宝乐果提取物8,9-糖基化环烯醚萜苷促进人软骨细胞增殖和抑制凋亡的作用

目的观察宝乐果(Borojo)提取物8,9-糖基化环烯醚萜苷(GIG)对体外培养的人骨关节炎软骨细胞促进增殖和抑制细胞凋亡的作用。方法体外培养人骨关节炎软骨细胞,进行软骨细胞鉴定。用不同浓度(25、50、100、200、400μg/ml)的8,9-糖基化环烯醚萜苷培养人骨关节炎软骨细胞,用硫酸酚嗪甲酯(MTS)法、5-乙炔基-2脱氧尿嘧啶核苷(EdU)法、平板克隆形成实验检测细胞的增殖、流式细胞术观察软骨细胞凋亡,用丙二醛(MDA)法、超氧化物歧化酶(SOD)检测、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)检测观察软骨细胞氧化酶的活性,用Western bolt法检测凋亡相关蛋白表达。结果与对照组相比,随GIG浓度增加,细胞活力升高,差异有统计学意义(P<0.01);细胞核分裂增加,差异有统计学意义(P<0.05);细胞克隆数量增多,差异有统计学意义(P<0.05);细胞周期的S期延长,细胞增殖活跃细胞凋亡率减少;MDA含量下降,差异有统计学意义(P<0.05)。SOD含量升高,差异有统计学意义(P<0.05);GSH-Px含量升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 GIG可能对软骨细胞具有增殖的作用,而且在观察浓度内,细胞毒性小,并可抑制细胞凋亡,提示其有潜在能力可能成为治疗骨关节炎的一种策略。

山茱萸环烯醚萜总苷对糖尿病血管并发症大鼠血清糖基化终产物-肽(AGE-P)水平的影响

探讨环烯醚萜总苷对糖尿病血管并发症大鼠血清糖基化终产物-肽(AGE-P)水平的影响。方法:在正常进食条件下,大鼠先以30mg·kg^(-1)ip。链脲佐菌素(STZ)溶液,第二天再按0.11ml/只ip。弗氏完全性剂(FCA),每周1次,连续3周。3周后测定大鼠血糖,若血糖≥16.7mol.L^(-1)者则纳入为糖尿病大鼠,并按血糖值范围随机分为模型组、氨基胍组(0.1g·kg^(-1))和环烯醚萜总苷组(0.25、0.5g·kg^(-1)),正常组,各组连续ig.12周。实验结束后运用流动注射分析法(FIA,flow injection assay)检测血清AGE-P含量。结果:模型组血清AGE-P水平显著增加(14.3±4.3vs2.8±0.4,P<0.01),而环烯醚萜总苷及氨基胍组均能降低血清AGE-P水平,与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:环烯醚萜总苷能降低糖尿病血管并发症大鼠血清AGE-P水平,具有减轻糖尿病血管并发症的作用。

山茱萸环烯醚萜总苷对晚期糖基化终末产物诱导的肾系膜炎症反应的调节

目的探讨山茱萸环烯醚萜总苷对晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导的大鼠肾系膜HBZY-1细胞炎症反应的影响以及可能的作用机制。方法采用巨噬细胞和肾系膜细胞共培养体系,评估巨噬细胞的迁移能力;采用ELISA试剂盒评估炎症因子的分泌水平;采用Western blot分析法评估炎症相关蛋白的表达。结果与AGEs诱导的模型组相比,山茱萸环烯醚萜总苷显著抑制AGEs诱导的巨噬细胞迁移能力,不同剂量山茱萸环烯醚萜总苷(1.0、0.5、0.25mg/mL),对巨噬细胞迁移抑制率分别为42.09%±7.25%、26.44%±10.23%、20.84%±6.84%;山茱萸环烯醚萜总苷显著抑制AGEs诱导的炎症因子IL-6,IL-10,MCP-1和TNF-α的分泌水平;Western blot分析显示山茱萸环烯醚萜总苷及AGEs受体特异性抗体显著下调AGEs诱导的ICAM-1和TGF-β1的蛋白表达。结论山茱萸环烯醚萜总苷可剂量依赖性地减轻AGEs诱导的大鼠肾系膜细胞HBZY-1炎症反应,对糖尿病肾病的发生发展具有一定的保护作用。

