微RNA-93-5p对多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞增殖的影响及机制

目的探讨血浆微RNA(miR)-93-5p对多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞增殖的影响及其可能机制。方法选择2022年1月至2023年1月焦作市人民医院收治的120例育龄期PCOS患者为PCOS组,选择同期在本院体检的18例育龄期健康女性为对照组。收集2组受试者的年龄、体质量和身高,计算体质量指数(BMI)。2组受试者均在自然月经周期的卵泡期或黄体酮诱导的撤退性出血期采集空腹静脉血,采用电化学法测定血清黄体生成素(LH)、促卵泡激素(FSH)、总睾酮(TT)、抗米勒管激素(AMH)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FBG)水平,并计算胰岛素抵抗稳态模型(HOMA-IR);采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测2组受试者血浆中miR-93-5p表达水平。取对数生长期人卵巢颗粒细胞KGN,以每孔3×10^(5)个细胞接种至6孔板中,随机分为miR-93-5p mimics组、LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组、阴性对照(NC)组、空白对照组。miR-93-5p组KGN细胞转染miR-93-5p mimics;LY294002+miR-93-5p组KGN细胞转染miR-93-5p mimics,并于转染前1 h给予50 mmol·L^(-1) LY294002处理;AZD5363+miR-93-5p组KGN细胞转染miR-93-5p mimics,并于转染前1 h给予50μmol·L^(-1) AZD5363处理;NC组KGN细胞转染阴性对照质粒;空白对照组KGN细胞不做任何处理。应用qRT-PCR法检测各组KGN细胞中miR-93-5p表达,细胞计数试剂盒-8试验检测各组KGN细胞增殖情况。结果PCOS组与对照组受试者的年龄及FSH、ALT、AST水平比较差异无统计学意义(P>0.05);PCOS组患者的BMI、TT、AMH、LH、FINS、FBG、HOMA-IR显著高于对照组(P<0.05)。PCOS组患者血浆中miR-93-5p相对表达量显著高于对照组(t=-5.549,P<0.001)。miR-93-5p与TT、FINS、HOMA-IR呈中度正相关(r=0.434、0.622、0.586,P<0.001),与FBG和LH呈低度正相关(r=0.398、0.398,P<0.001)。ROC曲线显示,血浆miR-93-5p诊断PCOS的最佳临界值为1.380,曲线下面积为0.906(95%置信区间:0.839~0.973,P<0.001),敏感度为0.858,特异度为0.833,约登指数为0.691。miR-93-5p mimics组、LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组KGN细胞中miR-93-5p相对表达量均显著高于空白对照组和NC组(P<0.05)。培养24、48、72 h时,miR-93-5p mimics组、LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组KGN细胞的增殖能力显著高于空白对照组和NC组(P<0.05);LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组细胞的增殖能力显著低于miR-93-5p mimics组(P<0.05)。结论PCOS患者血浆miR-93-5p呈过表达,miR-93-5p可能通过基于调控磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激B信号通路介导PCOS卵巢颗粒细胞增殖来参与PCOS的发生发展,血浆miR-93-5p水平对PCOS有一定的诊断价值。

miR-93-5p通过PI3K/AKT通路调控HepG2细胞自噬

目的:探究miR-93-5p对HepG2细胞增殖、自噬、葡萄糖消耗以及磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinases,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)通路的影响。方法:高浓度葡萄糖诱导构建胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)细胞模型,设计合成miR-93-5p inhibitor和NC,结合自噬抑制剂3-MA,将细胞分为Control组、IR组、IR+inhibitor NC组、IR+inhibitor组、IR+3-MA+inhibitor组。CCK8法检测各组细胞增殖活力,试剂盒检测各组细胞葡萄糖消耗量和细胞糖原合成情况,Western-Blot法检测细胞自噬基因微管相关蛋白1轻链3(autophagy genes microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)-I、LC3-II、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)蛋白、PI3K/AKT通路蛋白(AKT、p-AKT)的表达。结果:与对照组相比,IR组细胞增殖活力、葡萄糖消耗量和细胞糖原合成量、HGF蛋白、LC3-II蛋白表达下降(P<0.01),LC3-I蛋白和p-AKT/AKT值表达均增加(P<0.01)。与IR组和IR+inhibitor NC组相比,IR+inhibitor组细胞增殖活力、葡萄糖消耗量和细胞糖原合成量、HGF蛋白、LC3-II蛋白表达增加(P<0.01),LC3-I蛋白和p-AKT/AKT值表达均下降(P<0.01)。与IR+inhibitor组相比,3-MA能逆转miR-93-5p inhibitor的作用。结论:miR-93-5p通过PI3K/AKT通路促进HepG2细胞自噬,进而抑制胰岛素抵抗,缓解糖尿病造成的机体损伤。

