基于纳米金在线扫集-毛细管电泳法测定尿样中8-羟基-2′脱氧鸟嘌呤核苷

提出了纳米金在线富集-毛细管电泳法测定尿样中8-羟基-2′脱氧鸟嘌呤核苷(8-OHdG)的方法。试验选择了以下的分析条件:①运行电压-20kV;②背景电解质为pH 8.2的20mmol.L-1硼砂(含粒径10nm纳米金溶液200μL和0.1mmol.L-1 CTMAB);③检测波长254nm。试验证明背景电解质中的纳米金粒子与CTMAB形成胶束,提高了对8-OHdG的扫集能力,8-OHdG与dG在10min内可实现基线分离。8-OHdG浓度在0.50～50.0μmol.L-1范围内呈线性,检出限(3S/N)为39nmol.L-1。方法用于尿样中8-OHdG含量的测定,所得加标回收率在90.0%～104.6%之间。

聚(3,4-乙烯基二氧噻吩)/碳纳米管复合膜修饰电极的电化学制备及其用于8-羟基-2'-脱氧鸟嘌呤核苷的检测

通过恒电流电解一步法在玻碳电极表面制备了聚(3,4-乙烯基二氧噻吩)/碳纳米管复合膜,实验结果表明,该复合膜修饰电极综合了聚(3,4-乙烯基二氧噻吩)(PEDOT)和碳纳米管(CNTs)两者的优点,对8-羟基-2'-脱氧鸟嘌呤核苷(8-OH-dG)的氧化具有明显的增强作用,较好地抑制尿酸的干扰,而且具有很好的重现性和稳定性.在0.1 mol/L pH 9.0的磷酸盐缓冲溶液(PBS)中,8-OH-dG的氧化峰电流与其浓度在0.014～14.0μmol/L和14.0～56.0μmol/L两个范围内成良好的线性关系,检出限可达35 nmol/L(S/N=3).

MTH2蛋白与8-氧鸟嘌呤脱氧核苷在阿尔茨海默病患者海马组织中的表达变化

目的:观察8-氧鸟嘌呤脱氧核苷三磷酸酶同源蛋白2(MTH2)及8-氧鸟嘌呤脱氧核苷(8-oxodG)在阿尔茨海默病(AD)患者海马组织标本中的表达变化,探讨在AD患者海马中二者表达的相关性。方法:选用临床及病理均诊断为AD的尸检海马组织石蜡切片作为实验组,年龄匹配且临床及病理诊断均排除AD的尸检海马组织石蜡切片作为对照组,每组各3例,用免疫组化的方法分别检测人脑海马中8-oxo-dG的含量及MTH2蛋白的表达。结果:免疫组化定量结果显示,在人脑海马组织CA1及CA3区,AD患者8-oxo-dG的表达显著高于年龄匹配对照组,而AD患者MTH2的表达显著低于年龄匹配的对照组。结论:在人脑海马组织中,DNA氧化产物8-oxo-dG含量在AD患者比年龄匹配对照组有显著提高,抗氧化修复蛋白MTH2的表达量却显著降低,提示人脑海马组织中MTH2蛋白表达量的减少及8-oxo-dG含量的增加与AD的发病过程相关。

鸟嘌呤和8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷在聚甘氨酸修饰电极上的电化学行为及其同时测定

在优化的实验条件下,利用电化学方法制备了甘氨酸修饰电极,对修饰膜的电活性进行了表征。用循环伏安法研究了鸟嘌呤(G)和8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷(8-OH-dG)在聚甘氨酸修饰电极上的电化学行为,并建立了对两者进行分别检测和同时检测的分析方法。实验结果表明,聚甘氨酸修饰电极可以增强鸟嘌呤和8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷在电极表面的吸附,并且可以加快鸟嘌呤和8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷在电极表面的电子传输,使两种电活性物质在聚甘氨酸修饰电极上的电化学信号明显增大,检测灵敏度大大提高,并且该修饰电极具有良好的稳定性和重现性,可用于鸟嘌呤和8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷的分别和同时检测。

8-羟基鸟嘌呤糖苷酶1、环氧合酶2基因多态性与阿尔茨海默病的关系

阿尔茨海默病是一种慢性进行性神经退行性疾病,为老年痴呆最普遍的一种。目前研究认为遗传因素、环境因素和免疫因素等均参与了AD的病理生理过程。家族性AD多呈常染色体显性遗传,与淀粉样前体蛋白(APP)、早老素1(PS1)、早老素2(PS2)基因突变有关。晚发性AD(LOAD)以及散发性AD(SAD)最主要的遗传危险因子是ApoEε4等位基因,但它只与50%的AD有相关,存在其他遗传危险因子。本文就8-羟基鸟嘌呤糖苷酶1基因、环氧合酶2基因多态性与AD的关系的研究现状及进展做一简要综述。