星点设计-效应面法优化山茱萸总环烯醚萜苷脂质体的制备工艺

目的:优化山茱萸总环烯醚萜苷脂质体的制备工艺,并对其进行表征。方法:采用逆相蒸发法制备山茱萸总环烯醚萜苷脂质体。采用高效液相色谱法测定山茱萸总环烯醚萜苷脂质体中马钱苷和莫诺苷含量。以总皂苷(以马钱苷和莫诺苷总和计)包封率为指标,通过单因素试验筛选制备山茱萸总环烯醚萜苷脂质体的主要工艺因素后,采用星点设计-效应面法优化药物与磷脂的质量比(药脂比)、胆固醇与磷脂的质量比(胆脂比)和水合介质pH值。利用达尔文激光粒径测定仪测定最优处方下所制脂质体的Zeta电位和粒径,并在透射电镜下观察其形态。结果:确定最优处方的药脂比为0.026、胆脂比为0.107、水合介质pH为5.78。所制3批脂质体的平均包封率为11.63%(n=3),与预测值11.48%的相对误差为1.29%;平均粒径为(80.87±0.27)nm,Zeta电位为(-13.60±5.32)mV,脂质体外观呈球形或类球形。结论:优化后山茱萸总环烯醚萜苷脂质体制备工艺简单,所制脂质体粒径较小。

UPLC/Q-TOF MS/MS负离子模式下环氧烷型环烯醚萜苷的结构表征

利用四极杆飞行时间串联质谱(Q-TOF MS/MS)研究4个环氧烷型环烯醚萜苷同系组分(胡黄连苷Ⅰ、胡黄连苷Ⅱ、胡麻属苷、梓醇)的质谱裂解行为。在大气压化学电离源负离子(APCI^-)模式下,该类同系组分主要的裂解途径除了常见的母环上取代基的断裂,如中性丢失H_2O、CO_2和葡萄糖基等,生成^(1,6)F^-、^(1,4)F^-等特征碎片离子;另外还存在葡萄糖基环的断裂,生成^(0,4)A_1^-、^(1,4)A_1^-及^(2,4)A_1^-等碎片离子。通过对上述环氧烷型同系组分的质谱裂解行为进行归纳总结,依据其裂解规律,利用UPLC/Q-TOF MS/MS对胡黄连提取物中的环烯醚萜苷类化合物进行表征,共初步鉴定出10个环烯醚萜苷,其中包括8个环氧烷型环烯醚萜苷(胡黄连苷Ⅰ、胡黄连苷Ⅱ、胡黄连苷Ⅲ、胡黄连苷Ⅳ、黄金树苷、梓苷、婆婆纳苷和Piscroside B)和2个环戊烷型环烯醚萜(Boschnaloside和Mussaenosidic acid)。该方法有助于推动胡黄连在物质基础表征、质量控制和临床应用上的开发和利用。

星点设计-效应面法优化山茱萸总环烯醚萜苷脂质体凝胶剂的制备工艺

目的优选山茱萸总环烯醚萜苷脂质体凝胶剂的制备工艺,并对其进行质量评价。方法以卡波姆-940用量、凝胶剂p H值、甘油用量为考察因素,以凝胶剂的外观、涂展性、均匀度、离心性的综合评价为指标,采用三因素三水平星点设计-效应面法优选脂质体凝胶剂的制备工艺。结果山茱萸总环烯醚萜苷脂质体凝胶剂的最佳制备工艺为卡波姆用量0.5%,pH值6.6,甘油用量15 g。根据优选的最佳工艺,平行制备3份凝胶剂,进行综合评分,综合评分结果分别为9.4、9.7、9.5。结论运用星点设计-效应面法优选出的山茱萸总环烯醚萜苷脂质体凝胶剂的制备工艺简单,方法可靠。