脓毒症并发急性肾损伤患儿血清中miR-93-5p和miR-424-5p的表达及临床意义

目的探讨血清中微小RNA-93-5p(miR-93-5p)和微小RNA-424-5p(miR-424-5p)在脓毒症并发急性肾损伤(S-AKI)患儿中的表达水平及其临床意义。方法选取2019年11月至2021年11月南阳市中心医院综合ICU收治的116例脓毒症患儿作为研究对象,根据脓毒症患儿是否并发AKI分为AKI组60例和非AKI组56例;比较两组患儿的一般资料和血清miR-93-5p、miR-424-5p及肾功能指标[血肌酐(Scr)、胱抑素C(Cys-C)]水平;采用Pearson法分析S-AKI患儿血清miR-93-5p、miR-424-5p与肾功能指标的相关性;采用多因素Logistic回归分析脓毒症患儿并发AKI的影响因素;采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miR-93-5p、miR-424-5p水平对脓毒症患儿并发AKI的诊断价值。结果AKI组患儿的尿量为(1.52±0.31)mL·kg^(-1)·h^(-1)、血清miR-93-5p表达水平为0.62±0.14,均明显低于非AKI组的(1.87±0.36)mL·kg^(-1)·h^(-1)、(1.02±0.21),急性生理学与慢性健康状况评分(APACHEⅡ评分)、序贯器官衰竭评分(SOFA评分)、血清miR-424-5p表达水平、Scr、Cys-C水平分别为(17.35±5.01)分、(5.77±1.80)分、(2.36±0.51)、(182.84±43.31)μmol/L、(1.63±0.39)mg/L,明显高于非AKI组的(14.96±4.12)分、(5.10±1.41)分、(1.01±0.23)、(91.51±28.34)μmol/L、(0.96±0.28)mg/L,差异均有统计学意义(P<0.05);经Pearson法分析结果显示,S-AKI患儿血清miR-93-5p与Scr、Cys-C呈负相关(r=-0.621、-0.720,P<0.05),miR-424-5p与Scr、Cys-C呈正相关(r=0.503、0.538,P<0.05);经多因素Logistic回归分析结果显示,miR-424-5p、Scr、Cys-C是影响脓毒症患儿并发AKI的危险因素,miR-93-5p是保护因素(P<0.05);经ROC分析结果显示,血清miR-93-5p、miR-424-5p以及两者联合诊断脓毒血症患儿并发AKI的AUC分别为0.856、0.860、0.949,联合诊断的敏感度为90.00%,特异性为91.07%,两者联合优于血清miR-93-5p、miR-424-5p各自单独诊断(Z两者联合-miR-93-5p=2.897、Z两者联合-miR-424-5p=2.706,P=0.004、P=0.007)。结论S-AKI患儿血清miR-93-5p水平显著下调,miR-424-5p水平显著上调,两者联合诊断脓毒血症患儿并发AKI具有更高价值。

机械通气肺损伤患者微小RNA-93表达情况及临床意义

目的探讨微小RNA-93(miR-93)在机械通气肺损伤中的表达及临床意义。方法选取2021年3月至2022年10月在赣南医学院第一附属医院ICU治疗的机械通气肺损伤患者50例作为观察组,同时选取机械通气无肺损伤患者100例作为对照组,检测两组血清miR-93、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-8(IL-8)的差异。结果观察组血清miR-93相对表达量低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而TNF-α、IL-1β和IL-8高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组重度肺损伤患者血清miR-93相对表达量低于轻中度患者,差异有统计学意义(P<0.05),而TNF-α、IL-1β和IL-8高于轻中度患者,差异有统计学意义(P<0.05)。血清miR-93与Murray肺损伤评分呈负相关(r=-0.445,P<0.05)。血清miR-93与TNF-α、IL-1β、IL-8呈负相关(r=-0.394、-0.405、-4.111,P<0.05)。miR-93相对表达量诊断肺损伤的AUC为0.815,截断值为2.50,灵敏性和特异性分别为92.00%和58.00%;miR-93相对表达量诊断重度肺损伤的AUC为0.823,截断值为1.72,灵敏性和特异性分别为66.70%和84.40%。结论机械通气肺损伤患者血清miR-93表达下调,与患者肺损伤严重程度呈负相关,在诊断肺损伤及严重程度方面有一定应用价值。

