灵芝酸A对人非小细胞肺癌PC-9细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的:探讨灵芝酸A(GAA)对PC-9细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响,并阐明其作用机制。方法:体外培养非小细胞肺癌(NSCLC)PC-9细胞,分为对照组(未加GAA)、低剂量GAA组(0.1 mmol·L^(-1)GAA)和高剂量GAA组(0.5 mmol·L^(-1)GAA)。采用噻唑蓝(MTT)法检测各组PC-9细胞增殖率,流式细胞术检测各组PC-9细胞凋亡率,细胞划痕实验检测各组PC-9细胞划痕愈合率,Transwell小室实验检测各组PC-9细胞迁移能力,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测各组PC-9细胞中血管内皮生长因子(VEGF)和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA及蛋白表达水平。结果:MTT法检测,与对照组比较,处理48和72 h时低剂量GAA组细胞增殖率均降低(P<0.05),处理24、48和72 h时高剂量GAA组细胞增殖率均降低(P<0.05);与低剂量GAA组比较,处理24、48和72 h时高剂量GAA组细胞增殖率均降低(P<0.05)。流式细胞术检测,与对照组和低剂量GAA组比较,高剂量GAA组细胞凋亡率升高(P<0.05)。细胞划痕实验,与对照组和低剂量GAA组比较,高剂量GAA组细胞划痕愈合率降低(P<0.05)。Transwell小室实验,与对照组和低剂量GAA组比较,高剂量GAA组迁移细胞数减少(P<0.05)。RT-qPCR法和Western blotting法检测,与对照组和低剂量GAA组比较,高剂量GAA组细胞中HIF-1α和VEGF mRNA及蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论:高剂量GAA可抑制PC-9细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与调控VEGF和HIF-1αmRNA及蛋白表达有关。

miR-1-3p通过靶向调控CDK9对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨miR-1-3p与细胞周期蛋白依赖性激酶9(CDK9)的靶向调控关系及其对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖和凋亡的影响。方法:培养人肺上皮细胞株BEAS-2B及人NSCLC细胞株A549、H1299、HCC827和H460,并将miR-1-3p mimic及其阴性对照(miR-NC)转染至A549细胞,qPCR法检测细胞miR-1-3p表达水平,Western blot法检测细胞CDK9蛋白表达水平,生物信息学方法预测miR-1-3p可能的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证miR-1-3p与CDK9的靶向调控关系。将miR-1-3p mimic和pCEP4-CDK9质粒分别或同时转染至A549细胞,CCK-8法检测细胞增殖率,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测凋亡相关蛋白cleaved-Caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。结果:与BEAS-2B细胞相比,A549、H1299、HCC827和H460细胞中miR-1-3p表达降低(P<0.05),CDK9蛋白表达升高(P<0.05),A549细胞水平变化最为显著。CDK9是miR-1-3p的靶基因,可被miR-1-3p靶向负调控抑制其蛋白表达。miR-1-3p过表达可显著抑制A549细胞增殖及细胞克隆形成能力,提高A549细胞凋亡率,促进cleaved-Caspase-3和Bax蛋白表达,抑制Bcl-2蛋白表达。过表达CDK9可明显逆转miR-1-3p对A549细胞增殖的抑制作用及凋亡的促进作用。结论:miR-1-3p可抑制NSCLC细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与靶向抑制CDK9蛋白表达有关。

9顺维A酸对人肺腺癌细胞A2增殖及凋亡影响的实验研究

研究9顺维A酸(9-cis RA)抑制肺腺癌细胞A2增殖及诱导凋亡的作用并初步探讨其作用机制。体外培养A2细胞,随机分为4组,实验组加9-cis RA使其终浓度为1、5、10μmol/L,对照组加入二甲亚砜使其终质量分数为0.1%,采用MTT法检测各组A2细胞增殖情况;使用流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析药物作用后各组细胞的凋亡率;用逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)检测各组细胞bax、fas、bcl-2基因的变化。9顺维A酸对人肺癌细胞株A2增殖均有明显的抑制作用(P<0.01),实验组中细胞凋亡发生率显著增高(P<0.05),且随着浓度的升高抑制作用和凋亡率也随之提高。实验组bax m RNA、fas m RNA表达显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);实验组bcl-2 m RNA表达显著低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 9-cis RA具有明显的抗肺腺癌细胞A2增殖的作用,其机制可能通过上调bax、fas基因和下调bcl-2基因表达、诱导细胞凋亡有关。

