甘草次酸通过抑制p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路促进脂多糖诱导的小胶质细胞M2极化

目的探究甘草次酸(GA)通过抑制p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路促进脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞M2极化。方法将小鼠BV2小胶质细胞分为阴性对照(NC)组、LPS组(100μg/ml LPS)、GA组(100μg/ml LPS+10μmol/L GA)、GA+抑制剂组(100μg/ml LPS+10μmol/L GA+10μmol/ml p38 MAPK通路抑制剂)、抑制剂组(100μg/ml LPS+10μmol/ml p38 MAPK通路抑制剂)和GA+激活剂组(100μg/ml LPS+10μmol/L GA+300 ng/ml p38 MAPK通路激活剂)。用细胞计数试剂盒8法测定细胞活力,酶联免疫吸附测定炎性因子水平,倒置显微镜观察细胞形态,Western blot检测精氨酸酶1(Arg-1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及p38 MAPK通路相关蛋白表达水平。结果与LPS组比较,GA组和抑制剂组细胞足突增多、胞体变大、细胞间隔缩小,白细胞介素(IL)1β、IL-6、iNOS、P53蛋白、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)表达显著降低(22.53±0.53、24.13±1.00 vs 29.56±1.46,10.37±0.59、10.16±0.21 vs 15.13±1.00,0.39±0.01、0.38±0.01 vs 1.12±0.01,0.34±0.01、0.31±0.01 vs 0.89±0.01,0.40±0.01、0.40±0.02 vs 0.88±0.01,P<0.05),IL-10、Arg-1表达显著升高(177.33±7.57、187.21±6.87 vs 64.67±11.50,0.41±0.01、0.44±0.03 vs 0.10±0.01,P<0.05)。与GA组比较,GA+抑制剂组细胞足突增多、胞体变大,IL-1β、IL-6、iNOS、P53蛋白、p-p38 MAPK表达显著降低,IL-10、Arg-1表达显著升高(P<0.05);GA+激活剂组细胞足突减少、胞体变小,IL-1β、IL-6、iNOS、P53蛋白、p-p38 MAPK表达显著升高,IL-10、Arg-1表达显著降低(P<0.05)。结论GA可通过阻断p38 MAPK信号通路促进LPS诱导的小鼠BV2小胶质细胞M2极化。

重楼皂苷Ⅶ通过p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路对肝癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 观察重楼皂苷Ⅶ对肝癌细胞恶性生物学行为的影响,并探讨相关机制。方法 于2021年6月至2022年6月,取对数期人肝癌HepG2细胞,分为对照组(常规培养)、重楼皂苷Ⅶ组(重楼皂苷Ⅶ0.8μmol/L)、SB203580[p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路抑制剂]组(SB203580 10μmol/L)、联合组(重楼皂苷Ⅶ0.8μmol/L、SB203580 10μmol/L)。噻唑蓝法检测细胞增殖能力;膜联蛋白Ⅴ(AnnexinⅤ)/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡率;划痕实验检测细胞迁移能力;小室实验检测细胞侵袭能力;蛋白质印迹法检测细胞p38 MAPK、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)、细胞外信号调节激酶(ERK)1/2、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)蛋白表达。结果 与对照组24、48、72 h吸光度值,迁移率(74.33±9.37)%,凋亡率(3.25±0.78)%,p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2及侵袭细胞数(364.92±47.99)个比较,重楼皂苷Ⅶ组24、48、72 h吸光度值,迁移率(11.21±3.35)%降低,凋亡率(39.87±8.94)%,p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2升高,侵袭细胞数(54.84±7.41)个减少(P<0.05);SB203580组24、48、72 h吸光度值,迁移率(89.30±14.56)%升高,凋亡率(1.05±0.15)%,p-p38MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2降低,侵袭细胞数(617.04±75.34)个增加(P<0.05)。与重楼皂苷Ⅶ组比较,联合组24、48、72 h吸光度值,迁移率(40.52±8.18)%升高,凋亡率(11.30±2.80)%,p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2降低,侵袭细胞数(141.36±16.75)个增加(P<0.05);与SB203580组比较,联合组24、48、72 h吸光度值、迁移率降低,凋亡率、p-p38 MAPK/p38MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2升高,侵袭细胞数减少(P<0.05)。结论 重楼皂苷Ⅶ可抑制肝癌HepG2细胞增殖、迁移及侵袭等恶性生物学行为,并诱导其凋亡,作用机制可能与激活p38 MAPK信号通路相关。