miR-93靶向TLR4/NF-κB信号通路对动脉粥样硬化大鼠血管内皮炎症反应的影响

目的 探究微小核RNA(miR)-93对Toll样受体(TLR)4/核转录因子(NF)-κB的调控作用及对动脉粥样硬化(AS)大鼠血管内皮炎症反应的影响。方法 大鼠经高脂饲料喂养+腹腔注射维生素D3复制AS模型,随机分为正常对照组、模型组、miR-93模拟物(miR-93 agomir)组、agomir-NC组、RS09(TLR4激活剂)组、miR-93 agomir+RS09组,每组15只,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血脂[三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)]和炎症因子[白细胞介素(IL)-6、C反应蛋白(CRP)]水平;流式细胞术检测循环内皮细胞比例以评价血管内皮损伤状况;Movat染色观察动脉血管泡沫细胞聚集状况;油红O染色检测斑块面积;免疫组化法检测M1型巨噬细胞标记抗体(CD11)阳性表达水平;实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测miR-93表达;Western印迹法检测TLR4/核因子(NF)-κB通路蛋白、脂质沉积相关蛋白如三磷酸腺苷(ATP)结合盒转运体(ABC)A1、载脂蛋白(Apo)A1、巨噬细胞清道夫受体(ScR)-A、凝集素型氧化低密度脂蛋白受体(Lox)-1、M1型巨噬细胞极化相关蛋白[IL-1β、诱导型一氧化氮(iNOS)]、M2巨噬细胞极化相关蛋白[IL-10,几丁质酶-3样蛋白3(YM1)]表达。结果 与正常对照组相比,模型组动脉血管内膜增厚、泡沫细胞聚集及脂质沉积严重,斑块面积比例、IL-6、CRP、循环内皮细胞比例、TG、TC、LDL-C水平、TLR4/NF-κB通路活化介导的M1型巨噬细胞极化、炎症应答活性均明显升高,HDL-C、miR-93表达明显降低(P<0.05)。外源性上调miR-93,可明显促进脂质转运相关蛋白ABCA1及ApoA1表达,明显抑制TLR4/NF-κB通路活化介导的M1型巨噬细胞极化和炎症应答,缓解大鼠动脉血管内膜增厚、泡沫细胞聚集及脂质沉积,明显降低斑块面积及循环内皮细胞比例(P<0.05)。RS09可明显促进TLR4/NF-κB通路活化介导的M1型巨噬细胞极化和炎症应答,并可拮抗miR-93 agomir发挥的上述作用(P<0.05)。结论 外源性上调miR-93表达可能通过靶向抑制TLR4/NF-κB通路活化,发挥抗炎、抗M1型巨噬细胞极化、抗泡沫细胞聚集及抗脂质沉积作用,改善AS大鼠血管内皮损伤。

miR-93-5p/FOXJ2轴介导胃癌细胞的生物学功能

目的:评估miR-93-5p对胃癌细胞的调节和功能。方法:采用qPCR检测miR-93-5p在胃癌组织、胃癌细胞系中表达,MTT、克隆形成、Transwell实验检测miR-93-5p对胃癌细胞增殖、侵袭的影响,双荧光素酶报告基因实验检测miR-93-5p与FOXJ2的靶向关系。结果:miR-93-5p在胃癌细胞系和胃癌组织中表达升高,抑制miR-93-5p表达后胃癌细胞增殖和侵袭能力受抑。双荧光素酶报告基因检测显示,miR-93-5p mimic显著降低MKN28和MKN45细胞Wt-FOXJ2相对荧光素酶活性,FOXJ2为胃癌细胞中miR-93-5p的直接靶基因。结论:miR-93-5p靶向FOXJ2促进胃癌细胞的增殖和侵袭,miR-93-5p/FOXJ2轴可能是判断胃癌预后的生物标志物和治疗靶点。

钨丝/锆基非晶复合材料与93W合金弹芯侵彻靶板的损伤特征

为研究钨丝/锆基非晶复合材料(WF/Zr-based bulk metallic glass matrix composite,WF/Zr-MG)及93W合金两种弹芯材料对于45钢靶板的侵彻特征机理与损伤特征,利用上述两种弹芯进行对比开展侵彻试验,在宏观和微观层面对侵彻结果进行分析,其中,宏观定量化表征量采用等效直径进行研究,微观层面利用扫描电镜、光学显微镜、XRD衍射仪与显微维氏硬度仪对靶板的微观形貌、相变及硬度特征进行表征。试验结果表明,WF/Zr-MG弹芯完全贯穿靶板,而93W合金弹芯残留于靶板之中,其等效扩孔直径分别为16.7和18.4 mm,前者较后者低10.18%,WF/Zr-MG弹芯的穿甲能力高于93W合金弹芯。在微观角度,WF/Zr-MG与93W合金弹芯侵彻后弹坑细晶层晶粒长径比分别为4.5和7.3,其维氏硬度HV的峰值分别为249和287,其中高硬度层宽度分别为10.2和8.9 mm。前者对应靶板高硬度层更宽的原因是Zr基非晶合金在侵彻过程中持续释放热量,使其温度影响区较大,因此硬度提升的区域大。侵彻过程中,后者的靶板强度明显高于前者的,其主要原因为WF/Zr-MG弹芯发生屈曲回流,而93W合金弹芯产生蘑菇头现象,使得WF/Zr-MG弹芯对于靶板的挤压变形更小,晶粒拉长效果减弱,硬度峰值提升变小,靶板单位长度的能量损耗小,从而增强WF/Zr-MG复合材料弹芯的穿甲能力。

