拮抗青枯病90B4-2-2菌株模拟生产发酵工艺研究

90B4 2 2菌株的培养及最大菌落数产生的发酵模拟生产工艺条件 ,正交试验得到最适培养基碳、氮源组成为 ( % ) :黄豆饼粉 1.0 ,淀粉 1.5,酵母粉 0 .8;最适生长温度为 30℃ ;pH7.0 ,接种量 4 % ,在 2 50mL三角瓶中装 70mL培养基 ,2 0 0r/min摇床上培养 35h ,菌落数为 6.69×10 9CFU/mL ;上罐 ( 1～ 2t)发酵 2 2h ,终点总的菌落数为 ( 1.85～ 2 .50 )× 10 10 CFU/mL。

乳杆菌活菌胶囊协同人干扰素α-2b凝胶治疗HSIL患者CKC术后伴HR-HPV感染的效果及对IL-4、IL-10及TNF-α水平的影响

目的探讨乳杆菌活菌胶囊协同人干扰素α-2b凝胶治疗高度鳞状上皮内病变(HSIL)患者宫颈冷刀锥切术(CKC)术后伴高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染的效果及对白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素10(IL-10)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的影响。方法选取2019年1月至2022年12月于北京市通州区妇幼保健院因HSIL行CKC术后伴HR-HPV感染者161例为研究对象,依据治疗方式差异分为对照组79例(予人干扰素α-2b凝胶治疗)与研究组82例(予乳杆菌活菌胶囊协同人干扰素α-2b凝胶治疗)。对比两组临床疗效、阴道微生态评分(Nugent)、宫颈局部微免疫指标水平[IL-4、IL-10、TNF-α、白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)]、宫颈病变组织中相关组织阳性表达率[吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)、IL-10、IL-4、TNF-α]。结果治疗后,对照组总有效率为83.54%,研究组总有效率为93.90%,对照组总有效率比研究组低,差异有统计学意义(P<0.05);研究组阴道微生态环境恢复率(92.68%)比对照组(82.28%)高,pH值与Nugent评分均比对照组低,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后两组IL-2、IFN-γ细胞因子水平均上升,且研究组比对照组高;两组IL-4、IL-10、TNF-α水平均下降,且研究组比对照组低,差异均有统计学意义(P<0.05);两组IDO、IL-10、IL-4、TNF-α阳性表达率均比治疗前低,且研究组比对照组低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在应用乳杆菌活菌胶囊协同人干扰素α-2b凝胶治疗HSIL患者CKC术后伴HR-HPV感染的疗效更佳,有利于维持稳定宫颈微生态环境,提高免疫调节,降低炎症反应。

菠萝渣淀粉功能降解菌筛选及s2b7-4的鉴定

为了加快菠萝渣发酵,本试验通过利用多种选择性培养基,从自然发酵的菠萝渣中分离到多种淀粉分解菌,经过初筛和复筛,获得了降解菠萝渣的淀粉降解功能菌株s2b7-1和s2b7-4,筛选出其最适培养基为改良LB培养基及其优化组合。通过形态、生理生化和分子综合鉴定得出s2b7-4菌株为枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)。

90-2菌株对水稻野败型雄性不育细胞质浸染专化性的研究

用人工接种的方法在室内测定了90—2菌株对水稻野败型不育系和保持系的致病性及90—2菌株毒素对两种水稻材料的毒害作用,结果表明 90—2菌株对水稻野败型雄性不育细胞质有显著的专化侵染作用。

荧光假单胞菌AR4产2-酮基-D-葡萄糖酸发酵条件的研究

以淀粉水解糖为碳源,研究了不同氮源、碳氮比、金属离子、接种量以及环境因子(培养基起始pH值、通气量、温度)对抗噬菌体菌株荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)AR4产2-酮基-D-葡萄糖酸发酵的影响。结果表明,氮源、碳氮比、培养基的起始pH值、通气量及温度对该菌的产酸均有显著影响。在适宜培养条件下,该菌的摇瓶产酸及发酵转化率分别可达13.5%和90%左右。

