8-羟基脱氧鸟嘌呤在慢性砷暴露小鼠心肌细胞中的表达

目的通过检测核酸损伤标志物8-羟基脱氧鸟嘌呤(8-OHdG)在砷暴露小鼠心肌细胞中的表达,为探讨砷的心脏毒性作用机制提供参考依据。方法昆明种小鼠40只,随机分为4组:1、2、4mg/L三氧化二砷染毒组和生理盐水对照组。自然饮水方式连续染毒60 d,取小鼠心脏组织固定,采用HE染色和免疫组化方法观察心肌组织的病理变化和心肌细胞的8-OHdG表达。结果染砷组心肌细胞出现核肿胀、部分核质溶解等病理改变,且其心肌细胞出现明显的8-OHdG表达,并随着砷暴露剂量的增加呈现剂量-反应关系。结论砷可导致心肌细胞的核酸损伤和病理学改变,其损伤的程度与砷的暴露剂量有关。

高效液相色谱-电喷雾离子阱质谱联用测定尿中的8-羟基脱氧鸟嘌呤

建立了尿样中8-羟基脱氧鸟嘌呤的HPLC—MS测定方法。尿样中的8-羟基脱氧鸟嘌呤采用WCX固相萃取小柱预富集后，以0．5％甲酸-甲醇洗脱，吹干后用0．5mL流动相溶解剩余物上机测定。采用分子的二级碎片，方法在5．0～500．0μg／L范围内呈良好线性关系，相关系数r=0．9994，检出限（S／N：3）为0．50μg/L。尿样在40．0、100．0μg/L加标水平的回收率分别为82％和76％，尿样中内源性杂质对分子二级碎片离子峰无干扰。方法具有较高的选择性和灵敏度，适合尿样等复杂基体中8-羟基脱氧鸟嘌呤的定性定量检测。

8-羟基脱氧鸟嘌呤作为可溶性铬盐职业接触者生物标志物的研究

[目的]了解职业接触可溶性铬盐人群尿中8-羟基脱氧鸟嘌呤(8-OHdG)含量及其影响因素,探讨其作为职业接触人群生物标志物的可行性。[方法]2006年,选择济南市某铬盐生产企业114名重铬酸钾作业的健康劳动者作为接触组,以无毒物接触史的当地健康农民30名为对照组,测定2组人群尿液中8-OHdG水平与作业环境铬盐浓度,测定接触组外周血淋巴细胞DNA链断裂水平、红细胞与尿液中铬浓度。[结果]尿液中8-OHdG水平接触组为(1240.494±1603.918)μg/L,对照组为(468.871±908.460)μg/L(P<0.01);尿液中8-OHdG水平与空气中个体铬盐暴露水平、红细胞中铬浓度水平、外周血淋巴细胞DNA链断裂水平的相关系数(r)分别为0.333、0.230、0.396(P<0.01);多元线性回归分析显示,铬盐劳动者年龄、接触铬盐的年限、空气中铬盐浓度对尿液中8-OHdG水平影响显著。[结论]尿液中8-OHdG水平可以作为职业接触可溶性铬盐劳动者遗传损伤效应性生物标志物,可望用于职业接触可溶性铬盐劳动者生物监测及健康危险性的评价。

鸟嘌呤和8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷在聚甘氨酸修饰电极上的电化学行为及其同时测定

在优化的实验条件下,利用电化学方法制备了甘氨酸修饰电极,对修饰膜的电活性进行了表征。用循环伏安法研究了鸟嘌呤(G)和8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷(8-OH-dG)在聚甘氨酸修饰电极上的电化学行为,并建立了对两者进行分别检测和同时检测的分析方法。实验结果表明,聚甘氨酸修饰电极可以增强鸟嘌呤和8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷在电极表面的吸附,并且可以加快鸟嘌呤和8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷在电极表面的电子传输,使两种电活性物质在聚甘氨酸修饰电极上的电化学信号明显增大,检测灵敏度大大提高,并且该修饰电极具有良好的稳定性和重现性,可用于鸟嘌呤和8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷的分别和同时检测。

8-羟基脱氧鸟嘌呤作为DNA氧化损伤标志物的研究现状

8-羟基脱氧鸟嘌呤(8-OHd G)作为DNA氧化损伤的生物标志物,其表达水平与多种癌基因的突变密切相关,在癌症的发生、发展及预后中扮演着重要角色。8-OHd G或能成为一种对氧化性损伤疾病早期筛查、疗效监测与预后评估行之有效的生物标志物,在临床中发挥重要作用。本文通过对8-羟基脱氧鸟苷既往临床研究进行总结,旨在为其在临床上的应用提供启示。