蛋白酶体20S亚基β8调控丝裂原活化蛋白激酶激酶/细胞外信号调节激酶通路对肾透明细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探究蛋白酶体20S亚基β8(PSMB8)对肾透明细胞癌(ccRCC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响,以及是否通过调控丝裂原活化蛋白激酶激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路发挥其作用。方法采用癌症基因组图谱数据库分析ccRCC与正常组织PSMB8 mRNA的表达水平,并通过实时荧光定量PCR、Western blot和免疫组织化学染色等方法进一步检测PSMB8在ccRCC组织和细胞中的表达情况。构建稳定过表达和敲减PSMB8的细胞株,分别采用CCK-8法和平板克隆实验检测细胞的增殖能力,划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭的能力。对PSMB8共表达基因进行京都基因与基因组百科全书通路富集分析,Western blot检测MEK/ERK通路相关蛋白的磷酸化水平,并加用ERK激动剂C16-PAF处理进行细胞功能学挽救实验。结果与正常组织比较,PSMB8 mRNA和蛋白在ccRCC组织中呈高表达(P均<0.001),且与临床患者的TNM分期显著相关(P<0.001);与阴性对照组比较,过表达PSMB8可以促进786-O、ACHN细胞的增殖(P=0.021,P=0.039)、迁移和侵袭(P均<0.001),敲减PSMB8可以抑制786-O、ACHN细胞的增殖(P=0.022,P=0.005)、迁移和侵袭(P均<0.001);PSMB8共表达基因通路富集分析提示其可能与丝裂原活化蛋白激酶通路相关(P<0.001);敲减PSMB8后786-O和ACHN细胞MEK1/2(P=0.017,P=0.016)、ERK1/2(P=0.010,P=0.040)蛋白磷酸化水平及ERK下游因子c-Myc(P=0.043,P=0.038)、c-Fos(P=0.025,P=0.008)和CyclinD1(P=0.006,P=0.047)转录水平均下调;与ERK激动剂C16-PAF处理组比较,敲减PSMB8+C16-PAF组明显抑制786-O、ACHN细胞的增殖(P=0.003,P=0.002)、迁移和侵袭能力(P均<0.001)。结论PSMB8通过激活MEK/ERK信号通路从而促进ccRCC细胞的增殖、迁移及侵袭。

磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶在急性肝衰竭小鼠模型及HBV相关慢加急性肝衰竭患者肝组织中的表达及意义

目的研究磷酸化后的p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)在氨基半乳糖(D-Gal N)或脂多糖(LPS)诱导的急性肝衰竭小鼠模型以及HBV相关慢加急性肝衰竭(ACLF)患者肝脏中的表达及其意义。方法采用D-Gal N/LPS诱导C57BL/6小鼠构建急性肝衰竭模型,分别在给药0、0.5、1、2、4、6、8 h设立实验组,每组4只,处死小鼠取肝组织标本进行HE染色观察肝组织结构的病理变化,分别运用蛋白免疫印迹技术半定量检测及免疫组化染色定位检测肝组织中p-p38MAPK的表达;同时对照研究pp38MAPK在HBV-ACLF、乙型肝炎肝硬化、慢性乙型肝炎(CHB)患者肝组织中的表达情况。组间比较采用独立样本t检验。结果蛋白免疫印迹法检测p-p38MAPK在肝衰竭小鼠肝组织匀浆中的表达随时间变化持续增高,给药6 h组半定量分析表达量显著高于正常对照组,差异具有统计学意义(t=-2.727,P=0.034)。免疫组化染色结果显示随存活时间的延长,小鼠肝组织炎症程度逐渐加重,炎症早期主要为窦细胞表达p-p38MAPK,随着肝组织损害加重,肝细胞表达p-p38MAPK渐多,坏死肝组织附近分布大量p-p38MAPK阳性肝细胞;正常人肝组织中p-p38MAPK的表达量很低,CHB患者肝组织内可见浸润淋巴细胞及肝细胞表达pp38MAPK,并且随病程进展呈增多趋势,与临床观察病变程度逐渐加重相一致。结论 D-Gal N/LPS诱导的小鼠急性肝衰竭模型中,p-p38MAPK表达随肝组织损害加重,表明其在肝衰竭病变过程中占重要地位;在HBV-ACLF患者致病过程中,p-p38MAPK信号通路可能发挥重要作用。

