miR-29b-3p调控CXCL9/CXCR3轴抑制多柔比星诱导的心力衰竭

探讨小RNA miR-29b-3p对多柔比星诱导的心力衰竭的影响,并对其相关机制进行分析。方法 采用DOX诱导大鼠建立急性心肌毒性模型。并利用HE染色、Masson染色、TUNEL染色检测心脏组织的损伤情况。采用ELISA实验检测肌酸磷酸激酶(CPK)、同工酶(CK-MB)及乳酸脱氢酶(LDH)的水平。并通过GEO数据库筛选差异表达的miRNA,使用TargetScan在线工具(http://www.targetscan.org/vert_72/)分析miRNA的靶基因。并采用实时荧光定量PCR实验和双荧光素酶报告实验对miRNA的表达和与靶基因的结合进行验证。结果 与对照组大鼠相比,DOX诱导大鼠出现明显的心肌损伤,大鼠血清中,CPK、CK-MB和LDH浓度明显增加。同时,DOX促进心肌细胞中CXCR3和CXCL9的表达。DOX诱导急性心肌损伤后miR-29b-3p表达降低,miR-29b-3p直接靶向CXCL9调控DOX诱导的心肌损伤。结论 经过DOX诱导后,心肌细胞miRNA-29b-3p表达下降,CXCL9表达增加并促进CXCR3介导的炎症反应进而导致心肌损伤。

华蟾素通过调控MYH9/USP7/c-MYC通路抑制急性髓系白血病细胞免疫逃逸

【目的】探讨华蟾素调控肌球蛋白重链9(MYH9)/泛素特异性蛋白酶7(USP7)/骨髓细胞瘤病毒癌基因(c-MYC)通路对急性髓系白血病(AML)细胞免疫逃逸的影响。【方法】(1)体内实验:建立裸鼠异种移植瘤模型,评估华蟾素对AML细胞在体内生长和免疫逃逸的影响。(2)体外实验:使用不同浓度的华蟾素处理人AML细胞株HL-60,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞活力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。将HL-60细胞与活化的CD8^(+)T细胞共培养,流式细胞术检测CD8^(+)T细胞表面标志物CD25的表达,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测共培养上清液中细胞因子[白细胞介素2(IL-2)和干扰素(IFN-γ)]的水平,CytoTox96非放射性细胞毒性分析评估CD8^(+)T细胞对HL-60细胞的毒性。Western Blot法检测MYH9、USP7和c-MYC的蛋白表达,免疫共沉淀(Co-IP)法检测MYH9、USP7和泛素化之间的相互作用。转染MYH9过表质粒,验证华蟾素在AML中的作用机制。【结果】华蟾素抑制裸鼠移植瘤生长,增强CD8^(+)T细胞抗肿瘤的能力。华蟾素浓度依赖性地抑制HL-60细胞活力、侵袭。华蟾素处理后上调CD8^(+)T细胞表面标志物CD25的表达,同时还上调IL-2和IFN-γ水平。华蟾素增强CD8^(+)T细胞对HL-60细胞的毒性。华蟾素抑制HL-60细胞MYH9、USP7和c-MYC的蛋白表达,MYH9通过募集USP7促进c-MYC去泛素化,华蟾素抑制MYH9介导的c-MYC去泛素化。【结论】华蟾素可通过抑制MYH9的表达进而减少去泛素化酶USP7对c-MYC的募集,促进c-MYC泛素化降解,从而抑制AML细胞免疫逃逸。

芒柄花素通过miR-1229/ZDHHC9分子轴对胶质瘤细胞增殖、活力及凋亡的影响

目的:探讨芒柄花素对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响及其分子作用机制。方法:构建皮下移植瘤小鼠模型,灌胃给予5.72、14.31、22.9、31.49 mg/kg剂量的芒柄花素,观察肿瘤重量、体积变化;免疫组织化学法检测肿瘤组织增殖细胞核抗原(PCNA)表达。用不同浓度(20、50、80、110μmol/L)的芒柄花素处理TJ905细胞,并将TJ905细胞分为空白对照组、110μmol/L芒柄花素组、110μmol/L芒柄花素+miR-1229组、110μmol/L芒柄花素+miR-1229+ZDHHC9组、miR-NC组、miR-1229 mimic组。用Edu实验、CCK-8实验检测细胞增殖能力,TUNEL实验检测细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)实验检测miR-1229、ZDHHC9 mRNA表达水平,在线网站及双荧光素酶报告基因法验证miR-1229与ZDHHC9靶向结合。结果:与空白对照组比较,不同剂量的芒柄花素处理组肿瘤体积、重量及PCNA蛋白表达均显著降低(均P<0.05)。与对照组比较,不同浓度(20、50、80、110μmol/L)的芒柄花素处理后,细胞增殖率显著降低,凋亡率显著升高(均P<0.05);与110μmol/L芒柄花素组比较,110μmol/L芒柄花素+miR-1229组细胞增殖率、细胞活力均显著降低,凋亡率显著增加(均P<0.05);与110μmol/L芒柄花素+miR-1229组比较,110μmol/L芒柄花素+miR-1229+ZDHHC9组细胞增殖率、细胞活力均显著增加,凋亡率显著下降(均P<0.05);双荧光素酶报告基因实验验证miR-1229与ZDHHC9靶向结合。结论:芒柄花素可能通过miR-1229/ZDHHC9分子轴抑制胶质瘤细胞增殖,并诱导其凋亡。