^60 Coγ射线照射后血浆DNA加合物8-羟基脱氧鸟嘌呤含量改变的研究

辐射可造成生物体多种损伤,甚至诱发癌变.电离辐射除通过能量传递直接作用外,还能通过辐射分解反应产生包括活性氧在内的多种自由基间接产物对生物体造成损伤.近年研究表明,辐射损伤DNA所形成的多种碱基加合物可能是致DNA氧化损伤的关键因素,其中DNA加合物8-羟基脱氧鸟嘌呤（8-OhdG）是氧化DNA损伤的重要标志产物[1-2].

燃煤型砷中毒患者症状分级和尿砷水平与尿中8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷水平的相关性研究

目的研究燃煤型砷中毒患者症状分级和尿砷水平与尿中8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷(8-OHdG)水平的相关性。方法对贵州省某燃煤型慢性地方性砷中毒病区进行调查,确定砷中毒患者并依据诊断标准进行症状分级(n=21)同时选择非砷暴露对照人群(n=6),测定尿中总砷(tAs)和8-OHdG水平。结果砷中毒患者组尿中tAs及8-OHdG水平均显著高于对照组,且重度患者组尿中tAs及8-OHdG水平均显著高于轻度和中度患者组。尿中8-OHdG水平与tAs水平呈显著正相关(r=0.590,P<0.01);与砷中毒症状的轻重程度呈显著正相关(r=0.456,P<0.05)。结论高砷暴露可引起尿8-OHdG水平增高,且呈剂量-效应关系;高砷暴露所致的损伤可能与氧化损伤关系密切。

血清8-羟基脱氧鸟嘌呤水平与Graves眼病关系的临床研究

探讨血清8-羟基脱氧鸟嘌呤（8-hydroxy-deoxyguanosine,8-OHdG）水平在Graves眼病发病机制中的作用及与Graves眼病活动性的关系。用酶联免疫吸附法（ELISA）检测48例Graves眼病患者（GO组）和30例单纯Graves病而无眼征的患者（GD组）的血清8-OHdG水平，同时检测30名健康体检者作为对照组。与对照组相比，GO组和GD组的血清8-OHdG水平明显增高［（2.98 ± 1.33）,（2.07 ± 1.30）对（0.72 ± 0.93）ng/ml, P〈0.05］；且GO组的血清8-OHdG水平明显高于GD组（P〈0.05）；Pearson相关性分析显示血清8-OHdG水平与临床疾病活动分数呈显著正相关（r=0.54,P〈0.01）。Graves眼病患者外周血8-OHdG水平明显增高，提示氧化应激与Graves眼病的发病机制有关，血清8-OHdG水平可作为评价Graves眼病疾病活动度的良好指标。

基于纳米金在线扫集-毛细管电泳法测定尿样中8-羟基-2′脱氧鸟嘌呤核苷

提出了纳米金在线富集-毛细管电泳法测定尿样中8-羟基-2′脱氧鸟嘌呤核苷(8-OHdG)的方法。试验选择了以下的分析条件:①运行电压-20kV;②背景电解质为pH 8.2的20mmol.L-1硼砂(含粒径10nm纳米金溶液200μL和0.1mmol.L-1 CTMAB);③检测波长254nm。试验证明背景电解质中的纳米金粒子与CTMAB形成胶束,提高了对8-OHdG的扫集能力,8-OHdG与dG在10min内可实现基线分离。8-OHdG浓度在0.50～50.0μmol.L-1范围内呈线性,检出限(3S/N)为39nmol.L-1。方法用于尿样中8-OHdG含量的测定,所得加标回收率在90.0%～104.6%之间。

聚(3,4-乙烯基二氧噻吩)/碳纳米管复合膜修饰电极的电化学制备及其用于8-羟基-2'-脱氧鸟嘌呤核苷的检测

通过恒电流电解一步法在玻碳电极表面制备了聚(3,4-乙烯基二氧噻吩)/碳纳米管复合膜,实验结果表明,该复合膜修饰电极综合了聚(3,4-乙烯基二氧噻吩)(PEDOT)和碳纳米管(CNTs)两者的优点,对8-羟基-2'-脱氧鸟嘌呤核苷(8-OH-dG)的氧化具有明显的增强作用,较好地抑制尿酸的干扰,而且具有很好的重现性和稳定性.在0.1 mol/L pH 9.0的磷酸盐缓冲溶液(PBS)中,8-OH-dG的氧化峰电流与其浓度在0.014～14.0μmol/L和14.0～56.0μmol/L两个范围内成良好的线性关系,检出限可达35 nmol/L(S/N=3).