细胞DNA中8-OH-dG的毛细管区带电泳检测方法的研究

目的以人肝肿瘤细胞HepG2为工具细胞,通过优化选择毛细管区带电泳的运行电压、温度、缓冲溶液pH值等条件,建立细胞DNA氧化损伤后8OH dG的毛细管区带电泳分离检测方法,并以此方法分别检测未经H2O2处理组与经15mmol LH2O2处理组HepG2细胞DNA中8OH dG含量的变化。方法提取DNA采用饱和盐析法,避免经酚氯仿抽提导致8OH dG的产生。DNA溶液中加入DNaseI、蛇毒磷酸二酯酶及碱性磷酸酶得到游离核苷,并经去蛋白,二乙醚抽提后用于HPCE分析。优化后的分析条件为紫外检测器波长为254nm;pH值为9.5,浓度为20mmol L硼酸钠水溶液;毛细管长度为47cm;运行电压为25kV;温度为25℃;进样方式为重力进样,进样时间为20秒。结果在上述实验条件下,细胞DNA处理得到的游离核苷电泳结果与5种核苷标准品的电泳结果符合。经或未经H2O2处理组HepG2细胞DNA中均检测出8OH dG峰,H2O2处理组细胞DNA中8OH dG含量增加。结论此方法操作简便易行,进样量小,需时间及费用少,灵敏度较高,对人体无损害,并为8OH dG在人群生物监测方面的应用奠定了实验基础。

高血压小鼠心肌肥厚过程中心肌组织Prx-2、8-OHdG蛋白表达变化及意义

目的探讨高血压小鼠心肌肥厚过程中心肌组织硫氧环蛋白过氧化物酶2(Prx-2)、8-羟基脱氧鸟嘌呤(8-OHd G)蛋白表达变化及其意义。方法将60只雄性C57BL/6N小鼠分为观察组40只和对照组20只,观察组采用两肾一夹(2K1C)法制备高血压心肌肥厚模型,对照组只分离左肾动脉,不放置肾动脉夹。两组分别于术前和术后2、4、8、12周测量尾动脉收缩压;术后2、4、8、12周分别随机选择10只观察组小鼠及5只对照组小鼠处死,计算全心质量指数和左心室质量指数,分别采用免疫印迹法、免疫组化法检测左心室心肌组织Prx-2、8-OHd G蛋白表达;分析观察组术后各时间点Prx-2、8-OHd G蛋白表达的关系。结果两组术前尾动脉收缩压比较无明显统计学差异(P>0.05),观察组术后2、4、8、12周尾动脉收缩压、全心质量指数和左心室质量指数均呈升高趋势,且均高于对照组同时间点(P均<0.05);证实建模成功。观察组术后2、4、8、12周左心室心肌组织Prx-2蛋白相对表达量及8-OHd G蛋白表达均呈升高趋势,且均高于对照组同时间点(P均<0.05)。观察组术后2、4、8、12周左心室心肌组织8-OHd G和Prx-2蛋白表达均呈正相关(r分别为0.95、0.97、0.97和0.95,P均<0.01)。结论高血压小鼠心肌肥厚过程中左心室心肌组织Prx-2、8-OHd G蛋白表达均升高,二者分别通过抗氧化和促氧化作用参与心肌肥厚的发生与发展。

新生期大鼠反复惊厥后8-OH-dG和CytC的表达与细胞凋亡的关系研究

目的探讨新生期大鼠反复惊厥后8-羟基-2′-脱氧鸟嘌呤核苷(8-OH-dG)和细胞色素C(CytC)的表达与细胞凋亡的关系。方法将24只日龄8d的大鼠分为惊厥组和对照组,惊厥组进一步分为惊厥后3h、24h、48h,每组6只。采用吸入三氟乙醚诱导新生期大鼠反复惊厥持续状态模型,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清8-OH-dG水平,实时荧光定量PCR(RTPCR)和原位末端标记法(TUNEL)分别检测海马CytC的表达和细胞凋亡。结果与对照组相比,TUNEL显示惊厥组海马神经元细胞凋亡明显增多(P<0.01),呈棕黄色颗粒。血清8-OH-dG水平在末次惊厥后各时间点均明显高于对照组(P<0.05或P<0.01)。与对照组相比,CytC在末次惊厥后3h、24h增高(P<0.01),48h后下降至正常水平。8-OH-dG、CytC与细胞凋亡呈正相关(r=0.662、0.565,P<0.05)。结论线粒体损伤可能参与了发育期反复惊厥后脑损伤。