玉屏风颗粒通过调控TLR9/AP-1信号通路对过敏性鼻炎大鼠鼻黏膜重塑、白三烯水平及免疫调节的作用

目的 探究玉屏风颗粒通过调控Toll样受体(TLR)9/激活蛋白(AP)-1信号通路对过敏性鼻炎大鼠鼻黏膜重塑、白三烯水平及免疫调节的作用。方法 选取大鼠60只,除健康10只外其余建立过敏性鼻炎模型,所有大鼠分为健康(A)组、模型(B)组、玉屏风颗粒低剂量(C低)组、玉屏风颗粒中剂量(C中)组、玉屏风颗粒高剂量(C高)组、氯雷他定(D)组,各10只。分组后给予相应药物干预。其中,C高、中、低组用5.40、2.70、1.35 g/kg灌胃,D组以0.90 mg/kg灌胃,A、B组每天进行等体积生理盐水灌胃,均连续干预30 d。经酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素(IL)-4、组织胺(HIS)、血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、免疫球蛋白(Ig)E,苏木素-伊红(HE)染色观察组织形态,对鼻黏膜中嗜酸性粒细胞(EOS)检测,Western印迹检测细胞癌基因fos蛋白(C-Fos)、原癌基因蛋白(C-Jun),反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测白三烯受体(CysLT1-R)和CysLT2-R基因mRNA表达。结果 与A组比较,B组血清中IL-4、TNF-α、IgE、HIS表达、鼻黏膜组织中EOS细胞及CysLT1和CysLT2 mRNA表达、C-Fos、C-Jun蛋白水平明显增加(P<0.05);与B组相比,C中组血清中IL-4、TNF-α、IgE、HIS表达、鼻黏膜组织中EOS细胞及CysLT1和CysLT2 mRNA表达、C-Fos、C-Jun蛋白表达明显降低(P<0.05);与C中组比较,C高组血清中IL-4、TNF-α、IgE、HIS表达、鼻黏膜组织中EOS细胞及CysLT1和CysLT2 mRNA表达、C-Fos、C-Jun蛋白表达明显降低(P<0.05);与C高组比较,D组血清中IL-4、TNF-α、IgE、HIS表达、鼻黏膜组织中EOS细胞及CysLT1和CysLT2 mRNA表达、C-Fos、C-Jun蛋白表达明显升高(P<0.05);且B组与C低组比较无明显差异(P>0.05),C中组与D组比较无明显差异(P>0.05)。A组鼻腔内黏膜组织良好,无EOS浸润、充血;B组与C低组鼻腔内黏膜组织损坏严重,大量EOS浸润产生及黏膜上皮脱落,黏膜下腺体增生和血管扩张充血;C中组与D组鼻黏膜仍有部分肿胀及嗜酸性粒细胞,仍有炎性浸润现象;C高组鼻腔黏膜中仍有少量水肿和轻度血管扩张现象,EOS浸润明显降低。结论 过敏性鼻炎大鼠经玉屏风颗粒治疗后,白三烯表达降低,黏膜病理及免疫功能改善,机制可能与调节TLR9/AP-1信号通路相关。

溃疡性结肠炎患者血清Chemerin与Th9/Treg细胞失衡的相关性分析

目的探究溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)患者血清趋化素(Chemerin)水平与Th9/Treg细胞失衡的相关性。方法选取2020年11月至2021年11月于我院确诊为UC的患者85例(UC组)和健康体检者80名(对照组)。流式细胞术检测Th9/Treg的比例;采用ELISA法检测血清中IL-9、CRP、IL-10、IL-17的含量。统计学分析Chemerin表达与Mayo评分的相关性;与Th9、Treg、Th9/Treg以及相关细胞因子之间的相关性。结果UC组Chemerin水平和Mayo评分均显著高于对照组,UC患者重度组Chemerin水平和Mayo评分均显著高于中度组和轻度组,中度组显著高于轻度组(P<0.05);Chemerin表达与Mayo评分之间呈正相关(P<0.05);流式细胞术结果显示,UC患者血清中Th9/CD4+的比例显著升高,Treg/CD4+比例显著降低,Th9/Treg比例显著升高(P<0.05);UC组Treg比例以及IL-10水平显著低于对照组,Th9比例、Th9/Treg以及IL-9、CRP、IL-17水平显著高于对照组(P<0.05);UC患者重度组的Treg比例、IL-10水平显著低于中度组和轻度组,中度组显著低于轻度组(P<0.05);UC患者重度组的Th9比例、Th9/Treg、IL-9、CRP、IL-17水平显著高于中度组和轻度组,中度组显著高于轻度组(P<0.05);UC组患者血清Chemerin表达与Th9比例、Th9/Treg、CRP、IL-17、IL-9水平呈正相关,与Treg比例、IL-10水平呈负相关(P<0.05)。结论UC患者血清Chemerin水平与Th9/Treg细胞失衡有密切关系。