6-溴-1-异丙烯基-1H-咪唑[4,5b]吡啶-2-酮酰胺衍生物的合成及其抑菌活性研究

【目的】研究6-溴-1-异丙烯基-1 H-咪唑[4,5b]吡啶-2-酮酰胺衍生物抑制真菌活性的构效关系,为病原菌的防治提供参考依据。【方法】以5-溴-2,3-二氨基吡啶为原料,经乙酰乙酸乙酯环化制得中间体化合物6-溴-1-异丙烯基-1 H-咪唑[4,5b]吡啶-2-酮,再按照目标化合物合成路线设计合成6-溴-1-异丙烯基-1 H-咪唑[4,5b]吡啶-2-酮酰胺衍生物。通过核磁共振、质谱以及元素分析对目标化合物进行结构表征。以嘧菌酯为对照,采用菌丝生长速率法测定目标化合物对小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)、玉米弯孢霉病菌(Curvularia lunata)、棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporumf.sp.vasinfectum)、茄子黄萎病菌(Verticillium dahlia)、西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)和苹果炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)的抑菌活性。【结果】合成了17个6-溴-1-异丙烯基-1 H-咪唑[4,5b]吡啶-2-酮酰胺衍生物,其中脂肪羧酸酰胺衍生物10个(B01-B10),芳香羧酸酰胺衍生物6个(B11-B16),杂环羧酸酰胺衍生物1个(B17)。抑菌活性测定结果表明,17个目标化合物对供试病原真菌均有一定的抑菌活性,其中化合物B01,B03-B06和B13在100μg/mL质量浓度下对部分供试病原真菌菌丝生长有明显的抑制作用,尤以化合物B06的抑菌活性最为突出,抑制率均可达到70%以上,其对6种供试植物病原真菌的EC50值分别为8.23,49.32,21.45,24.87,36.40和28.65μg/mL,均高于对照药剂嘧菌酯。【结论】6-溴-1-异丙烯基-1 H-咪唑[4,5b]吡啶-2-酮衍生物对6种供试病原真菌均具有一定的抑制活性,该类化合物的结构具有进一步改造研究的价值。

枯草芽孢杆菌菌株ZT4-2电击转化体系的建立

【目的】建立枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株ZT4-2的高效电击转化体系。【方法】带有荧光蛋白标记的穿梭质粒pGFP78,通过电击转化法将其转入枯草芽孢杆菌菌株ZT4-2。【结果】菌株培养阶段、感受态细胞浓度、感受态细胞量、质粒体积量、转化电压等条件的不同,会对电击转化效率造成影响。其中试验条件:制备感受态细胞的菌株培养阶段的OD_(600 nm)值=1.0,重悬菌体时每100mL起始菌液加入600μL的40%PEG6000;电击转化体系中,感受态细胞量200μL,质粒体积10μL,转化电压2.5kV。最高转化效率可达6823.67CFU/μg。【结论】建立了枯草芽孢杆菌菌株ZT4-2的电击转化体系,电击转化效率较高。

丰产鲫败血症病原CSS-4-2的Dot-ELISA快速检测

应用Dot-ELISA法对丰产鲫败血病病原菌豚鼠气单胞菌CSS-4-2菌株的全菌抗原进行检测,其最低检出水平为105 cells/mL.Dot-ELISA法对人工感染CSS-4-2菌株濒临死亡或有明显症状丰产鲫的肝、脾、肾组织匀浆上清液的阳性检出率为97%;而对未显症状丰产鲫的肝、脾、肾组织匀浆上清液的阳性检出率为25%.同时发现当感染浓度较高(≥109 cells·mL-1)时,攻毒3h后在脾脏中就能检出病原菌.