正交-满意度函数优化秦艽黄酮和环烯醚萜苷超声共提取条件

目的:优化秦艽黄酮和环烯醚萜苷超声提取工艺条件。方法:以秦艽黄酮和环烯醚萜苷提取率为考察指标,以乙醇体积分数、料液比、提取温度及提取时间为影响因素,进行单因素试验;采用正交-满意度优化秦艽黄酮和环烯醚萜苷提取工艺。结果:优选出秦艽中黄酮及环烯醚萜苷提取的最佳工艺条件为乙醇体积分数60%,料液比1∶30 g/mL,提取温度60℃,提取时间40 min,在此条件下的提取率黄酮为2.20%,环烯醚萜苷为9.32%,平均满意度为0.997,RSD=0.28%。结论:优选的条件方法简便、高效、易于实现,适合秦艽中黄酮与环烯醚萜苷的提取。

睡菜环烯醚萜苷类成分及其α-葡萄糖苷酶抑制活性

为研究睡菜的化学成分,利用溶剂提取法,正、反相硅胶以及葡聚糖凝胶、半制备液相等方法进行分离纯化,结构依据其特征理化性质和波谱数据进行鉴定.从睡菜全草95%醇提物的正丁醇萃取浸膏中共分离得到6个化合物,均为环烯醚萜苷成分,且分别鉴定为:7-epiexaltoside(1)、6″,7″-dihydro-7-epiexaltoside(2)、獐牙菜苷(3)、断马钱子苷半缩醛内酯(4)、表断马钱子苷半缩醛内酯(5)、马钱子苷(6).化合物2~5为首次从睡菜中分离得到.本实验对分离得到的6个化合物进行α-葡萄糖苷酶活性的体外筛选实验,结果显示,化合物1~6均具有可抑制α-葡萄糖苷酶活性的作用.

生地环烯醚萜苷类成分对AGEs损伤HUVEC的保护作用

目的观察生地环烯醚萜苷类成分梓醇、毛蕊花糖苷对晚期糖基化终产物（AGEs）损伤人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的保护作用。方法体外培养HUVEC,将细胞分为正常对照组、模型组、梓醇组及毛蕊花糖苷组,并设氨基胍组作为阳性对照。加入终浓度为0.05、0.1、0.5、1、5、10、100μmol/L的药物分别预孵1h后,加入200mg/L的AGEs作为刺激物继续培养,24h后用MTT法检测并计算药物对AGEs致HUVEC损伤的保护率。体外培养HUVEC,加入氨基胍及梓醇、毛蕊花糖苷（终浓度分别为1、10、100μmol/L）预孵1h后,加入终浓度为200mg/L的AGEs,另设模型组及空白对照组,24h后取各组细胞培养上清液,试剂盒测定超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）和NO;ELISA法测定内皮素（ET）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、转化生长因子-（TGF-β）及白介素1（IL-1）。结果生地环烯醚萜苷类成分梓醇、毛蕊花糖苷（0.05、0.1、0.5、1、5、10、100μmol/L）可减轻AGEs致HUVEC的损伤。与空白对照组比较,模型组细胞上清液中ROS、AngⅡ、MDA含量增加（P〈0.05-0.01）,SOD活力和NO水平降低（P〈0.05-0.01）,TGF-β、IL-1β分泌增加（P〈0.05-0.01）。而梓醇、毛蕊花糖苷给药组（1、10、100μmol/L）能不同程度的降低ROS、AngⅡ、MDA含量,升高SOD活力和NO水平,减少TGF-、IL-1分泌,与模型组比较具有显著性差异（P〈0.05-0.01）。结论生地环烯醚萜苷类成分梓醇、毛蕊花糖苷可通过抑制氧化应激、调节内皮细胞分泌功能、抑制炎症因子及抗细胞粘连等保护血管内皮细胞。