基于AE9/AP9地球辐射带模型的太阳电池性能衰退仿真研究

作为航天器上重要的能源供应装置,太阳电池的性能表现对保证航天器的正常运行至关重要。在评估太阳电池的性能表现时,需要考虑的一个重要因素是航天器所处的轨道辐射环境。为了更准确地评估太阳电池在不同轨道环境下的工作效能,文章将AE9/AP9模型应用于太阳电池性能衰退模型中,并就GaAs太阳电池持续多年的轨道粒子环境对其造成的影响进行仿真实验,实验结果表明,所设计模型可以更加准确地评估太阳电池的在轨性能变化。

基于天枢与上巨虚穴经皮神经电刺激观察对溃疡性结肠炎模型大鼠结肠组织TLR9/MyD88/NF-κB蛋白表达的影响

目的基于“合募配穴”原则观察经皮神经电刺激(transcutaneous electrical nerve stimulation,TENS)对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型大鼠结肠组织Toll样受体9(toll-like receptor 9,TLR9)/髓样分化因子88(myeloid differentiation factor88,MyD88)/核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路相关蛋白表达的影响,探讨TENS治疗UC的相关机制。方法从48只SPF级成年SD大鼠中随机抽取12只作为空白组。其余36只通过2-4-6三硝基苯磺酸(2-4-6 trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS)/乙醇法制备UC大鼠模型,成模后再次随机分为模型组、TENS组、阳性药物组,每组12只。成模后第1天开始干预:模型组仅行捆绑固定;TENS组捆绑固定后刺激天枢、上巨虚两穴;阳性药物组用225 mg/kg剂量的柳氮磺胺吡啶混悬液灌胃。以上各组干预均每天1次,共10次。观察记录各组大鼠每天食量和体质量。干预结束后,HE染色观察各组大鼠结肠组织病理学变化;ELISA法检测结肠组织白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)炎性因子的含量;Western blot法检测结肠组织TLR9、My D88、NF-κB蛋白的表达量变化。结果(1)与空白组相比:模型组大鼠结肠组织出现明显溃疡面,上皮细胞大面积萎缩,炎性因子大量浸润,IL-6、TNF-α炎性因子含量升高(P<0.05);TLR9、MyD88、NF-κB蛋白表达量上调(P<0.05)。(2)与模型组相比:TENS组和阳性药物组结肠组织损坏情况较轻,上皮细胞黏液较充分,腺体分支较少,炎性细胞浸润面积小;IL-6、TNF-α含量减少(P<0.05);TLR9、NF-κB蛋白表达量降低(P<0.05)。(3)与阳性药物组相比:TENS组TNF-α、IL-1β的含量及TLR9、MyD88、NF-κB蛋白表达量相对较高(P<0.05)。结论TENS能够保护肠道上皮细胞,减轻肠道炎症,其机制可能与降低结肠细胞促炎因子水平,抑制TLR9/MyD88/NF-κB信号通路蛋白的过表达有关。

基于蛋白激酶NEK9/MTA2信号通路泛素化修饰探讨胃癌的转移机制

目的:基于永离有丝分裂基因A相关激酶9(NEK9)/转移相关肿瘤基因家族2(MTA2)信号通路泛素化修饰探讨胃癌(GC)的转移机制。方法:使用癌症基因组图谱(TCGA)和Kaplan-Meier Plotter数据库分析NEK9表达与GC分期、预后之间的关联。体外实验中,将GC细胞分为:对照组、shNC组、shNEK9组、shNC+NC-OE组、shNEK9+NC-OE组和shNEK9+MTA2-OE组。分别采用MTT和Transwell法测定细胞的增殖、迁移和侵袭,并通过Western blot检测NEK9、MTA2、上皮间充质转化(EMT)标记和PI3K/AKT信号通路蛋白表达。结果:TCGA数据库分析显示,NEK9 mRNA在肿瘤组织中的表达明显上调,并且与TNM分期较晚和NEK9高表达者的预后较差密切相关。此外,NEK9在7个GC细胞系中的表达明显高于正常胃上皮GES-1细胞(P<0.05)。与对照组相比,shNEK9组细胞活力、相对集落形成、EdU阳性细胞数、侵袭和迁移细胞数均显著降低(P<0.05)。此外,在shNEK9组细胞中,E-钙粘蛋白水平上调(P<0.05),波形蛋白水平下调(P<0.05)。通过免疫共沉淀试验证明NEK9与MTA2有相互作用。NEK9敲低加速了HGC-27细胞中MTA2的降解,并且MTA2泛素化在NEK9沉默的细胞中增加。与shNEK9+NC-OE组组相比,shNEK9+MTA2-OE组相对集落形成、EdU阳性细胞数和迁移和侵袭数均显著增加(P<0.05)。结论:NEK9在GC中明显上调,其敲低在体外抑制GC细胞的生长和转移。NEK9可能通过去泛素化途径稳定MTA2进而激活PI3K-AKT信号通路来对GC细胞产生促癌影响。

