8-脱氧鸟苷和8-氧化鸟苷与老年肌少症的相关性

目的探讨老年人群8-脱氧鸟苷(oxo-dGsn)、8-氧化鸟苷(oxo-Gsn)和炎症指标水平及其与肌少症的相关性。方法纳入老年肌少症患者100例为肌少症组,另选取同期在医院健康体检正常的老年人100例为对照组;收集两组临床资料,检测两组血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞、中性粒细胞水平;采用液相色谱仪测量两组8-oxo-dGsn、8-oxo-Gsn水平;比较两组握力、骨骼肌肌量、步行6 m所需时间等资料;应用Pearson线性模型分析8-oxo-dGsn、8-oxo-Gsn水平与肌少症组骨骼肌量的相关性,采用Logistic回归模型分析影响老年肌少症的独立相关因素。结果肌少症组握力、骨骼肌肌量低于对照组,步行6 m所需时间高于对照组;肌少症组8-oxo-dGsn、8-oxo-Gsn水平高于对照组,hs-CRP、IL-6、TNF-α水平高于对照组,差异具有统计学意义(均P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,高8-oxo-dGsn水平、高8-oxo-Gsn水平及高Hs-CRP水平、高IL-6水平、高TNF-α水平是老年肌少症的独立相关因素(均P<0.05);Pearson线性分析显示,8-oxo-dGsn和8-oxo-Gsn水平与肌少症患者骨骼肌量呈负相关(r=-0.707、-0.561;均P<0.05)。结论老年肌少症患者体内存在高水平的氧化应激和炎症反应状态,特别是高水平8-oxo-dGsn、8-oxo-Gsn可能与老年肌少症的发生和发展具有独立相关关系。

LC-MS/MS定量检测小鼠尿液RNA氧化标志物8-oxoGsn

目的建立快速高效的液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)用于测定小鼠尿液中RNA氧化标志物8-氧化鸟苷(8-oxoGsn)水平。方法小鼠尿液37℃孵育离心后,用70%甲醇溶液(含30%10 mmol/L醋酸铵)1∶10稀释尿液上清,加入同位素内标[13C,15N2]8-oxoGsn,用Agilent ZORBOX SB-Aq色谱柱(100 mm×3 mm,1.8μm)分离,以含0.1%甲酸的10 mmol/L醋酸铵水溶液及甲醇溶液为流动相梯度洗脱,柱温35℃,流速0.3 mL/min,进样量5μL,电喷雾离子源正离子模式,多反应监测。结果8-oxoGsn响应和水平的线性关系良好,R^(2)为0.996,定量检测限为0.25 ng/mL,加标回收率86.21%~112.56%,基质效应为-5.01%,日内和日间变异系数分别为3.38%~7.17%、2.74%~9.52%,满足生物样品的分析要求;小鼠尿液检测结果显示C57小鼠对乙酰氨基酚(APAP)处理组8-oxoGsn水平明显高于C57对照组(P<0.01);乙型肝炎病毒转基因(HBV-Tg)小鼠APAP处理组8-oxoGsn水平明显高于HBV-Tg小鼠对照组(P<0.001)。结论建立的LC-MS/MS灵敏度高,准确可靠,适用于小鼠尿液中8-oxoGsn水平的测定。

