中国野生和栽培大豆11S及7S蛋白质相对含量的比较分析

大豆种质蛋白质11S和7S及其亚基组相对含量的遗传变异是专用型品种选育的基础。以全国各生态区的野生豆138份和地方品种409份,国内育成品种148份、国外育成品种83份,合计778份大豆种质为材料,采用SDS-PAGE电泳技术测定蛋白质11S和7S组分及其亚基组相对含量,研究其遗传变异。在南京同一条件下的结果表明：全国野生豆、地方品种和育成品种11S相对含量平均分别为54.7%、64.8%和71.7%,变幅28.8%～82.6%、38.8%～79.4%和48.2%～88.9%;7S相对含量平均分别为44.7%、34.9%和27.9%,变幅20.6%～71.2%、20.6%～61.1%和15.7%～47.8%;11S/7S比值平均分别为1.4、2.0和2.7,变幅0.4～3.9、0.6～3.9和0.9～4.0。野生豆驯化为栽培豆并经选育后11S相对含量和11S/7S比值上升,7S相对含量下降,变幅均减小;亚基组11S-2和11S-3相对含量增加;7S的6个亚基组,尤其7S-1和7S-6,相对含量下降。11S、7S、11S/7S以及各亚基组在各群体各生态区内均有较大变异,但与来源地纬度、蛋白质和油脂含量均无显著相关。从中优选到11S/7S比值大于3.7、11S相对含量为78.9%～88.9%的8份种质,发现有11S的4个亚基组相对含量分别大于37%、7S的6个亚基组相对含量分别大于24%、以及11S-1和7S的6个亚基组缺失的种质,这些特异种质可供蛋白质组分育种利用。

谷氨酰胺转胺酶对大豆7S蛋白质及肌球蛋白质胶凝性质的影响

大豆 7S蛋白与肌球蛋白质经谷氨酰胺转胺酶 (TGase)作用后 ,产物的十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)结果表明 ,两者均可在分子间生成共价键 ,形成相对分子质量较大的聚合物 .1 0 g/dL肌球蛋白质溶液加入 1 0U/g的TGase,于 35℃、pH 7.0的条件下反应 90min ,体系的凝胶强度较对照组有了很大提高 .1 0 g/dL大豆分离蛋白质溶液与 0 .0 2U/mg的TGase在37℃下保温 1 50min后 ,体系粘度增加了 1 50mPa·s;而 5g/dL的肌球蛋白质加酶并于 1 0℃下保温 1 80min后 ,其粘度值提高了 60 0mPa·s.

S100A7在子宫颈癌组织中的表达及其对子宫颈癌HeLa和CaSki细胞迁移侵袭及上皮间质转化的影响

目的探讨S100钙结合蛋白A7（S100A7）在子宫颈癌组织中的表达及其对子宫颈癌HeLa和CaSki细胞迁移、侵袭、增殖及上皮间质转化（EMT）的影响。方法（1）选择2007年4月至2008年3月青岛大学附属医院妇科收治的因子宫颈鳞癌进行手术治疗的癌组织标本共40份作为子宫颈癌组，以同期因妇科良性肿瘤行子宫全切除术的正常子宫颈组织20份作为对照组，应用免疫组化SP法检测两组子宫颈组织中S100A7蛋白的表达。（2）通过慢病毒包装系统将重组质粒pLVX-IRES-Neo-S100A7和空质粒pLVX-IRES-Neo分别转染子宫颈癌HeLa和CaSki细胞（分别为转染组和对照组），筛选稳定表达S100A7基因的HeLa和CaSki细胞系并进行鉴定。穿膜（transwell）小室体外实验检测两组子宫颈癌细胞的迁移和侵袭能力，活细胞计数（CCK-8）法检测两组子宫颈癌细胞的增殖能力，流式细胞仪检测两组子宫颈癌细胞的细胞周期比例，蛋白印迹（western blot）法检测两组子宫颈癌细胞中EMT标志分子——上皮型钙黏蛋白（E-cad）、神经型钙黏蛋白（N-cad）、波形蛋白（Vim）和纤连蛋白（FN）的表达。结果（1）免疫组化SP法检测显示，子宫颈癌组、对照组子宫颈组织中S100A7蛋白表达水平的中位数分别为91.6和52.1，两组比较，差异有统计学意义（Z=-2.948，P=0.003）。（2）本研究成功构建稳定的过度表达S100A7基因的HeLa和CaSki细胞系，转染组HeLa和CaSki细胞中S100A7 mRNA的表达水平分别为119±3和177±16，均明显高于各自的对照组（均设为1，P均〈0.01）；转染组HeLa和CaSki细胞中S100A7蛋白的表达强度均明显高于各自对照组HeLa和CaSki细胞。transwell小室体外迁移实验显示，转染组HeLa和CaSki细胞的穿膜细胞数分别为（572±51）和（100±8）个，均明显高于各自的对照组[分别为（337±25）和（41±4）个；P均〈0.01]；应用matrigel基质的transwell小室进行细胞侵袭能力检测，结果显示，转染组HeLa和CaSki细胞的穿膜细胞数分别为（441±15）和（110±14）个，均明显高于各自的对照组[分别为（156±21）和（59±7）个；P均〈0.05]。CCK-8法和流式细胞仪检测显示，转染组HeLa和CaSki细胞的增殖率和细胞周期比例分别与各自的对照组比较，差异均无统计学意义（P均〉0.05）。western blot法检测显示，与各自的对照组比较，转染组HeLa和CaSki细胞中E-cad蛋白的表达强度均明显减弱，而N-cad、Vim和FN蛋白的表达强度均明显增强。结论S100A7基因促进子宫颈癌HeLa和CaSki细胞的侵袭转移和EMT，可能与子宫颈癌的发生、发展有关。