大鼠肾缺血再灌注损伤后p38丝裂原活化蛋白激酶的活化及氧自由基清除剂对其的影响

目的:观察肾缺血再灌注损伤后p38活化的情况,并探讨应用氧自由基清除剂tempol后对其的影响。方法:雄性SD大鼠随机分为假手术组(n=10)、缺血再灌注损伤组(IRI,n=45)和tempol预处理组(n=10)。IRI组采用右侧肾摘除左肾蒂夹闭50min后松开制备缺血再灌注模型,分别于再灌注0、5、10、15、30、45min及1、2h处死动物取肾组织,Western印迹法观察p38活化情况。Tempol处理组动物同样制备缺血再灌注模型,术前1h尾静脉注射tempol(100mg/kg),再灌注45min取肾组织;假手术组行右侧肾摘除但不夹闭左肾蒂,术后45min取肾组织。Western印迹法观察3组p38活化情况,分析肾组织丙二醛(MDA)含量,ELISA法检测肾组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)的含量。结果:大鼠肾组织磷酸化p38含量在再灌注早期(5min)开始升高,45min达到高峰,再灌注2h仍较高(P<0.05)。与假手术组相比,IRI和tempol预处理组磷酸化p38含量明显升高(0.103±0.008vs2.025±0.136vs0.833±0.191,P<0.05),且tempol预处理组低于IRI组(P<0.05)。3组间肾组织MDA、TNF-α、IL-1β的含量检测结果与磷酸化p38结果类似(P<0.05)。结论:氧自由基介导的p38磷酸化在缺血再灌注引起的大鼠肾脏炎症性损害中具有重要作用;应用tempol可以抑制p38磷酸化,防治缺血再灌注损伤。

丝裂原活化的蛋白激酶p38在健脾清化方改善大鼠慢性肾衰竭中的意义

目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)p38在健脾清化方改善模型大鼠慢性肾衰竭肾纤维化中的作用。方法:SPF级SD大鼠分为假手术组(n=10)、模型组(n=10)、健脾清化方组(n=10)、氯沙坦组(n=10)。健脾清化方组每日灌胃1次,每次3.9 g/200 g大鼠,连续60 d;氯沙坦组每日灌胃1次,每次3.3 g/200 g大鼠,连续60 d;假手术组和模型组等体积生理盐水灌胃。5/6肾切除大鼠模型(Platt法),采用生化法检测大鼠血清肌酐、尿素氮,蛋白质印迹法检测MAPK p38,HE染色观察肾脏组织病理学变化。结果:与模型组比较,健脾清化方、氯沙坦能显著降低血清肌酐水平(42.67±5.98 vs 60.90±9.54,40.90±5.07 vs 60.90±9.54,均P<0.01)及MAPK p38表达(0.555±0.004 vs 0.930±0.265,0.587±0.045 vs 0.930±0.265,均P<0.01),降低大鼠血清尿素氮水平(8.56±0.75 vs 8.62±0.62,7.97±0.86 vs 8.62±0.62,均P<0.05);模型组可见肾小球增生,系膜细胞轻度增生,间质炎性细胞浸润,健脾清化方组、氯沙坦组与模型组比较病变明显减轻,且健脾清化方组较氯沙坦组病变减轻更明显。结论:健脾清化方对Platt模型大鼠的肾功能和肾脏病理有一定的改善作用,该机制可能与健脾清化方对MAPK p38相关免疫炎症通路的抑制有关。