拟穴青蟹E93基因的鉴定及表达调控分析

为研究E93在拟穴青蟹中的功能和调控特征,利用转录组测序和分子克隆鉴定获得了拟穴青蟹(Scylla paramamosain)的E93基因,命名为Sp-E93,并对其基本生物信息、系统进化、组织分布以及激素调控的模式进行了分析。结果发现,Sp-E93的mRNA长度为3756 bp,包含2982 bp开放阅读框(ORF),编码993个氨基酸,预测蛋白质的相对分子质量为106.34 kDa,含有两个保守的helix-turn-helix(HTH)结构域,而HTH结构域外的其他区域序列在不同物种中一致度较低。系统进化分析发现,该基因的进化与物种进化基本一致。Sp-E93在拟穴青蟹成体的Y器官和大颚器中表达量最高,且在雄蟹中的表达显著高于雌蟹(P<0.05)。此外,甲基法尼酯和甲氧普林能显著上调雌蟹肝胰腺中E93基因的表达,但对卵巢中E93的表达无调控作用;20E可以调控肝胰腺E93基因的表达,但对卵巢中E93的表达无显著调控。结果表明,青蟹的E93基因在拟穴青蟹的激素信号中发挥作用,但调控模式较昆虫发生了一定进化,研究结果可为进一步研究甲壳动物E93的功能奠定基础。

CD93^(+)B淋巴细胞亚群在炎症及炎症相关疾病中的研究进展

CD93表达于原B(pro-B)细胞、前B(pre-B)细胞以及各种不成熟B细胞,CD93可以和膜突蛋白(moesin)、多聚素2(MMRN2)等分子相互作用参与细胞迁移、黏附和吞噬过程,进而在炎症以及血管生成过程中发挥着重要的作用。检测CD93+B细胞亚群对炎症及炎症相关疾病,如幽门螺杆菌相关性的胃炎、脓毒症、非肥胖型糖尿病以及牙周炎等疾病的诊断、治疗及预后监测具有重要的作用。

scAAV9-IGF-1对SOD1-G93A小鼠抗凋亡通路的作用

目的 探索以自我互补双链腺相关病毒9为载体介导的人胰岛素样生长因子-1 (scAAV9-IGF-1)对SOD1-G93A转基因小鼠抗凋亡通路的作用。方法 采用肌萎缩侧索硬化(ALS)的动物模型即转基因SOD1-G93A突变型及野生型(wild type-SOD1,WT-SOD1)小鼠,在其出生后60 d龄时,雌性同窝阳性SOD1-G93A转基因小鼠采用随机的方法分配到治疗组及溶剂对照组,治疗组全身多点肌肉注射scAAV9-IGF-1,溶剂对照组多点肌肉注射AAV9-GFP,同年龄WT-SOD1作为阴性对照组。在肌肉注射40~50 d后,利用PCR技术检测腰髓中IGF-1含量的变化,同时检测抗凋亡通路因子Bcl-xl、Bcl-2的mRNA含量变化,通过免疫组化染色观察抗凋亡通路因子Bcl-xl、Bcl-2在小鼠腰髓前角神经元中的表达。结果 PCR技术检测显示scAAV9-IGF-1处理后,腰髓中IGF-1的mRNA含量显著高于GFP对照组,抗凋亡通路因子Bclxl、Bcl-2的mRNA含量均高于溶剂对照组(均P<0.05),而与WT组差异无统计学意义。免疫组化染色结果显示,治疗组中抗凋亡通路蛋白Bcl-xl,Bcl-2在小鼠腰髓前角神经元中的表达多于溶剂对照组,并且与WT阴性对照组相当。结论 scAAV9-IGF-1可以激活SOD1-G93A转基因小鼠模型中的抗凋亡通路,其通过上调Bcl-xl,Bcl-2的mRNA水平,进而增加Bcl-xl、Bcl-2的蛋白表达,从而产生抗凋亡的作用。

miR-145和miR-93对泌乳素腺瘤耐药的研究进展

泌乳素腺瘤是最常见的功能性垂体肿瘤,临床表现为高催乳素血症、肿瘤局部压迫症状、垂体卒中、多激素混合腺瘤.目前指南推荐,多巴胺激动剂(DA)是首选治疗药物,有效率为67%,但约20%的垂体泌乳素瘤会出现耐药现象.微小核糖核酸(miRNA)参与肿瘤的发生发展、侵袭以及药物抵抗等过程.近年来,miRNA在耐药溴隐亭催乳素瘤中的表达知之甚少.本文系统阐述miRNA的生物学特征、生物学功能以及CircOMA1-miR-145-5P-TPT_(1)轴和lncRNA H19-miR-93-ATG7轴在垂体腺瘤中耐药的调控网络,为基础研究及临床提供参考.

