CAFs条件培养基影响EC9706细胞能量代谢的分子机制探索

目的通过收集癌相关成纤维细胞(CAFs)的条件培养基,探索CAFs促进EC9706细胞能量代谢的分子机制。方法通过MTT检测细胞活性,以DMEM高糖培养基培养的EC9706作为对照,筛选最适合间接共培养的CAFs条件培养基(CAFM);比色法检测EC9706细胞上清中乳酸及葡萄糖含量;Seahorse系统能量代谢分析系统检测EC9706细胞在DMEM与CAFM中能量代谢情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real time quantitative PCR,RT-qPCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测能量代谢相关分子mRNA及蛋白的表达。结果细胞融合度为50%-60%、70%-80%的CAFs条件培养基(CAFM)组与正常食管成纤维细胞条件培养基(NFM)相比,均有促进EC9706细胞增殖的作用(P<0.01),且在细胞融合度达70%-80%的CAFM各组中,与对照组相比,CAFM含量为60%时,对EC9706细胞的增殖作用显著升高(P<0.01)。与DMEM相比,CAFM可以上调EC9706细胞葡萄糖摄取、上清乳酸含量、基础呼吸值、基础糖酵解、补偿糖酵解(P<0.05),非线粒体耗氧、最大呼吸值、合成ATP耗氧量、备用呼吸能力(P<0.01)。RT-qPCR结果显示,CAFM还可上调EC9706细胞的低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、己糖激酶2(HK2)、单羧酸转运蛋白1(MCT1)(P<0.05),葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、丙酮酸激酶2(PKM2)(P<0.01)mRNA的表达。蛋白免疫印迹法结果显示,与DMEM相比,HK2、PKM2、MCT1、GLUT1的蛋白表达均显著提高(P<0.01)。结论CAFM能够通过促进EC9706细胞HK2、PKM2、HK2、GLUT1、MCT1、MCT4的mRNA和蛋白的表达,促进EC9706细胞的能量代谢。

下调PRDX6对食管癌EC9706细胞增殖、迁移、侵袭及放射敏感性的影响

目的:探讨PRDX6表达水平对食管癌细胞增殖、迁移、侵袭及放射敏感性的影响。方法:应用GEPIA数据库分析食管癌组织PRDX6表达情况;将抑制基因PRDX6表达的“PRDX6-shRNA”质粒转染到EC9706细胞(sh-PRDX6组)。qRT-PCR和Western Blot检测转染效果。CCK8法检测增殖活力。划痕实验检测迁移能力。Transwell实验检测侵袭能力。克隆形成实验检测克隆形成能力。Western Blot检测AKT、p-AKT的蛋白表达量。结果:食管癌组织中PRDX6表达水平明显高于癌旁组织。qRT-PCR和Western Blot证实“PRDX6-shRNA”质粒有效抑制PRDX6基因表达。与对照组相比,sh-PRDX6组的细胞增殖、迁移、侵袭能力显著下降,放射敏感性增强。sh-PRDX6组细胞中AKT的表达水平无明显变化,而p-AKT表达水平明显下降。结论:PRDX6促进食管癌细胞EC9706的增殖、迁移、侵袭及放射抵抗。

穿心莲内酯诱导人食管癌Ec9706细胞凋亡机制研究

目的在前期工作基础上进一步研究穿心莲内酯(an-drographolide,AD)抑制人食营癌Ec9706细胞增殖和诱导凋亡的机制。方法分光光度法分别检测AD处理Ec9706细胞6、12、18h对caspase-3活性的影响以及AD处理Ec9706细胞6h对caspase-8和caspase-9活性的影响,并用MTT法比较研究在有或无caspase广谱抑制剂Z-VAD-FMK时AD对Ec9706细胞增殖的影响;免疫组化法分析AD处理Ec9706细胞6h对bcl-2基因表达的影响。结果AD(30、60mg.L-1)下调bcl-2基因的表达(P<0.01),提高Ec9706细胞caspase-3和caspase-9活性,对caspase-8活性无明显影响,caspase广谱抑制剂Z-VAD-FMK减弱AD对Ec9706的细胞毒作用。结论AD通过下调bcl-2,激活caspase-9、caspase-3诱导Ec9706细胞凋亡。