核心蛋白聚糖对高糖诱导心肌细胞丝裂原活化蛋白激酶信号通路及纤维化的影响

目的探讨核心蛋白聚糖(DCN)对高糖诱导的心肌细胞H9c2转化生长因子β(TGF-β)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)通路及纤维化的影响。方法将心肌细胞H9c2随机分为5组:正常对照组(使用含5.6mmol/L葡萄糖的无血清培养液培养)、高糖组(使用含33mmol/L葡萄糖的无血清培养液培养)、DCN低浓度组(使用含33mmol/L葡萄糖和0.25μg/mlDCN的无血清培养液培养)、DCN中浓度组(使用含33mmol/L葡萄糖和1.25μg/mlDCN的无血清培养液培养)、DCN高浓度组(用含33mmol/L葡萄糖和2.5μg/mlDCN的无血清培养液培养),MTT法检测心肌细胞H9c2存活率;平板克隆实验检测各组H9c2细胞克隆形成数;流式细胞术检测H9c2细胞周期;划痕实验检测各组H9c2细胞迁移能力;Westernblot法检测H9c2细胞结缔组织生长因子(CTGF)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、纤维连接蛋白(FN)、TGF-β、p38MAPK表达水平以及CREB磷酸化水平。结果高糖组细胞存活率、克隆形成数、S期、G_(2)/M期、MMP-9表达水平显著低于正常对照组,G_(0)/G_(1)期、划痕愈合率、CTGF、FN、TGF-β、p38MAPK及磷酸化CREB表达水平显著高于正常对照组(P<0.05);与高糖组比较,DCN低、中、高浓度组细胞存活率[(90.77±1.13)%、(95.35±2.05)%、(98.70±2.30)%vs(73.23±1.09)%]、克隆形成数[(75.39±8.24)个、(92.28±9.94)个、(112.22±12.42)个vs(54.57±6.19)个]依次上升(P<0.05);高糖组G_(0)/G_(1)期、划痕愈合率、CTGF、FN、TGF-β、p38MAPK及磷酸化CREB水平显著高于DCN低、中、高浓度组,S期、G_(2)/M期、MMP-9表达水平显著低于DCN低、中、高浓度组(P<0.05)。结论DCN能够促进高糖诱导下H9c2细胞增殖,抑制迁移和心肌纤维化,可能与通过阻滞TGF-β/p38MAPK/CREB通路有关。

p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路抑制剂在慢性间歇性缺氧大鼠软腭重构作用的研究

目的探讨p38MAPK抑制剂SB203580对慢性间歇性缺氧大鼠软腭重构的保护作用。方法总数60只雌性SD大鼠,被随机分为3组:对照组、缺氧组和缺氧+SB203580干预组。缺氧组和缺氧+SB203580干预组大鼠在自动控制间歇性缺氧试验箱饲养,均饲养35 d后,取大鼠软腭组织HE染色,免疫组化方法测定p38MAPK的表达,Western blot检测软腭组织p38MAPK和p-p38MAPK的表达。结果缺氧组软腭组织厚度增加最明显,缺氧+SB203580干预组软腭组织厚度增加程度减轻;缺氧组软腭组织中p38MAPK表达增高最明显,缺氧+SB203580干预组p-p38MAPK减低明显。结论 p38抑制剂SB203580通过减轻软腭组织中p-p38的表达,从而减轻慢性间歇性缺氧大鼠软腭的损伤。

复元胶囊对软骨细胞凋亡P38丝裂原活化蛋白激酶信号传导通路的影响

目的:观察复元胶囊含药血清对体外培养软骨细胞凋亡及P38丝裂原活化蛋白激酶信号通路(P38MAPK)的影响.方法:建立体外原代软骨细胞培养体系,制备复元胶囊含药血清,采用硝普钠(SNP)诱导软骨细胞凋亡,并用复元胶囊含药血清以及P38MAPK的特异阻断剂SB203580干预.透射电镜观察软骨细胞凋亡的超微结构,流式细胞仪检测软骨细胞凋亡率的变化,比色法观察Caspase-3活性变化,免疫印迹技术(Western Blot)检测磷酸化P38,P53蛋白表达水平.结果:①电镜下可观察到典型的凋亡细胞形态;②中药组软骨细胞凋亡率(29.18±0.81)%比模型组(39.73±0.55)%显著降低,中药+抑制剂组软骨细胞凋亡率(25.85±0.85)%也比抑制剂组(27.27±0.78)%低,差异均具有统计学意义(P<0.01,P<0.05);③中药组凋亡执行因子Caspase-3的活性为(1.69±0.31)μg/μL,低于模型组(2.78±0.19)μg/μL,中药+抑制剂组(0.95±0.06)μg/μL与抑制剂组(1.17±0.13)μg/μL比较,Caspase-3的活性也降低,差异均具有统计学意义(P<0.01,P<0.05);④中药组p-P38蛋白表达(0.84±0.06)与模型组(1.98±0.19)比较显著降低,差异有统计学意义(P<0.01);而中药+抑制剂组p-P38表达(0.32±0.03)与抑制剂组(0.36±0.04)比较无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05);⑤P53蛋白在中药组(2.78±0.34)表达明显降低,与模型组(5.50±0.54)比较,差异均有统计学意义(P<0.01);中药+抑制剂组(0.92±0.02)与抑制剂(1.41±0.09)组比较,P53蛋白表达也降低.结论:复元胶囊含药血清能通过抑制磷酸化P38表达、调节P38信号通路下游靶基因P53和凋亡执行因子Caspase-3而抑制SNP诱导的软骨细胞凋亡.

