9-顺式-维甲酸联合8-cl-cAMP诱导人肺癌细胞株凋亡的研究

目的:探讨9-顺式-维甲酸(9-cis-RA)联合8-cl-cAMP对人肺癌细胞株H460和H292的生长抑制和凋亡诱导作用。方法:应用MTT法分别检测单用9-cis-RA和8-cl-cAMP以及两药联合使用对H460和H292细胞的生长抑制作用;应用流式细胞术(FCM)分析9-cis-RA和8-cl-cAMP对H460和H292细胞的凋亡诱导作用。结果:单药9-cis-RA明显抑制H460细胞的生长,具有时间和浓度依赖性,并诱导其凋亡,9-cis-RA(5×10-6moL/L )诱导的凋亡率最高;同样条件下,H292细胞对9-cis-RA不敏感;9-cis-RA联合8-cl-cAMP对H460细胞的生长抑制作用较单药组提早24h出现,同时,9-cis RA联合8-cl-cAMP明显抑制H292细胞生长,且诱导其凋亡。结论: 人肺癌细胞株H460和H292对9-cis-RA的敏感性不同,9-cis-RA联合8-cl-cAMP对H460和H292细胞的生长抑制和凋亡诱导具有协同作用。

9-顺式-维甲酸联合8-cl-cAMP对肺癌细胞凋亡的协同作用

目的探讨9-顺式-维甲酸(9-cis-RA)联合8-cl-cAMP对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株(H460和H292)的生长抑制和诱导凋亡的协同作用。方法实验分为9-cis-RA 1、5、10、20μmol/L组;8-cl-cAMP 5、10、20、50μmol/L组;9-cis-RA(5、10μmol/L)+8-cl-cAMP(10μmol/L)联合组和阴性对照组。以台盼蓝拒染法检测细胞生长抑制率,以Hoechst33258荧光染色法、DNA凝胶电泳法和流式细胞术等检测细胞凋亡。结果与阴性对照组比较,9-cis-RA明显抑制H460细胞生长,具有时间和浓度依赖性,并诱导凋亡(P<0.01),5μmol/L 9-cis-RA诱导48 h凋亡率最高;同样条件下,H292细胞对9-cis-RA不敏感。8-cl-cAMP抑制H460和H292生长,有浓度依赖性;与相同剂量单药组比较,联合用药组H460细胞和H292细胞的生长抑制率和凋亡率均显著提高(P<0.01)。结论人NSCLC细胞株H460和H292对9-cis-RA的敏感性不同,9-cis-RA明显抑制H460细胞生长,诱导凋亡,H292则表现耐药;9-cis-RA联合8-cl-cAMP对H460和H292细胞的生长抑制和诱导凋亡具有协同作用,并可部分逆转H292细胞对9-cis-RA的耐药性。

9-顺式-维甲酸联合8-cl-cAMP对人肺癌细胞生长和凋亡的影响

目的:探讨9-顺式-维甲酸(9-cis-RA)联合8-cl-cAMP对H460和H292细胞的生长抑制和凋亡诱导作用。方法:应用MTT法检测9-cis-RA和8-cl-cAMP分别以及联合对H460和H292细胞的生长抑制作用;应用流式细胞术分析9-cis-RA和8-cl-cAMP对H460和H292细胞的凋亡诱导作用;应用RT-PCR法检测Fas、FasL基因的表达以及应用比色法测定caspase-3的活性。结果:9-cis-RA明显抑制H460细胞的生长并诱导其凋亡,H292细胞对9-cis-RA不敏感。9-cis-RA联合8-cl-cAMP明显抑制H292细胞生长,且诱导其凋亡。9-cis-RA联合8-cl-cAMP作用后,H460细胞FasmRNA表达水平较单药组提高;H292细胞FasmRNA的表达也有提高,说明二者联合对Fas的转录具有协同作用。在FasmRNA表达水平提高时,caspase-3的活性明显提高,二者具有显著相关性。结论:H460和H292细胞对9-cis-RA的敏感性不同,9-cis-RA联合8-cl-cAMP对H460和H292细胞的生长抑制和凋亡诱导具有协同作用;且Fas参与了H460和H292细胞的凋亡过程。

