NKX2-1-AS1介导miR-96-5p/PRDM16轴对未分化甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)NK2同源异形盒1-反义RNA 1(NKX2-1-AS1)介导微RNA(miR)-96-5p/含有PR结构域的蛋白16(PRDM16)轴对未分化甲状腺癌(ATC)细胞体外增殖、迁移和侵袭以及体内移植瘤生长的影响。方法基于生物信息学筛选ATC组织及细胞中差异表达的lncRNA NKX2-1-AS1,并进一步筛选其靶基因miR-96-5p和下游靶基因PRDM16。双荧光素酶报告基因实验验证NKX2-1-AS1与miR-96-5p以及miR-96-5p与PRDM16之间的关系。Western blotting检测过表达miR-96-5p对NKX2-1-AS1过表达的CAL-62细胞PRDM16表达的影响。平板克隆形成实验、划痕实验和Transwell实验分别检测敲减PRDM16对过表达NKX2-1-AS1的CAL-62细胞增殖、迁移和侵袭的影响。裸鼠皮下注射CAL-62细胞,观察敲减PRDM16对NKX2-1-AS1过表达的CAL-62细胞移植瘤生长的影响。结果基于生物信息学筛选出参与调节ATC发展的NKX2-1-AS1/miR-96-5p/PRDM16轴。双荧光素酶报告基因实验验证结果显示NKX2-1-AS1与miR-96-5p、miR-96-5p与PRDM16结合。过表达NKX2-1-AS1上调CAL-62细胞中PRDM16蛋白表达;而过表达miR-96-5p可逆转此上调作用。过表达NKX2-1-AS1抑制CAL-62细胞体外增殖、迁移和侵袭以及体内移植瘤生长;而敲减PRDM16可逆转此抑制作用。结论NKX2-1-AS1可能作为竞争性内源性RNA与miR-96-5p竞争结合下游靶基因PRDM16,上调PRDM16表达,从而抑制ATC细胞体外增殖、迁移和侵袭以及体内移植瘤生长。

慢性缺氧通过激活缺氧诱导因子1α/microRNA-96通路诱导小管上皮细胞自噬异常参与肾间质纤维化

目的:研究慢性缺氧诱导肾脏纤维化的机制。方法:缺氧诱导人近端肾小管上皮细胞(HK-2),Western Blot检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、微管相关蛋白轻链3Ⅰ/Ⅱ(LC3Ⅰ/Ⅱ)和p62的表达及实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测microRNA-96(miR-96)的表达。采用siRNA-HIF-1α(siHIF-1α)和pcDNA-HIF-1α处理缺氧诱导的肾小管上皮细胞,利用RT-qPCR检测miR-96的表达,探讨过表达和干扰HIF-1α对miR-96表达的影响。miR-96mimic处理常氧肾小管上皮细胞,Western Blot检测促纤维化因子α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅳ型胶原蛋白1(COL4A1)蛋白的变化,RT-qPCR检测自噬关键分子LC3Ⅰ/Ⅱ和p62的表达。小鼠腹腔注射miR-96 inhibitor的病毒载体,通过Masson染色检测各模型肾脏纤维化的程度及纤维化因子COL4A1的表达。结果:在缺氧诱导的肾小管上皮细胞中HIF-1α和miR-96表达均增加(P<0.05),与纤维化程度呈正相关性,自噬关键分子LC3Ⅰ/Ⅱ水平升高p62水平降低(P<0.05),表明缺氧诱导HK-2细胞自噬。pcDNA-HIF-1α处理常氧培养的HK-2,发现HIF-1α促进miR-96的表达,siHIF-1α处理缺氧诱导的HK-2细胞,发现沉默HIF-1α可降低由缺氧引起的miR-96的增加,常氧条件下过表达miR-96诱导HK-2的纤维化因子α-SMA和COL4A1的增加,同时自噬关键分子LC3Ⅰ/Ⅱ水平升高p62水平降低(P<0.05)。缺氧条件下抑制miR-96可降低自噬关键分子的LC3Ⅰ/Ⅱ表达水平,恢复p62的表达(P<0.05)。小鼠腹腔注射miR-96 inhibitor的病毒载体,与注射了对照病毒的小鼠相比可以抑制单侧输尿管梗阻(UUO)引起的肾脏纤维化,减低纤维化因子COL4A1的表达。结论:缺氧通过激活HIF-1α/miR-96信号通路诱导肾小管上皮细胞自噬异常、促纤维化因子增加,促进了肾脏纤维化。