阿司匹林通过激活p38丝裂原活化蛋白激酶损伤视网膜色素上皮细胞的屏障功能

目的探讨阿司匹林对人视网膜色素上皮细胞屏障功能的影响和潜在分子机制。方法选取第3代人视网膜色素上皮细胞:(1)细胞培养液中添加阿司匹林,浓度分别为5 mmol/L、10 mmol/L、20 mmol/L,刺激24 h后,检测细胞活力。(2)细胞培养液中添加10 mmol/L的阿司匹林,刺激时间分别是30 min、60 min、120 min,提取细胞蛋白,检测p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)磷酸化水平。(3)细胞分为对照组(未刺激),阿司匹林组(10 mmol/L的阿司匹林刺激24 h),阿司匹林+SB2035080刺激组(联合组,1μmol/L的SB2035080预处理30 min,10 mmol/L的阿司匹林刺激24 h),检测细胞的跨膜电阻抗(TER)和单层细胞的通透性。结果5、10、20 mmol/L视网膜色素上皮细胞的活力与对照组比较,无统计学差异(P>0.05)。与对照组比较,阿司匹林刺激30 min、60 min、120 min的p38MAPK蛋白磷酸化程度明显增加(P<0.05)。与对照组比较,阿司匹林组上皮细胞的TER、claudin-7和ZO-1蛋白表达明显降低,细胞通透性明显增高(P<0.05)。与阿司匹林组比较,联合组TER、claudin-7和ZO-1蛋白表达明显升高,细胞通透性明显降低(P<0.05)。结论阿司匹林通过激活p38MAPK信号通路,抑制紧密连接蛋白claudin-7和ZO-1蛋白表达,从而损伤人视网膜色素上皮细胞的屏障功能。

吡格列酮对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞p38丝裂原活化蛋白激酶和转化生长因子β-1的影响

目的观察吡格列酮(PIO)对高糖(HG)培养的肾小球系膜细胞(MCs)p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和转化生长因子β-1(TGF-β1)表达的影响,探讨PIO肾保护作用及机制。方法体外培养MCs,取对数生长期的细胞以2×105/孔的密度接种于6孔细胞培养板,同步化后随机分为正常对照(NG)组、HG组、p38MAPK抑制剂(S)组及PIO(P)组。Western blot测定磷酸化p38MAPK(p-p38)和总p38MAPK(t-p38)蛋白含量,半定量RT-PCR测定细胞TGF-β1 mRNA表达情况。结果与NG组比较,HG组细胞内p-p38MAPK含量和TGF-β1mRNA表达增强(P<0.01);与HG组比较,p38MAPK抑制剂显著抑制HG刺激的细胞内p38MAPK活性和TGF-β1表达(P<0.05);与HG组比较,P组细胞内上述变化亦明显降低(P<0.05),与S组相似;p38MAPK活性和TGF-β1表达呈正相关(r=0.587,P<0.01)。结论 PIO可抑制肾小球系膜p38MAPK通路,降低TGF-β1表达,该作用可能与其肾脏保护部分有关。

丁基苯酞通过p38丝裂原活化蛋白激酶通路拮抗β淀粉样蛋白致皮质神经元凋亡

目的研究丁基苯酞是否可以通过p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路,抑制β淀粉样蛋白(Aβ)_(1 42)致原代培养皮质神经元凋亡。方法将原代培养的皮质神经元随机分为对照组、Aβ_(1-42)干预组(干预组)、Aβ_(1-42)+丁基苯酞0.1μmol/L组(A组)、Aβ_(1-42)+丁基苯酞1μmol/L组(B组)、Aβ_(1 42)+丁基苯酞10μmol/L组(C组)。Aβ_(1-42)作用24 h后,采用免疫荧光法染色观察细胞形态及凋亡比率,Western blot定量检测总p38、p-p38、caspase 3蛋白表达水平。结果免疫荧光双染显示,对照组神经元细胞体边缘光滑,突触长,细胞核完整;干预组细胞边缘塌陷,突触缩短,细胞核碎裂。与对照组比较,干预组、A、B、C组细胞凋亡率明显升高(P<0.05),干预组p p38和caspase-3蛋白表达明显增加(P<o.05);与干预组比较,A、B、C组caspase 3蛋白表达及B、C组p p38蛋白表达明显减少(P<0.05)。结论丁基苯酞可以通过p38蛋白磷酸化拮抗Aβ_(1-42)致原代培养皮质神经元凋亡。

