基于纳米金在线扫集-毛细管电泳法测定尿样中8-羟基-2′脱氧鸟嘌呤核苷

提出了纳米金在线富集-毛细管电泳法测定尿样中8-羟基-2′脱氧鸟嘌呤核苷(8-OHdG)的方法。试验选择了以下的分析条件:①运行电压-20kV;②背景电解质为pH 8.2的20mmol.L-1硼砂(含粒径10nm纳米金溶液200μL和0.1mmol.L-1 CTMAB);③检测波长254nm。试验证明背景电解质中的纳米金粒子与CTMAB形成胶束,提高了对8-OHdG的扫集能力,8-OHdG与dG在10min内可实现基线分离。8-OHdG浓度在0.50～50.0μmol.L-1范围内呈线性,检出限(3S/N)为39nmol.L-1。方法用于尿样中8-OHdG含量的测定,所得加标回收率在90.0%～104.6%之间。

聚(3,4-乙烯基二氧噻吩)/碳纳米管复合膜修饰电极的电化学制备及其用于8-羟基-2'-脱氧鸟嘌呤核苷的检测

通过恒电流电解一步法在玻碳电极表面制备了聚(3,4-乙烯基二氧噻吩)/碳纳米管复合膜,实验结果表明,该复合膜修饰电极综合了聚(3,4-乙烯基二氧噻吩)(PEDOT)和碳纳米管(CNTs)两者的优点,对8-羟基-2'-脱氧鸟嘌呤核苷(8-OH-dG)的氧化具有明显的增强作用,较好地抑制尿酸的干扰,而且具有很好的重现性和稳定性.在0.1 mol/L pH 9.0的磷酸盐缓冲溶液(PBS)中,8-OH-dG的氧化峰电流与其浓度在0.014～14.0μmol/L和14.0～56.0μmol/L两个范围内成良好的线性关系,检出限可达35 nmol/L(S/N=3).

MTH2蛋白与8-氧鸟嘌呤脱氧核苷在阿尔茨海默病患者海马组织中的表达变化

目的:观察8-氧鸟嘌呤脱氧核苷三磷酸酶同源蛋白2(MTH2)及8-氧鸟嘌呤脱氧核苷(8-oxodG)在阿尔茨海默病(AD)患者海马组织标本中的表达变化,探讨在AD患者海马中二者表达的相关性。方法:选用临床及病理均诊断为AD的尸检海马组织石蜡切片作为实验组,年龄匹配且临床及病理诊断均排除AD的尸检海马组织石蜡切片作为对照组,每组各3例,用免疫组化的方法分别检测人脑海马中8-oxo-dG的含量及MTH2蛋白的表达。结果:免疫组化定量结果显示,在人脑海马组织CA1及CA3区,AD患者8-oxo-dG的表达显著高于年龄匹配对照组,而AD患者MTH2的表达显著低于年龄匹配的对照组。结论:在人脑海马组织中,DNA氧化产物8-oxo-dG含量在AD患者比年龄匹配对照组有显著提高,抗氧化修复蛋白MTH2的表达量却显著降低,提示人脑海马组织中MTH2蛋白表达量的减少及8-oxo-dG含量的增加与AD的发病过程相关。

鸟嘌呤和8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷在聚甘氨酸修饰电极上的电化学行为及其同时测定

在优化的实验条件下,利用电化学方法制备了甘氨酸修饰电极,对修饰膜的电活性进行了表征。用循环伏安法研究了鸟嘌呤(G)和8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷(8-OH-dG)在聚甘氨酸修饰电极上的电化学行为,并建立了对两者进行分别检测和同时检测的分析方法。实验结果表明,聚甘氨酸修饰电极可以增强鸟嘌呤和8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷在电极表面的吸附,并且可以加快鸟嘌呤和8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷在电极表面的电子传输,使两种电活性物质在聚甘氨酸修饰电极上的电化学信号明显增大,检测灵敏度大大提高,并且该修饰电极具有良好的稳定性和重现性,可用于鸟嘌呤和8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷的分别和同时检测。

8-羟基脱氧鸟嘌呤在慢性砷暴露小鼠心肌细胞中的表达

目的通过检测核酸损伤标志物8-羟基脱氧鸟嘌呤(8-OHdG)在砷暴露小鼠心肌细胞中的表达,为探讨砷的心脏毒性作用机制提供参考依据。方法昆明种小鼠40只,随机分为4组:1、2、4mg/L三氧化二砷染毒组和生理盐水对照组。自然饮水方式连续染毒60 d,取小鼠心脏组织固定,采用HE染色和免疫组化方法观察心肌组织的病理变化和心肌细胞的8-OHdG表达。结果染砷组心肌细胞出现核肿胀、部分核质溶解等病理改变,且其心肌细胞出现明显的8-OHdG表达,并随着砷暴露剂量的增加呈现剂量-反应关系。结论砷可导致心肌细胞的核酸损伤和病理学改变,其损伤的程度与砷的暴露剂量有关。