Notch1信号途径在食管鳞癌细胞株EC9706的作用研究

目的:研究Notch1基因在食管癌细胞株中的表达及其对食管鳞癌细胞EC9706凋亡的影响。方法:通过免疫细胞化学检测Notch1基因在EC9706细胞中的表达。通过RT-PCR扩增Notch1基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-Notch1,转染EC9706细胞,利用Western blotting检测转染pcDNA3.1-Notch1载体12h,24h,48h,72h的食管癌细胞株与转染空载体食管癌细胞株中Notch1的表达,并观察每一时期食管癌细胞株的凋亡情况。结果:在食管癌细胞株中Notch1基因低表达,此外,转染Notch1后的细胞株Notch1表达量与转染空载体相比有明显差异(F=80.442,P<0.05)。经组间两两比较,实验组食管癌细胞株的Notch1的表达量在12h时比对照组食管癌细胞株的表达量显著增高(P<0.01),前者约为后者的4.6倍。但48h至72h时Notch1表达量实验组与对照组食管癌细胞株无显著性差异(P>0.05)。进一步通过倒置显微镜发现48h至72h细胞出现大量凋亡的现象。上述结果说明12hNotch1表达量的增加,使食管癌细胞EC9706中的Notch1信号途径得以激活,该途径激活后导致48h到72h时的细胞大量凋亡。结论:Notch1在食管癌细胞中的激活引起细胞大量凋亡,提示Notch1基因有可能成为治疗食管癌的新靶点。

健脾和胃法对食管癌细胞株EC9706移植瘤生长的抑制作用

目的:通过观察健脾和胃法及其代表方六君子汤对裸鼠移植瘤的生长和组织中STAT3通路相关因子和蛋白表达的影响,探讨其治疗食管癌的分子机制。方法:用EC9706细胞皮下注射裸鼠制备移植瘤模型,实验分为:正常空白组(C组)、模型组(M组)、六君子汤组(L组)、抑制剂组(S组)、六君子汤加抑制剂组(L+S组),C、M组为空白对照组,灌服生理盐水和腹腔注射生理盐水;L组灌服六君子汤和腹腔注射生理盐水;S组灌服生理盐水和腹腔注射Stattic工作液;L+S组灌服六君子汤水煎液和腹腔注射Stattic工作液。4周后摘除眼球取血和移植瘤,ELISA检测血清中IL-6、VEGF含量;免疫组化检测移植瘤组织中CD34和VEGF表达;Western blot检测移植瘤组织细胞中JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达。结果:与模型组比较,六君子汤组肿瘤体积较小(P<0.05);各组移植瘤重量及组织中CD34表达均下降(P<0.05);血清中抑制剂组IL-6含量明显降低(P<0.05),其它各组没有明显差异;仅六君子汤组和抑制剂组中JAK2和STAT3表达下降(P<0.05),抑制剂组中p-STAT3明显降低(P<0.05),其它各组无明显差异。与抑制剂组比较,六君子汤组中CD34表达略高于抑制剂组(P<0.05),其它各组无明显差异;STAT3蛋白表达中六君子汤组表达降低(P<0.05),而联合抑制剂组则明显升高(P<0.05);p-STAT3表达中,六君子汤组和及其联合制剂组均明显升高(P<0.05)。与六君子汤组比较,除STAT3表达在联合抑制剂组表达有所增高(P<0.05)外,其它各组无明显差异。结论:健脾和胃法及其代表六君子汤可以抑制食管癌EC9706细胞裸鼠移植瘤的生长,可能与下调移植瘤中CD34、JAK2、STAT3的表达有关。