miR-96联合HMGB1检测在胃癌病情及预后评估中的临床价值

目的研究miR-96联合HMGB1检测在胃癌病情及预后评估中的临床价值。方法选择胃癌患者(GAC组)及胃良性疾病患者(CON组)为研究对象,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-96及HMGB1表达,比较不同临床病理因素中miR-96、HMGB1表达的差异。采用ROC曲线分析HMGB1联合miR-96预测胃癌1年预后不良的敏感度和特异度。多因素Logistics回归分析胃癌死亡的危险因素。分析miR-96、HMGB1表达与生存期的关系。结果GAC组肿瘤组织miR-96、HMGB1表达均高于癌旁组织和CON组活检组织(P<0.05)。低分化、肿瘤最大径≥5cm、T3-T4、有淋巴结转移及Ⅲ-Ⅳ期胃癌患者miR-96、HMGB1表达显著高于中-高分化、肿瘤最大径<5cm、T1-T2、无淋巴结转移及Ⅰ-Ⅱ期患者。HMGB1联合miR-96预测胃癌1年预后不良敏感度、特异度均高于miR-96、HMGB1、肿瘤分化程度、肿瘤最大径、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期(P<0.05)。miR-96≥1.15、HMGB1≥0.87为胃癌死亡的独立危险因素(P<0.05)。miR-96≥1.15且HMGB1≥0.87胃癌患者中位生存期显著低于其它患者(miR-96<1.15或HMGB1<0.87)[中位生存期(31.4±4.7)月vs(42.4±5.8)月,P<0.05]。结论胃癌患者HMGB1和miR-96表达显著升高,可作为胃癌病情及预后评估的标志物,两者联合检测时可提高预测胃癌预后不良的敏感度及特异度。

七氟烷调控miR-96-5p/SIK1轴对胃癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 探讨七氟烷调控微小RNA(miR)-96-5p/盐诱导激酶1(SIK1)轴表达对胃癌(GC)细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法 以0、1%、2%、3%、4%、5%v/v浓度的七氟烷处理GC细胞SGC7901细胞,CCK-8法检测SGC7901细胞增殖情况;将SGC7901细胞随机分为对照组(正常培养)、七氟烷组(3%v/v七氟烷干预)、七氟烷+miR-NC组(转染miR-NC后再以3%v/v浓度的七氟烷干预48小时)、七氟烷+miR-96-5p mimics组(转染miR-96-5p mimics后,以3%v/v浓度的七氟烷干预48小时),RT-qPCR检测各组细胞中miR-96-5p表达;流式细胞术检测细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移;Transwell小室实验检测细胞侵袭;Western blot检测细胞磷酸化盐诱导激酶1(SIK1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-96-5p和SIK1的靶向关系。结果 与0浓度组相比,SGC7901细胞增殖抑制率在1%、2%、3%、4%、5%v/v浓度七氟烷处理下以剂量依赖性的方式显著增加(P<0.05),选取3%v/v浓度七氟烷进行后续实验;与对照组比较,七氟烷组细胞miR-96-5p表达水平、迁移、侵袭以及MMP-2、MMP-9蛋白表达水平显著降低,凋亡率和SIK1蛋白表达水平显著增加(P<0.05);激活miR-96-5p表达减弱了七氟烷对SGC7901细胞迁移和侵袭的抑制能力,降低细胞凋亡率(P<0.05);双荧光素酶报告基因结果表明miR-96-5p可靶向调节SIK1表达。结论 七氟烷可能通过下调miR-96-5p、上调SIK1抑制GC SGC7901细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。

肠道病毒C组96型VP1蛋白线性B细胞表位筛选与鉴定

目的鉴定肠道病毒C组96型(enterovirus C96,EV-C96)VP1蛋白的线性B细胞表位。方法采用IEDB网站提供的在线分析工具分析、预测EV-C96 VP1蛋白的线性B细胞表位,结合其二级结构、β-转角、抗原性、亲水性等多项参数,筛选出优势候选表位;应用间接ELISA法检测候选表位与EV-C96免疫血清的反应性以及与21种其他常见手足口病病原血清的交叉反应性;应用微量中和试验测定表位抗体的中和效价;采用序列比对分析表位的序列保守性;应用结构对齐分析表位的结构特异性。结果通过生物信息学筛选出EVC96 VP1蛋白7个候选表位(P1~P7);ELISA法检测发现P7(氨基酸序列位置为282~304)与EV-C96多克隆抗体有强反应性,与其他常见EV多克隆抗体不发生明显反应;微量中和试验显示,P7抗体的中和效价低于1∶2;序列及结构分析结果显示,P7的氨基酸序列在EV-C96型内具有较高保守性,与其他EV相应位点氨基酸序列的结构有明显差异。结论P7表位为EV-C96特异的非中和性B细胞表位,可作为开发EV-C96检测试剂盒的候选抗原表位。

