微小RNA-7慢病毒过表达载体的构建及其作用

目的构建miR-7慢病毒过表达载体,并对人肺癌细胞进行感染,观察其影响效果。方法设计引物,PCR法扩增miR-7初级序列;纯化、经BamH I和EcoR I双酶切后将其亚克隆入pLVX-shRNA慢病毒表达载体,并进行酶切及测序鉴定;将构建成功的pLVX-shRNA-miR-7（命名为p LV-miR-7）载体体外转染293T细胞进行包装,在48 h收获上清,用Real-time PCR法测定该慢病毒滴度;将制备好的病毒上清体外感染人肺癌95 D细胞后,用Real-time PCR检测各组中miR-7成熟体表达水平;CCK-8法检测95 D细胞生长变化。结果菌液PCR和酶切结果显示miR-7目的片段418 bp成功构入载体pLVX-shRNA;同时结合测序结果证明构建miR-7慢病毒过表达载体成功;慢病毒上清滴度为1.53×10^7copies/mL;该病毒感染人肺癌95 D细胞后可有效表达miR-7成熟体,并显著抑制细胞的体外生长（P〈0.05）。结论成功构建miR-7慢病毒过表达载体,为进一步探究miR-7在肺癌发病机制中的作用提供了重要实验基础。

水红花子总提取物及各化学部位体外抗肿瘤活性研究

目的:研究水红花子乙醇总提取物(SH1)及各化学部位对人肺高转移细胞株95D增殖的抑制作用,筛选水红花子抗肿瘤主要活性部位。方法:以人肺高转移细胞株95D作为实验用细胞株,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比象(MTT)法对水红花子总提取物(SH1)、石油醚部位(SH2)、乙酸乙酯部位(SH3)、丙酮部位(SH4)和甲醇部位(SH5)进行抗肿瘤活性研究。结果:水红花子各化学部位对人肺高转移细胞株95D有明显的抑制作用,水红花子乙酸乙酯部位和丙酮部位的半数抑制浓度分别为199.1 mg·L-1、261.2 mg·L-1。结论:水红花子乙酸乙酯部位和丙酮部位对人肺高转移细胞株95D细胞增殖的抑制作用较强,为水红花子主要活性部位。