8-氧化鸟苷对慢性肾脏病患者肾功能的评估价值

目的探讨来源于DNA的氧化产物8氧化脱氧鸟苷（8-oxo-dGsn）和来源于RNA的8氧化鸟苷（8-oxo-Gsn）与慢性肾脏病（CKD）的关系。方法2015年1月至2016年12月就诊于北京医院肾内科的146例CKD患者，年龄21～88（56.43±16.79）岁，其中男70例，占47.95%，CKD 1～5期分别为30、30、31、30、25例，收集空腹血及晨尿。应用同位素稀释高效液相-串联质谱（ID-LC-MS/MS）定量测定所有患者血浆和晨尿8-oxo-dGsn、8-oxo-Gsn水平。结果CKD 1～5期患者尿8-oxo-Gsn/Cr分别为（3.07±1.07）μmol/mol、（3.42±1.34）μmol/mol、（3.72±1.47）μmol/mol、（3.90±1.93）μmol/mol、（3.75±2.26）μmol/mol，其中CKD 4期患者尿8-oxo-Gsn含量高于其他4期（均P〈0.05）；CKD 1～5期患者血/尿8-oxo-Gsn分别为0.02±0.02、0.03±0.02、0.06±0.04、0.10±0.05、0.34±0.03，CKD 4～5期患者明显升高，以5期升高更明显（均P〈0.05）。8-oxo-Gsn与肾功能呈现较好的相关性：血8-oxo-Gsn与血肌酐相关系数r＝0.629（P〈0.001），尿/血8-oxo-Gsn与eGFR相关系数r＝0.799（P〈0.001），血/尿8-oxo-Gsn与血/尿肌酐相关系数r＝0.888（P〈0.001）。随着年龄增长，CKD患者RNA氧化增加，≥60岁患者尿8-oxo-Gsn明显升高（P〈0.05）。多重线性回归分析结果显示，8-oxo-Gsn仅与血肌酐有相关性（β＝0.656，t＝8.275，P〈0.001）。结论RNA氧化与肾脏疾病的发生发展密切相关，随着疾病进展，RNA氧化加重。血/尿8-oxo-Gsn的显著升高对终末期肾脏病有评价意义。

增龄人群尿液中8-氧化鸟苷与健康评估指标的相关性分析

目的探究增龄人群尿液中8-氧化鸟苷(8-oxoGsn)与人体成分肌肉质量、肌力、晚期糖基化终末产物(AGEs)、微量元素及重金属等健康评估指标的相关性。方法采取横断面研究方法,招募北京医院体检中心25~93岁健康体检者,以60岁为界划分为青中年组与老年组,质谱法检测尿液中8-oxoGsn含量并用尿肌酐进行校正,人体成分分析仪(BIA)检测肌肉质量,由专业人员进行握力、6 m步速、5次起坐时间测定,皮肤自发荧光检测皮肤AGEs,手掌部位皮肤分光光度法检测微量元素重金属,常规检测空腹血糖、糖化血红蛋白、高密度脂蛋白等血生化指标。结果共纳入研究对象106例,青中年组68例,老年组38例。老年组高血压人数占比[14(36.8%)比7(10.3%)]、收缩压值[130(120,140)mmHg比120(110,126)mmHg]、空腹血糖[5.7(5.2,5.9)mmol/L比5.2(4.9,5.5)mmol/L]、糖化血红蛋白[6.0(5.7,6.2)%比5.7(5.4,5.9)%]、8-oxoGsn/肌酐[1.9(1.4,2.6)比1.3(1.0,1.6)]、AGEs(2.44±0.46比2.01±0.29)、5次起坐时间[7.8(6.9,9.8)s比6.0(5.0,6.8)s]、镁(31.4±7.2比27.7±6.4)、汞(0.013±0.003比0.008±0.003)、银[0.011(0.010,0.012)比0.010(0.009,0.011)]高于青中年组,握力[28.0(22.0,35.1)kg比36.6(28.5,49.1)kg]、去脂体重[44.9(37.5,51.1)kg比53.3(42.4,58.5)kg]、躯干肌肉量[21.0(17.5,23.9)kg比25(19.8,27.4)kg]、四肢肌肉量[20.9(17.6,23.9)kg比24.9(19.8,27.3)kg]、钙[273.3(219.1,480.0)比457.8(428.5,489.1)]、钴[0.029(0.027,0.031)比0.031(0.028,0.034)]、硒[1.44(0.93,1.71)比1.61(1.53,1.68)]、镍[3.5(3.3,4.0)×10^(-3)比3.8(3.6,4.1)×10^(-3)]低于青中年组(均P<0.05);尿液中8-oxoGsn/肌酐与年龄、5次起坐时间、AGEs、空腹血糖、汞、铝含量呈正相关(r_(s)=0.443、0.292、0.357、0.205、0.316、0.214,均P<0.05),与躯干肌肉量、四肢总肌肉量、去脂体重、握力、硅、锰含量呈负相关(r_(s)=-0.334、-0.333、-0.332、-0.366、-0.246、-0.234,均P<0.05)。结论尿液中8-oxoGsn/肌酐水平升高与肌肉质量减少、躯体功能较差、AGEs蓄积、微量元素下降、重金属含量升高相关,8-oxoGsn可能是潜在的敏感的健康评估指标。