9-顺式维甲酸诱导胃癌MGC803细胞周期阻滞和凋亡的作用机制

背景与目的:9-顺式维甲酸(9-cisretinoicacid,9-cisRA)对胃癌的抗癌活性及机制尚不清楚,本研究以MGC803为靶细胞观察9-cisRA对胃癌的作用。方法:采用RT-PCR法检测维甲类X受体α(recinoidXreceptor!,RXRα)、细胞周期蛋白CyclinD1和细胞周期蛋白依赖性激酶CDK4mRNA表达,流式细胞术检测细胞周期,MTT实验检测9-cisRA作用MGC803细胞后生长抑制情况,Hoechst33342/PI双荧光染色和琼脂糖凝胶电泳检测凋亡,免疫细胞化学检测凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达。结果:0.1～10μmol/L9-cisRA作用MGC803细胞96h,能显著抑制细胞增殖。10μmol/L9-cisRA分别作用48、72和96h,G1期细胞随着作用时间的延长而增加,呈明显的G1期阻滞。作用72h后,细胞出现核染色质凝集、DNA片段化等凋亡特征;从作用48h开始,Bcl-2表达即显著下降。在MGC803细胞中RXRα表达较弱,经10μmol/L9-cisRA作用48h其表达水平显著增加(P<0.01);作用96h,细胞中CyclinD1和CDK4表达显著降低(P<0.01)。结论:9-cisRA能明显诱导MGC803细胞周期G1期阻滞和凋亡,该作用可能与其下调细胞周期因子CyclinD1和CDK4表达有关。

9-顺式维甲酸在原代培养猪前体脂肪细胞分化中的调控作用

采用RT-PCR、油红O染色法、油红O染色提取法和分光光度计法,探讨不同浓度9-顺式维甲酸(9-cisRA)(0-10$mol/L)对体外原代培养猪前体脂肪细胞分化的影响及其可能机制。结果表明,9-cisRA在脂肪细胞分化中因浓度不同而发挥不同作用。低浓度9-cisRA(0-10nmol/L)促进前体脂肪细胞分化,并上调RXRα、PPARγmRNA表达,增加前体脂肪细胞分化标志酶3-磷酸甘油脱氢酶(glyc-erol-3-phosphate dehydrogenase,GPDH)的活性;高浓度9-cisRA(100nmol/L-10$mol/L)则抑制前体脂肪细胞分化,并下调RXRα、PPARγmRNA表达,减少GPDH的活性。结果提示9-cisRA在猪前体脂肪细胞分化中,可能通过调控RXRα和PPARγ基因表达变化来发挥其促进或抑制作用。

9-顺式维甲酸对甲状腺鳞癌SW579细胞周期及CYCLIND1、CDK4表达的影响

目的探讨9-顺式维甲酸(9-cisRA)对甲状腺鳞癌细胞系SW579细胞周期及周期因子表达的影响。方法分别以不同浓度的9-cisRA处理SW579细胞系,采用MTT比色法测定细胞增殖活性;用流式细胞仪检测细胞周期;用RT-PCR方法检测SW579细胞CDK4、CYCLIND1 mRNA的表达水平;用Western blot法检测SW579细胞CDK4、CYCLIND1的蛋白表达。结果 9-cisRA作用后,各组细胞均出现显著的生长抑制作用,生长抑制率明显升高,并呈剂量依赖性。流式细胞仪分析,各组细胞均随着药物浓度的升高,S期细胞在细胞周期中所占比例逐渐减少,G1期细胞则明显增加(P<0.01),细胞滞留在G1期。经不同浓度9-cisRA处理的细胞CDK4 mRNA和蛋白表达水平没有明显变化;CYCLIND1的mRNA和蛋白表达水平明显下调(P<0.01)。结论 9-cisRA显著抑制SW579细胞生长,可能与抑制CYCLIND1的表达并将细胞阻滞于G1期有关。

