96孔板格式PCR仪

7900HT Fast Real-Time PCR可以在35分钟完成96孔板的PCR反应。缩短了加热循环时间，增加了研究人员的工作效率。这套系统包括一个让使用者可以互换的Fast PCR循环模块，一个qMan Fast Universal PCR Master Mix主机和Optical 96-Well Fast Thermal Cycling Hates快速热循环板。

第三代流式细胞分选仪及96孔板分选单个细胞的方法及参数优化

目的：用第三代流式细胞分选仪比较不同直径喷嘴分选的单细胞的得率及细胞活性,进一步完善单细胞微孔板分选的参数设置及条件优化。方法：用FACSAriaⅢ流式细胞分选仪及96孔板对Raji细胞、A549、DT 40、RAW 264.7细胞系进行单细胞分选,分别采用70μm、100μm和130μm喷嘴分选,比较分选后单细胞得率及克隆形成率。结果：在单细胞分选模式下,用3种不同直径喷嘴及96孔板分选后的单细胞得率为86.55%-93.44%,即96孔板有单细胞的孔数为84-92孔;分选后的单个细胞培养7d后,经70μm、100μm和130μm喷嘴分选的单细胞克隆孔数分别为31-52孔、49-70孔、58-78孔。结论：进行单细胞微孔板分选时,在精确调节及优化实验参数的前提下,为了保证单细胞的活性,应优先选择100μm或130μm喷嘴。

流式细胞仪MoFlo Astrios^(EQ)96孔板单细胞分选方法的条件优化

目的·优化流式细胞仪MoFlo Astrios EQ 96孔板单细胞分选方法,为单细胞技术的应用奠定基础。方法·通过对仪器精确调节及各项参数优化,采用不同孔径喷嘴、不同分选方式对32D、U937、iBMDM和293T共4种细胞进行单细胞分选,观察分选后单细胞孔数以及单细胞所形成克隆孔数。结果·在单细胞分选模式下,70、100μm喷嘴分选获得单细胞的孔数分别为83~91、87~93孔。分选后的单细胞经7~10 d培养后,70μm喷嘴分选获得的单细胞所形成克隆的孔数为36~58孔;100μm喷嘴条件下电荷式分选、"无电"直接分选获得的单细胞所形成克隆的孔数分别为53~78、69~81孔。结论·进行单细胞分选时,选择100μm喷嘴和"无电"直接分选方式可得到较好的细胞活性与较高的细胞克隆率。

超高速流式细胞仪MoFlo Astrios^(EQ) 96孔板单细胞分选方案的优化

主要建立了超高速流式细胞仪MoFlo Astrios^(EQ)96孔板单细胞分选的优化方案,实现高活性高效率分选,并着重分析了对仪器设置和管理人员操作细节上七大优化要点,供广大技术人员参考借鉴。

香蕉果实SMART cDNA文库的构建及利用PCR方法筛选香蕉Actin2基因

利用SMART(switching mechanismat5’end of RNA transcript)技术,提取果实少量总RNA,经15-25轮LD-PCR扩增获得全长ds-cDNA,构建了海南主栽的食用香蕉巴西蕉(Musa AAA Group Cavendish)果实的cDNA文库。所构建的文库容量为5×106Pfuml-1,重组率93%。利用此cDNA文库,采用96孔板PCR法筛选香蕉Actin2基因,测序结果显示,序列全长1723bp,编码区长1134bp,编码378个氨基酸,与蝴蝶兰Actin2基因序列同源率达83%,已递交GenBank,接受号692696。

FACSAria流式细胞仪96孔微孔板单个细胞分选方法的优化和应用

对FACSAria流式细胞仪96孔微孔板单个细胞分选方法进行优化和应用。通过对液流的调节,获得较稳定的分选设定值;在96孔微孔板盖上分选肉眼可见液滴,确定分选液滴在96孔微孔板每孔相对应的盖上的位置;分选结束后,计数单个细胞存在的细胞孔数;分选细胞培养7d后,记录单个细胞存在孔数及单克隆形成的数量。结果5个细胞形成的液滴即肉眼清晰可见;96微孔板有单个细胞的孔数为80～90个,单个细胞获得率为83.3%～93.7%,培养7d后,有活细胞存在的孔数为5～38孔,即单克隆形成率为6.3%～42.2%。分选前在96孔微孔板板盖上分选肉眼可见液滴的简单方法使得对液流位置的判断直观可见;流式细胞仪96孔微孔板单细胞分选是一种简单易行,准确有效地获得单个细胞和单克隆的方法。

辣椒泛素交联酶cDNA的分离及其在UV-B作用下的表达分析

利用96孔板法从UV处理的辣椒叶片cDNA文库中分离获得了一个cDNA阳性克隆,其长度为678 bp,含有148个氨基酸的开放读码框,与马铃薯等其他植物的泛素交联酶基因有较高的同源性,命名为CaE21.荧光定量PCR分析表明CaE21基因在UV-B作用下转录表达水平降低;当UV-B照射停止后,其表达水平逐渐回升.推测该基因与辣椒适应UV-B照射胁迫有关.

辣椒Rop cDNA分离及其序列分析

从cDNA文库中分离获得1个cDNA阳性克隆,测序和序列分析结果表明,其长度为1 141 bp,含有1个长度为197 aa的开放读码框架,与烟草等植物的Rop有较高的同源性,该cDNA是从UV处理的辣椒cDNA文库中分离获得的,可能与辣椒适应UV辐射胁迫有关。该cDNA的分离为进一步研究其在辣椒适应UV辐射防御反应的分子机理研究奠定了重要的基础。