GeneXpert MTB/RIF、MGIT960液体培养法在胸腔积液结核分枝杆菌检测中的应用

目的探讨GeneXpert MTB/RIF、MGIT960液体培养法在胸腔积液结核分枝杆菌检测中的应用。方法回顾性分析386例疑似和确诊结核病患者胸腔积液标本中腺苷脱氨酶(ADA)、GeneXpert MTB/RIF及MGIT960液体培养法的检测结果。以胸腔积液ADA>40 U/L作为鉴别结核性积液的标准,将标本分为3组:第1组为非结核性积液(ADA≤40 U/L,219例),第2组为结核性积液(ADA>40 U/L,145例),第3组为脓性胸腔积液(不能进行ADA检测,22例)。结果在386例患者中,GeneXpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌复合群的阳性率为15.54%(60/386),MGIT960液体培养法检测结核分枝杆菌复合群的阳性率为5.44%(21/386),前者检测阳性率明显高于后者(χ^(2)=14.52,P<0.05)。3组中,GeneXpert MTB/RIF检测阳性率分别为3.20%、24.83%和77.27%;MGIT960液体培养法检测阳性率分别为2.74%、8.28%和13.64%。GeneXpert MTB/RIF在结核性积液、脓性胸腔积液中检测结核分枝杆菌复合群的阳性率明显高于MGIT960液体培养法(χ^(2)=14.38、17.97,P<0.05)。将采用MGIT960液体培养法检测为阳性的标本21例进行GeneXpert MTB/RIF检测发现,两种方法检测阳性结果的符合率为52.38%(11/21)。结论GeneXpert MTB/RIF检出结核分枝杆菌复合群的阳性率明显高于MGIT960液体培养法,特别是在结核性积液和脓性胸腔积液中。两种方法联合检测,有助于临床对结核性胸膜炎的早期诊断和治疗。

Xpert MTB/RIF、TB-IGRA法和MGIT 960液体培养法诊断结核分枝杆菌感染

目的 分析结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(geneXpert Mycobacterium tuberculosis/Ri-fampin, Xpert MTB/RIF)、结核分枝杆菌γ-干扰素体外释放试验(tuberculosis interferon-γ release assay, TB-IGRA)法和液体分枝杆菌培养管(mycobacterium growth indicator tube, MGIT)培养法中的BACTEC MGIT 960液体培养法(简称“MGIT 960液体培养法”)诊断结核分枝杆菌感染的临床价值,为结核病的临床诊治提供依据。方法 分析2020年3月—2022年3月在雅安市某院就诊的120例疑似结核病患者临床资料,收集其痰液标本,分别采用Xpert MTB/RIF、TB-IGRA法和MGIT 960液体培养法进行检测,比较各检测方法对结核分枝杆菌感染的诊断效能。结果 病原学检测结果显示,120例疑似结核病患者最终有106例确诊,14例未确诊,阳性率为88.33%。Xpert MTB/RIF检测结果显示,阳性检出率为43.40%(46/106);TB-IGRA法检测结果显示,阳性检出率为73.58%(78/106);MGIT 960液体培养法检测结果显示,阳性检出率为36.79%(39/106)。TB-IGRA法检测的阳性检出率高于Xpert MTB/RIF和MGIT 960液体培养法(P<0.05)。TB-IGRA法检测的灵敏度、准确度、阴性预测值均高于Xpert MTB/RIF和MGIT 960液体培养法,曲线下面积大于Xpert MTB/RIF和MGIT 960液体培养法(P<0.05)。3种检测方法的特异度与阳性预测值相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TB-IGRA法检测快速简便,对结核病诊断有良好的灵敏度、准确度和阴性预测值,其诊断效能优于Xpert MTB/RIF和MGIT 960液体培养法,提示该方法可在实验室开展应用,但其结果仍需结合临床进一步分析。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术对分枝杆菌液体培养系统菌种鉴定的临床研究