纳米金应用于毛细管电泳检测尿液中8-OHdG

建立了8-羟基-2’脱氧鸟嘌呤核苷(8-OHdG)的毛细管电泳线扫集技术。以20mmol/L硼砂(含600μL,i.d.20nm纳米金溶液和0.3mmol/LCTAB,pH9.18)为背景电解质,进样前注入一段50mmol/LNaCl溶液。运行电压-20KV,紫外检测波长254nm,压力进样(50mbar×100s),结果显示,体系中的8-OHdG在10min内可实现基线分离。且在0.5-50.0μmol/L浓度范围内线性关系良好(R2=0.999),加标回收率为94.6-103.2%,最低检测限(LOD)为100nmol/L。采用此方法对痕量8-OHdG进行加标回收实验,效果良好,对于临床检测患者体内8-OHdG有很大帮助。

ICAM-1和8-OHdG在肾癌组织中的表达及其与临床病理指标的关系

目的:观察ICAM-1和8-OHdG在肾癌组织中的表达情况,并分析两者的表达与肾癌患者临床病理参数之间的关系,探讨其在肾癌发生和进展中的作用。方法:采用免疫组化的方法检测46例肾癌组织和18例远离癌组织的正常肾组织中ICAM-1和8-OHdG的表达,通过阳性染色强度及阳性细胞百分比进行综合评分,观察不同组织者中两者的表达差异,同时分别统计分析ICAM-1和8-OHdG的表达与肾癌患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤分期以及是否有淋巴结转移或远处转移等临床病理参数之间的关系。结果:ICAM-1在正常肾组织中的表达多为弱阳性或阴性表达,而在肾癌组织中ICAM-1阳性表达增加(占比82. 6%),且与肿瘤的分化程度、淋巴结转移和远处转移具有显著相关性(P<0. 05或P<0. 01)。绝大多数正常肾组织中8-OHdG呈阴性表达,而肾癌组织中8-OHdG阳性表达增加(占比63%),与肿瘤大小、淋巴结转移和远处转移以及无进展生存期(PFS)之间具有显著相关性(P<0. 05或P<0. 01)。结论:ICAM-1和8-OHdG在肾癌组织中高表达,二者在肾癌的发生和进展中可能发挥着重要的作用。

不同剂量氯沙坦对糖尿病肾病患者尿TGF-1及8-OHdG的影响

目的观察不同剂量氯沙坦对糖尿病肾病(DN)患者尿中转化生长因子-1(TGF-1)及8-羟基脱氧鸟嘌呤(8-OHdG)的影响。方法收集48例有明显蛋白尿的2型DN患者,给予氯沙坦50 mg/d治疗8周,之后改为100 mg/d治疗8周,比较治疗前后患者尿TGF-1、8-OHdG水平变化。采用Spearman分析患者尿TGF-1、8-OHdG浓度变化与24 h尿蛋白变化的相关性。结果患者治疗前、50 mg/d治疗后、100 mg/d治疗后,新鲜尿TGF-1、24 h尿8-OHdG的浓度明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。尿TGF-1浓度变化与尿蛋白变化具有相关性(P<0.01)。所有患者对氯沙坦100 mg/d耐受性良好。结论氯沙坦能显著降低2型DN患者尿TGF1、8-OHdG水平,100 mg/d比50 mg/d作用更强,而且副作用无明显增加。

基于二茂铁增强ABEI电致化学发光对8-OH-dG的检测

制备了一种基于二茂铁增强ABEI的电化学发光测定8-OH-dG的电化学适配体传感器.8-OH-dG的适配体一部分与固定在金电极上的cDNA互补配对,另一部分与末端修饰二茂铁的pDNA互补配对.由于二茂铁的引入,ABEI的电化学发光信号将显著增强.然而,当8-OHdG存在时,其可以诱导富G序列适配体形成紧密的G-四倍体结构,电极表面引入的二茂铁数量减少,导致ABEI的电化学发光信号降低.在最佳实验条件下,ABEI发光强度与8-OH-dG浓度的对数呈线性关系,线性范围为1nM-100μM,检出限为0.33nM.已将该方法应用于人体尿液中8-OH-dG的检测,结果满意,因此该方法在临床检测中具有潜在的应用价值.