9-顺式维甲酸对胃癌细胞周期及周期因子表达的影响

目的探讨9-顺式维甲酸(9-cisRA)抑制胃癌细胞生长及其机制。方法RT-PCR检测9-cisRA作用MGC80-3细胞前后细胞周期蛋白D1(CyclinD1)和周期蛋白依赖性激酶4(CDK4) mRNA表达的变化;流式细胞术和MTT法检测其对细胞周期和生长抑制的作用;电镜观察细胞形态学改变。结果10μmol/L9-cisRA作用MGC80-3细胞96h时,CyclinD1和CDK4 mRNA表达均显著下降(P<0.01);9-cisRA对MGC80-3细胞生长抑制作用呈时间和剂量依赖性;9-cisRA诱导MGC80-3细胞阻滞于细胞周期的G1期,并呈典型的凋亡特征性的“亚G1峰”和形态学改变。结论9-cisRA对MGC80-3细胞有显著的生长抑制和诱导凋亡作用,与抑制CyclinD1和CDK4表达将细胞周期阻滞于G1期有关。

9-顺式维甲酸抑制甲状腺鳞癌细胞SW579增殖的作用机制

目的:观察9-顺式维甲酸(9-cis-retinoic acid,9-cisRA)对甲状腺鳞癌细胞株SW579细胞RARβ、p21、CDK4、CyclinDl表达的影响,进而探讨9-cisRA的抗癌作用机制方法:分别以终浓度为1×10^(-7)、1×10^(-6)、5×10^(-6)、1×10^(-5)mol/L 9-cisRA作用SW579细胞,各组细胞均在培养24 h后加药,继续培养48 h。用RT-PCR方法检测SW579细胞RARβ、p21、CDK4、CyclinD1的mRNA表达;用Western Blot检测SW579细胞RARβ、p21、CDK4、CvclinD1的蛋白表达结果:9-cisRA作用后,RT-PCR检测结果表明,经不同浓度9-cisRA处理的细胞RARB、p21的mRNA表达水平均显著上调;CDK4的mRNA表达水平无明显变化;CyclinD1的表达水平明显下调;Western Blot检测结果表明经不同浓度9-cisRA处理的细胞RARβ、p21蛋白表达水平均显著上调;CDK4蛋白表达水平无明显变化;CyclinD1蛋白表达水平明显下调。结论:9-cisRA在一定浓度范围内可能通过上调RARβ、p21的表达进而下调细胞周期蛋白CvclinD1的表达,从而抑制细胞增殖。

9-顺式维甲酸抑制PMA诱导人单核细胞系THP-1表达MMP-9

目的探讨视黄醛X受体(retinoid X receptors,RXRs)特异性激动剂9-顺式维甲酸(9-cisRA)对佛波酯(PMA)诱导人单核细胞系THP-1基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达及活性的影响。方法体外培养THP-1细胞,PMA诱导分化为巨噬细胞,采用9-cisRA对不同浓度PMA组进行干预,应用Realtime-PCR、Westerblotting测定THP-1细胞MMP-9的基因和蛋白水平表达水平,通过Gelatin Zymography法检测MMP-9的酶活性。结果9-cisRA(100nmol/L)对不同浓度PMA组(10、20和40 nmol/L)干预24 h,9-cisRA可明显抑制THP-1细胞MMP-9转录水平,MMP-9的mRNA抑制率分别28%、60%、88%(P<0.01)。MMP-9蛋白水平及酶活性也呈显著下降。结论RXRs特异性激动剂9-cisRA可显著抑制PMA诱导THP-1的MMP-9转录和蛋白水平表达及其酶活性。