p38丝裂原活化蛋白激酶和核因子κB在鼻黏膜炎症上皮细胞的表达意义

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogenactivated protein kinase,MAPK)和核因子κB(nuclear factorkappa B,NF-κB)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致炎鼻黏膜上皮细胞中的表达意义。方法采用蛋白印迹法检测LPS加入培养的鼻黏膜上皮细胞后活化的p38MAPK(磷酸化p38MAPK)表达的变化,及加入p38MAPK特异性阻断剂SB203580对其活性的抑制作用;应用凝胶电泳迁移率分析法检测SB203580对NF-κB DNA结合活性的抑制作用。结果随着LPS浓度的增加(0.01 mg/L,0.1mg/L),鼻黏膜上皮细胞中磷酸化p38MAPK的表达升高(0.2±0.059,0.243±0.059),但无统计学差异(t=0.908,P=0.424;t=0.116,P=0.99);当LPS的刺激浓度为l mg/L时表达最高(0.851±0.108)(t=9.484,P<0.01);浓度为10 mg/L时不再继续升高(0.83±0.122)(t=7.916,P<0.01)。在加入LPS之前30 min加入SB203580可抑制p38MAPK活性(0.248±0.055)(t=8.741,P<0.01)。LPS刺激鼻黏膜上皮细胞后NF-κB的DNA结合活性升高(2.116±0.037),可被SB203580部分抑制(1.323±0.038)(t=10.662,P<0.01)。结论 p38MAPK在LPS致炎的鼻黏膜上皮细胞中被激活,且可能部分调控NF-κB转录因子的活性。

吡格列酮对大鼠缺血再灌注心肌p38丝裂原活化蛋白激酶表达的影响

目的观察临床用于降糖治疗的噻唑烷二酮类药物吡格列酮对大鼠缺血再灌注损伤心肌的保护作用及对p38丝裂原活化蛋白激酶表达的影响。方法将24只健康雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、吡格列酮10mg/(kg·d)组(P组)、吡格列酮10mg/(kg·d)+过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)特异性阻断剂GW9662组(P+G组),每组6只;利用结扎左前降支的方法建立缺血再灌注损伤模型,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口原位末端标记法检测心肌细胞凋亡,Western blot方法检测心肌组织磷酸化p38(p-p38)蛋白的变化。结果与I/R组比较,Sham组、P组心肌细胞凋亡指数(AI)显著降低[(8.6±4.3)%、(21.4±8.8)%vs(40.1±12.3)%,P<0.05];P+G组心肌细胞AI显著高于P组[(37.0±10.5)%vs(21.4±8.8)%,P<0.05]。与I/R组比较,Sham组、P组p-p38蛋白表达下调,差异有统计学意义(P<0.05),与P组比较,P+G组p-p38蛋白表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论吡格列酮抑制缺血再灌注损伤诱导的心肌细胞凋亡,可能与下调p-p38表达有关,这2种作用是由PPARγ介导的。

法舒地尔对脂多糖诱导急性肺损伤大鼠肺组织p38丝裂原活化蛋白激酶激活的影响

目的观察法舒地尔对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织p38MAPK磷酸化激活的影响。方法 45只雄性SD大鼠随机分为三组:对照组(NS组,n=15)、脂多糖组(LPS组,n=15)及法舒地尔干预组(FAS组,n=15),LPS组和FAS组采用股静脉注射LPS(5 mg/kg)建立ALI模型,FAS组在LPS注射前30 min腹腔注射法舒地尔(10 mg/kg)。造模后3 h、6 h、12 h观察肺组织病理形态学改变,免疫组织化学及Western Blot法检测肺组织p-p38MAPK的表达。结果造模后LPS组各时间点肺组织p-p38MAPK的表达较NS组明显增加(P<0.05),与LPS组相比,FAS组各时间点p-p38MAPK的表达明显减少(P<0.05)。光镜显示LPS组病理形态学改变明显,而FAS组则明显减轻。结论法舒地尔可明显抑制脂多糖诱导的急性肺损伤大鼠肺组织p38MAPK的磷酸化激活,减轻脂多糖诱导的大鼠肺损伤程度。