神经型钙粘素在食管鳞癌组织中的表达及RNAi沉默该基因对EC9706细胞体外侵袭能力的影响

背景与目的:上皮性钙粘附蛋白(E-cadherin)和神经性钙粘附蛋白(N-cadherin)在细胞的迁徙和肿瘤浸润转移方面有着重要的作用。许多研究表明,E-cadherin是作为一种抑癌基因发挥作用的,与之相反,N-cadherin在促进肿瘤的浸润转移方面具有重要作用。本研究探讨N-cadherin在食管鳞癌组织中的表达及其临床病理意义,以及RNA干扰(RNAi)沉默N-cadherin基因表达对人食管癌细胞系EC9706细胞体外侵袭能力的影响。方法:采用免疫组织化学PV法检测62例食管鳞癌组织、31例癌旁不典型增生组织及62例正常食管粘膜组织中E-cadherin、N-cadherin的蛋白表达。通过逆转录病毒介导的RNAi技术沉默EC9706细胞中N-cadherin的表达,观察该细胞体外侵袭能力的变化。结果:正常食管粘膜组织、癌旁不典型增生组织及食管鳞癌组织中E-cadherin的阳性率依次降低,分别为95.2%、71.0%、40.3%;N-cadherin的阳性率依次升高,分别为29.0%、61.3%、75.8%。E-cadherin的阴性率及N-cadherin的阳性率与食管鳞癌的浸润深度、分化程度及淋巴结转移密切相关(P<0.05),二者在食管鳞癌组织中的表达呈负相关关系(r=-0.534,P<0.05)。稳定干扰后的EC9706细胞中N-cadherin的mRNA和蛋白表达水平均下调。Transwell小室体外侵袭实验结果显示,正常对照组的穿膜细胞数为123.4±8.2,而干扰载体组的穿膜细胞数则为49.6±6.8(P<0.05)。结论:食管鳞癌组织中E-cadherin的低表达和N-cadherin的高表达与食管鳞癌的发生、浸润及转移密切相关;RNAi沉默N-cadherin基因表达可以使EC9706细胞的体外侵袭能力降低。

冬凌草甲素对EC9706细胞增殖、凋亡的影响

目的:观察冬凌草甲素对食管鳞状细胞癌EC9706细胞增殖、凋亡的影响。方法:用MTT法检测冬凌草甲素对EC9706细胞生长的抑制作用;采用流式细胞仪技术检测冬凌草甲素对EC9706细胞周期和细胞凋亡的影响,并计算凋亡率;激光共聚焦显微镜观察不同浓度冬凌草甲素作用后EC9706细胞中游离Ca2+荧光强度的变化。结果:MTT法显示冬凌草甲素作用EC9706细胞株后,抑制率随浓度增高而增高(F=370.600,P<0.001);流式细胞仪检测结果显示,冬凌草甲素作用EC9706细胞48 h后,G1/G0期细胞均显著增多(F=24.200,P<0.001);细胞凋亡结果显示,冬凌草甲素均能明显诱导EC9706细胞凋亡(P<0.05),冬凌草甲素40μmol/L组的作用效果最佳(F=10.214、37.820,P<0.001)。不同浓度冬凌草甲素均升高了EC9706细胞内游离Ca2+荧光强度(F=24.400,P<0.001)。结论:冬凌草甲素可抑制EC9706细胞增殖、促进细胞凋亡。

通幽汤及拆方对食管癌EC9706细胞PI3K/AKT信号通路影响的研究

目的:揭示通幽汤对食管癌抑制作用的细胞内分子机制,确定从功效分类的有效药物及瘀血内结证的分子本质。方法:体外培养食管鳞癌EC9706细胞,通幽汤及活血行气、滋阴养血拆方分别作用于细胞,倒置显微镜观察细胞形态变化;以MTT法检测细胞抑制率,确定最佳药物浓度和作用时间;western blot法观察PI3K/AKT信号通路各蛋白表达变化情况。结果:通幽汤及活血行气拆方可显著抑制EC9706细胞增殖,48h作用最强,通幽汤全方IC50=1523μg.mL-1,活血行气拆方IC50=1001μg.mL-1;可抑制PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达,作用强弱依次为:活血行气拆方>通幽汤全方>滋阴养血拆方。结论:通幽汤抑制食管癌细胞增殖主要为活血行气类药物,根据"以方测证"理论,瘀血内结证与PI3K/AKT信号通路表达增强有关。