8-oxodG在口腔黏膜白斑中的表达

目的:研究8-氧-7,8-二氢-2'-脱氧鸟嘌呤核苷(8-oxo-7,8-dihydro-2'-deoxyguanosine,8-oxod G)在口腔黏膜白斑中的表达,探讨氧化性DNA损伤在口腔黏膜白斑发生发展中的作用及机制。方法:应用免疫荧光技术检测10例正常口腔黏膜和20例口腔黏膜白斑中8-oxod G和抑癌基因P53蛋白的表达。结果:HE染色可见口腔黏膜白斑中炎性细胞浸润,过角化和上皮异型性增生等组织病理学变化。免疫荧光标记显示8-oxod G在口腔黏膜白斑中生成,并可见抑癌基因P53蛋白的表达。口腔黏膜白斑中8-oxod G和P53蛋白的阳性表达率高于正常口腔黏膜(P<0.01);8-oxod G、P53在正常口腔黏膜、口腔黏膜白斑伴或不伴异型性增生的阳性表达程度具有相关性,与病变程度呈正相关(r=0.773,P<0.01)。结论:氧化性DNA损伤在口腔黏膜白斑的发生过程中起着重要作用,8-oxod G可作为口腔黏膜白斑病变程度的风险性预测标志物。

卵巢上皮性肿瘤患者尿中8-羟基-2′脱氧鸟嘌呤核苷的检测及意义

目的 检测卵巢上皮类肿瘤患者尿中 8 羟基 2′脱氧鸟嘌呤核苷 (8 hydroxy 2′ deoxyguanosine ,8 O HdG)的水平 ,探讨DNA氧化损伤在卵巢上皮类癌发生机制中的作用。方法 于 2 0 0 2年 3～ 1 0月采用酶联免疫吸附法 (ELISA)检测 2 1例卵巢恶性上皮类肿瘤患者 ,1 7例卵巢良性上皮类肿瘤患者和 31例健康妇女尿中 8 O HdG的水平。结果 卵巢恶性上皮类肿瘤患者尿中 8 OHdG的含量为 (1 4 0 8± 4 92 ) μg/gCr ,卵巢良性上皮类肿瘤患者为 (9 4 1± 3 93) μg/gCr ,健康妇女为 (9 6 4± 2 95 ) μg/ gCr ,恶性上皮类肿瘤组与良性及健康对照组比较差异显著 (P <0 0 5 )。尿中 8 OHdG的水平与肿瘤分期、分级无关。结论 DNA氧化损伤在卵巢上皮类癌发生机制中可能起重要作用。

DNA／聚(3-甲基噻吩)复合膜修饰电极的制备及其应用于研究8-羟基-2＇-脱氧鸟嘌呤核苷的伏安行为及测定

首先通过电聚合方法在玻碳电极表面制备了聚(3-甲基噻吩)(P3MT)修饰膜,然后在一定电位下将DNA分子电沉积到P3MT表面,制备了DNA/(P3MT)复合膜修饰玻碳电极.研究了8-羟基-2'-脱氧鸟嘌呤核苷(8-OH-dG)在该复合膜修饰电极上的伏安行为以及扫描速度、pH值和尿酸对其伏安行为和检测的影响.实验结果表明,该复合膜修饰电极结合了P3MT和DNA两者的优点,使8-OH-dG在复合膜修饰电极上的电化学行为明显改善,而且具有很好的重现性和稳定性.在0.1mol/LpH7.0的磷酸盐缓冲溶液(PBS)中,8-OH-dG的氧化峰电流与其浓度在0.28～4.2μmol/L和4.2～19.6μmol/L两个范围内成良好的线性关系,检出限为56nmol/L(S/N=3).该研究可以为制备HPLC或毛细管电泳电化学检测器检测8-OH-dG打下一定的基础,因此在检测尿样中8-OH-dG的研究方面具有潜在的应用价值.

燃煤型砷中毒患者症状分级和尿砷水平与尿中8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷水平的相关性研究

目的研究燃煤型砷中毒患者症状分级和尿砷水平与尿中8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷(8-OHdG)水平的相关性。方法对贵州省某燃煤型慢性地方性砷中毒病区进行调查,确定砷中毒患者并依据诊断标准进行症状分级(n=21)同时选择非砷暴露对照人群(n=6),测定尿中总砷(tAs)和8-OHdG水平。结果砷中毒患者组尿中tAs及8-OHdG水平均显著高于对照组,且重度患者组尿中tAs及8-OHdG水平均显著高于轻度和中度患者组。尿中8-OHdG水平与tAs水平呈显著正相关(r=0.590,P<0.01);与砷中毒症状的轻重程度呈显著正相关(r=0.456,P<0.05)。结论高砷暴露可引起尿8-OHdG水平增高,且呈剂量-效应关系;高砷暴露所致的损伤可能与氧化损伤关系密切。

