96孔板法筛选抗黑曲霉性乳酸菌及抑菌机理研究

目的:筛选对黑曲霉具有良好拮抗作用的乳酸菌菌株。方法:采用96孔板法进行乳酸菌优良菌株的筛选。研究p H和温度等因素对抗菌特性的影响,利用气相测定菌株DL3无细胞上清液(CFS)中有机酸含量,研究抑菌活性物质;利用扫描电镜分析孢子细胞的完整性,研究抑菌机理。结果:从传统东北酸菜分离的乳酸菌中筛选对黑曲霉具有较强抑制作用的植物乳杆菌DL3,其抑菌率为92.28%。在p H2.5~6.5对黑曲霉具有抑菌活性,并具有良好的热稳定性,121℃处理30 min后抑菌率仅降低5.71%。经气相色谱分析表明菌株DL3 CFS中乳酸、乙酸、丙酸和苯乳酸含量分别为5.743、1.635、0.033、0.085μg/m L,乳酸和乙酸对黑曲霉的抑菌率分别为91.69%和92.04%,丙酸和苯乳酸均无抑菌作用,初步判断菌株DL3的抑菌活性物质为有机酸类。扫描电镜观察表明菌株DL3 CFS破坏了黑曲霉孢子的完整性,导致细胞膜溶解,胞内物质外泄。结论:菌株DL3 CFS中对黑曲霉的抑菌活性主要来自于乙酸和乳酸,可作为米面制品的乳酸菌生物防霉剂的出发菌株。

96孔板法用于除草剂高通量筛选的研究

分别用三角瓶法和96孔板法研究了4种除草剂(精吡氟禾草灵、精喹禾灵、氯氟吡氧乙酸、乙草胺)对小球藻的72 h生长抑制急性毒性效应,结果表明:这四种除草剂均对小球藻表现出一定的水生毒性,用两种方法测得的除草剂对小球藻毒性趋势基本一致,半抑制浓度EC50值非常接近.96孔板法用于农药高通量筛选时,与国际标准组织推荐的三角瓶法的可靠性程度基本相同.三角瓶法筛选农药时需要毫克级的量,而96孔板法只需要微克级的量即可满足筛选的需要.

利用96孔板建立除草剂微量活体筛选方法初探

以马唐、稗草、反枝苋3种杂草为指示植物,采用96孔板建立了化合物除草活性微量活体筛选方法.从6种培养基中筛选出最适合3种指示杂草生长的Ⅰ号培养基,以传统盆栽法为对照,进行了96孔板苗前处理微量活体筛选方法(以下简称96孔板法)的研究.结果表明:96孔板法以指示杂草的株高受抑制情况作为评价指标较为合适;3种供试除草剂采用96孔板法对3种指示杂草所表现出的杀草活性要高于盆栽法;乙氧氟草醚、二甲戊灵、氟乐灵盆栽法的EC50和EC90值分别是96孔板法的1.44～21.47倍和1.47～32.84倍;采用96孔板法,乙氧氟草醚对马唐和反枝苋、二甲戊灵对稗草的活性最高,EC50值分别为0.79、0.73和0.45μg/mL,EC90值也分别只有3.13、1.72和1.36μg/mL.96孔板法达到了微量、敏感、节省时间和空间的要求,是发现先导化合物除草活性较适宜的微量活体筛选方法.

小鼠淋巴瘤细胞突变试验方法

小鼠淋巴瘤细胞突变试验(简称小鼠淋巴瘤试验或MLA)是国际上较常应用的遗传毒性试验常规方法 ,有关该试验方面的报道在国内不常见 ,本文对该试验方法作了较为具体介绍 ,仅围绕该试验的96孔板法(microwellormicrotitre)展开论述 。

几种检测乳酸菌抑制真菌性能的方法比较

为建立抑制真菌乳酸菌的高效筛选方法,该文比较96孔板法、牛津杯琼脂扩散法、打孔法以及双层平板划线法检测乳酸菌抑菌性能的简便性、灵敏性和可行性。结果表明,在测定乳酸菌发酵上清液抑制黑曲霉孢子生长的方法中,与通过测定透明圈的牛津杯琼脂扩散法与打孔法相比,96孔板法通过测定黑曲霉孢子经过乳酸菌发酵上清液培养后的吸光度值,在检测乳酸菌抑菌性能时较为灵敏且简便快捷;双层平板划线法通过测定在乳酸菌菌落周围形成的透明圈,在测定乳酸菌菌株及其发酵产物抑制黑曲霉孢子生长的抑菌性能方面效果明显,且与96孔板法相比更能显示出测试乳酸菌菌株间抑菌性能的细微差异。

