应用MABA法与试管法测定蛇床子素和8-甲氧基补骨脂素体外抗结核活性的研究

为筛选有开发价值的抗结核中草药,本研究通过MABA(Microdilution MABA Assay)与试管法分别测定蛇床子素和8-甲氧基补骨脂素对结核分支杆菌H37Rv(ATCC27294)和H37Ra(ATCC25177)的体外抗菌活性,即最低抑菌浓度(MIC),同时比较两种方法的检测结果;并以MTT法研究蛇床子素和8-甲氧基补骨脂素对Balb/C小鼠的脾细胞和肝细胞的细胞毒性试验。蛇床子素和8-甲氧基补骨脂素对这两种结核菌的最低抑菌浓度分别均为32μg/mL和128μg/mL,并且对BALB/c小鼠的脾细胞和肝细胞均无毒性。MABA法与试管法相比较,完全符合率为90%(9/11),具有较好的一致性。本研究为蛇床子素和8-甲氧基补骨脂素作为抗结核药物的开发及它们的抗菌机制研究奠定了基础。

应用Alamar Blue法与试管法测定α-倒捻子素和8-甲氧基补骨脂素体外抗结核杆菌活性

选取传统中药提取单体化合物α-倒捻子素和8-甲氧基补骨脂素,通过2种药物敏感性实验方法MABA(Microdilution Alamar Blue Assay)分析与试管法分别测定了两种化合物对结核分枝杆菌H37Rv(ATCC27294)和H37Ra(ATCC25177)的体外抗菌活性,同时还测定了9种阳性抗结核药物对这两种结核菌的最低抑菌浓度(MIC),比较2种方法的检测结果。结果表明:α-倒捻子素对结核分枝杆菌H37Rv(ATCC27294)和H37Ra(ATCC25177)的最低抑菌浓度均为6.25μg/mL,而8-甲氧基补骨脂素对结核分枝杆菌H37Rv(ATCC27294)和H37Ra(ATCC25177)的最低抑菌浓度均为128μg/mL。Alamar B1ue法与试管法相比较,完全符合率是90%(9/11),具有较好的一致性。本研究结果表明Mamar B1ue法是一种快速、简便测定药物对结核分枝杆菌MIC的方法。本研究为α-倒捻子素和8-甲氧基补骨脂素的进一步开发利用和抗分枝杆菌机制研究打下了基础。

不同方法制备8-甲氧基补骨脂素柔性纳米脂质体的皮肤靶向性研究

目的研究不同方法制备的8-甲氧基补骨脂素(MOP)柔性纳米脂质体的皮肤靶向性。方法分别采用逆相蒸发法、乙醚注入法、薄膜法、薄膜-超声法等方法制备3H-MOP柔性纳米脂质体,根据脂质体包封率、平均粒径和Zeta电位评价脂质体质量。取上述4种方法制得的3H-MOP柔性纳米脂质体涂抹于SD大鼠皮肤,分别在1,2,4 h后用液体闪烁仪测定3H-MOP的皮肤滞留量和血药浓度。结果薄膜-超声法包封率高,平均粒径适中,Zeta电位负值较高,皮肤的靶向性较好。结论薄膜-超声法制备补骨脂素柔性纳米脂质体质量较好,皮肤靶向性强。

8-甲氧基补骨脂素柔性纳米脂质体的制备工艺

目的:优选8-甲氧基补骨脂素(8-methoxypsoralan,8-MOP)柔性纳米脂质体的制备工艺条件。方法:通过正交设计优选该脂质体的处方及制备工艺,用扫描电镜观测其外观及分布,采用高速离心法处理样品,测定其包封率。结果:所得脂质体外观圆整,分布较均匀,平均包封率(89.7±1.2)%(n=5)。结论:该脂质体制备工艺可行,具有开发价值。