高本底地区辐射对8-OHdG和hMTH1的影响研究

目的探讨天然低水平放射性辐射对氧化损伤及其修复基因表达水平的影响。方法选择广东省阳西县天然放射性高本底辐射地区（HBRA）和恩平市天然放射性低本底辐射地区（CA）各48名50-58岁土生土长男性居民为研究对象,按年龄匹配,佩戴热释光剂量计测得外照射剂量。采集外周血并分离血浆和白细胞,ELISA法测定血浆8-羟基脱氧鸟苷（8-OHd G）的含量,QPCR法测定血白细胞人8-羟基鸟嘌呤核苷酸酶修复基因（Human Mut Thomologue,h MTH1）m RNA转录水平。结果 HBRA组和CA组居民外周血血浆中8-OHd G浓度分别为（0.27±0.11）μg/m L和（0.32±0.10）μg/m L,差异有统计学意义（P〈0.05）,与个人剂量呈负相关（rs=-0.271,P=0.013）;h MTH1 m RNAΔCt值分别为（9.61±2.51）和（10.01±1.24）,差异无统计学意义（P〉0.05）,但与个人剂量呈负相关（rs=-0.219,P=0.028）。结论长期暴露于天然放射性低本底辐射地区可降低居民氧化损伤水平、提高DNA损伤修复能力。

高浓度胰岛素对不同糖浓度下视网膜色素上皮细胞8-OHdG表达的影响

目的探讨高浓度胰岛素对不同糖浓度下体外培养的人视网膜色素上皮细胞19（RPE-19细胞）线粒体DNA氧化损伤标记物8-羟基-2′脱氧鸟嘌呤（8-OHdG）表达的影响。方法体外培养的RPE-19细胞随机分成四组,空白对照（A）组（葡萄糖5.6mmol/L）、高胰岛素（B）组（葡萄糖5.6mmol/L＋胰岛素10~4 U/L）、高糖（C）组（葡萄糖30mmol/L）、高胰岛素＋高糖（D）组（葡萄糖30mmol/L＋胰岛素10~4 U/L）。各组分别在正常糖（5.6mmol/L）或高糖（30mmol/L）浓度下培养72h,再按不同组别给予胰岛素10~4 U/L干预24h,采用免疫细胞荧光法检测细胞内8-OHdG的表达量。结果 B、C、D组人RPE-19细胞中8-OHdG表达量均高于A组（P〈0.05）;D组人RPE-19细胞中8-OHdG表达量亦高于B、C组（P〈0.05）;B、C组人RPE-19细胞中8-OHdG表达量相近,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论高浓度胰岛素促进人RPE-19细胞中8-OHdG生成增加,可能是临床上胰岛素强化治疗导致糖尿病视网膜病变恶化的原因之一。

PC-B2对AFB_1致肝细胞DNA损伤及修复影响

目的探讨原花青素B2(PC-B2)对黄曲霉毒素B1(AFB1)所致人胚胎肝细胞(L-02)DNA损伤及修复基因表达影响。方法取对数期生长良好的L-02细胞随机分为空白对照组、溶剂对照组、PC-B2处理组(3、10、30μg/m L)、AFB1染毒组(10、20、30、40μg/m L)和PC-B2干预组(3、10、30μg/m L PC-B2+30μg/m L AFB1),利用噻唑蓝法、酶联免疫吸附法和荧光定量PCR技术分别测定细胞增殖活力、细胞上清液8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)含量及细胞h OGG1基因表达水平。结果 AFB1可明显抑制L-02细胞增殖活力(P<0.05),呈剂量-效应关系;与溶剂对照组比较,30μg/m L AFB1组细胞活力[(69.9±2.46)%]明显降低(P<0.05),细胞上清中8-OHd G含量[(2.779±0.089)ng/m L]明显升高(P<0.05);与30μg/m L AFB1组比较,3、10、30μg/m L PC-B2干预组细胞活力[分别为(70.6±2.67)%、(69.7±1.94)%、(82.4±1.58)%]明显升高(P<0.05),细胞上清中8-OHd G含量[分别为(2.550±0.078)、(2.376±0.109)、(1.873±0.065)ng/m L]明显降低(P<0.05);与溶剂对照组比较,30μg/m L AFB1组L-02细胞h OGG1基因表达减少(P<0.05);与30μg/m L AFB1组比较,PC-B2干预组L-02细胞h OGG1表达明显升高。结论 PC-B2可提高肝细胞增殖活力,抑制AFB1所致肝细胞DNA损伤,其机制可能与调控修复基因h OGG1表达有关。