TK基因/9-丙氧鸟苷联合mGM-CSF基因治疗胃癌

目的 观察自杀基因TK对小鼠胃癌的杀伤作用 ,并联合mGM CSF基因 ,观察免疫反应在增强TK杀伤性中的作用。方法 应用逆转录病毒方法转导自杀基因TK ,应用脂质体方法转导细胞因子基因mGM CSF。观察TK基因体外对小鼠胃癌 6 15小鼠前胃癌 (MFC)细胞的杀伤性和旁观者效应 ;体内实验中将病毒上清注入瘤体内 ,并结合应用其前药 9 丙氧鸟苷 (GCV)和mGM CSF基因 ,分别观察肿瘤的生长情况。通过病理切片观察肿瘤病理变化 ;应用酶联免疫吸附试验 (ELISA)方法测定 40只小鼠mGM CSF的产量。结果 2 0 %的转TK基因细胞可以杀伤 70 %～ 80 %以上的肿瘤细胞。体内实验表明TK基因结合GCV可显著杀伤肿瘤 ,而TK基因本身并无杀伤作用 (P <0 .0 5 )。联合mGM CSF后肿瘤体积显著缩小 ,4只小鼠肿瘤完全消退 ,与TK/GCV比较差异有非常显著性 (P <0 .0 1)。结论 TK基因联合GCV对小鼠胃癌产生显著杀伤作用 ,不仅转基因细胞被杀死 ,而且通过旁观者效应杀伤大量周围细胞。细胞因子基因mGM CSF可增强TK的抗肿瘤作用。

TK基因联合GCV治疗胃癌的实验

胃癌是威胁人类最常见的恶性肿瘤之一,目前的治疗方法主要是手术和化疗.但对中晚期胃癌的疗效却欠理想.基因治疗为恶性肿瘤的治疗开辟了新的途径.自杀基因(suicide gene)为目前研究较多的基因.TK 基因(单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 herpes simplx virus-thymidine kinase,HSV-TK)即为自杀基因之一,它能将其作用的前药9-丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)转化为磷酸化.GCV,干扰细胞 DNA 合成,导致转基因细胞的死亡.但自杀基因抗肿瘤更重要的作用是通过产生旁观者效应(bystander effect),所谓旁观者效应就是不仅转基因细胞被杀死,同时伴有周围大量未转基因的细胞亦被杀死.我们构建 TK 基因逆转录病毒表达载体,体外转染胃癌细胞株,检测其体外杀伤性.并通过转染小鼠模型胃癌,研究其体内抗肿瘤作用.1材料和方法1.1材料 TK 基因通过酶切位点 EcoRⅠ和 BamHⅠ构建于逆转录病毒载体 pLxSN.应用 PA317细胞包装逆转录病毒,培养液为 DMEM.NIH3T3为小鼠成纤维细胞,用作病毒滴度的测定.MFC 细胞为615小鼠前胃癌细胞,培养基为 DMEM,含小牛血清,置37℃培养箱培养.应用脂质体方法(按说明)将逆转录病毒质粒转染 PA317细胞,并用 G418筛选,收集含病毒上清.用 NIH3T3细胞测定病毒滴度.病毒上清经测定滴度,最高为1×10~8cfu·L^(-1).