8型荚膜多糖的过量产生能增强金黄色葡萄球菌的毒力

绝大多数的金黄色葡萄球菌(90%)能产生荚膜多糖,现已知有11个血清型。1型和2型荚膜多糖的产量较多,具有明显的抗吞噬作用。但这两种血清型的金黄色葡萄球菌在临床标本中很少见,最常见的是能产生8型荚膜多糖(CPS)和5型荚膜多糖(CPS)的金黄色葡萄球菌(分离率分别是～53%和～22%)。由于CP5和CP8的产生很少,故对其毒力所知甚微。

金黄色葡萄球菌8型荚膜多糖的提取纯化及其反应原性

为获取金黄色葡萄球菌8型荚膜多糖（CP8）,采用高压破碎菌体释放荚膜多糖,酶处理去除核酸和蛋白,再通过离子交换层析进一步纯化得到CP8荚膜多糖,并对荚膜多糖的纯度和反应原性进行了检测。结果显示,得到的荚膜多糖纯度为63.83%,净产量为6.23 mg/L。用免疫琼脂双扩散试验检测,结果纯化的CP8仅与CP8抗血清反应,反应原性在pH2.5~11.5范围内稳定。表明,获得的CP8荚膜多糖具有较高的纯度和良好的反应原性,可用于制备载体蛋白-荚膜多糖完全抗原,研发有效的预防金黄色葡萄球菌疫苗。

双光径免疫浊度分析仪测定8型肺炎球菌荚膜多糖

[目的]对用双光径免疫浊度分析仪（IMMAGE）定量测定8型肺炎球菌荚膜多糖进行方法学评估，并讨论其检测实用性。[方法]系统研究IMMAGE测定8型肺炎球菌多糖的精密度、灵敏度、回收率、标准曲线的稳定性及干扰因素。[结果]IMMAGE检测8型肺炎多糖的总CV值为2．40％-4．96％，分析灵敏度为0．2μg／mL，稀释样本的平均回收率为99．25％，标准曲线至少可稳定5d，加入不同浓度的19F、5、17F、33F、10A五个血清型的肺炎球菌多糖对检测无显著影响（P〉0．05）。[结论]IMMAGE自动化程度高，操作简便，并且检测快速，结果准确，有较高的精密度。对定量测定肺炎8型多糖有较强的特异性。

8型肺炎球菌荚膜多糖分子大小对结合效果及结合物抗原性的影响

目的评价8型肺炎球菌荚膜多糖(capsular polysaccharide of Streptococcus pneumoniae type 8,CPS8)分子大小对多糖蛋白结合物物理化学(理化)性质的影响,并对结合效果最优的多糖蛋白结合物进行抗原一致性评价。方法采用高压均质法制备不同分子大小的CPS8;采用1-氰基-4-二甲氨基吡啶四氟硼酸酯活化法,制备以白喉类毒素无毒突变体CRM197为载体的CPS8蛋白结合物CPS8-CRM197,并检定其理化性质;采用核磁共振氢谱及核磁共振碳谱分析降解前后多糖糖链结构的变化情况,同时采用抑制ELISA评价CPS8-CRM197结合物的抗原一致性。结果高压均质法制备的CPS8相对分子质量在69000~268000;CPS8相对分子质量>200000时会过度交联,<100000时结合效果较差;CPS8在相对分子质量100000~200000之间的CPS8-CRM197结合物游离多糖含量均<10%,游离蛋白含量均<5%。核磁共振氢谱及核磁共振碳谱结果表明,降解前后多糖糖链结构未发生改变,特异基团得到完整的保留;抑制ELISA表明不同CPS8-CRM197结合物对8型肺炎球菌抗血清抑制的半数效应浓度在同一数量级内,分别为0.005、0.003、0.005μg/ml,抗原性具有一致性。结论多糖结合疫苗制备工艺中,应将CPS8分子大小控制在相对分子质量100000~200000之间,该范围内多糖所制备的多糖蛋白结合物理化性质较优、抗原一致性较好。

金黄色葡萄球菌荚膜多糖型CP8菌小鼠全身感染模型的建立及评价

目的建立金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)荚膜多糖型CP8菌小鼠全身感染模型,并对模型进行免疫攻毒保护性评价。方法金葡菌荚膜多糖型CP8国际标准株49525经37℃培养24 h,用PBS缓冲液稀释成不同浓度菌液,分组经腹腔注射感染BALB/c小鼠,观察小鼠发病症状,统计生存率及体重变化,确定每只小鼠的致死剂量及亚致死剂量;采集不同感染时间的小鼠血液及心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏,进行细菌定植量检测及主要脏器病理学检查。用CP8多糖-蛋白偶联物(实验组)及氢氧化铝佐剂(对照组)对建立的小鼠模型进行3次免疫攻毒保护性实验,统计小鼠存活率。结果经腹腔感染途径建立的小鼠模型,每只致死剂量为3.0×10^9 CFU,亚致死剂量为1.5×10^9 CFU。感染发病小鼠表现为翘毛弓背、耸肩及行动迟缓,生存率及体重随感染剂量增加明显下降,血液及心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏均有细菌定植,心脏、肾脏、肝脏主要脏器中可见明显细胞坏死和炎性细胞浸润。与对照组比较,实验组小鼠3次攻毒存活率差异均有统计学意义(P均<0.01),对小鼠的保护率分别为55.6%、50.0%和57.1%。结论成功建立金葡菌荚膜多糖型CP8菌小鼠全身感染模型,并可用于疫苗保护性评价,为进一步研究多抗原组分疫苗的有效性和安全性奠定了实验基础。