重症肝病合并真菌感染尿RNA氧化产物8-氧化鸟苷水平及临床意义

目的探究重症肝病合并医院真菌感染患者尿RNA氧化产物8-氧化鸟苷(8-oxoGsn)水平变化及意义。方法选择山东第一医科大学附属济南人民医院67例重症肝病患者,根据医院感染情况分为真菌感染组(n=7)、细菌感染组(n=24)、无感染组(n=36),检测血清感染相关指标[白细胞介素-6(IL-6)、降钙素原(PCT)、C-反应蛋白(CRP)、白细胞计数(WBC)]和尿8-oxoGsn水平。结果67例重症肝病患者发生医院感染31例,共分离出62株病原菌,革兰阳性菌24株,占38.71%,革兰阴性菌31株,占50.00%,真菌7株,占11.29%。细菌感染组、真菌感染组IL-6、PCT、CRP、WBC水平高于无感染组(P<0.05),细菌感染组PCT水平高于真菌感染组(P<0.05);尿8-oxoGsn水平比较为细菌感染组>真菌感染组>无感染组(P<0.05);重症肝病真菌感染患者尿8-oxoGsn水平与IL-6、PCT、CRP、WBC水平正相关(r=0.769、0.845、0.963、0.756,P<0.05);尿8-oxoGsn判断重症肝病是否合并医院感染、鉴别真菌或细菌感染的曲线下面积为0.978、0.780(P<0.05),灵敏度、特异性为87.00%和97.22%,100.00%和58.33%。结论重症肝病合并医院真菌感染患者尿8-oxoGsn与IL-6、PCT、CRP、WBC水平正相关,可用于诊断是否合并医院感染,并鉴别感染病原菌类别。

ID-LC-MS/MS评估糖尿病大鼠DNA和RNA氧化损伤

目的评估高血糖对DNA和RNA氧化损伤的影响。方法以链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠为模型,运用放射性核素稀释高效液相-串联质谱(ID-LC-MS/MS)法检测大鼠肾性、心性、肝性、肺、脑、睾丸、附睾、血浆和尿中的核酸氧化标志物8-氧化脱氧鸟苷(8-oxo-d Gsn)和8-氧化鸟苷(8-oxo-Gsn)的含量,并进行比较分析。结果虽然不同脏器DNA中8-oxo-d Gsn/106d Gsn和RNA中8-oxo-Gsn/10~6Gsn的基础水平不一致,但是模型组SD大鼠不同脏器中8-oxo-Gsn/10~6Gsn和8-oxo-d Gsn/10~6d Gsn的水平均高于对照组,6月组糖尿病大鼠肾脏、肺脏和睾丸中8-oxo-d Gsn/10~6d Gsn的水平高于对照组相应脏器的水平(P<0.05);3月组糖尿病大鼠肾脏、心脏和睾丸中8-oxo-Gsn/10~6Gsn的水平高于对照组相应脏器的水平(P<0.05);除了脑和肺脏,6月组糖尿病大鼠各脏器中8-oxo-Gsn/10~6Gsn的水平均高于其对照组(P<0.05);糖尿病大鼠血浆8-oxo-d Gsn和8-oxo-Gsn浓度明显高于其同龄对照大鼠,且随着高糖血症的持续而增加。尿液检测结果的趋势与血浆中的检测结果一致,RNA氧化代谢产物8-oxo-Gsn均高于DNA的氧化代谢产物8-oxo-d Gsn。结论高血糖引起的氧化应激增强可以造成多器官DNA和RNA氧化损伤增加,DNA和RNA氧化损伤随着高糖血症的持续而增加;RNA氧化损伤水平高于DNA氧化损伤,其标志物尿液8-oxo-Gsn可以作为评估糖尿病氧化应激状态的良好指标。