盐酸埃克替尼对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制探讨

目的观察盐酸埃克替尼对非小细胞肺癌PC-9细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法取对数生长期的PC-9细胞,以40μmol/L盐酸埃克替尼培养0、2、4、8、12、24 h,以0、20、40、60、80μmol/L的盐酸埃克替尼处理12 h,采用MTT法检测细胞增殖活性;将对数生长期的PC-9细胞分为给药组和对照组,分别以40μmol/L盐酸埃克替尼、DMSO处理8 h,用流式细胞仪检测凋亡细胞并计算凋亡率,Western blot法检测JAK2、p-JAK2、信号转导与激活因子3(STAT3)、p-STAT3和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白,细胞免疫荧光技术观察并计算STAT3入核细胞百分率。结果随着盐酸埃克替尼浓度的增加及作用时间的延长,PC-9细胞增殖活性逐渐降低,40、60、80μmol/L与0μmol/L-比较,8、12、24 h与0 h比较,P均<0.05。给药组PC-9细胞凋亡率3.70%±0.39%,明显高于对照组的1.40%±0.21%,P<0.05。与对照组比较,给药组p-JAK2、p-STAT3相对表达量均减少(P均<0.05),VEGF蛋白相对表达量亦减少(P<0.01)。给药组STAT3入核细胞百分率为36.48%±2.12%,低于对照组的86.56%±1.82%(P<0.01)。结论盐酸埃克替尼可抑制非小细胞肺癌细胞增殖,促进细胞凋亡;其可能通过抑制JAK2-STAT3信号通路活性及STAT3入核,并下调VEGF蛋白表达发挥作用。

L-氨基酸氧化酶对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的影响研究

目的:探讨L-氨基酸氧化酶(LAAO)对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的影响,为临床上寻找新的肺癌治疗方法提供参考。方法:将A549细胞制成浓度为5×104个/mL的细胞悬液,根据LAAO干预浓度的不同,将其分为4组:2.41、4.82、9.64、19.28mg·mL-1干预组,各组均干预24、48、72h。镜下观察各组细胞形态学改变,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,原位末端标记法检测细胞凋亡指数,另设立阴性对照组进行比较。结果:LAAO对A549细胞增殖的抑制率随时间延长和浓度增加而增加(P<0.05),凋亡指数随时间延长和浓度增加而增加(P<0.05)。结论:LAAO可抑制A549细胞增殖,诱导其凋亡,且呈时间、剂量依赖性。

广藿香酮对肺癌PC-9细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨广藿香酮对肺癌PC-9细胞增殖、克隆形成、侵袭、迁移和凋亡的影响,并初步探讨其可能的分子机制。方法:配制不同浓度的广藿香酮(50,100,150,200,250,300,350,400μmol·L^(-1))处理人肺癌PC-9、A549和95D细胞24,48 h,采用CCK-8法检测细胞增殖活力,筛选出其中对广藿香酮最敏感的细胞株并确定低、中、高浓度用于后续实验;将PC-9细胞分为对照组和广藿香酮低、中、高浓度组,采用平板克隆实验、Transwell小室实验、划痕愈合实验和流式细胞术分别检测细胞克隆形成、侵袭、迁移能力和细胞凋亡;采用Western blot检测PC-9细胞中PCNA、Vimentin、MMP-2、MMP-9、Bax、Bcl-2、Caspase-3、Cleaved-caspase-3蛋白的表达。结果:广藿香酮可有效抑制PC-9、A549和95D细胞增殖能力,且呈剂量和时间依赖性,其中PC-9细胞对广藿香酮最敏感;广藿香酮浓度分别为100,150,200μmol·L^(-1)处理PC-9细胞48 h,与对照组比较,广藿香酮低、中、高浓度组中细胞克隆形成、侵袭和迁移能力显著下降,细胞凋亡率显著上升;Western blot结果显示,与对照组比较,广藿香酮低、中、高浓度组PC-9细胞中PCNA、Vimentin、MMP-2、MMP-9和Bcl-2蛋白的表达显著减少,Bax、Cleaved-caspase-3蛋白的表达显著增加。结论:广藿香酮能显著抑制肺癌PC-9细胞的增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力,并诱导细胞凋亡,分子机制可能与下调细胞中PCNA、Vimentin、MMP-2、MMP-9和Bcl-2蛋白的表达,上调Bax、Cleaved-caspase-3蛋白的表达有关。