9-顺式维甲酸联合细胞毒药物对MYCN扩增型神经母细胞瘤细胞毒性及MYCN、MDR1表达的影响

目的:观察9-顺式维甲酸(9-cis retinoic acid,RA)联合细胞毒药物对MYCN扩增型神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞的毒性及MYCN、MDR1表达的影响,为临床合理用药提供依据。方法:RA分别与长春新碱(VCR)、顺铂(CDDP)、足叶乙甙(VP16)、阿霉素(ADR)双药联合或单独作用IMR32细胞株24h后:(1)CCK-8法测定细胞生长抑制率;(2)流式细胞仪检测细胞凋亡率;(3)实时荧光定量PCR法检测MYCN、MDR1的mRNA表达。结果:(1)细胞生长抑制率:各双药组高于相应单药组(P<0.01)。(2)细胞凋亡率:双药组高于相应单药组(P<0.01),RA+CDDP高于其他双药组(P<0.05)。(3)MYCN表达:各双药组均低于相应单药组(P<0.05),RA+VCR低于其他双药组(P<0.05);MDR1表达:双药组高于相应单药组(P<0.05),RA+ADR高于其他双药组(P<0.01)。结论:RA联合细胞毒药物对NB生长抑制、凋亡及下调MYCN表达有协同作用,可上调MDR1表达,综合分析RA与VCR或CDDP的组合可能为临床联合用药提供较合理的选择。

9-顺式维甲酸体外诱导神经母细胞瘤细胞分化的研究

目的 :为设计维甲酸治疗神经母细胞瘤可能的有效方案 ,本文对 9-顺式维甲酸 (9-cisretinoicacid ,9-cisRA)体外诱导分化神经母细胞瘤细胞 (SK -N -SH)作用进行了研究。方法 :SK -N -SH细胞经 9-cisRA处理后 ,采用相差显微镜、神经纤维银染法、透射电镜观察等手段 ,观察 9-cisRA对细胞生长的影响。结果 :9-cisRA作用SK -N -SH细胞 7d后 ,细胞形态发生变化 ;12d时出现神经原性表型 ,多个细胞形成“神经节” ,节间形成粗而长的类神经纤维 ;尼氏小体和银染法亦证明细胞产生显著分化。透射电镜观察结果表明 ,9-cisRA对该细胞有分化作用 ,却无明显凋亡诱导作用。结论 :9-cisRA对神经母细胞瘤细胞体外能产生明显诱导分化作用。

9-顺式维甲酸协同-干扰素下调神经母细胞瘤细胞MYCN和MDR1基因mRNA表达的实验研究

目的测定9-顺式维甲酸(9-cis retinoic acid,9-cis RA)联合γ-干扰素(gamma-interferon,γ-IFN)在体外诱导神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)SK-N-SH细胞分化过程中MYCN和MDR1基因mRNA表达方面的变化,探讨其联合作用的分子生物学机制。方法将NB细胞分为A组(对照组)、B组(9-cis RA用药组)、C组(γ-IFN用药组)和D组(9-cis RA和γ-IFN联合用药组)4组,在处理后5d收集各组细胞,用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法(fluorescent quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,FQ-RT-PCR)检测细胞MYCN和MDR1基因mRNA的表达变化并对其进行相关性分析。结果 9-cis RA和γ-IFN体外皆可下调NB细胞MYCN和MDR1基因mRNA的表达,二者联合应用具有协同效应;两基因的表达呈显著的正相关关系。结论 9-cis RA协同?-IFN在体外诱导NB细胞分化、凋亡及生长抑制的作用机制可能为共同下调MYCN和MDR1基因mRNA的表达,一方面抑制了NB细胞原癌基因的生物学表现,另一方面预防了多药耐药(multidrug resistance,MDR),为其联合应用提供分子生物学依据和理论指导。