8-甲氧基补骨脂素柔性纳米脂质体凝胶对白癜风豚鼠模型的治疗作用

目的:观察8-甲氧基补骨脂素(MOP)柔性纳米脂质体凝胶对白癜风豚鼠模型的治疗作用。方法:采用化学脱色法制备白癜风豚鼠动物模型,豚鼠随机分成4组,正常对照组、模型对照组、MOP脂质体凝胶组、MOP酊剂组,每组10只。以表皮毛囊黑色素生成、血清胆碱酯酶、酪氨酸酶及丙二醛含量为考察指标。结果:总有效率正常对照组100%,MOP脂质体凝胶组90%,MOP酊剂组70%,均高于模型对照组(P<0.01,P<0.05)。MOP脂质体凝胶比MOP酊剂对白癜风动物的黑色素生成、胆碱酯酶和酪氨酸酶的活性影响更显著。结论:MOP脂质体凝胶比MOP酊剂对白癜风豚鼠模型有更好的治疗作用。

高效液相色谱法测定化妆品中8-甲氧基补骨脂素

[目的]建立测定化妆品中8-甲氧基补骨脂素含量的方法。[方法]采用高效液相色谱法,选用ZORBAX C18柱,流动相为35%甲醇∶乙腈=12∶88,二极管阵列检测器,波长296 nm。[结果]在0.035-0.620μg范围内,线性关系良好(r=0.999 6),平均回收率为81.5%,RSD为4.79%。[结论]本法操作简便,结果准确,适用于测定化妆品中8-甲氧基补骨脂素的含量。

8-甲氧基补骨脂素柔性纳米脂质体不同研制方法的比较

目的:筛选制备8-甲氧基补骨脂素(MOP)柔性纳米脂质体的合适方法。方法:根据正交实验设计及预试验,确定基本配方大豆磷脂∶胆固醇∶MOP∶胆酸钠=20∶10∶3∶10。分别采用逆相蒸发法、乙醚注入法、薄膜法、薄膜-超声法等方法制备MOP柔性纳米脂质体,比较脂质体包封率、平均粒径和Zeta电位。结果:逆相蒸发法制备的脂质体包封率低,粒径大;乙醚注入法包封率低且平均粒径小;薄膜法包封率高,粒径大;薄膜-超声法包封率高,平均粒径适中,且Zeta电位负值较高;超声15min获得的脂质体包封率较高,平均粒径大小合适,Zeta电位的负值也比较高。结论:采用薄膜-超声法,超声时间15min是制备补骨脂素柔性纳米脂质体比较适宜的方法。

高效液相色谱法测定小鼠血浆中8-甲氧基补骨脂素及其药代动力学研究

目的:建立小鼠血浆中8-甲氧基补骨脂素(8-methoxypsoralen,8-MOP)的高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)测定方法,并应用于8-MOP在小鼠体内的药代动力学研究。方法:以5-甲氧基补骨脂素为内标,Waters Symmetry~C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm)分离,等度洗脱,流动相为甲醇-水(体积比55∶45),流速为1.0 m L/min,荧光检测器检测,激发波长与发射波长分别为334 nm和484 nm,内标法定量。60只雄性健康的ICR小鼠随机分为12组,对照组以1%(质量分数)吐温80灌胃给药,其余11组小鼠灌胃给药8-MOP(40 mg/kg),HPLC法测定给药后不同时间点小鼠血浆中8-MOP的浓度,DAS 2.0软件计算药代动力学参数。结果:小鼠血浆中8-MOP在0.05~10.00 mg/L范围内线性良好(r=0.999 3),检出限为0.015 mg/L;高、中、低3种浓度8-MOP的加标回收率为92.5%~100.6%;日内精密度为3.3%~8.2%,日间精密度为3.4%~6.7%;提取回收率为90.9%~92.0%;小鼠血浆样品在-80℃下至少可以保存15 d。小鼠灌胃给药后5 min即可在小鼠血浆中检出8-MOP(1.4 mg/L),给药2 h血药浓度达到最高峰值,且给药后24 h仍可检出(1.1 mg/L)。t_(1/2)为(39.21±3.65)h,C_(max)为(2.31±0.02)mg/L,t_(max)为(2.00±0.00)h,AUC_(0-t)为(33.34±1.19)(h·mg)/L。结论:该方法准确、简便,适用于小鼠体内8-MOP药代动力学研究。