目的应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)对Bactec^(TM) MGIT^(TM) 960液体培养出的阳性培养物进行高通量、快速、准确的菌种鉴定,为临床早期、精准治疗提供病原学依据。方法选取我院Bactec^(TM) MGIT^(TM) 960分枝杆菌快速液体培养的阳性培养物为研究对象,通过不同的孵育时间、不同大小的研磨珠处理、不同的破壁方式摸索出MALDI-TOF MS对Bactec^(TM) MGIT^(TM) 960阳性培养物鉴定的"最优处理方法",并将所有结果与基因芯片法菌种鉴定做参照进行比对,鉴定不一致的结果通过基因测序确认。结果Bactec^(TM) MGIT^(TM) 960液体培养报阳性后增加孵育时间可提高检出率及鉴定分值,同时使用0.5 mm的氧化锆珠研磨,使用超声震荡混匀处理,鉴定效果最佳。鉴定结果方面,液体系统报阳的420份阳性标本,基因芯片法鉴定结果为结核分枝杆菌占69.05%(290/420),非结核菌占28.81%(121/420),9例未鉴定出,未鉴定占2.14%(9/420),错误鉴定占0.95%(4/420),总鉴定率为97.86%(411/420);采用MALDI-TOF MS质谱鉴定420份阳性标本中鉴定出419例,其中结核分枝杆菌占69.05%(290/420),非结核占30.00%(126/420),星型奴卡菌0.48%(2/420),巴西奴卡菌占0.24%(1/420),1例未鉴定出,总鉴定率为99.76%。质谱鉴定分值≥2.0的400例占95.24%,分值在1.7~2.0的19例占4.52%,分值<1.7的1例占0.24%。结论本实验实现了Bactec^(TM) MGIT^(TM) 960液体培养阳性培养物的直接质谱鉴定,缩短了培养鉴定的时间,将分枝杆菌鉴定到种水平,能区分出结核菌与非结核菌,同时也能将与分枝杆菌相似的奴卡菌鉴定出来,对临床疾病的鉴别诊断起到了积极的作用。

添加复苏促进因子的液-固相培养技术在结核分枝杆菌培养中的应用研究

目的通过与常用的结核病病原学实验室诊断技术进行比较,评价液-固相培养技术在结核分枝杆菌培养中的应用价值,为临床诊断提供参考依据。方法选取无锡市第五人民医院2020年7—12月收治的肺结核患者176例。用浓缩集菌抗酸涂片、MGIT 960全自动液体培养和液-固相培养分别对入组患者痰液样本进行检测,并统计分析阳性率、阳性时间差异。结果液-固相培养的阳性率为58.0%,相对MGIT 960液体培养(56.3%),差异无统计学意义。液-固相培养和MGIT 960液体培养平均阳性时间分别为8.0(6.0,10.0)d和10.0(7.0,15.0)d,差异有统计学意义(Z=-3.223,P<0.001)。按MGIT 960液体培养阳性时间,分为1~10 d、11~20 d、21~35 d 3个组别,在11~20 d组内,液-固相培养阳性时间10.0(7.3,13.5)d相较于MGIT 960液体培养14.0(12.0,16.0)d,差异有统计学意义(Z=-4.582,P<0.0001);在21~35 d组内,液-固相培养相较于MGIT 960液体培养差异有统计学意义(Z=-2.805,P=0.005)。此外,液-固相培养技术还可以初步鉴别非结核分枝杆菌,5例非结核分枝杆菌经基因芯片确认为胞内分枝杆菌3例和鸟分枝杆菌2例。结论液-固相培养检测结核分枝杆菌阳性率高,且培养时间短,可作为结核分枝杆菌培养的优选方法。

四种不同的检测技术对活动性肺结核诊断的效果评估

目的研究BD960结核液体培养法、实时荧光定量PCR法(溶解曲线法)、抗酸染色、结核感染T细胞检测(T-SPOT.TB)对活动性肺结核患者诊断的效果评价。方法分析该院2021年4月-2022年4月住院及门诊104例肺结核患者以及50例随机对照,按照痰涂片找抗酸菌的结果将研究对象分为痰阳组和痰阴组,以临床最终诊断为标准,分析其MGIT960结核液体培养系统、实时荧光PCR(溶解曲线法)、抗酸染色、结核感染T细胞检测(T-SPOT.TB)对活动性肺结核诊断的效果评估。结果结核液体培养法对活动性结核的诊断效果最好,其灵敏度、特异度、准确度分别99.04%,100%,99.35%。痰涂片阳性组中,结核液体培养对活动性结核的诊断效果最好,其灵敏度、特异度均为100%。痰涂片阴性组中结核液体培养对活动性结核的诊断效果最好,其灵敏度、特异度分别为98.04%、100%。在活动性肺结核中预测抗酸染色阳性结果的ESAT6抗原、CFP10抗原最佳阈值为28.5、36.5,其灵敏度为79.6%、70.4%,特异度为80%、90%。结论MGIT960结核液体培养法对活动性肺结核的辅助诊断效果最好,在活动性肺结核患者中T-SPOT.TB结果对初筛抗酸染色阳性结果具有一定的预测价值。