脑脊液基质金属蛋白酶9水平和基质金属蛋白酶9/基质金属蛋白酶组织抑制剂1比值与结核性脑膜炎病情严重程度的相关性及对预后的预测价值研究

目的 探讨脑脊液基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平和MMP-9/基质金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)比值与结核性脑膜炎病情严重程度的相关性及对预后的预测价值。方法 选择2021年1月至2023年2月在湖南省胸科医院住院的结核性脑膜炎患者72例为观察组,以同期住院的非肿瘤非感染性头痛患者52例为对照组。比较2组患者脑脊液MMP-9水平和MMP-9/TIMP-1比值。根据改良的英国医学研究理事会结核性脑膜炎分期标准将观察组患者分为Ⅰ期组、Ⅱ期组、Ⅲ期组,比较3组患者MMP-9水平和MMP-9/TIMP-1比值。根据预后情况将观察组患者分为预后良好组和预后不良组,比较2组MMP-9水平和MMP-9/TIMP-1比值,并以受试者工作特征(ROC)曲线法评估各指标对结核性脑膜炎的预后预测价值。结果 观察组MMP-9水平及MMP-9/TIMP-1比值均大于对照组[(96±21)μg/L比(50±12)μg/L、(1.21±0.33)比(0.67±0.15)](均P<0.05),但2组间TIMP-1水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。不同严重程度结核性脑膜炎患者MMP-9水平及MMP-9/TIMP-1比值差异均有统计学意义,且均呈Ⅰ期<Ⅱ期<Ⅲ期(均P<0.05);不同严重程度结核性脑膜炎患者TIMP-1水平差异均无统计学意义(均P>0.05)。相关性分析结果显示,结核性脑膜炎病情严重程度与MMP-9水平及MMP-9/TIMP-1比值均呈正相关(r=0.861、P=0.012;r=0.731、P=0.008),与TIMP-1无相关性(r=0.220,P=0.063)。预后不良组患者MMP-9水平及MMP-9/TIMP-1比值均高于预后良好组(均P<0.05),2组TIMP-1水平差异无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线分析结果显示,MMP-9水平、MMP-9/TIMP-1比值预测结核性脑膜炎患者预后不良的截断值分别为112.04μg/L、1.41,曲线下面积分别为0.803、0.905(均P<0.05)。结论 结核性脑膜炎患者脑脊液MMP-9水平、MMP-9/TIMP-1比值明显升高,且MMP-9水平、MMP-9/TIMP-1比值与结核性脑膜炎的病情严重程度呈正相关,并可用于预测患者预后。

Neural stem cell-derived exosomes regulate cell proliferation,migration,and cell death of brain microvascular endothelial cells via the miR-9/Hes1 axis under hypoxia

Background:Our previous study found that mouse embryonic neural stem cell(NSC)-derived exosomes(EXOs)regulated NSC differentiation via the miR-9/Hes1 axis.However,the effects of EXOs on brain microvascular endothelial cell(BMEC)dysfunction via the miR-9/Hes1 axis remain unknown.Therefore,the current study aimed to determine the effects of EXOs on BMEC proliferation,migration,and death via the miR-9/Hes1 axis.Methods:Immunofluorescence,quantitative real-time polymerase chain reaction,cell counting kit-8 assay,wound healing assay,calcein-acetoxymethyl/propidium iodide staining,and hematoxylin and eosin staining were used to determine the role and mechanism of EXOs on BMECs.Results:EXOs promoted BMEC proliferation and migration and reduced cell death under hypoxic conditions.The overexpression of miR-9 promoted BMEC prolifera-tion and migration and reduced cell death under hypoxic conditions.Moreover,miR-9 downregulation inhibited BMEC proliferation and migration and also promoted cell death.Hes1 silencing ameliorated the effect of amtagomiR-9 on BMEC proliferation and migration and cell death.Hyperemic structures were observed in the regions of the hippocampus and cortex in hypoxia-induced mice.Meanwhile,EXO treatment improved cerebrovascular alterations.Conclusion:NSC-derived EXOs can promote BMEC proliferation and migra-tion and reduce cell death via the miR-9/Hes1 axis under hypoxic conditions.Therefore,EXO therapeutic strategies could be considered for hypoxia-induced vascular injury.