一种适用于高通量基因分型的水稻种子切片DNA制备技术

建立一种高质量、低成本的水稻种子切片DNA制备方法,用于育种群体的高通量基因分型。通过对比TPS法提取水稻叶片DNA及96孔板结合磁珠法提取切片种子DNA的纯度和浓度,进一步采用STARP(Semi-thermal asymmetric PCR)标记检测验证96孔板结合磁珠法提取水稻切片种子DNA的质量。结果表明:96孔板结合磁珠法提取水稻种子切片的DNA质量和纯度优于TPS法提取水稻叶片的DNA质量;STARP标记检测验证结果显示96孔板结合磁珠法提取水稻切片种子DNA可适用于GS3、Wx的STARP标记基因分型,其鉴定结果与测序结果一致。研究显示96孔板结合磁珠法可以从微量水稻种子切片中提出高回收率、高纯度、高完整度、无PCR抑制物的DNA用于高通量STATP法基因单倍型分析,可获得一种96孔板结合磁珠法提取DNA的高通量基因分型操作流程。

微孔板稀释法在活菌培养计数中的应用观察

目的以96孔板微量稀释法代替传统试管稀释法建立了新的活菌计数方法(也简称新方法或96孔板计数法),通过两种活菌培养计数方法的比较,验证新方法的准确性、快捷性。方法对新方法的不同吹吸次数进行比较,选择最佳的吹吸次数。用两种活菌培养计数方法同时对同一管枯草杆菌黑色变种芽孢悬液进行计数,验证新方法的准确性;不同实验技术人员同时对同一管枯草杆菌黑色变种芽孢悬液用96孔板进行系列稀释,用滴液计数法计数,比较不同人员操作的误差率;用两种活菌培养计数方法对同一种消毒剂进行中和剂鉴定试验,验证新方法在消毒效果检测中应用的可行性。结果经不同吹吸次数的误差率比较,20次为最佳吹吸次数;96孔板微量计数法对枯草杆菌黑色变种芽孢悬液计数结果与传统方法计数结果一致;3名不同实验技术人员采用新方法同时对一管菌悬液计数,3人之间的误差率为1.69%,符合2002年版《消毒技术规范》要求,且误差率远低于新入职实验技术人员用传统方法对枯草杆菌黑色变种芽孢悬液活菌培养计数结果;在一种消毒剂的中和剂鉴定试验中,新方法与传统方法活菌培养计数结果一致。结论新的活菌计数法计数结果与传统活菌培养计数结果一致,且不同实验技术人员之间的误差率很小,新的培养计数方法可以应用到消毒剂悬液定量杀菌试验中,且采用新的培养计数方法更方便、快捷,节省时间,对实验人员技术要求不高,适合进一步推广。

壳聚糖盐酸盐对几种水产致病菌的抑菌性研究

目前,对虾疾病仍然是困扰对虾养殖业的一大难题,由弧菌属(Vibrio)细菌引起的弧菌病(Vibriosis)是其中危害最大的细菌性疾病,给水产养殖业造成了严重的经济损失。本实验以副溶血弧菌、哈维氏弧菌和鳗弧菌为供试菌种,采用滤纸片扩散法对壳聚糖盐酸盐进行抑菌实验研究。在此基础上进一步采用96孔板法测定了壳聚糖盐酸盐对副溶血弧菌、哈维氏弧菌和鳗弧菌的最小抑菌浓度(MIC),结果表明:壳聚糖盐酸盐对3种供试菌株均具有抑菌作用,最小抑菌质量浓度因供试菌的不同而不同,副溶血弧菌为2.5 mg/m L,哈维氏弧菌和鳗弧菌为3.25 mg/m L。

药品质控实验室用水的微生物分析

目的:针对目前国内药检所微生物实验室用水的实际情况,探索实验室用水微生物分析的可行方法,提出合理的水微生物污染的质控水平。方法:参考国内外药典对药用水的微生物质控方法,采用培养基方法考察了实验用水在储水期、培养基配制过程中的微生物生长情况和运用96孔酶标板法初步考察了水的污染程度对培养基检测性能的影响。结果:水在储水期、培养基配制过程中的微生物生长迅速,在水的微生物污染程度达到104 cfu/m L的时候对培养基的检测性能有影响。结论:本研究为微生物实验室水质影响评估和合理利用实验室用水提供了依据。