hOGG1基因型和血清8-OHdG水平与急性心肌梗死关系的病例对照研究

目的探讨中国河南新乡地区人群8-羟基鸟嘌呤糖苷酶(hOGG1)基因Ser326Cys单核苷酸多态性和血8-羟基脱氧鸟嘌呤(8-OHdG)水平与急性心肌梗死(AMI)的关系。方法用病例-对照研究设计,选取AMI病例(病例组)和与之年龄、性别匹配且冠状动脉造影示冠状动脉正常的对照(对照组)各300例,按1∶1配对,运用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测hOGG1基因Ser326Cys单核苷酸多态性,同时检测血8-OHdG水平及相关血脂、血糖等生化指标。结果两组hOGG1基因Ser326Cys等位基因的分布无差异(P=0.16);病例组Cys/Cys基因型频率明显高于对照组,Ser/Cys基因型频率明显低于对照组(P=0.001);与携带Ser/Ser+Ser/Cys基因型者比较,携带Cys/Cys基因型的个体患AMI的风险增加(OR=1.99,95%CI:1.20～2.69);病例组血8-OHdG水平明显高于对照组(P<0.05),携带Cys/Cys基因型的病例组患者血8-OHdG水平明显增高(P<0.05)。结论 hOGG1基因型和血清8-OHdG水平与AMI均存在相关性。携带Cys/Cys基因型的个体患AMI的风险增加,AMI患者的氧化应激水平增高,基因型为Cys/Cys的AMI患者氧化应激水平增高明显。

ICAM-1和8-OHdG在肾癌组织中的表达及其与临床病理指标的关系

目的:观察ICAM-1和8-OHdG在肾癌组织中的表达情况,并分析两者的表达与肾癌患者临床病理参数之间的关系,探讨其在肾癌发生和进展中的作用。方法:采用免疫组化的方法检测46例肾癌组织和18例远离癌组织的正常肾组织中ICAM-1和8-OHdG的表达,通过阳性染色强度及阳性细胞百分比进行综合评分,观察不同组织者中两者的表达差异,同时分别统计分析ICAM-1和8-OHdG的表达与肾癌患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤分期以及是否有淋巴结转移或远处转移等临床病理参数之间的关系。结果:ICAM-1在正常肾组织中的表达多为弱阳性或阴性表达,而在肾癌组织中ICAM-1阳性表达增加(占比82. 6%),且与肿瘤的分化程度、淋巴结转移和远处转移具有显著相关性(P<0. 05或P<0. 01)。绝大多数正常肾组织中8-OHdG呈阴性表达,而肾癌组织中8-OHdG阳性表达增加(占比63%),与肿瘤大小、淋巴结转移和远处转移以及无进展生存期(PFS)之间具有显著相关性(P<0. 05或P<0. 01)。结论:ICAM-1和8-OHdG在肾癌组织中高表达,二者在肾癌的发生和进展中可能发挥着重要的作用。

不同剂量氯沙坦对糖尿病肾病患者尿TGF-1及8-OHdG的影响

目的观察不同剂量氯沙坦对糖尿病肾病(DN)患者尿中转化生长因子-1(TGF-1)及8-羟基脱氧鸟嘌呤(8-OHdG)的影响。方法收集48例有明显蛋白尿的2型DN患者,给予氯沙坦50 mg/d治疗8周,之后改为100 mg/d治疗8周,比较治疗前后患者尿TGF-1、8-OHdG水平变化。采用Spearman分析患者尿TGF-1、8-OHdG浓度变化与24 h尿蛋白变化的相关性。结果患者治疗前、50 mg/d治疗后、100 mg/d治疗后,新鲜尿TGF-1、24 h尿8-OHdG的浓度明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。尿TGF-1浓度变化与尿蛋白变化具有相关性(P<0.01)。所有患者对氯沙坦100 mg/d耐受性良好。结论氯沙坦能显著降低2型DN患者尿TGF1、8-OHdG水平,100 mg/d比50 mg/d作用更强,而且副作用无明显增加。