氧化低密度脂蛋白通过PCSK9/LRP1信号途径促神经细胞凋亡的双向调节

目的阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是多种危险因素引起的中枢神经系统退行性疾病,其中神经细胞凋亡是其主要病理基础之一。高脂血症是AD发生的高危因素,可导致脑组织内氧化低密度脂蛋白(oxidized lowdensity lipoprotein,ox-LDL)水平增高。前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin kexin type 9,PCSK9)是一个与血脂代谢密切相关的蛋白酶,但有研究显示其与AD发生可能相关。本研究旨在探索PCSK9在介导ox-LDL促神经细胞凋亡中的作用及其机制,进一步阐述高脂血症导致AD等神经退行性疾病的发生机制。方法首先用不同浓度ox-LDL(0、25、50、75、100 mg/L)处理PC12细胞24 h,油红O染色检测PC12细胞脂质蓄积,Hoechst33258染色和流式细胞术检测PC12细胞凋亡,ELISA检测PC12分泌的β淀粉样肽(amyloidβ-peptide,Aβ)含量,蛋白质印迹(Western blot)法检测SREBP2、PCSK9和LRP1的表达。然后用75 mg/L ox-LDL处理PC12细胞不同时间(0、6、12、24、48 h),Western blot检测SREBP2、PCSK9和LRP1的表达情况。最后,100 nmol/L PCSK9 siRNA转染PC12细胞48 h后,用75 mg/L ox-LDL处理PC12细胞24 h,Hoechst33258染色和流式细胞术检测PC12细胞的凋亡率,Western blot检测PCSK9、LRP1、PI3K、AKT、P-PI3K、P-AKT、NF-κB、Bcl-2、Bax、Caspase-9和Caspase-3的表达,ELISA检测PC12细胞的Aβ分泌量。结果ox-LDL可以增加PC12细胞脂质蓄积,促进PC12细胞凋亡和Aβ分泌,同时增加PC12细胞中SREBP2和PCSK9的表达,减少LRP1的表达。敲低PCSK9的表达可以通过PI3K/AKT通路和NF-κB-Bcl-2/Bax-Caspase-9/3通路减弱ox-LDL诱导的PC12细胞凋亡,同时增加PC12细胞中Aβ的分泌。结论ox-LDL通过诱导PC12细胞中PCSK9表达增加,降低LRP1的表达,进而影响下游的不同信号途径,从而在ox-LDL诱导PC12细胞凋亡中发挥双向调节作用。

EPO、IL-1β、MMP-9/TIMP-1与烧伤患者瘢痕评分、创面愈合时间关系及对创面愈合质量的预测价值

目的:探讨促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)、白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、基质金属蛋白酶-9/基质金属蛋白酶抑制剂-1(Matrix metalloproteinase-9/Tissue inhibitor of metalloproteinase-1,MMP-9/TIMP-1)与烧伤患者瘢痕评分、创面愈合时间关系及对创面愈合质量的预测价值。方法:选取2018年5月-2021年1月笔者科室收治的113例深Ⅱ度烧伤患者,采用削痂植皮联合外用重组人粒细胞-巨噬细胞刺激因子治疗,根据创面愈合质量分为良好组(n=88)、不良组(n=25),比较两组基线资料及治疗前、治疗5 d、10 d后EPO、IL-1β、MMP-9/TIMP-1,应用Pearson分析治疗5 d、10 d后EPO、IL-1β、MMP-9/TIMP-1与温哥华瘢痕量表(Vancouver scar scale,VSS)、创面愈合时间关系,采用多因素Logistic回归方程分析创面愈合质量的相关影响因素,采用受试者工作特征曲线(Receiver operating characteristic,ROC)及ROC下面积(Area under the curve,AUC)分析治疗5 d、10 d后EPO、IL-1β、MMP-9/TIMP-1,预测创面愈合质量价值。结果:不良组创面愈合时间、VSS评分数值均高于良好组(P<0.05);不良组治疗5 d、10 d后EPO低于良好组,IL-1β、MMP-9/TIMP-1高于良好组,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗5 d、10 d后EPO与VSS评分、创面愈合时间呈负相关(P<0.05);治疗5 d、10 d后IL-1β、MMP-9/TIMP-1与VSS评分、创面愈合时间呈正相关(P<0.05);将创面愈合时间、VSS评分控制后,治疗5 d、10 d后EPO、IL-1β、MMP-9/TIMP-1仍与创面愈合质量相关(P<0.05);治疗10 d后EPO、IL-1β、MMP-9/TIMP-1的AUC大于治疗5 d后,且EPO、IL-1β联合MMP-9/TIMP-1的AUC大于任一单一指标。结论:EPO、IL-1β、MMP-9/TIMP-1与烧伤患者瘢痕评分、创面愈合时间、创面愈合质量有关,联合检测能为临床预测创面质量提供有效参考,并有望成为促进创面愈合、提高愈合质量的一个干预靶点。