尿液8-oxo-Gsn与丙型肝炎病毒感染引起肝损害的关系研究

目的探讨尿液中RNA氧化产物8-氧化鸟苷(8-oxo-Gsn)与丙型肝炎病毒(HCV)感染引起肝损害的关系及临床意义。方法选取45例慢性丙型肝炎(CHC)患者肝穿刺活检前的空腹中段晨尿,HCV携带者50例及50例体检健康者(对照组)的空腹中段晨尿,采用同位素稀释高效液相-串联质谱(ID-LC-MS/MS)检测尿RNA氧化产物8-oxo-Gsn,并用肌酐值(creatinine)校正。分析尿8-oxo-Gsn与CHC炎症程度和纤维化程度之间的相关性。结果CHC组尿8-oxo-Gsn水平显著高于HCV携带组(P<0.01);HCV携带组患者尿8-oxo-Gsn水平显著高于对照组(P<0.01);肝脏炎症程度高的患者(A2~A3)尿8-oxo-Gsn水平显著高于肝脏炎症程度低的患者(A0~A1),差异有统计学意义(P<0.01);纤维化程度高的患者(F3~F4)尿8-oxo-Gsn水平与纤维化程度低(F0~F2)的比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论尿中RNA氧化损伤标志物8-oxo-Gsn对评估丙型肝炎肝脏损害程度有较高的参考价值。

AD患者血清核酸氧化损伤产物与抗氧化物质相关性分析

目的探讨阿尔茨海默病(AD)患者血清DNA氧化损伤产物8-氧化脱氧鸟苷(8-oxo-dGsn)和RNA氧化损伤产物8-氧化鸟苷(8-oxo-Gsn)与抗氧化物质硒、维生素(Vit)A和Vit E的相关性。方法选取55例AD患者(AD组)和64名体检健康者(正常对照组),采用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测血清8-oxo-dGsn、8-oxo-Gsn、Vit A和Vit E水平,采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)检测血清硒水平。将所有对象按年龄分为<60岁、60~69岁、70~79岁和≥80岁4个年龄段。采用Spearman相关分析评估各项指标之间的相关性。结果AD组血清硒、Vit A水平均显著低于正常对照组(P<0.01),血清8-oxo-dGsn水平显著高于正常对照组(P<0.01);血清Vit E及8-oxo-dGsn水平2个组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。正常对照组各年龄段血清硒水平均高于AD组同年龄段(P<0.01),<60岁和60~69岁者血清Vit A水平均高于AD组同年龄段(P<0.01),血清8-oxo-dGsn水平则低于AD组同年龄段(P<0.05),但70~79岁者与≥80岁者血清Vit A、8-oxo-dGsn水平差异均无统计学意义(P>0.05)。正常对照组各年龄段血清VitE、8-oxo-Gsn水平与AD组同年龄段比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。血清8-oxo-dGsn、8-oxo-Gsn水平与年龄呈正相关(r值分别为0.443、0.782,P<0.01),血清硒水平与血清Vit A、Vit E水平呈正相关(r值分别为0.330、0.401,P<0.01),血清8-oxo-dGsn水平与血清8-oxo-Gsn水平呈正相关(r=0.644,P<0.01);其他指标两两之间均无相关性(P>0.05)。结论AD患者DNA氧化损伤产物8-oxo-dGsn水平升高,抗氧化物质硒降低。

幽门螺杆菌感染致胃黏膜及尿中RNA损伤水平测定

目的检测幽门螺杆菌(Hp)感染患者胃窦部黏膜及尿液中8-氧化脱氧鸟苷及8-氧化鸟苷水平,探讨Hp感染与DNA及RNA氧化损伤的相关性,并比较不同取材部位水平的差异。方法 Hp阳性组85例,Hp阴性组31例。分别留取尿液标本以层析分析法,同时两组中各30例取胃窦部黏膜以免疫组化法检测8-氧化脱氧鸟苷及8-氧化鸟苷。结果胃窦部黏膜检测结果显示Hp阳性组8氧化鸟苷高于Hp阴性组,差异有统计学意义(P<0.05),8-氧化脱氧鸟苷高于Hp阴性组,差异无统计学意义(P>0.05);尿液检测,Hp阳性组8-氧化鸟苷及8-氧化脱氧鸟苷水平均高于Hp阴性组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论尿液检测与胃黏膜组织检测结果趋势一致,Hp感染后DNA及RNA氧化损伤水平高于Hp阴性对照组,且尿液检测更敏感。RNA氧化产物8-氧化鸟苷可能是Hp感染致病的一个较敏感的指标。