GC-MS法同时测定9-氨基米诺环素盐酸盐中的硫酸二甲酯和硫酸二异丙酯

目的建立GC-MS测定9-氨基米诺环素盐酸盐中的硫酸二甲酯(DMS)和硫酸二异丙酯(DIPS)。方法采用HP-5MS毛细管柱,以氦气为载气,流速:3mL·min-1;进样口温度为200℃,程序升温模式:60℃(2min)以6℃/min至140℃(1min),再以40℃/min至260℃(4min);柱流速为1mL·min-1;分流进样,分流比25∶1。结果 DMS和DIPS的线性范围分别为0. 07455~1. 98800μg·m L-1和0. 07389~1. 97040μg·m L-1,检测限分别为0. 022365μg·m L-1和0. 026601μg·m L-1,远低于其在替加环素中的毒性浓度限度。结论该方法可用于药品中DMS和DIPS的毒性检测。

5-氨基酮戊酸光动力疗法联合小剂量米诺环素治疗玫瑰痤疮疗效分析

目的:探讨5% 5-氨基酮戊酸光动力疗法联合小剂量米诺环素治疗红斑毛细血管扩张型玫瑰痤疮的疗效。方法:选择2019年1月-2021年1月笔者医院就诊的94例红斑毛细血管扩张型玫瑰痤疮患者为研究对象,按随机数字表法分对照组(小剂量米诺环素)47例,观察组(5% 5-氨基酮戊酸光动力疗法联合小剂量米诺环素)47例,比较两组治疗后临床症状改善程度,记录两组患者临床疗效,记录两组患者毛细血管扩张、红斑、皮肤潮红好转时间及治疗期间不良反应情况。结果:治疗后,观察组临床症状积分、红斑指数低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);对照组总有效率79.60%,观察组总有效率91.49%,对照组无效患者11例,观察组无效4例,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组红斑、毛细血管扩张缓解、皮肤潮红症状缓解时间短于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组发生不良反应患者4例(8.51%),对照组5例(10.64%),两组患者治疗过程中均出现短暂红肿和色素沉着,观察组1例患者出现米粒至黄豆大小水疱,两组不良反应均不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:5% 5-氨基酮戊酸光动力疗法联合小剂量米诺环素治疗玫瑰痤疮临床疗效显著,能够明显改善皮肤丘疹、脓疱及红斑症状,且不增加不良反应。

LC-MS/MS测定替加环素中的基因毒性杂质9-硝基米诺环素

建立高效液相色谱-质谱联用的方法测定替加环素中遗传毒性杂质9-硝基米诺环素。方法:选用C 18色谱柱(Welch XB-C 18,4.6×50 mm,5μm),以0.1%甲酸(v/v)为流动相:乙腈为流动相,流速为每分钟0.5 mL,进行线性梯度洗脱;质谱条件:采用电喷雾离子源(ESI),多级反应监测(MRM),正离子扫描模式,干燥气温度为300℃,干燥气流速为8 L/min,雾化气压力为35 psi,鞘流气温度为350℃,鞘流气流速为11 L/min,毛细管端电压为3500 V,喷嘴正电压为500 V,喷嘴负电压为1000 V。离子碰撞能为34 V,扫描时间为500 ms,用于定量分析的MRM离子对为m/z→503.2/153.9。该方法在0.0125~0.9580μg·mL^(-1)的范围内线性良好(0.9999),定量限和检出限分别为0.0125和0.0067μg·mL^(-1),方法回收率94.4%~100.8%之间,稳定性较好。本研究所建立的方法快速、灵敏、专属性强,适用于替加环素中基因毒性杂质9-硝基米诺环素的测定。

5-氨基酮戊酸光动力疗法联合米诺环素及他克莫司软膏治疗玫瑰痤疮的效果观察

目的:探讨5-氨基酮戊酸光动力(ALA-PDT)疗法联合米诺环素及他克莫司软膏治疗玫瑰痤疮的临床效果。方法:选取92例玫瑰痤疮患者,按照随机数字表法分成两组,每组各46例。对照组采用米诺环素与他克莫司软膏治疗,观察组在对照组基础上加用ALA-PDT疗法,对比两组临床疗效、痤疮症状评分与皮肤红斑指数E值以及不良反应。结果:观察组治疗总有效率高于对照组(P<0.05);治疗后,观察组丘疹评分与皮肤红斑指数E值均低于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);两组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:ALA-PDT疗法联合米诺环素与他克莫司软膏治疗玫瑰痤疮患者效果明显,能够缓解其临床症状,促进其快速康复,安全可靠。