血清铁、CA19-9/GGT比值与肝细胞癌微血管侵犯、术后复发和预后的关系

目的:分析血清铁、癌胚抗原19-9(CA19-9)/γ-谷氨酰转肽酶(GGT)比值与肝细胞癌微血管侵犯(MVI)、术后复发和预后的关系。方法:选择2020年3月至2023年3月我院收治的80例肝细胞癌患者(肝癌组)和53例健康志愿者(对照组),根据是否发生MVI将患者分为MVI组(46例)和非MVI组(34例)。术前检测血清铁、CA19-9/GGT比值,术后定期随访,统计术后复发和总生存(OS)情况,根据复发情况分为复发组(26例)和非复发组(54例)。受试者工作特征(ROC)曲线分析血清铁和CA19-9/GGT诊断术前MVI的价值。分析血清铁、CA19-9/GGT比值与肝细胞癌MVI、术后复发和预后的关系。结果:肝癌组血清铁、CA19-9/GGT比值均高于对照组(P<0.05),肝内转移、TNM分期Ⅲ期、低度分化肝细胞癌患者血清铁、CA19-9/GGT比值高于无肝内转移、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、高中分化患者(P<0.05)。MVI组血清铁、CA19-9/GGT比值均高于非MVI组(P<0.05),复发组血清铁、CA19-9/GGT比值均高于非复发组(P<0.05)。血清铁和CA19-9/GGT诊断术前MVI的截断值分别为56.98μmol/L、2.53,曲线下面积为0.767、0.882,联合诊断为0.934,高于单独诊断(P<0.05)。血清铁高水平、CA19-9/GGT高比值肝细胞癌患者OS生存率低于血清铁低水平、CA19-9/GGT低比值患者(P<0.05)。TNM分期Ⅲ期、高血清铁水平、高CA19-9/GGT比值是肝细胞癌患者不良预后的危险因素(P<0.05)。结论:肝细胞癌患者血清铁水平和CA19-9/GGT比值增高,与术前MVI、术后复发和预后不良有关。

枸杞多糖通过调控TLR9/AP-1信号通路对变应性鼻炎大鼠Th1/Th2细胞因子及鼻黏膜中嗜酸性粒细胞炎症的影响

目的探究枸杞多糖通过调控Toll样受体9/激活蛋白-1(TLR9/AP-1)信号通路对变应性鼻炎大鼠Th1/Th2细胞因子、鼻黏膜中嗜酸性粒细胞炎症的影响。方法选取60只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常(A)组,模型(B)组,糠酸莫米松(C)组,枸杞多糖(D)组,TLR9/AP-1信号通路抑制剂(E)组,TLR9/AP-1信号通路抑制剂联合枸杞多糖(F)组,每组各10只,对B、C、D、E、F组采用卵清蛋白致敏法建立变应性鼻炎模型,A组不建立该模型。建模成功后,对C组给予1喷/侧的糠酸莫米松喷鼻治疗,对D组灌胃100 mg/kg的枸杞多糖,对E组灌胃20 mg/kg AP-1抑制剂SP100030,对F组给予SP100030联合枸杞多糖,A、B组同期给予灌胃同体积生理盐水,对大鼠鼻部症状进行评分,HE染色法检测鼻黏膜组织病理形态及嗜酸性粒细胞并计数,ELISA法检测大鼠血清中Th1/Th2细胞因子水平,免疫印迹法检测鼻黏膜组织中TLR9/AP-1信号通路相关蛋白表达。结果与A组相比,B组鼻部症状评分、鼻黏膜中嗜酸性粒细胞数目、血清IL-4含量显著升高(P<0.05),血清中INF-γ含量显著降低(P<0.05);与B组比较,C、D两组鼻部症状评分、鼻黏膜中嗜酸性粒细胞数目、血清IL-4含量显著降低(P<0.05),血清中INF-γ含量显著升高(P<0.05),且D组比C组变化显著(P<0.05);A组大鼠鼻黏膜组织结构完整,B组鼻黏膜上皮结构紊乱且不完整,出血及嗜酸性粒细胞等炎性细胞浸润;与B组相比,C、D组病理状态明显改善,嗜酸性粒细胞明显减少;与A组比较,B组鼻黏膜组织中TLR9、AP-1蛋白表达显著升高(P<0.05),与B组比较,C、D组鼻黏膜组织中TLR9、AP-1蛋白表达显著降低(P<0.05),且D组比C组变化显著(P<0.05),而E组与D组相比无明显差异(P>0.05),F组比E组降低明显(P<0.05)。结论枸杞多糖可有效调控变应性鼻炎大鼠Th1/Th2细胞因子水平、减轻鼻黏膜中嗜酸性粒细胞炎症,其机制可能与抑制TLR9/AP-1信号通路有关。