温阳复元方对脑缺血再灌注损伤大鼠线粒体铁死亡相关蛋白IRP1和FAM96A表达的影响

目的观察温阳复元方对脑缺血再灌注后大鼠铁调节蛋白1(IRP1)和96序列相似家庭成员A(FAM96A)表达的影响,探讨其脑保护机制。方法将84只SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注组、温阳复元方组和补阳还五汤组,每组21只。除假手术组外,其余组采用改良Longa线栓法建立脑缺血再灌注模型。温阳复元方组和补阳还五汤组大鼠在造模前30 min分别给予温阳复元方14.04 g/kg和补阳还五汤11.43 g/kg灌胃,大鼠清醒后1 h继续予以原方灌胃,假手术组、脑缺血再灌注组给予生理盐水灌胃。分别于再灌注12 h、24 h、3 d时对各组大鼠进行神经功能缺损评分,随后处死大鼠取脑组织,分别采用RT-qPCR、免疫组化法检测缺血灶脑组织中IRP1、FAM96AmRNA和蛋白表达情况。结果脑缺血再灌注组大鼠再灌注12 h、24 h、3 d时神经功能缺损评分均明显高于假手术组(P均<0.05);温阳复元方组大鼠再灌注12 h、24 h、3 d时神经功能缺损评分均明显低于同期脑缺血再灌注组(P均<0.05),且再灌注3 d时明显低于同期补阳还五汤组(P<0.05);补阳还五汤组仅在再灌注12 h时神经功能缺损评分明显低于脑缺血再灌注组(P<0.05)。脑缺血再灌注组再灌注12 h、24 h、3 d时IRP1、FAM96A mRNA相对表达量和蛋白表达平均光密度值均明显高于同期假手术组(P均<0.05);温阳复元方组IRP1、FAM96A mRNA相对表达量和蛋白表达平均光密度值随再灌注时间延长逐渐降低,再灌注3 d时最低,与脑缺血再灌注组相应时间点比较差异均有统计学意义(P均<0.05),且再灌注3 d时IRP1 mRNA相对表达量和再灌注24 h、3 d时FAM96A mRNA相对表达量及IRP1、FAM96A蛋白表达平均光密度值均明显低于同期补阳还五汤组(P均<0.05);补阳还五汤组IRP1、FAM96A mRNA相对表达量和蛋白表达平均光密度值随再灌注时间延长逐渐升高,但再灌注12 h、24 h时均明显低于同期脑缺血再灌注组(P均<0.05),再灌注3 d时与脑缺血再灌注组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论温阳复元方可以通过下调IRP1和FAM96A表达起到保护大鼠脑缺血再灌注损伤的作用。

miR-96-5p通过下调肌动蛋白结合蛋白1促进卵巢癌干细胞顺铂耐药性

目的 探索微小核糖核酸(miRNA)miR-96-5p通过调控肌动蛋白结合蛋白1(profilin 1,PFN1)对卵巢癌干细胞(SiHa细胞)顺铂耐药的分子机制。方法 采用RT-qPCR检测miR-96-5p表达水平;将SiHa细胞置于不同浓度顺铂的培养基中,构建顺铂耐药细胞SiHa/DDP;采用Western blot检测蛋白的表达水平;双荧光素酶报告实验验证miR-96-5p与PFN1的靶向关系;MTT、Transwell和流式细胞术检测细胞增殖、侵袭和凋亡;成球实验检测细胞的成球能力。结果 miR-96-5p在SiHa细胞中高表达,且在SiHa/DDP细胞中的表达最高;敲降miR-96-5p可抑制SiHa/DDP细胞增殖、侵袭和干细胞成球能力并促进细胞凋亡;PFN1是miR-96-5p的潜在靶基因,过表达miR-96-5p通过下调PFN1促进SiHa/DDP细胞增殖、侵袭和干细胞成球,抑制细胞凋亡。结论 miR-96-5p通过靶向调控PFN1,促进SiHa/DDP细胞增殖、侵袭及其干细胞成球并抑制凋亡,从而增强SiHa/DDP细胞对顺铂的耐药性。