高血压小鼠心肌肥厚过程中心肌组织Prx-2、8-OHdG蛋白表达变化及意义

目的探讨高血压小鼠心肌肥厚过程中心肌组织硫氧环蛋白过氧化物酶2(Prx-2)、8-羟基脱氧鸟嘌呤(8-OHd G)蛋白表达变化及其意义。方法将60只雄性C57BL/6N小鼠分为观察组40只和对照组20只,观察组采用两肾一夹(2K1C)法制备高血压心肌肥厚模型,对照组只分离左肾动脉,不放置肾动脉夹。两组分别于术前和术后2、4、8、12周测量尾动脉收缩压;术后2、4、8、12周分别随机选择10只观察组小鼠及5只对照组小鼠处死,计算全心质量指数和左心室质量指数,分别采用免疫印迹法、免疫组化法检测左心室心肌组织Prx-2、8-OHd G蛋白表达;分析观察组术后各时间点Prx-2、8-OHd G蛋白表达的关系。结果两组术前尾动脉收缩压比较无明显统计学差异(P>0.05),观察组术后2、4、8、12周尾动脉收缩压、全心质量指数和左心室质量指数均呈升高趋势,且均高于对照组同时间点(P均<0.05);证实建模成功。观察组术后2、4、8、12周左心室心肌组织Prx-2蛋白相对表达量及8-OHd G蛋白表达均呈升高趋势,且均高于对照组同时间点(P均<0.05)。观察组术后2、4、8、12周左心室心肌组织8-OHd G和Prx-2蛋白表达均呈正相关(r分别为0.95、0.97、0.97和0.95,P均<0.01)。结论高血压小鼠心肌肥厚过程中左心室心肌组织Prx-2、8-OHd G蛋白表达均升高,二者分别通过抗氧化和促氧化作用参与心肌肥厚的发生与发展。

细胞DNA中8-OH-dG的毛细管区带电泳检测方法的研究

目的以人肝肿瘤细胞HepG2为工具细胞,通过优化选择毛细管区带电泳的运行电压、温度、缓冲溶液pH值等条件,建立细胞DNA氧化损伤后8OH dG的毛细管区带电泳分离检测方法,并以此方法分别检测未经H2O2处理组与经15mmol LH2O2处理组HepG2细胞DNA中8OH dG含量的变化。方法提取DNA采用饱和盐析法,避免经酚氯仿抽提导致8OH dG的产生。DNA溶液中加入DNaseI、蛇毒磷酸二酯酶及碱性磷酸酶得到游离核苷,并经去蛋白,二乙醚抽提后用于HPCE分析。优化后的分析条件为紫外检测器波长为254nm;pH值为9.5,浓度为20mmol L硼酸钠水溶液;毛细管长度为47cm;运行电压为25kV;温度为25℃;进样方式为重力进样,进样时间为20秒。结果在上述实验条件下,细胞DNA处理得到的游离核苷电泳结果与5种核苷标准品的电泳结果符合。经或未经H2O2处理组HepG2细胞DNA中均检测出8OH dG峰,H2O2处理组细胞DNA中8OH dG含量增加。结论此方法操作简便易行,进样量小,需时间及费用少,灵敏度较高,对人体无损害,并为8OH dG在人群生物监测方面的应用奠定了实验基础。

尿TGF-β1、8-OHdG检测在早期糖尿病肾病中的应用价值

目的探讨尿转化生长因子-β1(TGF-β1)及8-羟基脱氧鸟嘌呤(8-OHdG)检测在早期糖尿病肾病(DN)中的应用价值。方法选取2019年1—11月该院收治的2型糖尿病患者120例作为研究对象,根据尿微量清蛋白与肌酐比值(ACR)将其分为3组,分别为正常蛋白尿组(ACR<30 mg/g)、微量蛋白尿组(30 mg/g≤ACR<300 mg/g)、大量蛋白尿组(ACR≥300 mg/g)。另选取同期30例健康体检者作为对照组。比较各组TGF-β1、8-OHdG、ACR、血肌酐水平及TGF-β1、8-OHdG单独与联合检测的阳性率。结果与对照组比较,微量蛋白尿组、大量蛋白尿组ACR水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。正常蛋白尿组、微量蛋白尿组、大量蛋白尿组TGF-β1、8-OHdG水平高于对照组,且随尿蛋白水平的增加TGF-β1、8-OHdG水平呈递增趋势,各组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。各组中TGF-β1、8-OHdG联合检测的阳性率均高于TGF-β1、8-OHdG单独检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论尿TGF-β1、8-OHdG检测能够较灵敏地反映DN患者早期肾损害,两者联合检测在DN早期筛查中具有一定价值,值得临床推广应用。