RP-HPLC-UV法同时测定毛大丁草中大丁苷和8-甲氧基补骨脂素的含量

目的建立HPLC方法同时测定毛大丁草(Gerbera piloselloides(L.) Cass.)中大丁苷和8-甲氧基补骨脂素的含量。方法采用WondaCract ODS-2色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),使用乙腈(A)-水(B)溶液为流动相,进行梯度洗脱,流速:1.0 mL·min^(-1),检测波长:282 nm,柱温:25℃。结果大丁苷和8-甲氧基补骨脂素的标准曲线线性关系良好,相关系数r分别为0.999 3和0.999 4。实验的精密度、重复性和稳定性均能达到要求,大丁苷的平均回收率为99.30%、8-甲氧基补骨脂素的平均回收率为99.40%。以上2种成分都可以与基线分离,并且无其他成分峰的干扰。结论本方法适用于毛大丁草药材的质量控制。

长波紫外线与8-甲氧基补骨脂素复合选育天蓝淡红链霉菌(S. coeruleorubidus)高产株的研究

首次报道长波紫外线(near ultraviole)与8-甲氧基补骨脂素(8-methoxypsoralen)复合选育天蓝淡红链霉菌(S. coeruleorubidus)的研究结果,曾获柔红霉素较出发株稳增6.7%的高产株。

8-甲氧基补骨脂素及其与紫外线复合选育天兰淡红链霉菌的研究

本文比较8 甲氧基补骨脂素(8 Mop)及其与紫外线复合处理柔红霉素产生菌———天兰淡红链霉菌(S.coeruleorubidus)的选育效果,分别获得柔红霉素产率较出发菌株均提高5%以上的高产株,该菌株已在国内应用。

高效液相色谱法测定化妆品中8-甲氧基补骨脂素、5-甲氧基补骨脂素、欧前胡内酯和三甲沙林的不确定度评定

对8-甲氧基补骨脂素、5-甲氧基补骨脂素、欧前胡内酯和三甲沙林高效液相色谱法含量测定进行不确定度评定,建立了数学模型,分析了检测过程中的不确定度的来源并给出了量化结果,计算出标准不确定度和扩展不确定度。结果表明,当取置信概率为95%,包含因子k=2,被测化妆品中8-甲氧基补骨脂素、5-甲氧基补骨脂素、欧前胡内酯和三甲沙林含量分别为19.68、19.39、20.25和21.38μg/g时,其相应的扩展不确定度为0.33、0.33、0.32和0.34μg/g,并针对测量不确定度的主要来源提出了改进建议。

8-甲氧基补骨脂素微乳及其微乳凝胶的在体透皮研究

目的研究8-甲氧基补骨脂素(8-MOP)微乳及其微乳凝胶的在体透皮性能。方法以SD大鼠为实验动物,对8-MOP微乳、8-MOP微乳凝胶和市售8-MOP溶液分别进行在体透皮实验,于不同时间点眼眶取血,HPLC法测定血样及鼠皮中药物含量。结果 8-MOP微乳组的AUC_(0~24)是溶液组的2.9倍,药物皮肤滞留量是后者的4.9倍,即相对提高了滞留量;微乳组和微乳凝胶组之间的AUC_(0~24)、AUC_(0~∞)和皮肤滞留量差异均无统计学意义;微乳凝胶组的AUC_(0~24)是溶液组的2.85倍,但药物皮肤滞留量差异并无统计学意义(P>0.05)。结论与市售8-MOP溶液剂相比,8-MOP微乳能提高药物的滞留透过比,制备成微乳凝胶后,降低了药物的皮肤滞留性。