HSP gp96与Jab1在胃癌中的表达及其临床意义

目的探讨热休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)和C-jun激活域连接蛋白1(Jab1)在人胃癌组织及其癌旁正常组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组化SP法检测80例原发性胃癌患者术后癌组织及其癌旁正常组织标本中HSP gp96和Jab1的表达。结果胃癌组织中HSP gp96和Jab1的表达均高于癌旁正常组织(P<0.05);HSP gp96的表达与胃癌的临床分期、浸润程度、分化程度以及有无淋巴结转移有关(P<0.05,P<0.01),与其他临床病理参数无关;Jab1的表达与胃癌的浸润程度、分化程度以及有无淋巴结转移有关(P<0.05),与其他临床病理参数无关。胃癌组织中HSP gp96和Jab1的表达存在关联(χ2=4.901,P<0.05,r=0.248)。结论胃癌组织中HSP gp96和Jab1表达显著增高,且HSP gp96和Jab1可能存在较强的正相关关系,两者的表达与胃癌的发生、发展密切相关。

苹果新种质B96-1的选育及其抗性评价初报

苹果新种质B96-1是我们于1996年以金冠作母本、富士花药培养纯系富85-1作父本杂交育成。果实圆柱形,平均单果重200.0g,果皮黄绿色,阳面带红晕,无果锈;果肉黄白色,肉质松脆,汁液多,风味酸甜适度,品质上等;可溶性固形物含量14.60%,果肉硬度7.03kg/cm2;果实贮至翌年3—4月,不皱皮;抗寒、高抗苹果早期落叶病和苹果果实轮纹病。

禽流感病毒GD/1/96株M基因在sf9昆虫细胞中的表达

从pUCM 1质粒中亚克隆禽流感病毒M基因至转移载体 pFastBac1质粒 ,PCR鉴定后 ,转化DH10 BAC感受态细胞。提取重组杆粒rBacM ,以M 13为通用引物作PCR分析 ,证明M基因已转入其中。用CellFectin试剂包裹rBacM杆粒转染sf9细胞 ,96h收取感染细胞。细胞表达产物裂解后作SDS PAGE蛋白电泳和Westernblot分析 ,证明M基因在昆虫细胞中成功表达且具有与天然M 1蛋白相似的活性。琼脂扩散试验结果进一步证明 ,重组M 1蛋白可作为诊断抗原。

gp96、Mcl-1在肝硬化和肝癌组织中表达及意义

目的通过研究gp96、髓样细胞白血病-1(Mcl-1)蛋白在肝硬化和肝癌组织中的表达及临床病理学意义,初步探讨其与肝硬化和肝癌发生、发展的关系。方法采用免疫组织化学ENVISION法分别检测19例肝硬化组织(癌旁肝硬化组织)、32例肝癌组织和21例对照肝组织(癌旁非硬化肝组织)中gp96、Mcl-1的表达,并分析其各自表达与肝癌临床病理学特征的关系。取来源于同一患者的肝癌组织、癌旁肝硬化组织或癌旁非肝硬化组织,分别配对检测gp96、Mcl-1,比较两者的阳性表达率。结果对照组、肝硬化组和肝癌组gp96阳性表达率逐渐递增,差异有统计学意义(P<0.05);gp96的阳性表达与肿瘤有无包膜、TNM分期有关(P<0.05),与患者的性别、年龄、肿瘤大小、血清甲胎蛋白(AFP)值、组织学分级及临床分期无关(P>0.05)。肝癌组和肝硬化组Mcl-1阳性表达率明显高于对照组(P<0.05),但肝癌组和肝硬化组之间差异无统计学意义(P>0.05);Mcl-1阳性表达与肿瘤有无坏死和TNM分期有关(P<0.05)。肝癌组gp96阳性表达率明显高于配对癌旁肝硬化组及配对癌旁非肝硬化组(P均<0.05);而肝癌组Mcl-1阳性表达率明显高于配对癌旁非肝硬化组,与配对癌旁肝硬化组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 gp96、Mcl-1过表达可能与肝癌的发生、发展有关。gp96可能参与了肝硬化的发生、发展及向肝癌的恶性转化,有助于判断肝癌患者的预后。

