关系。