支气管哮喘患儿血清外泌体miR-93-5p检测的价值

目的探讨支气管哮喘患儿血清外泌体微小RNA-93-5p(miR-93-5p)水平检测的价值,及其与气道炎症和肺功能的相关性。方法选取2020年4月—2022年4月内江市第二人民医院支气管哮喘患儿133例(哮喘组)和体检健康儿童133名(正常对照组)。根据支气管哮喘病情将133例患儿分为急性发作期组(51例)和临床缓解期组(82例)。检测所有研究对象血清外泌体miR-93-5p相对表达量、气道炎症指标[血清IgE、白细胞介素(IL)-17、嗜酸性粒细胞绝对数(EO#)、C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-8]和肺功能[用力肺活量(FVC%)、一秒用力呼气容积(FEV1%)、FEV1占FVC的百分比(FEV1/FVC%)]。采用Pearson相关分析评估各项指标的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价各项指标诊断支气管哮喘患儿急性发作的效能。结果与正常对照组比较,哮喘组血清外泌体miR-93-5p和IgE、IL-17、EO#、CRP、TNF-α、IL-8均升高(P<0.001),FVC%、FEV1%和FEV1/FVC%均降低(P<0.001)。Pearson相关分析结果显示,哮喘组血清外泌体miR-93-5p与IgE、IL-17、EO#、CRP、IL-8均呈正相关(r值分别为0.319、0.440、0.535、0.279、0.296,P<0.05),与FEV1%、FVC%、FEV1/FVC%均呈负相关(r值分别为-0.304、-0.295、-0.327,P<0.05)。与临床缓解期组比较,急性发作期组血清外泌体miR-93-5p相对表达量降低(P<0.001),IgE、IL-17、EO#、CRP、IL-8水平升高(P<0.01)。ROC曲线分析结果显示,血清外泌体miR-93-5p、IgE、IL-17、EO#、CRP、TNF-α、IL-8诊断支气管哮喘急性发作的曲线下面积(AUC)分别为0.88、0.60、0.65、0.64、0.69、0.62、0.66。结论支气管哮喘患儿血清外泌体miR-93-5p水平显著升高,且与患儿肺功能、气道炎症密切相关,或可作为支气管哮喘病情评估的指标。

血清和脑脊液CD93表达变化与自身免疫性脑炎的相关性研究

目的探讨自身免疫性脑炎患者血清和脑脊液中白细胞分化抗原93(CD93)的表达变化及其相关性。方法回顾性选取2017年1月至2022年3月信阳市中心医院收治的80例自身免疫性脑炎患者作为自身免疫性脑炎组,同期选取年龄、性别相匹配的113例病毒性脑炎患者作为病毒性脑炎组,以及80例健康体检的志愿者作为对照组。自身免疫性脑炎患者出院后随访1年,根据患者预后情况分为预后良好组52例和预后不良组28例。采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测自身免疫性脑炎组和病毒性脑炎组患者血清和脑脊液CD93水平以及对照组受试者血清CD93水平。采用生化分析仪检测所有受试者血清白细胞(WBC)计数、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素6(IL-6)、白介素17(IL-17)、C反应蛋白(CRP)水平;采用Pearson法分析CD93与炎症因子指标的相关性;利用受试者工作特征曲线(ROC)分析CD93水平诊断自身免疫性脑炎及对预后的评估价值。结果自身免疫性脑炎组患者的血清CD93水平为(169.55±30.49)μg/L,明显高于病毒性脑炎组的(106.46±24.02)μg/L及对照组的(75.35±20.35)μg/L,脑脊液CD93水平为(183.21±37.19)μg/L,明显高于病毒性脑炎组的(125.72±28.63)μg/L,差异均有统计学意义(P<0.05);预后不良组患者血清及脑脊液中的CD93水平分别为(154.68±27.81)μg/L、(161.81±35.44)μg/L,明显高于预后良好组的(198.02±35.63)μg/L、(224.18±40.55)μg/L,差异均有统计学意义(P<0.05);经Pearson法分析结果显示,自身免疫性脑炎患者血清CD93水平与CRP、TNF-α、IL-6、IL-17表达均呈正相关(r=0.639,0.569,0.407,0.528,P<0.05);经ROC分析结果显示,血清CD93水平评估自身免疫性脑炎的曲线下面积(AUC)为0.936(95%CI:0.895~0.965),截断段值为134.99μg/L,敏感度为85.29%,特异度为90.27%,脑脊液CD93水平评估自身免疫性脑炎的AUC为0.891(95%CI:0.841~0.929),截断段值为165.12 ug/L,敏感度为71.57%,特异度为92.04%;血清及脑脊液CD93水平评估自身免疫性脑炎患者预后不良的AUC分别为0.919(95%CI:0.848~0.963),0.911(95%CI:0.839~0.959),截断段值分别为171.33μg/L,194.79μg/L。对应的敏感度分别为91.43%、82.86%,特异度分别为79.10%、92.54%。结论CD93在自身免疫性脑炎患者血清及脑脊液中呈高水平,与患者预后密切相关,临床观察其水平变化有助于疾病诊断。