人血浆中全反式维甲酸、13-顺式维甲酸和9-顺式维甲酸浓度的监测

目的建立高效液相色谱法同时测定人血浆中全反式维甲酸、13-顺式维甲酸和9-顺式维甲酸浓度。方法色谱柱为KromasilC18柱(4.6mm×250mm,5μm);柱温为室温。流动相A:甲醇;流动相B:0.01mol/L醋酸钠缓冲液(pH=5.7),梯度洗脱,流速1ml/min;检测波长340nm。结果全反式维甲酸、13-顺式维甲酸和9-顺式维甲酸血药浓度在1～200ng/ml范围内,浓度与峰面积比有良好的线性关系,最低检测浓度为0.5ng/ml。全反式维甲酸方法回收率为97.22%～108.80%,日内RSD≤8.24%,日间RSD≤11.34%;13-顺式维甲酸方法回收率为98.62%～104.80%,日内RSD≤8.02%,日间RSD≤11.70%;9-顺式维甲酸方法回收率为97.74%～102.24%,日内RSD≤7.72%,日间RSD≤9.17%。结论本方法简单、快速、灵敏、重现性好,适用于全反式维甲酸、13-顺式维甲酸和9-顺式维甲酸临床血药浓度监测及人体药代动力学研究。

维生素D_3、9-顺式维甲酸及其相应核受体对hsp90β基因表达的调控

目的 研究维生素 D3(VD3)、9-顺式维甲酸 (9- cis- RA)及其相应核受体对 hsp90 β基因表达的调控作用。方法 采用 DEAE- Dextran方法将人 hsp90 β基因调控片段 (- 10 39bp/ +15 31bp)介导的荧光素酶 (L uc)报告基因质粒 β1.11转染 Jurkat细胞 ,并用 VD3和 9- cis- RA分别或同时刺激细胞 ,或将质粒 β1.11及野生型维生素D3受体 (VDR)或 /和维甲酸 X受体 α(RXRα)真核表达质粒共转染 Jurkat细胞 ,检测细胞裂解液中荧光素酶活性 ;用 Western印迹分析方法检测经 VDR真核表达质粒转染或用 VD3和 9- cis- RA刺激的 Jurkat细胞中内源性Hsp90β蛋白的改变 ;通过电泳迁移率变更分析 (EMSA)实验 ,检测 VDR和 RXR能否与含有 hsp90β基因第一内含子中维生素 D3应答元件 (i VDRE)的双链寡核苷酸片段发生特异结合。结果 VD3和 9- cis- RA可分别低水平诱导hsp90β基因表达 ,而两种配体同时加入有协同作用。 VDR或 RXRα分别转染只能较弱地抑制 hsp90β基因表达 ,二者共转染能增强其抑制作用。 EMSA实验证实 ,VDR和 RXR都可特异结合于 i VDRE上。结论 VD3和 9- cis- RA这两条信号途径共同参与 hsp90β基因的启动子活性调节。

9-顺维甲酸联合细胞毒性药物对SH-SY5Y神经母细胞系增殖及诱导凋亡的影响

目的:探讨9-顺维甲酸联合细胞毒性药物对SH-SY5Y神经母细胞系增殖及诱导凋亡方面的作用,为9-顺式维甲酸治疗神经母细胞瘤可能有效方案的设计提供实验依据。方法:1)采用MTT比色法测定不同单药组和双药组在不同时间及不同浓度下SH-SY5Y细胞的抑制率;2)采用流式细胞仪测定不同单药组和双药组在不同时间及不同浓度下SH-SY5Y细胞的凋亡指数。结果:1)DDP+RA双药组中,低剂量组在24和48h以及高剂量组在48h细胞抑制率较相应DDP单药组高(P<0.01);UP-16+RA双药组中,低、高剂量组在24h细胞抑制率较相应UP-16单药组高(P<0.01);DDP+RA和UP-16+RA双药组(除了低剂量DDP+RA组在24h)细胞抑制率均高于RA组(500ng/孔)(P<0.01)。2)单药组和双药组细胞凋亡指数均高于对照组(P<0.01);双药组细胞凋亡指数均高于相应单药组(P<0.01)。结论:细胞毒性药物与RA组合用药细胞抑制率和早期细胞凋亡指数较单药高,提示细胞毒性药物与RA在抑制细胞生长和诱导凋亡方面表现很好的协同作用。