山茱萸环烯醚萜苷对APP/PS1/tau小鼠脑内阿尔茨海默病样病理变化的作用机制

目的阿尔茨海默病(AD)最典型的病理变化是β-淀粉样蛋白(Aβ)在脑部沉积形成的老年斑和过度磷酸化的tau蛋白聚集导致的神经纤维原缠结(NFT),同时伴随氧化应激、神经炎症、突触损伤、神经元变性或死亡等。本研究利用APP/PS1/tau三转基因(3x Tg)模型小鼠,观察山茱萸环烯醚萜苷(CIG)对小鼠脑内多种病理变化的影响。方法 16月龄3x Tg模型小鼠每天灌胃给予CIG 100或200 mg·kg-1至18月龄。采用刚果红染色法观察3x Tg小鼠海马中老年斑沉积;Western蛋白印迹法检测tau蛋白在Thr212和Thr217位点的磷酸化水平;免疫组化法观察小鼠海马中脑源性神经营养因子(BDNF)的表达和分布;实时荧光定量PCR法(q RT-PCR)检测小鼠BDNF转录水平;尼氏染色法观察小鼠海马中尼氏小体的变化。结果 18月龄模型组小鼠与对照组相比,Aβ淀粉样斑块沉积明显增加,而给予CIG 100或200 mg·kg-1均能不同程度降低脑内斑块负荷。模型组小鼠tau蛋白在Thr217位点的磷酸化水平明显升高,而在Thr212位点的磷酸化水平无明显升高;CIG治疗组能明显拮抗tau蛋白在Thr217位点的过度磷酸化。模型组小鼠海马BDNF蛋白和m RNA的水平均降低,CIG能够明显恢复BDNF蛋白和m RNA表达;模型组小鼠海马内尼氏小体数量减少,染色变浅,排列散乱,CIG有增高尼氏体数量的趋势。结论 CIG能够减少Aβ在脑内的沉积和tau蛋白异常过度磷酸化,恢复BDNF在脑内的表达,并且保护神经元。

大叶秦艽总环烯醚萜苷3种提取工艺优化及其抗氧化活性研究

目的 优化大叶秦艽总环烯醚萜苷回流提取、超声提取、超声-回流提取工艺,并评价其抗氧化活性。方法 在单因素试验基础上,以乙醇体积分数、液料比、回流时间、提取次数、超声时间、超声功率为影响因素,总环烯醚萜苷含量为评价指标,响应面法优化3种提取工艺,再测定提取物对DPPH、OH~-自由基的清除率。结果 最优回流提取工艺为乙醇体积分数75%,液料比20∶1,回流时间100 min,提取次数2次,总环烯醚萜苷含量为62.75 mg/g;最优超声提取工艺为乙醇体积分数78%,液料比20∶1,超声时间42 min,超声功率204 W,总环烯醚萜苷含量为70.25 mg/g;最优超声-回流提取工艺为乙醇体积分数76%,液料比17∶1,超声时间29 min,回流时间72 min,总环烯醚萜苷含量为76.49 mg/g。超声-回流提取工艺所得提取物对DPPH、OH~-自由基的清除率高于其他2种提取工艺所得。结论 超声-回流提取工艺更适合大叶秦艽总环烯醚萜苷的提取。

HPLC法测定秦艽及其不同配伍药对中两种环烯醚萜苷类成分含量研究

目的:建立HPLC法同时测定秦艽及其不同配伍药对(秦艽威灵仙、秦艽桑寄生、秦艽防己)水煎液中两种环烯醚萜苷类成分含量的方法。方法:采用Agilent A3000250×046 Pursuit 5 C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相为甲醇(A)-0.04%磷酸水溶液(B),梯度洗脱:0~28 min,A 15%→23%;28~35 min,B 23%→35%;流速:0.8 mL/min;柱温:30℃;检测波长245 nm。结果:獐牙菜苦苷、龙胆苦苷分别在0.025 8μg^1.032 0μg、0.265μg^10.60μg内线性关系良好,平均加样回收率分别为99.67%(RSD=2.55%,n=6),101.36%(RSD=2.86%,n=6),与单味秦艽比较,三组药对中獐芽菜苦苷的含量均升高,尤以秦艽威灵仙药对升高明显;三组药对中龙胆苦苷含量亦发生了变化,其中秦艽威灵仙药对中龙胆苦苷含量升高,而秦艽桑寄生药对、秦艽防己药对中龙胆苦苷含量却降低,尤以秦艽桑寄生药对降低明显。结论:秦艽配伍用药后所含的有效成分含量发生了变化;本研究所建立的龙胆苦苷、獐牙菜苦苷含量测定方法简便、准确、重复性较好。