化妆品中甲氧基补骨脂素同分异构体的液相色谱法分离和测定

建立了用高效液相色谱（HPLC）-二极管阵列检测器（DAD）测定化妆品中两种呋喃香豆素同分异构体-8-甲氧基补骨脂素（8-MOP）和5-甲氧基补骨脂素（5-MOP）的简便方法。样品用甲醇超声提取，高速冷冻离心，经0．45μm滤膜过滤，注入高效液相色谱，用DAD进行扫描检测，并在301nm波长进行分析。用保留时间结合紫外光谱图定性，外标法定量，并且采用液质联用（LC／MS／MS）确证。测试结果对8-MOP的回收率为87．0％-105．0％，RSD为0．41％～5．3％．检出限为5．0mg／kg；5-MOP的回收率为88．0％～105．0％，RSD为0．33％～4．1％，检出限为5．0mg／kg。本文用DAD同时分离和检测了化妆品中的8-MOP和5-MOP，方法可用于化妆品安全性监控。

8-MOP的光敏反应对DNA特定位置的致损伤作用

目的:探讨末端标记8-甲氧基补骨脂素(8-MOP)的三螺旋结构寡核苷酸(TFO)对鸭乙肝病毒(DHBV)-DNAX/C区一目标基因的特异结合及定位损伤作用。材料方法:在一定条件下,将人工合成的3’末端标记有8-MOP的TFO与目标双链基因片断反应,用电泳转移杂交印迹和PCR法观察设计的复合物(TFO-P)对目标基因的结合以及在长波紫外线(UVA)的照射下8-MOP所致DNA交联及引起的PCR扩增阻止效应。结果:所设计合成的TFO-P能与细胞外DHBV-DNA的目标基因双链直接结合,随TFO-P含量的增加,TFO-P与目标双链形成的三聚体分子的产量明显增加;TFO-P与目标基因的反应物经一定剂量的320～380nmUVA照射后,目标序列的PCR扩增出现阻断现象。结论TFO-P能直接与目标DNA特异结合,形成三聚体产物,在UVA的进一步作用下,TFO-P能在目标序列的设定位置发生光敏反应,使DNA形成共价交联结构。

自体表皮移植合并外用8-MOP治疗白癜风的疗效观察

目的:探索白癜风治疗方法。方法:白癜风患者采用自体表皮移植术后,随机分为2组,进行合并外用8-MOP对比研究。结果:合并外用8-MOP组痊愈率为85·5%,明显好于对照组。结论:自体表皮移植术后合并外用8-MOP治疗白癜风可提高白癜风痊愈率。

8-Mop选育天兰淡红链霉菌(S.Coeruleorubidus)高产株

本文首次报导天兰淡红链霉菌(S.coeruleorubidus)经8-甲氧基补骨脂素选育后,获得一株摇瓶产量稳增7.47%的高产株,已在国内应用。

8-Mop选育肉桂地链霉菌(Streptomyces Cinnamonensis)的研究

作者首次报导8-甲氧基补骨脂素(8-Mop)单一选育肉桂地链霉菌(Streptomycescinnamonensis)的研究结果,曾有摇瓶发酵产量增幅达7.5%的稳产高产株获得,高产株已在国内应用。

8-Mop选育薰衣草链霉菌(Streptomyces lavendulae)的研究

本文首次报导8 甲氧基补骨脂素(8 Mop)单一选育薰衣草链霉菌(Streptomyceslavendulae)的研究结果,曾有摇瓶发酵单位提高18.3%的高产株获得,高产株已在国内应用。

长波紫外线联合补骨脂素诱导人脾脏淋巴细胞凋亡

长波紫外线即紫外线A（ultraviolet A，UVA）联合8-甲氧基补骨脂素（8-methoxypsoralen，8-MOP）的诱导方法被应用于治疗许多疾病，如皮肤T细胞淋巴瘤、移植物抗宿主病、器官移植排斥反应和多种自身免疫性疾病。8-MOP是一种从植物中提取出的化合物，400～320nm UVA照射后激活的8-MOP可以与细胞DNA发生共价交联，抑制DNA的合成，进而抑制淋巴细胞增殖并启动细胞凋亡。