IL-17D调控CD93^(+)CTL在肺脏肿瘤微环境中的杀伤功能及桔梗的促进作用

目的:探讨IL-17D调控CD93^(+)CTL在肺脏肿瘤微环境(TME)中的杀伤功能及桔梗(PG)的促进作用。方法:采用PG或IL-17D处理小鼠肺脏B16黑色素瘤模型和对照小鼠,观察肺脏肿瘤克隆形成;应用单细胞测序、免疫荧光染色、流式细胞术等方法检测肿瘤小鼠肺脏IL-17D表达变化;采用单细胞测序、流式细胞术等方法分别检测各组小鼠肺脏CD93^(+)CTL含量、细胞表型和功能因子改变(包括CD107a、穿孔素、颗粒酶B、趋化因子CCL2、CXCL9及趋化因子受体CCR2、CXCR3等);利用EL4细胞系,采用Western blot、RT-PCR检测桔梗皂苷D对IL-17D及其转录调控因子NRF2表达的作用。结果:小鼠肺脏CD93^(+)CTL较CD93−CTL高表达穿孔素、CD107a等细胞毒性效应因子和趋化因子受体CXCR3、CCR2等,而颗粒酶B分泌能力无显著差异;小鼠肺脏肿瘤模型中,肺脏IL-17D表达及其CD93^(+)CTL含量明显下降(P<0.001);肿瘤小鼠经IL-17D回补实验,或经PG处理10 d后,肺脏IL-17D和CD93^(+)CTL比例和数量明显增多(P<0.05),肿瘤克隆明显减少。同时,肿瘤局部CD93^(+)CTL募集和功能相关细胞因子CCL2、CXCL9、IL-17D等表达明显上调。PG对IL-17D的上调作用在EL4细胞系体外实验中也得到了验证,桔梗皂苷D可显著上调EL4细胞IL-17D及其转录调控因子NRF2表达。结论:中药PG及其提取物可上调肺脏IL-17D表达,增强肺脏CD93^(+)CTL浸润和杀伤功能,拮抗肿瘤在肺脏的恶性进展,是PG改善肺脏TME的重要药理机制。

miRNA-93-5p通过调控FBXW7基因参与宫颈癌进展

目的:探究miRNA-93-5p是否可通过调控FBXW7基因影响宫颈癌进展。方法:收集20例临床宫颈癌患者组织,分组为癌旁组织、宫颈癌组织,RT-qPCR检测宫颈组织中miRNA-93-5p、FBXW7 mRNA水平,并检测人正常宫颈上皮细胞H8、宫颈癌细胞Caski、HeLa、C33A细胞miRNA-93-5p、FBXW7 mRNA水平。选择宫颈癌细胞C33A,分为对照组(正常培养)、miRNA-93-5p抑制组(转染低表达miRNA-93-5p),FBXW7激活组(转染高表达FBXW7),转染48h后收集细胞,RT-qPCR检测各组细胞中miRNA-93-5p、FBXW7 mRNA水平,Western blotting检侧C33A细胞中FBXW7蛋白水平,流式细胞术检测C33A细胞凋亡率,平板克隆检测C33A细胞克隆能力,划痕实验检测C33A细胞迁移能力,Transwell实验检测C33A细胞侵袭能力。结果:与癌旁组织相比,宫颈癌组织中miRNA-93-5p mRNA水平增加、FBXW7 mRNA水平减少(P<0.001)。与H8细胞相比,Caski、HeLa、C33A细胞中miRNA-93-5p mRNA水平增加、FBXW7 mRNA水平减少(P<0.05),后续实验中选择C33A宫颈癌细胞株进行研究。与对照组相比,miRNA-93-5p抑制组C33A细胞中miRNA-93-5p mRNA水平显著降低(P<0.001),细胞凋亡率增加(P<0.001),克隆能力下降(P<0.01),细胞迁移距离减少(P<0.01),侵袭能力下降(P<0.01),FBXW7蛋白及mRNA水平显著增加(P<0.01)。与对照组相比,FBXW7激活组C33A细胞中FBXW7 mRNA水平显著增加(P<0.01),细胞凋亡率增加(P<0.001),克隆能力下降(P<0.001),迁移距离减少(P<0.01),侵袭能力下降(P<0.01)。结论:miRNA-93-5p可通过调控FBXW7基因影响宫颈癌细胞的凋亡、增殖、迁移、侵袭水平。

miR-93-5p对胰岛素抵抗细胞模型中HGF、GLUT4表达及GLUT4分布的影响

目的探讨miR-93-5p对胰岛素抵抗细胞模型中肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)、葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter 4,GLUT4)表达及GLUT4分布的影响。方法将细胞分为对照组、模型组、miR-93-5p inhibitor组、inhibitor-NC组、miR-93-5p mimics组和mimics-NC组。对照组细胞正常培养,模型组构建胰岛素抵抗细胞模型,其余组分别转染miR-93-5p inhibitor、inhibitor-NC、miR-93-5p mimics、mimics-NC,转染完成后构建胰岛素抵抗模型。CCK-8检测细胞存活率;试剂盒检测细胞上清液中葡萄糖含量,计算葡萄糖消耗量;qPCR检测miR-93-5p、HGF、GLUT4的mRNA表达水平;Western blot检测HGF、GLUT4蛋白表达水平;免疫荧光检测GLUT4的表达和分布。结果与对照组相比,模型组细胞存活率、葡萄糖消耗量、HGF、GLUT4 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(均P<0.01),miR-93-5p水平显著升高(P<0.01),GLUT4膜分布减少。与模型组相比,miR-93-5p inhibitor组细胞存活率、葡萄糖消耗量、HGF、GLUT4 mRNA和蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05),miR-93-5p水平显著降低(P<0.01),GLUT4膜分布增多;mimics组结果相反。结论miR-93-5p能够抑制胰岛素抵抗细胞模型中HGF和GLUT4的表达,并减少GLUT4的膜分布,具有促进胰岛素抵抗的功能。