抑制P38丝裂原活化蛋白激酶信号通路对急性重症胰腺炎大鼠大脑皮层诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的观察P38丝裂原活化蛋白激酶信号通路抑制剂SB203580对急性重症胰腺炎(SAP)大鼠大脑皮层诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达的影响。方法将45只SD大鼠按随机数字法分3组。模型组:将5%牛磺胆酸钠经胰胆管逆行注入胰腺制备;抑制剂组:造模后于大鼠尾静脉注射SB203580;对照组开腹后翻动胰腺数次立即缝合腹壁,尾静脉注射0.9%氯化钠注射液。造模成功后24h,检测血清淀粉酶;应用免疫组织化学、蛋白印迹法观察及检测各组神经元中iNOS和磷酸化P38表达的变化,并进行图像分析和统计学处理。结果模型组大鼠p-P38、iNOS阳性神经元显著增加及蛋白水平升高;给予注射SB203580后,抑制剂组较模型组均明显减轻(P<0.05)。结论 P38丝裂原活化蛋白激酶信号通路抑制剂SB203580具有调控SAP大鼠大脑皮层iNOS蛋白表达的作用,减轻神经元的变性丢失。

牛膝含药血清对骨关节炎软骨细胞P38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路的影响

目的:探讨牛膝含药血清对骨关节炎软骨细胞P38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路的影响。方法:将20只雄性新西兰大白兔随机分为空白对照组、模型组、P38阻断剂组及含药血清组,每组5只。分组后含药血清组大白兔以牛膝水煎剂灌胃(2.5 g.kg-1),其余各组以等量生理盐水灌胃,每天2次,共3 d。3 d后静脉采血,分别配成10%含药血清和10%空白血清的DMEM培养液保存备用。除空白对照组外,其余各组大白兔均采用Hulth法行兔膝骨关节炎造模,空白对照组行假手术。造模成功后处死实验兔分离兔膝关节软骨进行软骨细胞培养,对空白对照组、模型组的第3代软骨细胞以空白血清进行干预,P38阻断剂组以SB203580进行干预,含药血清组以牛膝含药血清进行干预。血清干预结束后,分别采用免疫荧光技术和Western Blot技术检测各组软骨细胞磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶及Ⅱ型胶原蛋白含量。结果:①免疫荧光检测结果。各组细胞均有磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶阳性表达,其中模型组呈强阳性表达,P38阻断剂组及含药血清组略弱,空白对照组最弱;各组细胞均有Ⅱ型胶原蛋白阳性表达,其中空白对照组呈强阳性表达,P38阻断剂组及含药血清组略弱,模型组最弱。②Western Blot检测结果。各组磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶含量比较,差异有统计学意义(F=3.872,P=0.038)。进一步两两比较,空白对照组(0.463±0.007)小于模型组(0.856±0.007)、P38阻断剂组(0.576±0.005)及含药血清组(0.508±0.004),差异有统计学意义(P=0.008;P=0.036;P=0.042);模型组大于P38阻断剂组和含药血清组(P=0.025;P=0.019);P38阻断剂组与含药血清组比较,差异无统计学意义(P=0.058)。各组细胞Ⅱ型胶原蛋白含量比较,差异有统计学意义(F=3.963,P=0.034)。进一步两两比较,空白对照组(0.884±0.007)大于模型组(0.434±0.007)、P38阻断剂组(0.616±0.003)及含药血清组(0.565±0.008),差异有统计学意义(P=0.007;P=0.031;P=0.038);模型组小于P38阻断剂组和含药血清组(P=0.035;P=0.028);P38阻断剂组与含药血清组比较,差异无统计学意义(P=0.066)。结论:牛膝含药血清能阻断骨关节炎软骨细胞P38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路,进而保护软骨细胞,其效果与SB203580相当。