替加环素杂质9-硝基米诺环素的致突变Ames试验研究

目的通过组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验评价替加环素杂质9-硝基米诺环素的潜在致突变性。方法采用平板渗入法进行实验,以二甲基亚砜(DMSO)为溶剂,计数TA97a、TA98、TA100、TA102及TA1535菌株在活化和非活化条件下的回变菌落数,评价其致突变性。结果受试物9-硝基米诺环素在菌株TA100间接(+S9)和直接(-S9)致突变实验中,回复突变数均显著增加,并为溶剂对照的2倍以上;在菌株TA1535直接(-S9)致突变实验中,回复突变菌落数为溶剂对照的2倍以上,但未达到3倍,在间接(+S9)致突变实验中,回复突变菌落数显著增加,并为溶剂对照的3倍以上。结论在本实验条件下,受试物9-硝基米诺环素具有潜在致突变性。

米诺环素对大鼠脑缺血-再灌注损伤后血脑屏障的保护机制

目的观察米诺环素对大鼠脑缺血-再灌注损伤(IRI)后基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达及血脑屏障通透性的影响,并探讨其与p38信号通路的关系。方法采用线栓法阻塞大脑中动脉制备大鼠局灶性脑IRI模型,将30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型对照组及米诺环素组(n=10)。IRI 24 h后,采用伊文思蓝(EB)法测定缺血脑组织血脑屏障通透性的改变,Western blotting法检测MMP-9、claudin-5蛋白表达的变化及p38的磷酸化水平。结果与假手术组比较,模型对照组血脑屏障通透性在IRI 24 h后明显增加[(4.55±0.69)μg·g-1比(0.55±0.08)μg·g-1],MMP-9蛋白表达显著升高(1.18±0.12比0.15±0.02),p38磷酸化水平上升(0.67±0.07比0.11±0.02),claudin-5蛋白表达降低(P<0.05);与模型对照组比较,米诺环素组血脑屏障通透性[(2.82±0.46)μg·g-1比(4.55±0.69)μg·g-1],MMP-9蛋白(0.77±0.06比1.18±0.12)及p38磷酸化水平(0.36±0.04比0.67±0.07)均明显降低,claudin-5蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论大鼠局灶性脑IRI后,米诺环素通过调节MMP-9及claudin-5蛋白的表达而减轻血脑屏障破坏,其保护作用可能与抑制p38信号通路有关。

米诺环素对大鼠肢体缺血-再灌注继发肺损伤的影响

目的探讨米诺环素对大鼠肢体缺血-再灌注继发肺损伤的影响。方法 SD成年雄性大鼠30只,随机分为三组(n=10),采用乙醚麻醉后,N组和M组大鼠经尾静脉注入生理盐水1.0ml,C组注入米诺环素10mg/kg。M组和C组分别结扎大鼠双下肢3h,再灌注4h制作缺血-再灌注模型。切除右肺,上叶测量湿干比,中叶测定IL-6含量;左肺下叶免疫组化S-P法观察基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9在肺组织的着色及灰度对比。结果右肺上叶湿干比、左肺下叶MMP-2和MMP-9表达以及匀浆IL-6含量均为M组>C组>N组(P<0.01)。结论米诺环素可通过抑制炎性反应减轻大鼠肢体缺血-再灌注所造成的肺损伤。

复方珍珠暗疮片联合米诺环素胶囊、ALA-PDT治疗中重度寻常性痤疮患者的临床效果

目的探讨复方珍珠暗疮片联合米诺环素胶囊、5-氨基酮戊酸光动力疗法(ALA-PDT)治疗中重度寻常性痤疮患者的临床效果。方法将我院收治的78例中重度寻常性痤疮患者按随机数字表法分为研究组(n=39)和对照组(n=39)。对照组予以米诺环素胶囊+ALA-PDT治疗,研究组在对照组基础上予以复方珍珠暗疮片治疗。比较两组的治疗效果、治疗前及治疗2、4周后的皮损创面评分、治疗前、后的血清睾酮、雌二醇水平、不良反应发生情况。结果研究组的治疗总有效率为高于对照组(P<0.05)。治疗2、4周后,研究组丘疹、脓包、结节或囊肿评分均低于对照组(P<0.05)。治疗后,研究组血清睾酮水平低于对照组,血清雌二醇水平高于对照组(P<0.05)。两组不良反应总发生率无显著差异(P>0.05)。结论复方珍珠暗疮片联合米诺环素胶囊、ALA-PDT治疗中重度寻常性痤疮的临床疗效显著,可有效减轻皮损症状,调节机体性激素水平,且安全性良好。