4种检测技术对艾滋病合并肺结核的诊断效能比较

目的比较痰涂片抗酸染色镜检(简称"涂片法")、BACTEC MGIT 960液体培养法(简称"MGIT960培养法")、RNA恒温扩增技术快速检测法(简称"TB-SAT法")、Gene-Xpert MTB/RIF检测法(简称"Gene-Xpert法")在进行艾滋病合并肺结核患者痰标本病原学检测中的诊断效能。方法收集2020年1-12月重庆市公共卫生医疗救治中心感染科收治的艾滋病合并肺结核患者107例为研究对象,采集患者的痰标本同时进行4种实验室检测技术检验,比较4种检测技术的诊断效能。结果TB-SAT法阳性率(35.51%)高于涂片法阳性率(30.84%),但差异无统计学意义(χ^(2)=0.764,P=0.382),MGIT960培养法阳性率(51.40%)高于涂片法阳性率(30.84%),差异有统计学意义(χ^(2)=10.246,P=0.001);MGIT960培养法阳性率(51.40%)高于TB-SAT法阳性率(35.51%),差异有统计学意义(χ^(2)=5.496,P=0.019);Gene-Xpert法阳性率(49.53%)低于MGIT960培养法阳性率(51.40%),但差异无统计学意义(χ^(2)=0.075,P=0.078);Gene-Xpert阳性率(49.53%)高于TB-SAT法阳性率(35.51%),差异有统计学意义(χ^(2)=4.302,P=0.038)。涂片法灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为52.72%、92.31%、87.88%和64.87%,与MGIT960培养法Kappa值为0.445,两者一致性中等;TB-SAT法灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为67.27%、98.07%、97.36%和73.91%,与MGIT960培养法Kappa值为0.648,两者具有较高的一致性;Gene-Xpert法灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别90.91%、94.23%、94.34%和90.74%,MGIT960培养法Kappa值为0.851,两者一致性良好。结论Gene-Xpert法的诊断效能较高,并且与MGIT960培养法检测结果具有良好的一致性,建议在诊断艾滋病合并肺结核时优先选用Gene-Xpert法。

PCR荧光探针法与传统检测技术在结核病诊断中的比较

目的通过与离心沉淀法、BD960液体培养法的比较来评价聚合酶链反应(PCR)荧光探针法这一检测手段的优缺点和可行性。方法 275例痰液标本收集来自包括常州市第三人民医院2014年1—10月收治入院的结核病患者149例、常州市第二人民医院2014年1—10月收治入院的支气管肺炎患者51例、细菌性肺炎患者49例和肺部肿瘤患者26例。采用PCR荧光探针法检测275例临床标本,并与BD960液体培养法和离心沉淀法的平行检测结果比较。结果 PCR荧光探针法检测的阳性率为23.3%,离心沉淀法和BD960液体培养法的阳性率分别为14.5%和26.5%。PCR荧光探针法和离心沉淀法仅需1 d就可以得到结果,BD960液体培养法的阳性报告时间需要(14.37±2.93)d。结论 PCR荧光探针法不仅操作简便、快速,其阳性率高,与BD960液体培养法有很高的可比性,适合结核病疫情严重的发展中国家推广使用。

四种检测方法在结核病诊断中的比较

目的比较分析MGIT960液体培养法、结核/非结核分枝杆菌核酸检测(PCR-荧光探针法)、Xpert MTB/RIF和直接涂片镜检在结核病诊断中的应用。方法收集我院2019年5~12月临床上疑似为结核病患者的各类标本。将疑似结核病患者2天内所有的标本混匀后进行直接涂片镜检,然后平均分装为3份,进行MGIT960液体培养、PCR-荧光探针法和Xpert MTB/RIF。结果2019年5~12月间总共收集了我院710份疑似结核病患者的各类标本。直接涂片镜检、PCR-荧光探针法、MGIT960液体培养和Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌的阳性率分别为12.0%、18.7%、21.4%和24.8%。以临床诊断作为参考标准时,直接涂片法、PCR-荧光探针法、MGIT960液体培养和Xpert MTB/RIF检出结核分枝杆菌的灵敏度分别为40.2%、60.3%、78.4%和70.1%,而特异度分别为98.6%、96.9%、100.0%和92.2%,且四种方法组间比较均具有统计学差异。结论四种临床检测方法在结核病诊断中各有优缺点,联合应用可以更好的诊断、治疗和监测结核病。

三种检测方法诊断分枝杆菌感染的效果分析

目的分析PCR-荧光探针法、BD960液体培养法和直接涂片荧光染色法诊断分枝杆菌感染的效果。方法选取2021年1月至2021年4月在广西壮族自治区胸科医院就诊的104例疑似分枝杆菌感染者作为研究对象,以BD960液体培养法为参照,评估PCR-荧光探针法和直接涂片荧光染色法检测分枝杆菌的检验效能。结果104例疑似分枝杆菌病患者的标本中,BD960液体培养法检测结果与PCR-荧光探针法及直接涂片荧光染色法比较差异均有统计学意义(P=0.013,P<0.001)。结论PCR-荧光探针法和BD960液体培养法可以快速诊断结核分枝杆菌(MTB)和非结核分枝杆菌(NTM),但当MTB和NTM混合生长时,只能表达MTB,有检测局限性,有待进一步提高。直接涂片荧光染色法检出率低,但是操作简单、快速、价格低廉,适合基层实验室进行初步鉴定。