ApoE基因敲除小鼠主动脉肿瘤坏死因子-α/p38丝裂原活化蛋白激酶/血清核因子-κB/视黄醇结合蛋白信号通路变化研究

目的通过观察Apo E基因敲除动脉粥样硬化小鼠主动脉肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinases,p38MAPK)/血清核因子-κB(Nuclear FactorκB,NF-κB)/视黄醇结合蛋白(Retinol Binding Protein-4,RBP4)信号通路变化,探讨RBP4在动脉粥样硬化的炎症反应过程的作用及发生机制。方法 10只Apo E-/-小鼠给予高脂饲料喂养8周,进行动脉粥样硬化模型复制,空白对照组选取具有相同遗传背景的同龄野生型C57BL/6J小鼠10只。饲养8周后,分离两组小鼠血清,分离主动脉,分别保存于4%多聚甲醛和-80℃冰箱。Elisa法检测小鼠血清TNF-α、RBP4水平变化,全自动生化分析仪检测血清中甘油三酯(Triglyceride,TG)、低密度脂蛋白(Low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白(High density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、血清总胆固醇(Total cholesterol,TC)水平,HE染色法观察两组小鼠主动脉组织形态学变化,蛋白质印迹法和RT-PCR法检测主动脉TNF-α、p38MAPK、NF-κB、RBP4蛋白和基因表达情况。结果血脂水平检测发现,与空白对照组相比,模型组小鼠血清中TG、TC、LDL-C水平显著升高(P<0.01),HDLC水平显著降低(P<0.01);HE染色观察发现,较空白对照组小鼠,模型组实验小鼠主动脉管腔内可见较大的AS斑块形成。蛋白质印迹法(western blot)结果显示,与空白对照组比较,模型组小鼠TNF-α[(0.93±0.05)mg·L^(-1),t=-9.079,P<0.001)]、NF-κB[(0.82±0.03)mg·L^(-1),t=-9.718,P<0.001]水平明显升高,p38MAPK、RBP4水平显著升高(P<0.01)。PCR结果显示,模型组小鼠TNF-α(0.78±0.03 mg·L^(-1))和RBP4(0.39±0.02 mg·L^(-1))水平较空白对照组明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论 TNF-α/p38MAPK/NF-κB/RBP4信号通路可能参与了动脉粥样硬化的形成及炎症反应过程。

幽门螺杆菌依赖丝裂原活化蛋白激酶信号通路诱导SGC7901细胞表达分泌白细胞介素-8

背景:已知前炎症细胞因子白细胞介素(IL)鄄8在慢性活动性胃炎、消化性溃疡等幽门螺杆菌(H.pylori)感染相关疾病的发生、发展中起重要作用,但H.pylori诱导胃上皮细胞表达、分泌IL鄄8的分子机制尚不明确。目的:通过体外实验了解H.pylori对人胃癌细胞株SGC7901表达、分泌IL鄄8的影响,探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在H.pylori诱导SGC7901细胞IL鄄8mRNA表达和IL鄄8蛋白分泌中的作用。方法:SGC7901细胞经p38MAPK特异性抑制剂SB203580预作用2h,再加入H.pylori标准菌株CCUG17874共培养。采用逆转录聚合酶链反应(RT鄄PCR)检测IL鄄8mRNA的表达,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测IL鄄8蛋白的分泌,观察SB203580对H.pylori诱导SGC7901细胞表达、分泌IL鄄8的影响。结果:H.pylori能诱导SGC7901细胞表达、分泌IL鄄8。SB203580能以剂量依赖的方式抑制H.pylori诱导的SGC7901细胞IL鄄8蛋白分泌,经终浓度为0.3、1、3和10μmol/L的SB203580预作用2h,SGC7901细胞的IL鄄8蛋白分泌与未经SB203580预作用组相比分别减少了26%、51%、64%和73%(P<0.05);SB203580也能使H.pylori诱导的IL鄄8mRNA表达显著减弱。结论:H.pylori能诱导胃上皮细胞表达、分泌IL鄄8,该作用在一定程度上依赖于MAPK信号通路。

p38丝裂原活化蛋白激酶在大鼠视网膜缺血再灌注损伤后的磷酸化及其意义

目的:观探讨大鼠视网膜缺血再灌注损伤后p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)的磷酸化及其意义.方法:采用升高眼内压的方法,制作实验性视网膜缺血再灌注大鼠模型.将30只Wistar大鼠随机分为正常组(n=6)和缺血再灌注组(n=24),其中缺血再灌注组又分为再灌注后2,12,24,72h等4个时间段(每时间段6只).应用Western Blot法检测视网膜组织中p38 MAPK及磷酸化p38 MAPK(p-p38MAPK)蛋白的表达变化.结果:p38 MAPK在缺血再灌注组各时间点的视网膜组织内的表达保持相对恒定,与正常对照组相比无统计学上的变化(P>0.05).p-p38 MAPK的表达水平在缺血再灌注组12h时即有明显升高,24h时达到高峰,72h时仍维持较高的表达水平,与正常对照组相比有统计学著差异(P<0.01).结论:p38 MAPK信号通路的激活可能与缺血再灌注所造成的视网膜损伤有密切关系.