LncRNA H19介导TSPAN9/ITGB1基因对食管癌细胞生物活性的作用机制

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)H19介导TSPAN9/ITGB1基因对食管癌细胞生物活性的作用机制。方法检测不同食管鳞癌细胞株中LncRNA H19水平。将食管癌KYSE30细胞分为EC组(无转染食管癌细胞株),NC组(食管癌细胞转染si-NC),干扰组(食管癌细胞转染LncRNA H19-siRNA)。聚合酶链反应(PCR)检测证实LncRNA H19转染成功后,采用噻唑蓝(MTT)、流式细胞仪、Transwell小室及划痕实验检测KYSE30生物活性,采用Western印迹及PCR检测时增加干扰Ⅱ组(干扰组上+TSPAN9模拟物+ITGB1-siRNA),检测TSPAN9/ITGB1蛋白及mRNA相对表达。结果在不同食管癌细胞株中均能够检测出LncRNA H19相对表达,在KYSE30食管癌细胞株中表达最高,选择KYSE30细胞进行后续实验;NC组和EC组KYSE30中LncRNA H19表达比较无显著差异(P>0.05),干扰组明显低于EC组、NC组(P<0.05);各组KYSE30在0 h及24 h时细胞增殖比较无显著差异(P>0.05),从48 h时起干扰组增殖抑制逐渐升高,与EC组、NC组比较,增值明显降低(P<0.05);NC组和EC组KYSE30细胞凋亡率比较无显著差异(P>0.05),干扰组凋亡率明显高于EC组、NC组(P<0.05);NC组和EC组KYSE30细胞侵袭、迁移数目比较无显著差异(P>0.05),干扰组细胞侵袭、迁移数目明显低于EC组、NC组(P<0.05);EC组和NC组TSPAN9/ITGB1蛋白及mRNA比较均无显著差异(P>0.05),干扰组与NC组比较存在显著差异(P<0.05),干扰Ⅱ组与干扰组比较存在显著差异(P<0.05)。结论LncRNA H19在食管癌KYSE30细胞中表达较高,转染LncRNA H19-siRNA后KYSE30细胞生物活性降低,作用机制与激活TSPAN9、抑制ITGB1表达相关。

外周血Th9/Treg在不同程度慢性乙型病毒性肝炎患者中的变化及意义

目的 探讨外周血Th9/Treg在不同程度慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者中的变化及意义。方法 收集2019年1月至2020年12月杭州市第三人民医院收治的乙型肝炎病毒(HBV)感染者150例,分为HBV携带组、轻度CHB组、中度CHB组、重度CHB组及乙肝肝硬化组,每组各30例;同时选取健康志愿者20例设为对照组。记录患者及健康志愿者的性别及年龄,完成HBV血清学标志物、血清肝功能、HBV-DNA、外周血Th9及Treg等指标检测。结果HBV感染组与对照组Th9/Treg差异无统计学意义(P> 0.05),Th9及Treg水平差异均有统计学意义(均P <0.05)。随着CHB程度加重,Th9频率逐渐升高,Treg频率逐渐降低,Th9/Treg逐渐升高,5组Th9、Treg及Th9/Treg差异均有统计学意义(均P <0.05)。Th9与Treg呈负相关(r=-0.485,P=0.000);Th9细胞与丙氨酸氨基转移酶(ALT)呈正相关(r=0.364,P=0.000),与总胆红素(TBi L)呈正相关(r=0.407,P=0.000),与HBV-DNA呈负相关(r=-0.076,P=0.353);Treg细胞与ALT呈负相关(r=-0.188,P=0.02),与TBi L呈负相关(r=-0.146,P=0.075),与HBV-DNA呈负相关(r=-0.035,P=0.667)。结论 HBV感染中Th9可能起促炎作用,Treg可能起抗炎作用,Th9/Treg影响CHB炎症程度。

芪蛭通脉颗粒对冠心病模型大鼠MMP-9/TIMP-1影响的研究

目的观察芪蛭通脉颗粒对冠心病模型大鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)/基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的调节作用,研究芪蛭通脉颗粒治疗冠心病的作用机理。方法将Wistar大鼠随机分为芪蛭通脉颗粒低、中、高剂量组,血塞通滴丸组、模型组和空白组,每组10只,共60只。造模成功后,连续用药4周。治疗结束后,ELISA法检测血清MMP-9、TIMP-1和心肌组织MMP-9、TIMP-1水平,检测凝血功能[活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(FIB)]及大鼠肝、肾功能[谷丙转氨酶(ALT)、血清尿素氮(BUN)、血清肌酐(Cr)]。结果与空白组比较,模型组、血塞通滴丸组、芪蛭通脉低剂量组大鼠血清MMP-9水平显著升高(P<0.01);与空白组比较,模型组TIMP-1水平降低(P<0.05)。芪蛭通脉中、高剂量组与模型组比较MMP-9水平降低(P<0.05)。芪蛭通脉中、高剂量组与模型组比较TIMP-1水平显著升高(P<0.01)。各组凝血功能未见异常,模型组ALT、Cr升高(P<0.05)。结论芪蛭通脉颗粒可以降低MMP-9水平,升高TIMP-1水平,可能的作用机制是抑制MMP-9的释放,促进TIMP-1生成,抑制细胞外基质的降解,稳定斑块,延缓动脉粥样硬化进程。未发现低、中、高剂量芪蛭通脉颗粒致凝血功能障碍及肝肾功异常。