PTEN基因表达对EC9706细胞增殖、侵袭、凋亡能力的影响

目的:观察PTEN基因表达水平的变化对食管癌EC9706细胞增殖、侵袭、凋亡能力的影响。方法:构建2个靶向PTEN的siRNA载体及1个PTEN表达载体,分别转染EC9706细胞。实验分沉默1组、沉默2组、siRNA载体对照组、PTEN表达组、表达载体对照组和未转染组。RT-PCR、Westernblot法检测转染后各组细胞PTEN基因mRNA和蛋白表达水平。采用CCK-8试验、软琼脂克隆形成实验、流式细胞术和Transwell试验分别检测各组细胞增殖、克隆形成能力、细胞凋亡率及侵袭能力。结果:与未转染组比较,沉默1组、沉默2组PTENmRNA和蛋白表达量均降低,PTEN表达组PTENmRNA相对表达量升高(F=25.762,P<0.001);与未转染组比较,PTEN表达组细胞软琼脂克隆形成数和穿透细胞数均降低,细胞凋亡率增加(F=50.752、29.981、32.193,P均<0.001)。结论:上调PTEN的表达水平可以有效抑制EC9706细胞的增殖、克隆形成和侵袭转移能力,同时促进细胞凋亡。

穿心莲内酯对人食管癌Ec9706细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨穿心莲内酯(AD)对人食管癌Ec9706细胞增殖、克隆形成、细胞周期和细胞凋亡的影响。方法:分别以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和平板克隆形成法评价AD对Ec9706细胞增殖和克隆形成的抑制作用;通过流式细胞术、细胞原位凋亡检测(TUNEL)和Annexin·V／PI法观察AD诱导细胞凋亡。结果:AD显著抑制Ec9706细胞的增殖,IC_(50)值为28．6μg·mL^(-1),也显著抑制Ec9706细胞的克隆形成,IC_(50)值为1．7μg·mL^(-1)。AD 30和60μg·mL^(-1)组G_0/G_1期的细胞比例较对照组显著增加[(65．6±1．9)%,(60．5±1．1)% vs．(50．6±0．9)%,P＜0．01],凋亡细胞比例也显著大干对照组[(17．9±2．6)%,(39．4±1．7)％vs．(0．5±0．2)%,P＜0．01]。结论:AD抑制人食管癌Ec9706细胞的增殖和克隆的形成,阻滞细胞周期于G_0/G_1期并诱导细胞凋亡。

EC9706和Eca109细胞中雷帕霉素靶蛋白信号通路激活状态观察

目的:观察低分化的食管鳞癌细胞EC9706和高分化的食管鳞癌细胞Eca109中雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号转导通路的激活状态。方法:采用细胞免疫组织化学方法检测EC9706和Eca109细胞中mTOR及其下游靶分子p70S6K的表达和定位,并采用RT-PCR和Westernblot方法分别从mRNA及蛋白水平检测此通路的活性。结果:在2种细胞中mTOR均有表达,且在EC9706细胞中的表达水平高于Eca109(P<0.05);EC9706细胞中mTOR下游靶点的磷酸化水平高于Eca109细胞(P<0.05)。结论:在2种食管鳞癌细胞中,mTOR信号通路均特异性激活;但激活状态与细胞的分化程度有关,细胞分化程度低者通路的激活水平较高。