新生期大鼠反复惊厥后8-OH-dG和CytC的表达与细胞凋亡的关系研究

目的探讨新生期大鼠反复惊厥后8-羟基-2′-脱氧鸟嘌呤核苷(8-OH-dG)和细胞色素C(CytC)的表达与细胞凋亡的关系。方法将24只日龄8d的大鼠分为惊厥组和对照组,惊厥组进一步分为惊厥后3h、24h、48h,每组6只。采用吸入三氟乙醚诱导新生期大鼠反复惊厥持续状态模型,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清8-OH-dG水平,实时荧光定量PCR(RTPCR)和原位末端标记法(TUNEL)分别检测海马CytC的表达和细胞凋亡。结果与对照组相比,TUNEL显示惊厥组海马神经元细胞凋亡明显增多(P<0.01),呈棕黄色颗粒。血清8-OH-dG水平在末次惊厥后各时间点均明显高于对照组(P<0.05或P<0.01)。与对照组相比,CytC在末次惊厥后3h、24h增高(P<0.01),48h后下降至正常水平。8-OH-dG、CytC与细胞凋亡呈正相关(r=0.662、0.565,P<0.05)。结论线粒体损伤可能参与了发育期反复惊厥后脑损伤。

纳米金应用于毛细管电泳检测尿液中8-OHdG

建立了8-羟基-2’脱氧鸟嘌呤核苷(8-OHdG)的毛细管电泳线扫集技术。以20mmol/L硼砂(含600μL,i.d.20nm纳米金溶液和0.3mmol/LCTAB,pH9.18)为背景电解质,进样前注入一段50mmol/LNaCl溶液。运行电压-20KV,紫外检测波长254nm,压力进样(50mbar×100s),结果显示,体系中的8-OHdG在10min内可实现基线分离。且在0.5-50.0μmol/L浓度范围内线性关系良好(R2=0.999),加标回收率为94.6-103.2%,最低检测限(LOD)为100nmol/L。采用此方法对痕量8-OHdG进行加标回收实验,效果良好,对于临床检测患者体内8-OHdG有很大帮助。

卵巢上皮性肿瘤患者尿中8-羟基-2′脱氧鸟嘌呤核苷的检测及意义

目的 检测卵巢上皮类肿瘤患者尿中 8 羟基 2′脱氧鸟嘌呤核苷 (8 hydroxy 2′ deoxyguanosine ,8 O HdG)的水平 ,探讨DNA氧化损伤在卵巢上皮类癌发生机制中的作用。方法 于 2 0 0 2年 3～ 1 0月采用酶联免疫吸附法 (ELISA)检测 2 1例卵巢恶性上皮类肿瘤患者 ,1 7例卵巢良性上皮类肿瘤患者和 31例健康妇女尿中 8 O HdG的水平。结果 卵巢恶性上皮类肿瘤患者尿中 8 OHdG的含量为 (1 4 0 8± 4 92 ) μg/gCr ,卵巢良性上皮类肿瘤患者为 (9 4 1± 3 93) μg/gCr ,健康妇女为 (9 6 4± 2 95 ) μg/ gCr ,恶性上皮类肿瘤组与良性及健康对照组比较差异显著 (P <0 0 5 )。尿中 8 OHdG的水平与肿瘤分期、分级无关。结论 DNA氧化损伤在卵巢上皮类癌发生机制中可能起重要作用。

基于二茂铁增强ABEI电致化学发光对8-OH-dG的检测

制备了一种基于二茂铁增强ABEI的电化学发光测定8-OH-dG的电化学适配体传感器.8-OH-dG的适配体一部分与固定在金电极上的cDNA互补配对,另一部分与末端修饰二茂铁的pDNA互补配对.由于二茂铁的引入,ABEI的电化学发光信号将显著增强.然而,当8-OHdG存在时,其可以诱导富G序列适配体形成紧密的G-四倍体结构,电极表面引入的二茂铁数量减少,导致ABEI的电化学发光信号降低.在最佳实验条件下,ABEI发光强度与8-OH-dG浓度的对数呈线性关系,线性范围为1nM-100μM,检出限为0.33nM.已将该方法应用于人体尿液中8-OH-dG的检测,结果满意,因此该方法在临床检测中具有潜在的应用价值.