熊果酸对肺癌A549细胞增殖、凋亡与侵袭的影响及可能机制

目的探讨熊果酸对肺癌A549细胞增殖、凋亡与侵袭的影响及可能机制。方法体外培养A549细胞,分别以0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L熊果酸处理48h后,平板克隆实验与MTT实验检测肺癌A549细胞的增殖能力;流式细胞术检测肺癌A549细胞的凋亡率;Transwell实验检测A549细胞的侵袭能力;Western blot方法检测各组细胞磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达水平。结果与对照组相比,不同浓度熊果酸处理组细胞的增殖能力和克隆形成能力均明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.01);凋亡率升高,侵袭能力降低,A549细胞PI3K、Akt、VEGF和MMP-9的表达水平均明显降低(P<0.01)。结论熊果酸抑制肺癌A549细胞增殖与侵袭,促进凋亡。

甘草酸联合Notch1 siRNA对肺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的研究甘草酸(GA)联合Notch1小干扰RNA(siRNA)对肺癌细胞(HCC827)增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法将HCC827细胞分为对照组(正常培养的细胞)、GA组(5.0 mmol·L^(-1) GA处理)、GA+si-NC组(5.0 mmol·L^(-1) GA处理转染si-NC的细胞)、GA+si-Notch1组(5.0 mmol·L^(-1) GA处理转染si-NC细胞)。用细胞计数(CCK-8)法、流式细胞术、Transwell实验检测各组细胞增殖、凋亡、迁移侵袭情况。结果对照组、GA组、GA+si-NC组、GA+si-Notch1组HCC827细胞活力(72 h)为1.00±0.12,0.70±0.09,0.63±0.04,0.46±0.06,迁移细胞数为136.00±8.88,60.00±8.96,66.00±6.08,34.00±3.21,侵袭细胞数为106.00±7.51,45.00±5.56,48.00±3.21,29.00±3.51,凋亡率分别为(6.31±0.83)%,(15.07±0.65)%,(14.87±0.47)%,(20.61±1.64)%,对照组与GA组比较、GA+si-NC组与GA+si-Notch1组比较,上述指标差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论甘草酸联合Notch1 siRNA1可抑制肺癌细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡。

迷迭香酸调节p53/p21信号通路诱导非小细胞肺癌凋亡的体外研究

目的:探讨迷迭香酸(RA)对肺癌95D和A549细胞的凋亡作用及其作用机制。方法:CCK-8检测RA(25、50、100、200、300、400μmol/L)对95D和A549细胞不同时间(42、72 h)的细胞增殖作用;碘化丙啶(PI)单染法检测RA(150、200、250μmol/L)对95D和A549细胞周期的影响;异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)凋亡试剂盒检测RA(150、200、250μmol/L)对95D和A549细胞凋亡的影响;Western Blot检测RA(150、200、250μmol/L)对95D和A549细胞中p53和p21蛋白水平的影响。结果:95D和A549细胞随着RA给药剂量增加细胞存活率逐渐降低;RA各剂量组95D和A549细胞较空白对照组细胞阻滞在G1/G0期(P<0.05,P<0.01);RA高剂量组95D早凋亡细胞和A549中早、晚凋亡细胞凋亡量较空白对照组显著升高(P<0.01);与空白对照组比较,RA各剂量组95D和A549细胞中p53和p21蛋白表达水平升高。结论:RA可以抑制95D和A549细胞的增殖,周期阻滞G1/G0期,进而诱导细胞凋亡,其机制可能与调节p53/p21信号通路有关。