RNA干扰对EC9706细胞mTOR表达及细胞生长与凋亡的影响

目的:探讨RNA干扰技术对人食管癌EC9706细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达及细胞生长与凋亡的影响。方法:设计合成mTORsiRNA,采用低、中、高浓度(50、100与150nmol/L)的mTORsiRNA分别转染EC9706细胞24、48与72h,同时设无义对照组(转染无义对照siRNA)、空白对照组(转染空脂质体)及正常对照组(不转染)。采用免疫细胞化学与原位杂交法分别检测各组EC9706细胞中mTOR蛋白与mRNA的表达;应用MTT法检测细胞增殖,计算细胞生长抑制率;应用TUNEL法检测转染24h时细胞凋亡,计算凋亡指数(AI)。结果:转染24、48与72h,6组细胞mTOR蛋白和mRNA的表达差异均有统计学意义(mTOR蛋白:F=24.14,45.78,59.19,P均<0.001;mTORmRNA:F=41.42,69.74,43.71,P均<0.001),细胞生长抑制率差异亦有统计学意义(F=143.85,172.98,155.01,P均<0.001);低、中、高浓度组转染不同时间点间比较,mTOR蛋白(F=42.23,29.46,50.22,P均<0.001)、mTORmRNA(F=6.48,8.50,4.80,P均<0.05)及细胞生长抑制率(F=78.77,76.14,52.28,P均<0.001)差异均有统计学意义。mTORsiRNA转染组EC9706细胞mTOR蛋白与mRNA的表达均低于各对照组,且mTOR蛋白及mRNA的表达随mTORsiRNA浓度的增加及转染时间的延长而减弱(P<0.05)。不同浓度mTORsiRNA转染组EC9706细胞生长抑制率均高于各对照组,且细胞生长抑制率随mTORsiRNA浓度的增加和转染时间的延长而升高(P<0.05)。转染24h,6组细胞AI相比,差异有统计学意义(F=442.96,P<0.001),mTORsiRNA转染组AI均高于各对照组,且高浓度转染组AI高(P<0.05)。结论:mTORsiRNA可有效抑制EC9706细胞mTOR蛋白与mRNA的表达,且能抑制EC9706细胞的增殖并促进其凋亡。

藤梨根提取物与奥沙利铂在诱导人食管癌细胞Ec9706细胞凋亡中的协同作用

目的:观察藤梨根提取物与第三代铂类奥沙利铂(L-OHP)对人食管癌Ec9706细胞株增殖的影响。方法:分别应用藤梨根正丁醇提取物与L-OHP单独应用以及联合应用于人食管癌Ec9706细胞株,并应用MTT法检测食管癌Ec9706细胞的抑制率,并且应用显微镜在镜下观察食管癌细胞株的形态变化;并且对细胞的凋亡率和细胞周期使用流式技术进行检测,且对食管癌细胞Ec9706株应用免疫细胞化学技术检测中细胞株内Bcl-2和Survivin蛋白的表达水平。结果:藤梨根提取物单用、奥沙利铂单用、以及联合应用均可对食管癌细胞Ec9706的增殖起到抑制作用。通过显微镜下观察食管癌细胞株发现Ec9706细胞的形态发生了改变,并且凋亡比率也显著增加;且藤梨根提取物与L-OHP连用后能起到协同增效的作用。而应用藤梨根提取物后食管癌细胞Ec9706中Bcl-2和Survivin蛋白的表达水平均受到了抑制。连用L-OHP后两种蛋白的阳性率表达均进一步降低。结论:藤梨根正丁醇提取物能显著抑制人食管癌细胞Ec9706细胞的增殖并且与L-OHP联用可有协同增效的作用,抑制作用明显增强,可能机制与Bcl-2和Survivin蛋白的下调有关。

组织蛋白酶B特异性siRNA对食管癌EC9706细胞组织蛋白酶B基因表达的影响

目的:探讨小分子干扰RNA(siRNA)对食管癌EC9706细胞组织蛋白酶B(CB)基因表达的影响。方法:设计并用体外转录方法合成针对CB基因的siRNA,转染EC9706细胞(设10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L3个转染浓度),分别培养24h、48h、72h(实验组),采用免疫细胞化学及原位杂交方法检测转染细胞中CB蛋白和mRNA表达的变化,并设正常对照、空白对照、无关对照。结果:不同浓度siRNA转染24h、48h、72hEC9706细胞CB蛋白表达量均较正常、空白及无关对照降低(P<0.05),以转染72h的抑制效应最为明显,但3者相比差异无统计学意义(P>0.05)。3个时间段内随浓度增加siRNA抑制效应增强,3者相比差异有统计学意义(P<0.05),正常对照、空白对照、无关对照均未表现出对CB蛋白表达的抑制效应。转染siRNA后部分细胞形态发生改变。结论:特异性siRNA能有效抑制EC9706细胞中CB蛋白和mRNA表达。