Hsp90抑制剂WH-4对肝癌细胞株SK-HEP-1增殖、凋亡及耐药基因表达的影响观察

目的探讨Hsp90抑制剂WH-4对肝癌细胞SK-HEP-1增殖、凋亡及耐药基因表达的影响。方法将肝癌细胞SK-HEP-1随机分为A、B、C组,A组分别加入0.625、1.25、2.5、5、10μmol/L WH-4,B组分别加入0.625、1.25、2.5、5、10μmol/L 17-AAG,C组加入等量生理盐水,培养48 h后,采用MTT法测算各组肝癌细胞SK-HEP-1增殖抑制率,并计算IC 50。将肝癌细胞SK-HEP-1随机分为A1、B1、C1组,分别加入2.3μmol/L WH-4、2.6μmol/L 17-AAG及生理盐水,培养48 h后,采用BrdU法观察肝癌细胞SK-HEP-1增殖活性。将肝癌细胞SK-HEP-1随机分为A2、B2、C2组,分别加入2.25μmol/L WH-4、2.80μmol/L 17-AAG、生理盐水,培养48 h后,采用软琼脂平板实验检测肝癌细胞SK-HEP-1克隆形成率,流式细胞术检测肝癌细胞SK-HEP-1凋亡率,采用Western blotting法检测肝癌细胞SK-HEP-1凋亡蛋白Bcl2、Bax、Bcl-xL。将肝癌细胞SK-HEP-1随机分为A3、B3、C3组,分别加入2.30μmol/L WH-4、2.65μmol/L 17-AAG及生理盐水。培养48 h后,采用qPCR法检测耐药基因ABCB1、ABCG2。结果WH-4对肝癌细胞SK-HEP-1有抑制作用,且呈浓度依赖性(R 2=0.647(48h),P均<0.05),IC 50为(2.35±0.25)μmol/L。与C1组相比,A1、B1组SK-HEP-1绿色荧光减弱。A2、B2组克隆形成率相比,P<0.05。与B2组比较,A2组细胞凋亡率升高(t=0.342,P<0.05),Bax蛋白相对表达量升高,B淋巴细胞瘤-2基因及Bcl-xL蛋白相对表达量降低。A3组ABCB1、ABCG2基因相对表达量低于B3组(t分别为-8.88、-13.00,P均<0.05)。结论Hsp90抑制剂WH-4对肝癌细胞SK-HEP-1具有增殖抑制、诱导凋亡作用,同时可降低耐药基因的表达。

云南土壤真菌07-11号菌株中的活性成分

从云南土壤真菌 0 7 11发酵液乙酸乙酯层浸膏中得到 5个活性成分 ,经光谱数据分析和理化鉴别 ,分别鉴定为邻羟基苯甲酸 (Ⅰ )、4 ,6 二羟基 5 甲基 1(3H)异苯骈呋喃酮 (Ⅱ )、2 甲酰基 3,5 二羟基 4 甲基苯甲酸 (Ⅲ )、N (4 羟基 2 甲氧苯基 )乙酰胺 (Ⅳ )以及麦角甾 7,2 2 二烯 3,6 二酮(Ⅴ ) ,它们对稻瘟霉分生孢子及菌丝体都有一定抑制作用。其中化合物Ⅳ为首次分离得到的天然产物 。

2-乙氧羰基(羧基)-4-取代苯基-2,3-二氢-1H-苯并[b][1,4]二氮杂的合成及抑菌活性测定

以取代苯和顺丁烯二酸酐为起始原料,通过Friedel-Crafts酰基化反应、酯化、aza-Michael加成、环合、脱水等过程,合成了11种未见文献报道的2-乙氧羰基(羧基)-4-取代苯基-2,3-二氢-1H-苯并[b][1,4]二氮杂(4a^4g和6a^6d)化合物.通过1H NMR,IR,MS和元素分析确定了目标产物的结构,对合成目标化合物的反应条件、选择性进行了较详细的研究,提出了可能的反应机理.对新合成的目标化合物进行了体外抑菌活性测试,结果表明,部分化合物显示了一定的抑菌活性,并表现出对不同菌株的抑菌活性具有一定的选择性和特异性.采用密度泛函理论方法在B3LYP/6-31G水平上对所合成的11种目标化合物进行了几何全优化和计算,研究其微观结构和抑菌活性之间的关系,结果表明,N(11)和C=N可能分别是所合成的该类化合物与细菌(枯草杆菌)和真菌(白色念珠菌和新型隐球菌)发生作用的主要活性部位.