对草苁蓉环烯醚萜苷抑制人肝癌细胞进行上皮-间质转化机理的研究

目的:探讨草苁蓉环烯醚萜苷(IGBR)抑制人肝癌细胞(SMMC-7721)进行上皮-间质转化(EMT)的机理。方法:对SMMC-7721进行体外培养。将经体外培养的SMMC-7721分为对照组、模型组和IGBR组。为对照组SMMC-7721使用RPMI培养基进行造模,为模型组SMMC-7721使用TGF-β1进行造模,为IGBR组SMMC-7721使用TGF-β1+IGBR进行造模。对三组SMMC-7721模型进行划痕实验和WesternBlot蛋白定性和半定量实验。然后,比较三组SMMC-7721的细胞形态学变化、细胞的迁移能力及E-cadherin蛋白表达的水平和N-cadherin蛋白表达的水平。结果:与对照组SMMC-7721相比,模型组SMMC-7721发生迁移的细胞数更多,P<0.05。与模型组SMMC-7721相比,IGBR组SMMC-7721发生迁移的细胞数更少,P<0.05。与对照组SMMC-7721相比,模型组SMMC-7721中E-cadherin蛋白的表达水平显著降低,其中N-cadherin蛋白表达的水平显著增加;与模型组SMMC-7721相比,IGBR组SMMC-7721中E-cadherin蛋白表达的水平有所增加,其中N-cadherin蛋白表达的水平有所减少。结论:IGBR可以抑制SMMC-7721进行上皮-间质转化,其作用机制与E-cadherin蛋白表达的上调及N-cadherin蛋白表达的下调有关。

巴戟天中环烯醚萜苷和蒽醌在电喷雾离子源负离子模式下的质谱裂解行为

利用电喷雾-四极杆-飞行时间串联质谱(ESI-Q-TOF MS/MS)技术,在负离子模式下,探讨巴戟天中4种环烯醚萜苷和2种蒽醌成分的质谱裂解途径。通过[M-H]-获得化合物的相对分子质量信息,进一步对[M-H]-进行碰撞诱导解离,获得相应化合物的裂解途径。结果表明,环烯醚萜苷主要的裂解途径是首先脱去母环上的功能基团,如中性丢失H_2O、CO_2、CH_3COOH和糖单元等部分;其次是二氢吡喃环和糖环的断裂,m/z113、101为环烯醚萜苷母环断裂的特征碎片离子。蒽醌类化合物的裂解行为是连续失去CO,也可以失去CO_2。这些质谱裂解行为的研究有助于环烯醚萜苷和蒽醌类化合物的结构解析,也可为其他同类化合物的鉴定提供依据。

马鞭草环烯醚萜苷类成分的研究

目的 :探索马鞭草抗早孕有效成分。方法 :甲醇渗漉提取 ,反复硅胶柱层析分离 ,理化常数和光谱分析鉴定化合物结构。结果 :从马鞭草甲醇提取物中分离并鉴定了 3个环烯醚萜苷 ,分别为马鞭草苷 ( )、3,4-二氢马鞭草苷 ( )和 5 -羟基马鞭草苷 ( )。结论 :其中 为新的天然化合物。

猪殃殃中环烯醚萜苷和蒽醌苷类化学成分的研究

采用硅胶、反相硅胶和凝胶柱色谱进行分离、纯化，研究茜草科植物猪殃殃全草甲醇洗脱部位的化学成分。化合物经质谱和核磁等波谱分析方法确定结构得到8个化合物，分别为6-O-乙酰鸡屎藤次苷（1），6α-羟基京尼平苷（2），京尼平苷酸（3），6β-羟基京尼平苷（4），交让木苷（5），6α-甲氧基京尼平苷酸（6），去乙酰基车叶草苷酸（7），光泽汀-3-O-葡萄糖苷（8）。化合物1—6为首次从拉拉藤中分离得到，其中化合物4，6是从该属中首次分到。