高血压脑出血患者血清微小RNA-93、Toll样受体4表达及其与患者短期预后的相关性

目的探讨高血压脑出血患者血清微小RNA-93(miR-93)、Toll样受体4(TLR4)表达水平与短期预后的相关性。方法选取2019年12月至2020年12月榆林市第一医院接收的104例高血压脑出血患者为观察组,根据入院时格拉斯哥昏迷评分将患者分为轻度亚组、中度亚组、重度亚组,治疗4个月后根据格拉斯哥预后量表(GOS)评分将患者分为预后良好组69例和预后不良组35例;同期对照组选本院98例健康体检者。收集观察组及对照组性别、年龄、合并症等一般资料,检测血清miR-93、TLR4水平;分析高血压脑出血患者血清miR-93与TLR4水平相关性;分析影响高血压脑出血患者预后的因素。结果重度亚组血清TLR4水平高于中度亚组、轻度亚组和对照组,miR-93水平低于中度亚组、轻度亚组和对照组(F=712.900、105.700,P<0.01);中度亚组血清TLR4水平高于轻度亚组和对照组,miR-93水平低于轻度亚组和对照组(P<0.01);轻度亚组血清TLR4水平高于对照组,miR-93水平低于对照组(P<0.01)。轻度亚组、中度亚组和重度亚组高血压脑出血患者血清miR-93与TLR4水平均呈负相关(r=-0.530、-0.502、-0.447,P<0.05)。与预后良好组比较,预后不良组血清TLR4水平、出血量、合并高脂血症、合并感染、合并消化道出血、出血破入脑室患者比例较高,血清miR-93水平降低(t/χ^(2)=36.216、9.999、4.757、12.671、10.668、7.597、14.599,P<0.05)。TLR4是高血压脑出血患者预后不良的危险因素[OR(95%CI)=2.714(1.712~4.302),P<0.01],miR-93是高血压脑出血患者预后不良的保护因素[OR(95%CI)=0.879(0.839~0.921),P<0.01]。结论高血压脑出血患者血清miR-93水平较低、TLR4水平较高,且两者对患者病情评估及预后评估可能有一定价值。

miR-93-5p靶向下调ROCK2表达对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨miR-93-5p对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLSs)增殖、迁移和侵袭的影响,并阐明其可能的机制。方法:选择类风湿性关节炎(RA)患者(RA组,n=37)和接受关节置换手术的关节创伤患者(对照组,n=30)作为研究对象,从RA患者滑膜组织分离出RA-FLSs,采用免疫荧光法和流式细胞术鉴定细胞。将RA-FLSs分为空白组、mimics NC组(转染miR-93-5p mimics NC)、mimics组(转染miR-93-5p mimics)、OE-NC组(转染ROCK2过表达空载质粒)、OE-Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(ROCK)2组(转染ROCK2过表达质粒)、mimics+OE-NC组(共转染miR-93-5p mimics和ROCK2过表达空载质粒)和mimics+OE-ROCK2组(共转染miR-93-5p mimics和ROCK2过表达质粒)。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组患者滑膜组织和各组细胞中miR-93-5p和ROCK2 mRNA表达水平,CCK-8法检测各组细胞增殖活性,EdU染色检测各组细胞中EdU阳性细胞率,Transwell小室实验检测各组RA-FLSs迁移和侵袭数,Western blotting法检测各组细胞中ROCK2、Ki-67、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-93-5p与ROCK2之间的靶向关系。结果:免疫荧光法检测,Vimentin蛋白表达呈阳性。流式细胞术检测,第3代RA-FLSs表面CD55呈阳性表达,CD14和CD68呈阴性表达,证实分离的细胞为RA-FLSs。RT-qPCR法检测,与对照组比较,RA组患者滑膜组织中miR-93-5p表达水平明显降低(P<0.01),ROCK2 mRNA表达水平明显升高(P<0.01)。与空白组和mimics NC组比较,mimics组细胞中miR-93-5p表达水平明显升高(P<0.01),ROCK2 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。CCK-8法和EdU染色检测,与mimics NC组比较,mimics组细胞增殖活性和EdU阳性细胞率明显降低(P<0.01),OE-ROCK2组细胞增殖活性和EdU阳性细胞率明显升高(P<0.01);与mimics组比较,mimics+OE-ROCK2组细胞增殖活性和EdU阳性细胞率明显升高(P<0.01)。Transwell小室实验检测,与mimics NC组比较,mimics组RA-FLSs的迁移和侵袭数明显减少(P<0.01),OE-ROCK2组RA-FLSs的迁移和侵袭数明显增加(P<0.01);与mimics组比较,mimics+OE-ROCK2组RA-FLSs的迁移和侵袭数明显增加(P<0.01)。Western blotting法检测,与mimics NC组比较,mimics组细胞中ROCK2、Ki-67、PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平明显降低(P<0.01),OE-ROCK2组细胞中ROCK2、Ki-67、PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与mimics组比较,mimics+OE-ROCK2组细胞中ROCK2、Ki-67、PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。miR-93-5p与ROCK2-3’-UTR之间存在靶向结合位点。双荧光素酶报告实验验证转染miR-93-5p mimic可明显降低ROCK野生型(ROCK2-WT)组细胞中荧光素酶活性(P<0.01)。结论:过表达miR-93-5p通过靶向下调ROCK2表达抑制RA-FLSs的增殖、迁移和侵袭。