低氧对食管癌ECa9706细胞生长及顺铂敏感性的影响

着重探讨低氧对食管癌ECa9706细胞生长及顺铂敏感性的影响.ECa9706细胞分别培养于顺铂干预的常氧和低氧(1%O2)环境下,倒置显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞活力,流式细胞法检测细胞凋亡和细胞周期.结果显示:与常氧环境下培养相比,低氧下细胞形态变长、变大,细胞自第7d后生长缓慢.常氧下顺铂作用细胞48h的IC50为(1.180±0.056)μM,低氧下为(2.675±0.063)μM.培养48h后,常氧对照组及常氧高浓度顺铂组(1.18μM)阻滞细胞周期于G1期,低氧下各组细胞周期阻滞于S期.低氧导致顺铂诱导的细胞凋亡率较常氧下降低.表明:低氧环境影响了细胞的形态、增殖及细胞周期,低氧下细胞对顺铂的细胞毒作用敏感性降低.

Notch1基因在食管鳞癌细胞株EC9706中的表达及其对细胞凋亡的影响

背景与目的:早期的研究显示,Notch1信号途径与肿瘤的发生密切相关,在细胞的生长、增殖、分化和凋亡中起着十分重要的作用。本研究旨在研究Notch1基因在食管鳞癌EC9706细胞中的表达及其对EC9706细胞凋亡的影响。方法:通过免疫细胞化学方法检测Notch1基因在EC9706细胞中的表达。采用RT-PCR技术扩增Notch1基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-Notch1(命名为pcNICD),转染EC9706细胞,利用RT-PCR及Western blot检测稳定转染pcNICD载体、转染pcDNA3.1空载体及未处理的EC9706细胞中Notch1的表达,另通过流式细胞仪检测未处理、转染pcDNA3.1和转染pcNICD的EC9706细胞的凋亡。结果:EC9706细胞中发现Notch1基因的表达。与未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞相比,转染pcNICD的EC9706细胞中Notch1基因的mRNA和蛋白表达水平均明显增加,大约增加3倍(P<0.05);但未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞中Notch1的表达差异无统计学意义(P>0.05)。流式细胞检测结果显示,在未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞中,细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05);但与与未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞相比,转染pcNICD的EC9706细胞转染后24h、48h和72h时细胞凋亡率明显增加(P<0.01)。结论:Notch信号途径的激活引起食管鳞癌EC9706细胞的凋亡,提示Notch1基因有可能成为治疗食管鳞癌的新靶点。

六君子汤对食管癌细胞株EC9706致血管生成的影响

目的研究六君子汤对食管癌血管生成的影响。方法 MTT法检测六君子汤醇提物对食管癌细胞株EC9706生长抑制作用,收集其500μg/m L质量浓度的EC9706细胞条件培养基用于鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成、人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和小管形成的观察。ELISA法检测EC9706细胞和人脐静脉内皮细胞培养基上清中VEGF和IL-6含有量。结果六君子汤醇提物可明显抑制EC9706细胞增殖,具一定剂量依赖性,其IC50值为505.28μg/m L。六君子汤醇提物可减少EC9706细胞条件培养基所致鸡胚绒毛尿囊膜血管生成、人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和小管形成。六君子汤醇提物可减少EC9706细胞和内皮细胞IL-6及内皮细胞VEGF分泌。结论六君子汤醇提物可能通过干预EC9706细胞信号通路从而抑制血管生成的效应。