鼻咽癌组织中氧化性DNA损伤标志物8-硝基鸟嘌呤和8-羟基脱氧鸟苷的检测及与iNOS的关系

8-硝基鸟嘌呤(8-nitroguanine,8-NitroG)和8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-2′-deoxyguanosine,8-OHdG)是2个氧化性DNA损伤生物标志物,而诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在病理状态下催化细胞合成与氧化性DNA损伤有关的氧自由基NO.本研究通过检测鼻咽癌组织中8-NitroG、8-OHdG和iNOS的免疫反应强度,初步探究鼻咽癌的发生和发展是否与氧化性DNA损伤有关以及8-NitroG、8-OHdG与iNOS表达的关系.利用多克隆抗体8-NitroG和单克隆抗体8-OHdG、iNOS,采用双色荧光免疫组织化学方法检测鼻咽癌组织中8-NitroG、8-OHdG和iNOS的免疫反应,秩和检验统计学方法分析鼻咽癌和慢性咽炎鼻咽组织之间8-NitroG、8-OHdG和iNOS免疫反应强度的差异.结果显示,19例鼻咽癌组织细胞中,8-NitroG、8-OHdG和iNOS均为强免疫反应,8-NitroG和8-OHdG阳性率100%,iNOS阳性率94.7%,与13例慢性咽炎组织比较差异显著(P<0.05).结果提示,鼻咽癌的发生和发展与氧化性DNA损伤有关,其原因与炎症等病理刺激下鼻咽组织高表达的iNOS催化细胞合成氧自由基NO引起的8-NitroG和8-OHdGDNA损伤密切相关.另外,8-NitroG和8-OHdG有望成为辅助鼻咽癌诊断的生物标志物.

高效液相色谱-电喷雾离子阱质谱联用测定尿中的8-羟基脱氧鸟嘌呤

建立了尿样中8-羟基脱氧鸟嘌呤的HPLC—MS测定方法。尿样中的8-羟基脱氧鸟嘌呤采用WCX固相萃取小柱预富集后，以0．5％甲酸-甲醇洗脱，吹干后用0．5mL流动相溶解剩余物上机测定。采用分子的二级碎片，方法在5．0～500．0μg／L范围内呈良好线性关系，相关系数r=0．9994，检出限（S／N：3）为0．50μg/L。尿样在40．0、100．0μg/L加标水平的回收率分别为82％和76％，尿样中内源性杂质对分子二级碎片离子峰无干扰。方法具有较高的选择性和灵敏度，适合尿样等复杂基体中8-羟基脱氧鸟嘌呤的定性定量检测。

茶多酚对H_(2)O_(2)致HL-60细胞氧化损伤时DNA中8-羟基鸟嘌呤含量的影响

目的 观察茶叶的主要成分茶多酚 (Teapolyphenol,TP)对 HL- 60细胞 DNA中 8-羟基鸟嘌呤 (8- oh- G)变化的影响。方法 利用气相色谱仪 (GC/ FID)、气质联用仪 (CGC/ MS- SIM)测定 DNA中 8-羟基鸟嘌呤含量 ,同时观察细胞丙二醛 (MDA)含量、还原型谷胱甘肽 /氧化型谷胱甘肽 (GSH/ GSSG)比值变化。结果 TP作为抗氧化剂在一定的浓度范围可以减少 DNA的氧化损伤产生 8-羟基鸟嘌呤的含量 ,但当 TP高达到一定浓度时反而增高 8-羟基鸟嘌呤的含量。结论 TP对细胞 DNA氧化损伤有抑制和促进两方面作用 ,这与 TP的浓度有关 ,即一定浓度时 TP具抗氧化作用 。