磁珠法在抗酸杆菌快速检测中可行性的研究

目的通过与BD960快速液体培养法、离心沉淀法的比较来评价磁珠法这一检测手段的优缺点和可行性。方法采用磁珠法检测108例痰液标本,并与BD960快速液体培养法和离心沉淀法的平行检测结果相比较。结果 1)磁珠法和离心沉淀法仅需1天就可以得出结果,BD960快速液体培养法的阳性报告时间需要10.72±4.49天。2)磁珠法阳性占BD960快速液体培养法的88.8%(71/80)。3)离心沉淀法阴性的43例标本中磁珠法有6例标本为阳性,占离心沉淀法阴性标本的14.0%(6/43),且磁珠法的浓集效果更好。结论磁珠法不仅操作简便、快速,其阳性率高,与BD960快速液体培养法有很高的可比性,适合结核诊断实验室的开展。

GeneXpert MTB/RIF检查对结核性胸膜炎诊断的价值

目的:探讨GeneXpert MTB/RIF技术在结核性胸膜炎诊断及利福平耐药检测中的价值。方法:回顾性分析96例结核性胸膜炎和4例非结核性胸膜炎患者,比较胸水涂片抗酸染色法、结核分枝杆菌BACTEC MGITBD960液体快速培养、GeneXpert MTB/RIF技术的阳性率,并对培养阳性菌株做比例法药敏与GeneXpert MTB/RIF利福平耐药性对比。结果:GeneXpert MTB/RIF技术阳性率68.75%,明显高于涂片抗酸染色法2.1%及BACTEC MGITBD960液体快速培养24%,差异均有统计学意义(P<0.05),GeneXpert MTB/RIF检测利福平耐药性的正确度为91.3%。结论:GeneXpert MTB/RIF技术在结核性胸膜炎诊断中有重要价值。

结核分枝杆菌检测试剂盒优化方案对结核分枝杆菌的诊断价值

目的评估结核分枝杆菌检测试剂盒(TB-SAT)优化方案对结核分枝杆菌的诊断价值。方法选择2019年12月在浙江中医药大学附属中西医结合医院收治、疑似肺结核患者105例的支气管肺泡灌洗液标本。后经临床确诊有75例为肺结核患者,30例为非肺结核患者。以临床诊断为金标准,对比TB-SAT优化方案、RNA恒温扩增检测法、PCR-荧光探针法以及MGIT 960液体快速培养对肺结核的诊断价值。结果以临床诊断为金标准,TB-SAT优化方案的灵敏度最高,为73.33%;特异度方面,TB-SAT优化方案、RNA恒温扩增检测及PCR-荧光探针法均为100.00%,MGIT 960液体快速培养的特异度为93.33%。结论TB-SAT优化方案有较好的诊断价值,提高了结核RNA的检出率,降低了肺结核的漏检率,可帮助临床进行肺结核患者的筛查,值得推广。

MGIT960联合快速药敏在结核分枝杆菌药物敏感性检测中的应用

目的评价结核分枝杆菌快速培养及快速药物敏感试验在结核病诊治中的指导意义。方法应用MGIT 960液体快速培养方法及美国临床和实验室标准协会(clinical and laboratory standards institute,CLSI)推荐的M24-A(CLSI M24-A)微量肉汤稀释法对结核分枝杆菌临床分离菌株进行快速培养及快速药物敏感试验。结果对540株结核分枝杆菌临床分离菌株进行快速培养及快速药物敏感试验,耐药结果检出的平均时间为40.4天,<40天获得药物敏感试验结果的比例达50.37%。快速药敏组平均报告天数比常规罗氏药敏试验平均报告天数缩短近18天,差异有统计学意义(t=9.137,P<0.05)。对异烟肼、利福平、乙胺丁醇、左氧氟沙星、莫西沙星、环丙沙星、克拉霉素、利福布丁和利奈唑胺等药物低浓度耐药和高浓度耐药比例差异均有统计学意义(P<0.05)。结论河北地区结核耐药形势依旧严峻,通过缩短结核分枝杆菌培养及药物敏感性试验的时间,使得药物敏感试验结果更加快速、准确,使得病人得到更加快速准确的治疗方案,及时地服务于临床。