土槿乙酸增强9顺式维甲酸对白血病细胞生长的抑制作用

目的观察过氧化物酶体激活物活化受体γ(PPARγ)的配体土槿乙酸(PLAB)联合维甲类X受体α(RXRα)的配体9-顺式维甲酸(9-cis RA)对白血病细胞生长的影响。方法应用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术和Hoechst33342/PI染色分析HL-60细胞凋亡及细胞周期变化,RT-PCR检测PPARγ和RXRαmRNA表达。结果HL-60细胞系上有PPARγ和RXRα的表达,经配体联合作用后能明显抑制细胞生长,呈剂量依赖关系;细胞出现明显凋亡形态学改变和亚G1峰;PPARγ和RXRαmRNA表达明显增强。结论PLAB能显著增强9-cis RA对HL-60细胞的生长抑制作用,其机制与凋亡诱导效应有关。

联合应用9-顺式维甲酸和化疗药物对人胆管癌细胞系QBC_(939)的作用

目的 观察联合应用分化诱导剂9-cis RA和化疗药物对人胆管癌细胞QBC939细胞的作用,为临床诱导分化治疗胆管癌提供实验基础。方法 以10-6mol/L的9-cis RA作用于培养的人胆管癌细胞系QBC939细胞1、2、3、5 d后检测几种常用化疗药物对细胞的杀伤作用。并观察同时加入10-6mol/L的9-cis RA和化疗药物对QBC939细胞的杀伤作用。结果 同时应用9-cis,RA和化疗药物时,对QBC939细胞的杀伤作用与单用化疗药物时无明显差异。9-cis RA作用2 d和3 d时,化疗药物对QBC939,细胞的杀伤作用强于9-cis RA作用前;9-cis RA作用5 d时,化疗药物对QBC939细胞的作用较9-cis RA作用前强,但比3 d时下降。结论先用9-cis RA作用后可增强QBC939细胞对化疗药物的敏感性,此作用与9-cis RA作用时间有关。不同联合用药方法的效果不同。

9-顺式维甲酸诱导HL-60细胞凋亡

目的：检测９－顺式维甲酸（９－ｃｉｓＲＡ）诱导ＨＬ－６０细胞凋亡的能力，并探讨其分子机制。方法：应用形态学观察、ＤＮＡ电泳、流式细胞仪分析检测细胞凋亡，应用流式细胞仪检测ＨＬ－６０细胞ｂｃｌ－２含量。结果：９－ｃｉｓＲＡ可以诱导ＨＬ－６０细胞在分化后发生典型的凋亡。在ＨＬ－６０细胞分化和凋亡的过程中ｂｃｌ－２含量逐渐下降。９－ｃｉｓＲＡ诱导ＨＬ－６０细胞凋亡能力和降低ｂｃｌ－２表达的能力均显著强于全反式维甲酸（Ａ－ＴＲＡ）。结论：９－ｃｉｓＲＡ具有诱导ＨＬ－６０细胞凋亡的作用。ｂｃｌ－２表达水平的降低可能是经诱导分化成熟的白血病细胞走向凋亡的重要条件。

土槿乙酸联合9-顺式维甲酸促进白血病细胞凋亡的机制研究

目的观察过氧化物酶体激活物活化受体γ(PPARγ)的配体土槿乙酸(PLAB)联合维甲类X受体α(RXRα)的配体9-顺式维甲酸(9-cisRA)促进白血病细胞凋亡的作用,探讨其作用机制。方法应用透射电子显微镜、琼脂糖凝胶电泳分析HL-60细胞凋亡,RT-PCR检测HL-60细胞Cyclin D1和CDK4 mRNA表达。结果 HL-60细胞经配体联合作用后,电镜下可见明显细胞凋亡的形态学变化,琼脂糖凝胶电泳出现DNA Ladder,Cyc-lin D1及CDK4 mRNA的表达均降低,且联合用药组下降程度明显较单独作用组大(P<0.05)。结论 PLAB联合9-cisRA抑制HL-60细胞生长,其机制与凋亡诱导效应相关。