维格列汀联合吡格列酮治疗2型糖尿病的效果及其对血糖、8-羟基脱氧鸟苷和炎症因子的影响

目的探讨维格列汀与吡格列酮治疗2型糖尿病的效果及其对血糖水平、8-羟基脱氧鸟苷（8-OHd G）和炎症因子水平的影响。方法选取2014年1月～2015年6月于四川省人民医院崇州分院内分泌科诊治的58例2型糖尿病患者为研究对象,以随机数字表法将患者分为维格列汀组（单独组）和维格列汀＋吡格列酮组（联合组）,每组各58例。分别比较两组患者的血糖指标及血糖波动、8-OHd G水平和炎症因子水平的变化。结果治疗后,两组空腹血糖（FPG）、餐后2 h血糖（2h PBG）、糖化血红蛋白（Hb A1c）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、超敏C反应蛋白（hs-CRP）和8-OHd G水平较治疗前显著降低（P〈0.05）;联合组血糖指标、炎症因子及8-OHd G的改善程度均明显优于单独组（P〈0.05）;两组血糖标准差（SDBG）、日内平均血糖波动幅度（MAGE）、血糖波动最大幅度（LAGE）及平均餐后血糖波动幅度（MPPGE）水平较治疗前显著下降（P〈0.05）,联合组动态血糖监测水平的下降程度明显高于单独组（P〈0.05）。联合组不良反应发生率低于单独组,但两组比较差异无统计学意义（χ^2=0.099,P=0.753）。结论维格列汀联合吡格列酮治疗2型糖尿病效果良好,能降低8-OHd G水平和炎症因子水平。

2型糖尿病患者血清8-羟基脱氧鸟苷酸水平与大血管病变的相关性

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者血清8-羟基脱氧鸟苷酸(8-OHdG)和颈动脉内膜中层厚度(IMT)的关系。方法将42例T2DM患者根据IMT的不同分成轻度组(IMT<1.0 mm,27例)和重度组(IMT≥1.0 mm或存在硬化斑块,15例),采用ELISA法测定其血清8-OHdG水平,并与健康体检者进行比较。结果两组T2DM患者的血清8-OHdG水平均明显高于正常对照组,重度组8-OHdG水平明显升高,血清8-OHdG水平与IMT呈正相关均有统计学意义(P<0.05)。结论T2DM患者血清8-OHdG水平的增高与颈动脉IMT的增厚有关,提示血清8-OHdG水平增高是T2DM患者合并早期动脉粥样硬化的危险因素之一。

8-羟基-2'-脱氧鸟苷的生物学意义及其尿中含量的测定方法

DNA中的脱氧鸟苷受到羟自由基(.OH)攻击后,其C-8位生成8-羟基-脱氧鸟苷(8-OH-dG),8-OH-dG无需进一步代谢即排入尿中。因其生成量相对较高,且不受饮食影响、能用灵敏度较高的分析方法检测等特点,已成为常用的DNA氧化损伤生物学标志。文中主要介绍了其形成机制、生物学意义及目前常用的测定方法。

2',3'-二脱氧-2',3'-二去氢鸟嘌呤核苷构象稳定性的理论研究

采用密度泛函方法在B3LYP/6-31+G**水平上研究了2',3'-二脱氧-2',3'-二去氢鸟嘌呤核苷分子(D4G)的构象.分别研究在气相中的孤立分子和一水合物异构体的相对稳定性和异构体之间的相互转变过程,分析了水分子的参与对D4G异构体的相对稳定性和几何结构参数以及自然电荷的影响.结果表明,孤立的D4G分子在气相中存在8种稳定构象,其中构象d4g-2是所有构象中最稳定的,气相中D4G主要以d4g-2存在.气相中各构象的相对稳定性为:d4g-2>d4g-1>d4g-5>d4g-3>d4g-6>d4g-4>d4g-8>d4g-7.计算得到的各构象键长和键角数据与实验值接近.一个水分子的加入对D4G分子的构型参数有所影响,基本不改变D4G分子各构象的稳定性顺序,但构象转变的能垒有所提高.氢键在分子构象中发挥了重要作用.

阳离子对8-氧-7,8-二氢-2'-去氧鸟嘌呤核苷构型的影响

采用DFT理论的M05方法选用6-311++G(d,p)基组对8-氧-7,8-二氢-2'-去氧鸟嘌呤核苷的构型和糖苷键的稳定性进行了研究,考虑了阳离子对8-oxodG的构型和N—糖苷键稳定性的影响.研究结果表明,阳离子降低了N—糖苷键的稳定性,有利于N—糖苷键的断裂."异头碳影响"和由于在碱基引入正电荷而引起的缺电子影响促进N—糖苷键以异裂过程进行裂解,正电荷或金属离子的引入对促进N—糖苷键的断裂起着重要的作用,而且,异裂过程是糖苷键断裂的首选方式.