淫羊藿苷基于GDF-9/Smads对多囊卵巢小鼠排卵的作用

目的探讨淫羊藿苷(icariin,ICA)对多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)小鼠排卵障碍和卵泡发育的作用。方法取50只小鼠,40只用脱氢表雄酮法建立PCOS模型,随机分为模型组及ICA低剂量、中剂量和高剂量组,每组10只,剩余10只未建立模型的小鼠作为对照组。ICA低剂量、中剂量和高剂量组分别按25、50、75 mg·kg^(-1)腹腔注射0.5 mL ICA(溶于9 g·L^(-1)氯化钠注射液0.5 mL中),对照组和模型组腹腔注射9 g·L^(-1)氯化钠注射液,比较各组小鼠激素水平、脏器指数、卵巢形态学差异、卵母细胞凋亡率、生长分化因子9(growth differentiation factor-9,GDF-9)、骨形成蛋白Ⅱ型受体(bone morphogenetic protein typeⅡreceptor,BMPR-Ⅱ)、激活素受体样激酶5(activin receptor like kinase 5,ALK5)、磷酸化Smad蛋白2(phospho-Smad protein 2,p-Smad2)及p-Smad3蛋白水平的差异。结果HE结果显示ICA各剂量组小鼠各级卵泡数量增多,颗粒细胞层数增加、囊性卵泡数量减少;ICA各剂量组睾酮激素(testosterone,T)、促黄体生成激素(luteinizinghor mone,LH)、抗缪勒管激素(anti-Müllerian hormone,AMH)水平、卵巢指数、囊性卵泡数量以及卵泡细胞凋亡率较模型组降低,卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)、雌二醇(estradiol,E 2)水平、子宫指数、生长卵泡数量、黄体数量、GDF-9、BMPR-Ⅱ、ALK5、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达水平较模型组升高(P<0.05);T、LH、AMH水平及卵巢指数、囊性卵泡数量、卵泡细胞凋亡率与ICA呈剂量依赖性降低,E 2、FSH水平、子宫指数、生长卵泡数量、黄体数量以及GDF-9、BMPR-Ⅱ、ALK5、p-Smad2和p-Smad3蛋白的表达水平与ICA呈剂量依赖性升高(P<0.05)。结论ICA能有效调节PCOS小鼠生殖激素水平,改善内分泌代谢,促进卵泡发育、成熟,减少卵泡凋亡,改善排卵,可能与调控GDF-9/Smads信号通路蛋白的表达有关。

高频冲击对0Cr18Ni9/GH4169焊接接头残余应力和性能的影响

对3 mm厚的0Cr18Ni9与GH4169试板进行氩弧焊对接焊接,之后对试板焊接接头及附近区域进行高频冲击工艺处理,采用盲孔法对焊接试板进行残余应力检测,通过拉伸和疲劳试验,对比了高频冲击工艺处理前后的0Cr18Ni9/GH4169异种钢焊接接头力学性能的变化。试验结果表明:未经高频冲击处理的试验焊接试件焊趾残余应力均为拉应力,经过高频冲击处理之后的试验焊接试件焊趾残余应力均为压应力;经过高频冲击处理之后的试验焊接试件的抗拉强度和疲劳寿命均有明显提升,但塑性基本无变化。

白杨素通过调控SNHG9/miR-184对IL-1β诱导的软骨细胞损伤的保护作用

目的 探讨白杨素对白细胞介素(IL)-1β诱导的软骨细胞损伤的影响及可能机制。方法 体外培养人软骨细胞,不同浓度(20、40、60μg/L)的白杨素与10 ng/ml的IL-1β共同干预软骨细胞24 h后,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹法检测细胞中裂解的半胱氨酸蛋白水解酶(Cleaved-caspase)3蛋白表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清中IL-8、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,RT-聚合酶链反应(qPCR)检测细胞中小核仁RNA宿主基因(SNHG)9和miR-184表达。转染SNHG9过表达载体或小干扰RNA至软骨细胞后,用10 ng/ml的IL-1β干预24 h或60μg/L白杨素与10 ng/ml IL-1β共同干预24 h,上述相同方法检测细胞增殖、凋亡、Cleaved-caspase3蛋白表达及细胞培养上清中IL-8、IL-6、TNF-α水平。双荧光素酶报告基因实验验证SNHG9和miR-184靶向关系。结果 20、40、60μg/L的白杨素显著提高了IL-1β诱导的软骨细胞光密度(OD)值(P<0.05),显著降低了细胞凋亡率及Cleaved-caspase3蛋白表达量(P<0.05),同时显著降低了软骨细胞培养上清中IL-8、IL-6、TNF-α表达量(P<0.05),且呈浓度依赖性。上调SNHG9显著提高了IL-1β诱导的软骨细胞OD值(P<0.05),显著降低了细胞凋亡率、Cleaved-caspase3蛋白表达量及细胞培养上清中IL-8、IL-6、TNF-α表达量(P<0.05),而下调SNHG9与上调SNHG9的作用相反。SNHG9靶向负调控miR-184。白杨素促进IL-1β诱导的软骨细胞中SNHG9的表达,而抑制了miR-184的表达。下调SNHG9逆转白杨素对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡及炎症因子表达的抑制作用。结论 白杨素可抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡和炎性因子表达,其可能通过调控SNHG9/miR-184轴发挥作用。