子宫内膜癌患者VEGF、HE4、miR-93表达特征及检测价值研究

目的探讨子宫内膜癌患者血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)、人附睾蛋白4(Human epididymal protein 4,HE-4)、微小核糖核酸-93(Micrornas-93,miR-93)表达特征及检测价值。方法回顾性选取2021年3月-2022年6月新疆医科大学附属肿瘤医院妇外四科收治的53例子宫内膜癌患者的临床资料为研究组,选取同期收治的53例子宫肌瘤患者的临床资料为对照组。两组患者均于入院后抽取空腹静脉血,经荧光定量聚合酶链反应法测定miR-93水平,以电化学发光法测定血VEGF与HE4水平。对比研究组与对照组之间,不同病理分级、疾病分期、肌层浸润、淋巴结转移情况及不同预后患者miR-93、VEGF与HE4水平,分析miR-93、VEGF与HE4水平与子宫内膜癌疾病状况关联性,并比较miR-93、VEGF与HE4对子宫内膜癌预后的预测价值。结果与对照组比较,研究组miR-93、VEGF与HE4水平增高,差异有统计学意义(P<0.05)。不同病理分级、疾病分期、肌层浸润、淋巴结转移情况患者miR-93、VEGF与HE4水平差异有统计学意义(P<0.05),且随着病理分级和疾病分期的增高,肌层浸润程度增加,淋巴结转移、miR-93、VEGF与HE4水平增高,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson检验表明,miR-93、VEGF与HE4水平与子宫内膜癌病理分级、疾病分期、肌层浸润程度、淋巴结转移情况存在显著正相关关系(P<0.05)。预后不良者miR-93、VEGF与HE4水平高于预后良好者(P<0.05)。miR-93、VEGF与HE4联合检测预测子宫内膜癌预后的AUC、敏感度、特异度分别为0.952、84.20%、71.80%,优于单独检测预测效能。结论子宫内膜癌患者VEGF、HE4、miR-93均呈高表达状态,其增高幅度与疾病病理分级、疾病分期、肌层浸润、淋巴结转移情况存在密切相关性,对子宫内膜癌的预后预测具有较高的价值,临床可联合检测VEGF、HE4、miR-93对子宫内膜进行病情评估和预后预测。

miR-93-5p在骨碎补总黄酮介导的兔骨髓间充质干细胞成骨分化中的作用及机制

目的:探讨miR-93-5p在骨碎补总黄酮(TFRD)介导的兔骨髓间充质干细胞(rBMSCs)成骨分化中的作用。方法:采用成骨培养液对rBMSCs进行成骨诱导分化,通过茜素红S和油红O染色分别检测rBMSCs的成骨和成脂分化。运用荧光定量PCR(qPCR)检测miR-93-5p的表达,Western免疫印迹检测FZD6、ALP、Runx2和WNT通路相关蛋白(Dishevelled和β-catenin)的蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因分析法检验miR-93-5p和FZD6的结合。采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计学分析。结果:与对照组相比,TFRD促进rBMSCs的成骨分化,抑制miR-93-5p的表达,促进FZD6和成骨相关基因ALP和Runx2的表达。双荧光素酶报告基因分析表明,FZD6是miR-93-5p的下游靶基因。过表达miR-93-5p抑制rBMSCs的成骨分化和FZD6、ALP和Runx2的蛋白表达,而过表达FZD6逆转miR-93-5p的抑制作用。使用WNT通路抑制剂(KYA1797K)处理rBMSCs,可逆转TFRD对成骨分化的促进作用,导致成骨细胞分化减少,ALP、Runx2和WNT通路相关蛋白(Dishevelled和β-catenin)表达下调。结论:TFRD通过下调miR-93-5p,促进FZD6的表达,激活WNT信号通路,促进rBMSCs成骨分化,从而有助于口腔种植体骨结合。