重组人干扰素α-2b栓治疗宫颈支原体耐药菌株感染疗效分析

目的研究重组人干扰素α-2b栓治疗宫颈支原体耐药菌株感染的临床效果。方法随机选取52例宫颈支原体培养耐药菌株感染患者，使用重组人干扰素α-2b栓为治疗组，另选52例宫颈支原体培养耐药菌株感染患者为对照组，将两组疗效进行比较。结果治疗组治疗3个月后转阴率为21．2％，有效率为65．4％；对照组转阴率为3．8％，有效率为30．8％，两组差异有统计学意义（P〈0．01）。结论重组人干扰素α-2b栓能部分杀灭支原体耐药菌株，改善耐药支原体耐药菌株对药物的敏感性。

一株芒果炭疽病拮抗菌抑菌活性的研究及其鉴定

从芒果表皮分离得到29株内生细菌,对峙培养法发现菌株B2-1对芒果炭疽病菌丝的生长具有较强的抑制作用。通过离体实验和活体实验对拮抗菌株B2-1抑菌活性进行了研究,离体实验结果表明,B2-1的发酵滤液、挥发性代谢产物以及非挥发性代谢产物都对芒果炭疽病菌丝的生长有很强的抑制作用,其中B2-1发酵液的非挥发性代谢产物对芒果炭疽病菌丝生长的抑制率达到了99.86%,抑菌效果显著。活体实验结果表明,B2-1的菌悬液和发酵液与对照相比显著降低了芒果炭疽病的发病率,提高了芒果的可食用果率。进一步对菌株B2-1进行鉴定,综合形态学观察和生理生化特征检测以及16S rDNA序列分析,B2-1菌株被鉴定为枯草芽孢杆菌。

贵州鼠尾草中1个新的姜黄素类化合物

目的研究贵州鼠尾草Salvia cavaleriei中抗菌活性成分。方法采用正相硅胶柱色谱、RP-18反相硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱以及半制备高效液相色谱等多种手段进行分离纯化,并借助化合物的理化性质、质谱、核磁数据以及碳谱计算等方法确定化合物结构。采用微量肉汤稀释法测定化合物的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)。结果从贵州鼠尾草中分离得到11个化合物,分别鉴定为1,7-bis-(4′-hydroxyl-3′-methoxyphenyl)-5(R)-methoxyhepthan3-one(1)、姜烯酮A(2)、原儿茶醛(3)、对羟基苯甲醛(4)、oresbiusin B(5)、迷迭香酸(6)、bis(2-ethyloctyl)phthalate(7)、cylindol B(8)、2-(3',4'-二羟苯基)-1,3-胡椒环-5-醛(9)、苯甲醇葡萄糖苷(10)和1H-indole-3-carboxaldehyde(11),其中,化合物1为1个新的姜黄素类化合物。抗菌活性结果显示化合物1对青枯假单胞菌、产气荚膜梭菌有较好抑制作用,MIC为71.2μg/mL,而化合物2对青枯假单胞菌、产气荚膜梭菌、枯草芽孢杆菌的MIC为77.6μg/mL。结论化合物1为新化合物,命名为鼠尾草姜黄素。除化合物3和6外,其余化合物均为首次从该植物中分离得到,此外,化合物2、7、8和9为首次从唇形科植物中分离得到,化合物5为首次从鼠尾草属植物中分离得到。化合物1和2表现出明显的抗菌活性。