还原型谷胱甘肽对高糖致大鼠腹膜间皮细胞8-羟基脱氧鸟苷及其修复酶8-羟基鸟嘌呤-DNA糖苷酶表达的影响

目的观察还原型谷胱甘肽(GSH)对高糖致大鼠腹膜间皮细胞8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)及其修复酶8-羟基鸟嘌呤-DNA糖苷酶(r OGG1)表达的影响,探讨其对高糖所致腹膜间皮细胞DNA氧化损伤的保护作用。方法将60只健康雄性SD大鼠按随机数字法分成3组:对照组(n=20,A组):每天1次腹腔注射生理盐水25 ml;模型组(n=20,B组):每天1次腹腔注射4.25%葡萄糖腹透液25 ml+每周1次腹腔注射乳酸红霉素6.25万IU;治疗组(n=20,C组):每天1次腹腔注射4.25%葡萄糖腹透液25 ml+GSH溶液150 mg/(kg·d)+每周1次腹腔注射乳酸红霉素6.25万IU。8周后分别处死每组各20只大鼠,取腹膜组织分别行HE及Masson染色病理学检查、酶联免疫吸附法(ELISA)测定壁层腹膜间皮细胞8-OHd G水平、实时荧光定量PCR检测壁层腹膜间皮细胞r OGG1的表达。结果 1与A组比较,B组腹膜间皮细胞8-OHd G表达上调(0.8843±0.0068,5.0733±2.0068,P<0.05),C组8-OHd G表达低于B组(5.0733±2.0068,1.6867±0.4867,P<0.05);2与A组比较,B组腹膜间皮细胞r OGG1表达减少(0.7576±0.0701,0.2226±0.0565,P<0.05),C组r OGG1表达增高(0.7576±0.0701,1.4793±0.3895,P<0.05);3与A组比较,HE染色时B组和C组可见腹膜间皮细胞变为圆形、柱形,间皮细胞肥大脱落,间皮下结缔组织明显增厚,可见血管生成以及纤维素样物质沉积,还可见成纤维细胞及单核巨噬细胞浸润,在B组表现尤为明显;4与A组比较,Masson染色显示腹膜组织有胶原沉积,B组比C组改变更明显。结论高糖致大鼠腹膜间皮细胞DNA氧化性损伤标记物8-OHd G表达增高,GSH可能通过上调DNA修复酶OGG1m RNA表达,对大鼠腹膜间皮细胞DNA具有保护和修复作用。

8-氧-2'-去氧鸟嘌呤核苷水解机理的理论研究

本文用计算化学的方法研究了有单个水分子参与的8-氧-2'-去氧鸟嘌呤核苷(8-oxodG)的N-糖苷键水解反应机理.研究结果表明,水分子有两个进攻方向,即水分子可以从去氧核糖糖环的上方和下方进攻C1'并且8-氧鸟嘌呤碱基的O8原子和N9原子都可以摘取去氧糖环的Ha2'.因此,8-oxodG与单个水分子作用的水解反应有四条不同的反应通道,且每条反应通道都包括两步,都形成类双氢呋喃中间体.O8原子摘取去氧糖糖环Ha2'的反应的两条反应途径的第一步的活化能相近,约为41.98kcal/mol;而N9原子摘取去氧糖糖环Ha2'的反应的两条反应途径的第一步的活化能也相近,约为47.31kcal/mol.碱基上O8原子摘取去氧核糖糖环Ha2'的反应的两条反应途径更具有优势.

维格列汀对2型糖尿病患者尿8-羟基脱氧鸟苷水平的影响

目的:观察维格列汀对2型糖尿病(type 2 diabetes melitus,T2DM)患者尿8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-deoxyguanosine,8-OHd G)水平的影响,探讨其抗氧化应激作用及其防治糖尿病并发症的作用。方法:将82例血糖控制欠佳的T2DM患者以随机数字表法分为联合维格列汀治疗组(A组)和磺脲类药物治疗组(B组)各41例,治疗12周。观察2组患者治疗前后空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(Hb A1c)、尿8-OHd G水平变化。结果:12周的治疗结束时,受试对象共75例,其中A组37例,B组38例(A组2例失访、2例血糖控制不达标退出;B组2例失访、1例血糖控制不达标退出)。治疗12周后,2组患者FBG、Hb A1c和尿8-OHd G水平均较治疗前明显下降(P<0.01);2组患者FBG、Hb A1c水平的差异无统计学意义(P>0.05),但2组患者尿8-OHd G水平的差异有统计学意义(P<0.05)。结论:维格列汀降低T2DM患者尿8-OHd G水平、减轻氧化应激可能是其防治糖尿病肾病等慢性并发症的机制之一。