禽流感病毒A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)NA基因克隆及序列分析

采用RT_PCR技术扩增了禽流感病毒A/Goose/Guangdong/ 3/ 96 (H5N1) (GD3/ 96 )NA基因 ,并对其进行了克隆与测序 ,该苷酸序列测定结果表明 :NA基因全长为 1410bp ,共编码 46 9个氨基酸。其序列与A/Hongkong/ 15 6 / 97(H5N1)、A/Chicken/HongKong/ 2 2 0 / 97(H5N1)、A/Goose/Guangdong/ 1/ 96 (H5N1)及A/teal/Hongkong/W312 / 97(H6N1)分离株核苷酸序列的同源性在88.4%～ 99.0 %之间 ,其相应氨基酸序列的同源性在 89.8%～ 99.2 %之间。氨基酸序列与香港流感分离株氨基酸序列相比 ,在茎部没有出现 19个氨基酸残基的缺失 。

miR-96与转移抑制因子1是前列腺癌骨转移潜在的生物学标志物

目的探讨miR-96和转移抑制因子1(MTSS1)在前列腺癌(PCa)组织中的表达及其临床意义。方法收集PCa患者标本89例,癌旁组织作为正常对照,分别用原位杂交及免疫组化检测PCa组织及癌旁组织中miR-96和MTSS1的表达水平,并对二者进行相关性分析。结果 89例PCa组织中miR-96阳性表达率为87.64%,显著高于癌旁组织(P<0.01);而MTSS1蛋白阳性表达率为16.85%,显著低于癌旁组织(P<0.01);miR-96的表达随着Gleason评分和临床分期演进而增加(P<0.05),有骨转移的miR-96的表达高于无骨转移组(P<0.05);MTSS1的表达随着Gleason评分和临床分期演进而下调,且有骨转移的MTSS1的表达显著低于无骨转移组(P<0.01);miR-96表达与MTSS1的表达呈显著负相关(P<0.01)。结论 miR-96与MTSS1可能是PCa骨转移的重要生物学标志。

子宫内膜癌组织中miR-96、FOXO1表达变化及意义

目的探讨子宫内膜癌(EC)组织中微小RNA96(miR-96)、叉头框基因O1(FOXO1)的表达变化及意义。方法收集120例EC患者癌组织及其癌旁组织(距癌组织边缘>5 cm),用荧光定量PCR法检测组织中miR-96、FOXO1 mRNA表达,Pearson相关分析二者表达的关系,用在线软件TargetScan预测miR-96与FOXO1相互作用的位点,分析miR-96、FOXO1 mRNA表达与患者临床病理特征的关系;对患者随访至2021年4月,用Kaplan-Meier生存曲线法分析miR-96与FOXO1表达对EC患者预后的影响;多因素Cox回归分析EC患者预后的危险因素。结果与癌旁组织比较,EC组织中miR-96相对表达量高、FOXO1 mRNA相对表达量低(P均<0.05)。EC组织中miR-96与FOXO1 mRNA的表达呈负相关(r=-0.611,P<0.05)。FOXO1 mRNA的3'UTR区第232~266碱基位置处存在与miR-96相互结合的潜在位点。miR-96、FOXO1 mRNA表达与EC的国际妇产科联盟(FIGO)分期、伴淋巴结转移有关(P均<0.05)。随访5~36(27.7±6.3)个月,随访期间死亡26例。以miR-96相对表达量的均数4.118为临界值,分为miR-96高表达组65例,miR-96低表达组55例。miR-96高表达组3年总体生存率低于低表达组(P<0.05)。以FOXO1 mRNA相对表达量的均数0.918为临界值,分为FOXO1高表达组62例,FOXO1低表达组58例。FOXO1高表达组3年总体生存率高于低表达组(P<0.05)。miR-96高表达、FOXO1低表达、高FIGO分期及淋巴结转移是EC患者预后不良的危险因素(P均<0.05)。结论EC组织中miR-96高表达、FOXO1 mRNA低表达,二者表达变化与肿瘤FIGO分期、淋巴结转移有关;miR-96高表达、FOXO1低表达的EC患者预后不良。