卡培他滨对食管癌细胞系EC9706细胞毒性和放射增敏作用的研究

目的:探讨卡培他滨对食管癌细胞系EC9706细胞毒性和放射增敏作用。方法:取健康成年家兔1只,以卡培他滨141mg/kg,对其进行灌胃,分别于灌胃前、后2.5～3h,取耳缘静脉血8～10mL,不加抗凝剂,并防止溶血和细菌污染,离心取血清-20℃保存备用;用CCK8分别检测不同量的加药血清和对照血清对食管癌细胞系EC9706细胞毒性,同时观察不同量的加药血清对食管癌细胞系EC9706的放射增敏作用。结果:加药血清对食管癌细胞系EC9706细胞有明显的抑制作用,其抑制作用48h达到高峰,2、4、6、8和10μL血清作用细胞48h后抑制率分别为14.29%、23.96%、50.59%、52.16%和53.96%(P均为0.00),72h其细胞毒性无增加;加药血清孵育2.5h后,在相同放射剂量作用下,不同量血清组的OD值均显著低于对照组(P值均为0.00),其增敏作用无明显的剂量依赖性。结论:卡培他滨对食管癌细胞系EC9706有明显的细胞毒性和放射增敏作用。

肝素酶特异性RNAi对人食管癌EC9706细胞肝素酶基因表达的影响

目的:探讨RNAi技术对人食管癌EC9706细胞肝素酶(heparanase,Hpa)基因表达的影响。方法:针对Hpa不同基因位点设计合成寡核苷酸,然后转录为小分子干扰RNA(siRNA),分别用浓度为10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L的siRNA经LipofectamineTM2000脂质体介导转染EC9706细胞72h,同时设无关序列组及不转染组。采用完整细胞原位杂交技术观察各组EC9706细胞中Hpa基因的表达。结果:siRNA可有效抑制人食管癌EC9706细胞Hpa基因的表达,以15μmol/L的siRNA作用效应最强,但不同浓度siRNA两两相比,差异均无统计学意义(P>0.05),不同浓度siRNA对Hpa基因表达的抑制效应均显著强于无关序列组及不转染组(P<0.05)。结论:RNAi技术可有效抑制人食管癌EC9706细胞Hpa基因的表达。

启膈散乙酸乙酯提取物对食管癌Eca9706细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨启膈散乙酸乙酯提取物对食管癌Eca9706细胞增殖和凋亡的影响。方法按沙参∶丹参∶茯苓∶川贝母(去心)∶郁金∶砂仁壳∶杵头糠=6∶6∶2∶3∶1∶1∶1的比例配制启膈散,每克药物配10 ml的比例加入95%乙醇溶液,用旋转蒸发仪浓缩药液,浓缩液与乙酸乙酯按体积比2∶1进行萃取,获取启膈散乙酸乙酯提取物。Eca9706细胞与浓度分别为12.5、25.0、50.0、100.0、200.0μg/ml的启膈散提取物共培养,MTT法检测启膈散提取物对Eca9706细胞的抑制率。Eca9706细胞与35%抑制浓度(IC35)、50%抑制浓度(IC50)和70%抑制浓度(IC70)的启膈散提取物共培养,采用流式细胞仪检测启膈散提物对Eca9706细胞的凋亡率。结果不同浓度启膈散提取物对Eca9706细胞的抑制率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。启膈散提取物对Eca9706细胞的抑制率与启膈散提取物浓度拟合曲线方程为Y=-1.835×10^(-5)X2+0.006X+0.185,R2=0.996,概率法计算IC35为22.8μg/ml,IC50为81.8μg/ml,IC70为162.2μg/ml。显微镜下观察,随着启膈散提取物浓度的增加,细胞变圆、变小,贴壁细胞数目逐渐减少,细胞间隙增大,细胞碎片增多。IC35、IC50和IC70启膈散提取物对Eca9706细胞的凋亡率比较,差异有统计学意义(P<0.001)。激光共聚焦显微镜下显示,启膈散提取物作用于Eca9706细胞后,部分细胞膜呈绿色,提示早期凋亡;部分细胞膜呈绿色,且细胞核呈红色,细胞体积变小、变圆,形成凋亡小体,提示晚期凋亡细胞。结论启膈散乙酸乙酯提取物可抑制食管癌Eca9706细胞增殖,诱导细胞凋亡。