HPLC同时测定栀子药材中栀子苷和西红花苷-1的含量

目的同时测定10批栀子药材中栀子苷和西红花苷-1的含量。方法采用RP-HPLC法,ShimpackVP-ODS柱,乙腈-水梯度洗脱,检测波长238nm(0～20min,检测环烯醚萜苷类)、440nm(20～60min,检测西红花苷类)。结果和结论该方法简便、准确、重复性好,可同时测定栀子中不同检测波长的两大类有效成分。

栀子总环烯醚萜苷对大鼠脑出血AQP4和MMP-2/9表达的影响

目的:探讨栀子总环烯醚萜苷对大鼠脑出血AQP4和MMP-2/9表达的影响。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组和栀子总环烯醚萜苷(30mg/kg)治疗组,采用自体血注入诱发大鼠脑出血模型,术后24、48、72和120h时间点各组各取5只大鼠脑组织标本,采用干湿重法、免疫组织化学染色、逆转录聚合酶链反应技术分别测定脑含水量、AQP4蛋白和AQP4mRNA的表达、MMP-2和MMP-9表达。结果:与模型组比较,治疗组大鼠在各时间点脑含水量减少(P<0.01),AQP4蛋白和AQP4mRNA表达降低(P<0.05),术后72～120h时间点MMP-2和MMP-9表达水平低(P<0.05～P<0.01)。结论:栀子总环烯醚萜苷可能通过抑制AQP4、MMP-2和MMP-9的表达减轻脑出血后脑水肿的形成。

草苁蓉环烯醚萜苷联合5-氟尿嘧啶对人肝癌HepG2、SK-Hep1细胞上皮间质转化的抑制效果研究

目的研究草苁蓉环烯醚萜苷(IGBR)联合5-氟尿嘧啶(5-Fu)抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人肝癌HepG2、SK-Hep1细胞上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT),比较其药物的作用疗效。方法采用噻唑蓝(MTT)法检测HepG2、SK-Hep1细胞存活率,计算联合指数(Q值),判断联合用药的相互作用;建立HepG2、SK-Hep1细胞EMT模型,检测细胞黏附率,Westernblotting检测相关的蛋白表达,免疫荧光法检测钙黏附蛋白-E(E-cadherin)和波形纤维蛋白(Vimentin)的表达。结果人肝癌细胞在给药48 h细胞存活率降低(P<0.05),IGBR和5-Fu两者有相加或协同作用;与模型组比较,给药组(IGBR组、5-Fu组、联合组)抑制细胞黏附率(P<0.05);与对照组比较,模型组基质金属蛋白酶2、7、9(MMP2、MMP7、MMP9)、锌指转录因子1、2(Snail、Slug)蛋白表达上调(P<0.05);与模型组比较,给药组(IGBR组、5-Fu组、联合组)MMP2、MMP7、MMP9、Snail、Slug蛋白表达降低(P<0.05);与对照组比较,模型组E-cadherin荧光强度减弱,Vimentin荧光强度增强;与模型组比,给药组(IGBR组、5-Fu组、联合组)E-cadherin荧光强度增强,Vimentin荧光强度减弱。结论 IGBR和5-Fu可以抑制肝癌EMT,联合用药对HepG2细胞作用相加;对SK-Hep1细胞具有协同效果,SK-Hep1细胞用药疗效优于HepG2细胞。

UPLC-MS/MS同时测定巴戟天中4个环烯醚萜苷的含量

目的:建立UPLC-MS/MS法同时测定巴戟天中4个环烯醚萜苷(水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸、车叶草苷酸和车叶草苷)含量。方法:巴戟天以甲醇回流提取;采用Xbridge BEH C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-0.3%甲酸水为流动相,梯度洗脱;电喷雾离子源,负离子多反应监测模式监测,内标法测定。结果:水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸,车叶草苷酸和车叶草苷质量浓度在.015~79.65、0.030~96.00、0.042~21.00、0.018~37.50μg·m L^(-1)范围内与峰面积呈现良好的线性关系(R20≥0.994 9);平均加样回收率分别为99.4%、98.5%、98.1%、97.7%,RSD分别为2.3%、2.5%、3.5%、4.1%;不同产地巴戟天中车叶草甘酸和车叶草甘的含量差异较大;结论:该方法可靠,简便,可用于巴戟天中环烯醚萜苷的快速检测。