热休克蛋白gp96、髓样细胞白血病-1和阻抑蛋白在肝硬化和肝癌组织中的表达

目的:分析热休克蛋白gp96、髓样细胞白血病-1(MCL-1)和阻抑蛋白(PHB)在LC和HCC组织中的表达及其临床意义.方法:免疫组化二步法分别检测19例LC,32例HCC和21例对照组肝组织中gp96,MCL-1和PHB的表达,并分析其与肝癌临床病理学特征的关系.结果:gp96在对照组、LC组和HCC组的表达逐渐增强(P<0.05);HCC无包膜、有坏死和门静脉有癌栓者gp96表达较高;gp96表达与HCC分化程度呈负相关(r=-0.4655,P=0.0073),与TNM分期呈正相关(r=0.5157,P=0.0025).MCL-1和PHB在HCC组织中过表达,HCC有坏死者MCL-1表达高于无坏死者,HCC无包膜者PHB表达高于有包膜者(P<0.05).结论:gp96,MCL-1和PHB的过表达可能与HCC的发生、发展有关.gp96可能参与LC的发生、发展及向HCC的恶性转化,有助于判断HCC患者的预后.

禽流感病毒新疆分离株1/96(H14N5)非结构蛋白基因克隆及序列分析

研究应用无特定病原体 (SPF)鸡胚增殖禽流感病毒分离株 A/ Chicken/ Xinjiang/ 1 / 96(H1 4 N5) ,提取病毒基因组及病毒感染鸡胚绒毛尿囊膜细胞信使 RNA,运用 RT-PCR技术扩增病毒分离株的 NS1和 NS2基因 c DNA,克隆后进行序列测定。序列测定后分析结果表明 。

胃癌gp96多肽复合物树突状细胞疫苗对Th1/Th2平衡的影响

目的探讨gp96多肽复合物树突状细胞(dendriticcells,DCs)疫苗对Th1/Th2平衡的影响。方法从胃癌组织中提取gp96多肽复合物负载从外周血单个核细胞诱导培养的DCs,用gp96多肽复合物DC疫苗诱导同一患者Th0淋巴细胞,ELISA检测培养上清中IFNγ和IL10的水平;以胃癌细胞裂解物负载的DC疫苗作对照。结果gp96多肽复合物DC疫苗诱导的T细胞分泌IFNγ的量为(2875±177.66)pg/ml,显著高于对照组(1765±289.07)pg/ml(P<0.01);分泌IL10的量为(36±6.72)pg/ml,显著低于对照组(90±11.26)pg/ml(P<0.05),二者之间存在显著的负相关(r=-0.915,P<0.01)。结论gp96多肽复合物DC疫苗可诱导Th1/Th2平衡向Th1漂移,显示了gp96多肽复合物DC疫苗可显著提高机体的免疫能力,为临床免疫干预治疗奠定基础。

MiR-96-5p靶向调控MTSS1表达对结肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨miR-96-5p对人结肠癌细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法应用miRNA转染技术,将miR-96-5p抑制物(miR-96-5p inhibitor)及microRNA无关序列(miR-NC)转染入结肠癌HCT116细胞中;采用免疫荧光及RT-PCR验证转染效率后,分别利用MTT、划痕实验、Transwell、凋亡实验检测miR-96-5p对结肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭、凋亡能力的影响;采用裸鼠皮下成瘤实验检测miR-96-5p对人结肠癌细胞成瘤能力的影响;miRNA靶基因预测软件分析miR-96-5p潜在靶目标并利用双荧光素酶报告基因和Western blot实验进行验证。结果免疫荧光及RT-PCR结果提示miR-96-5p inhibitor显著下调miR-96-5p在HCT116细胞中的表达。MTT、划痕实验、Transwell及凋亡实验结果提示下调miR-96-5p表达显著抑制结肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力并且促进细胞发生凋亡。裸鼠皮下成瘤实验提示过表达miR-96-5p能够促进结肠癌细胞成瘤能力,下调miR-96-5p的表达能够明显削弱其成瘤能力。miRNA靶基因预测软件分析提示MTSS1可能为miR-96-5p目标靶基因;双荧光素酶报告基因验证了miR-96-5p对MTSSI的靶向调控,且Western blot实验结果提示下调miR-96-5p可明显促进MTSS1蛋白在结肠癌细胞中的表达。结论下调miR-96-5p的表达可抑制结肠癌细胞的增殖、侵袭、迁移能力并促进细胞发生凋亡,这种作用可能通过对MTSS1的靶向调控来实现。

CAN总线在80C196KC单片机系统中的应用

介绍了基于80C 196KC单片机系统中CAN总线的应用。CAN总线是一种应用广泛的实时性现场总线,80C 196KC单片机是In te l公司的一款功能较强的通用型单片机。阐述了80C 196KC单片机的特点、智能节点的结构以及系统的硬件框图和软件设计。同时结合现场实际使用给出了硬件抗干扰措施。