人尿8-羟基脱氧鸟嘌呤的HPLC电化学测定方法

目的：建立高效液相色谱-电化学检测法（HPLC-ECD）测定人尿中8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷（8-OHdG）的检测方法。方法：采用Bond Elute C18小柱固相萃取尿液，ODS C18分析柱，8％甲醇醋酸缓冲液为流动相，电化学检测器检测，电极电压750mV。结果：本方法线性范围25～400μg/L，r=0．9892，回收率为91．2％～108．8％，批内和批间精密度分别为3．9％～7．5％和4．3％～8．6％，检测限为2μg/L。结论：本方法操作简便、准确度较好，已应用于正己烷接触者现场尿样的测定。

8-羟基脱氧鸟嘌呤作为可溶性铬盐职业接触者生物标志物的研究

[目的]了解职业接触可溶性铬盐人群尿中8-羟基脱氧鸟嘌呤(8-OHdG)含量及其影响因素,探讨其作为职业接触人群生物标志物的可行性。[方法]2006年,选择济南市某铬盐生产企业114名重铬酸钾作业的健康劳动者作为接触组,以无毒物接触史的当地健康农民30名为对照组,测定2组人群尿液中8-OHdG水平与作业环境铬盐浓度,测定接触组外周血淋巴细胞DNA链断裂水平、红细胞与尿液中铬浓度。[结果]尿液中8-OHdG水平接触组为(1240.494±1603.918)μg/L,对照组为(468.871±908.460)μg/L(P<0.01);尿液中8-OHdG水平与空气中个体铬盐暴露水平、红细胞中铬浓度水平、外周血淋巴细胞DNA链断裂水平的相关系数(r)分别为0.333、0.230、0.396(P<0.01);多元线性回归分析显示,铬盐劳动者年龄、接触铬盐的年限、空气中铬盐浓度对尿液中8-OHdG水平影响显著。[结论]尿液中8-OHdG水平可以作为职业接触可溶性铬盐劳动者遗传损伤效应性生物标志物,可望用于职业接触可溶性铬盐劳动者生物监测及健康危险性的评价。

H_2O_2对人淋巴细胞8-羟基-2'-脱氧鸟苷三磷酸酶表达及端粒长度的影响

目的:探讨人外周血淋巴细胞遭受H2O2损伤时,8-羟基-2'-脱氧鸟苷三磷酸酶(8鄄oxo鄄dGTPase)的表达及端粒长度的变化,评估氧化应激对端粒长度的影响。方法:体外培养人外周血淋巴细胞,分为正常对照组、氧化组和抗氧化组,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT鄄PCR)及凝胶成像技术,测定8鄄oxo鄄dGTPase的mRNA表达水平,并应用Southern杂交技术检测端粒长度的变化。结果:①随着H2O2作用时间的延长,8鄄oxo鄄dGTPasemRNA的相对含量也增加,尤以氧化组增加最显著(P<0.05),而抗氧化组与对照组相比较则差异无显著性(P>0.05);②端粒长度则随着时间的变化表现为缩短,且3组之间均有差异(P<0.05)。结论:①8鄄oxo鄄dGTPase的表达随着氧化应激的程度加深而显著增加;②维生素C具有一定的抗氧化作用,它能明显减低过氧化损伤,抑制8鄄oxo鄄dGTPase的生成,同时能减缓端粒缩短的速率;③氧化应激在一定程度上可以引起人淋巴细胞端粒长度的缩短。

氧化应激对人淋巴细胞8-羟基-2'-脱氧鸟苷三磷酸酶表达的影响

目的:探讨人外周血淋巴细胞遭受H_2O_2损伤时,8-羟基-2′-脱氧鸟苷三磷酸酶(8-oxo-dGTPase)表达的变化。方法:体外培养外周血淋巴细胞,然后分为正常对照组、氧化组和抗氧化组,采用逆转录PCR及凝胶成像技术,测定8-oxo-dGTPase的mRNA表达水平。结果:人淋巴细胞经H_2O_2持续作用,其8-oxo-dGTPase表达的相对水平也明显增加;而经维生素C抗氧化处理后,8-oxo-dGTPase表达的水平与正常对照组相比则无明显改变。结论:随着氧化应激的持续作用,细胞8-oxo-dGTPase的表达也明显增加,提示8-oxo-dGTPase可以作为氧化应激的标记物;而预先给予维生素C处理,可以明显抑制H_2O_2所造成的DNA损伤。