应用于马铃薯疮痂病防治药剂筛选的改良方法研究

[目的]对比部分商品化杀菌剂对马铃薯疮痂病的室内生物活性和田间防效。[方法]采用改良后的96孔细胞培养板法进行了30个杀菌剂对马铃薯疮痂病的最小抑菌质量浓度测定试验,并从中选取5个杀菌剂进行田间验证试验。[结果]室内试验结果表明咯菌腈、喹啉铜、氟啶胺、氰霜唑和代森联对马铃薯疮痂病均有不同程度的抑制作用。田间试验结果表明咯菌腈、喹啉铜和氟啶胺对马铃薯疮痂病的防效相对较好。[结论]改良后的方法可以应用于化学杀菌剂防治马铃薯疮痂病的室内筛选研究中,且筛选得到的5种化学杀菌剂可以为防治马铃薯疮痂病的后续研究提供参考。

氧化苦参碱体外抑菌活性的研究

目的评估氧化苦参碱对条件性致病菌——大肠埃希菌的抑菌活性。方法采用滤纸片法和96孔板法对氧化苦参碱的抑菌活性进行检测,根据不同浓度氧化苦参碱对大肠埃希菌的抑菌率,利用origin 75拟合标准曲线计算氧化苦参碱对大肠埃希菌IC50。结果滤纸片法检测结果发现,256、128、64、32 mg/mL的氧化苦参碱对大肠埃希菌的抑菌圈大小分别为7.75、7.25、6.50和6.00 mm,而阳性对照5 000 IU/mL庆大霉素的抑菌圈大小为27.00 mm。96孔板法检测结果发现,氧化苦参碱对大肠埃希菌的抑制率均随用药剂量的增加抑制率增大,呈"S"型曲线。用药后6、12、24、48和72 h时氧化苦参碱的IC50值分别为27.27、26.81、24.75、20.29和17.01 mg/mL。结论氧化苦参碱对大肠埃希菌生长有抑制作用,其抑菌作用随氧化苦参碱用药作用时间的延长而增强,但抑菌活性较低。

大肠埃希菌对化疗药物顺铂体外敏感性的探讨

目的通过体外细菌敏感性试验研究细胞周期非特异性化疗药物顺铂(Cisplatin,DDP)对条件性致病菌———大肠埃希菌的抑菌活性。方法分别用滤纸片法和96孔板法对顺铂的抑菌活性进行研究。其中,滤纸片法是以庆大霉素作为阳性对照,以生理盐水作为阴性对照,用直尺测不同浓度顺铂抑菌圈直径大小;96孔板法是用酶标仪测定吸光值,然后计算抑菌率。根据不同浓度大肠埃希菌的抑菌率曲线,利用origin 75拟合标准曲线做图并计算出能使50%大肠埃希菌死亡所需的顺铂使用剂量(IC50)。结果滤纸片法检测结果发现,5、2.5、1.25、0.625、0.313和0.156 mg/mL的顺铂对大肠埃希菌的抑菌圈大小分别为14、121、19、.678、.33和0 mm,而阳性对照6 670 IU/mL庆大霉素的抑菌圈大小为18 mm。96孔板法检测结果发现,顺铂对大肠埃希菌的抑制率均随用药剂量的增加而增大,呈"S"型曲线。用药后6、24、48和72 h时顺铂的IC50值分别为30.29、42.56、80.24和98.69μg/mL。结论顺铂对大肠埃希菌有抑制生长的作用;其抑菌作用随顺铂用药作用时间的延长而减弱。

海南栽培肾茶的19种抗菌活性测试

为探究海南栽培肾茶的抗菌活性,采用96孔板法对栽培肾茶乙酸乙酯部分粗提取物进行19种抗菌活性测试,发现肾茶粗提取物对结核分枝杆菌、金黄色葡萄球菌ATCC 29213、鲍曼不动杆菌BAA 1605、鲍曼不动杆菌(BAA 1605+Col 0.1μmol/L)、鲍曼不动杆菌(BAA 1605+Rif 0.1μmol/L)、绿脓杆菌27853、绿脓杆菌(27853+Sceptrin 0.1μmol/L)有大于100%的抑制活性。但对金黄色葡萄球菌ATCC 700699、粪链球菌ATCC 29212、粪链球菌ATCC 51299、屎肠球菌ATCC 35667、屎肠球菌ATCC 700221、鲍曼不动杆菌BAA 747、肺炎克雷伯氏菌13883、大肠杆菌25922、白色念球菌(酵母形态)、白念球菌(菌丝形态)、金黄色葡萄球菌ATCC 29213、金黄色葡萄球菌ATCC 29213无抑制率。研究对栽培肾茶中19种抗菌活性进行探讨。