米诺环素对大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的保护作用

目的探讨米诺环素对大鼠蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后早期脑损伤(early braininjury,EBI)的保护作用及其机制。方法健康4月龄雄性SD大鼠48只,体质量250～300g,按随机数字表法分为假手术组(sham组)、SAH组、安慰剂组(vehicle组)和米诺环素组(minocycline组),每组各12只。采用经视交叉前池注血法建立蛛网膜下腔出血模型。各组于处理后24h经HE染色观察海马CA1区神经元形态;运用Western blot和明胶酶谱方法检测大鼠海马基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达;采用原位末端标记法(TUNEL)检测海马神经元凋亡。结果 HE染色显示:SAH组大鼠海马CA1正常神经元数量(67.42±20.35)个较sham组(145.5±21.23)个明显下降(P<0.01),米诺环素组正常神经元数量(125.73±24.67)个较SAH组明显增加(P<0.01)。Western blot检测结果显示:sham组大鼠海马MMP-9蛋白表达水平较低(1.94±0.39)%,SAH后24h MMP-9表达明显增高[(103.60±7.72)%,与sham组相比明显升高,P<0.01];米诺环素组MMP-9蛋白表达明显降低[(74.52±6.47)%,较SAH组明显降低(P<0.01)]。明胶酶谱检测显示:sham组大鼠海马未检测到活性[(0.39±0.23)%]、SAH组MMP-9活性(201.81±6.31)%较Sham组明显增高(P<0.01);米诺环素组MMP-9活性(148.96±6.02)%较SAH组明显降低(P<0.01)。TUNEL检测显示:sham组海马神经元未检测到TUNEL阳性细胞,SAH后24h海马TUNEL阳性细胞数明显增加[(192.17±6.31)个],与sham组相比差异有统计学意义(P<0.01);米诺环素组凋亡阳性细胞数(91.17±7.78)个较SAH组明显下降(P<0.01)。结论大鼠蛛网膜下腔出血后,米诺环素能够改善大鼠海马神经元形态,对早期脑损伤发挥保护作用;其机制可能与米诺环素抑制MMP-9活性及其蛋白表达,减轻海马神经元凋亡有关。

米诺环素对糖基化终末产物所致大鼠视网膜微血管渗漏的作用及其机制研究

目的研究基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在糖基化终末产物(AGEs)所致血-视网膜屏障损害中的作用,评估米诺环素对AGEs所致血-视网膜屏障损害的治疗作用。方法 36只SD大鼠用随机数字表法分为牛血清白蛋白(BSA)组、AGEs-BSA组和AGEs-BSA+米诺环素组。BSA组和AGEs-BSA组分别自尾静脉注入BSA和AGEs-BSA,每日1次,每次40mg/kg,AGEs-BSA+米诺环素组在每日注射AGEs-BSA的同时隔日腹腔注射米诺环素45mg/kg。14d后,每组取6只大鼠用伊文思蓝(EB)法观察并比较各组视网膜血管的通透性,其余大鼠处死后,采用RT-PCR及Westernblot法观察视网膜MMP-9的表达。结果 AGEs-BSA组MMP-9mRNA和蛋白水平均较BSA组升高,差异有统计学意义(P<0.01),同时,视网膜微血管渗透性也显著升高(P<0.01)。而在AGEs-BSA+米诺环素组大鼠视网膜基因和蛋白水平的MMP-9均被抑制(P<0.01),同时视网膜微血管渗漏被部分逆转(P<0.01)。视网膜微血管的渗透性与MMP-9蛋白的表达呈正相关(r=0.891,P=0.000)。结论 AGEs所致的视网膜微血管渗漏与MMP-9的高表达有密切关系,AGEs的作用至少部分是通过MMP-9实现的。米诺环素能部分逆转AGEs-MMP-9途径所致的血管渗漏。

5-氨基酮戊酸光动力治疗结节囊肿型痤疮疗效观察

目的:观察并探讨5-氨基酮戊酸光动力治疗结节囊肿型痤疮的疗效及安全性。方法:共70例患者,随机分为治疗组和对照组。治疗组35例,给予5-氨基酮戊酸光动力治疗,2周治疗1次,共4次;对照组35例,予米诺环素胶囊,首次剂量为0.2g,以后每12h服用0.1g,共6周。结果:治疗组有效率为77.14%,对照组有效率为57.14%,治疗组复发率为18.52%,对照组复发率为45.00%,两组疗效比较差异具有统计学意义,治疗组疗效优于对照组。结论:5-氨基酮戊酸光动力治疗结节囊肿型痤疮痤疮疗效安全,有效,复发率相对较低,患者依从性较高。

米诺环素对大鼠脑出血损伤的保护作用及对Bcl-2和MMP-9表达的影响

目的观察B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在大鼠脑出血后脑损伤机制中的作用及米诺环素(minocycline)对脑损伤的保护作用。方法 Wistar大鼠随机分为3组:假手术组(Sham)、模型组(Model)及米诺环素组(Minocycline),每组又按时间点不同分为6,12 h,1,2,3,5,7 d亚组。根据大鼠脑立体定位术,制备大鼠脑内囊出血模型。采用神经系统功能评分和体感诱发电位对脑出血模型进行评价。并于不同时间点开颅取脑组织对针眼前脑组织进行含水量的测定,针眼后脑组织制成病理切片,苏木精-伊红染色法用于脑组织形态学的观察,免疫组化染色用于检测出血周围脑组织Bcl-2和MMP-9蛋白的表达情况。结果大鼠内囊出血模型制备成功。免疫组化结果表明,与假手术组相比,模型组各时间点出血周围脑组织的Bcl-2和MMP-9蛋白表达增加(P<0.001),脑组织含水量增加(P<0.001);与模型组相比,米诺环素组各时间点出血周围脑组织Bcl-2表达明显增加,MMP-9表达明显下降,脑组织含水量明显下降。结论米诺环素对脑出血后脑损伤有保护作用,可能与Bcl-2表达增加以及MMP-9表达减少有关。

痤疮合剂联合ALA-PDT治疗中重度寻常性痤疮疗效观察

目的观察痤疮合剂联合5-氨基酮戊酸光动力疗法(ALA-PDT)治疗中重度寻常性痤疮的临床疗效和安全性。方法采用随机数表法将2016年8月—2017年12月南通市第三人民医院皮肤科收治的96例中重度寻常性痤疮患者随机分为试验组(46例)与对照组(50例),其中试验组患者采用痤疮合剂联合ALA-PDT治疗,对照组患者采用盐酸米诺环素胶囊治疗,对比观察两组患者的皮损创面愈合情况、不良反应发生情况及复发情况等。结果治疗过程中,试验组患者中有8例患者发生局部不良反应,对照组患者中有5例患者发生局部不良反应,两组对比采用四格表资料的卡方检验,χ~2=1.118,P=0.290,P>0.05,差异无统计学意义;治疗后两组患者皮损创面均逐渐好转,创面评分均逐渐降低,其中治疗2、4、6周后两组患者皮损创面评分对比采用t检验,t值分别为7.301、7.050及4.949,P均<0.01,差异具有统计学意义;治疗6周后,两组患者临床疗效对比采用等级资料的秩和检验,mann-whitney U=807.000,Z=2.648,P=0.008,P<0.01,差异具有统计学意义;3个月后随访,试验组患者中有1例患者复发,对照组患者中有8例患者复发,两组对比采用四格表资料的卡方检验,χ~2=3.886,P=0.021,P<0.05,差异具有统计学意义。结论痤疮合剂联合ALA-PDT治疗中重度寻常性痤疮,可有效促进皮损创面痊愈,降低复发率,疗效显著,值得临床推广应用。

Minocycline对rhHGF刺激ECV304细胞株表达MMP9的抑制作用

目的探讨重组人类肝细胞增殖因子(recombinant human hepatocyte growth factor,rhHGF)刺激ECV304细胞株表达基质金属蛋白酶-9(matrjx metalloproteinase-9,MMP-9)的作用及米诺环素(minocycline)的影响作用.方法绘制正常ECV304细胞株生长曲线,明确最适生长浓度及对数生长期;明确rhHGF及minocycline的作用浓度;流式细胞仪(flow cytometer,FCM)检测ECV304细胞株的MMP-9水平.结果①ECV304细胞株的最适生长浓度为1.0E+4/mL,对数生长期为3～5d;rhHCF的作用浓度为8ng/mL,minocycline的作用浓度为1.0E-5mol/L.②对照组MMP-9的表达量为39.74%;培养基中加入rhHGF8ng/mL后,细胞存活率为1.388169±0.102033(P＜0.01),MMP-9的表达量为40.32%;培养基中加入minocycline1.0E5mol/L后,细胞存活率为0.294526±0.076829(P＜0.01),MMP-9的表达量为19.92%.③培养基中加入minocycline 1.0E5mol/L 15min后加入rhHGF 8ng/mL,细胞存活率为0.397291±0.099504(P＜0.01),MMP-9的表达量为22 28%.结论rhHGF可刺激ECV304细胞株增殖,使MMP-9的表达量增加;minocycline可抑制ECV304细胞株增殖,使MMP-9的表达量降低;minocycline可拮抗rhHGF所引起的ECV304细胞株增殖,从而使MMP-9的表达量降低.