Candida sp.99-125脂肪酶催化猪油酸解合成1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯

人乳脂是一种在甘油骨架Sn-2位上富含棕榈酸(C16∶0)的结构酯。经分析可知,猪油中棕榈酸主要分布在甘油酯的Sn-2位,可作为制备1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯(OPO)的原料。以Candida sp.99-125脂肪酶作催化剂,以猪油和油酸为原料,通过正交试验对无溶剂体系中酸解合成OPO的工艺条件进行研究,得到最适反应条件:猪油与油酸的质量比为1∶2.0,酶用量为总底物质量的10%,反应温度40℃,反应时间4 h。在该反应条件下,经酸解合成的产物三甘酯中,Sn-2C16∶0的含量大于70%,占总脂肪酸中棕榈酸含量的93%以上,并含有43%以上的OPO。

H9N2亚型禽流感病毒A／Chicken／Gansu／2／99株基因组的分子特征

目的测定H9N2亚型禽流感病毒A/Chicken/Gansu/2/99(CK/GS/2/99)分离株的基因组序列并与参考毒株进行同源性分析,阐明该毒株的遗传变异及分子特征。方法采集发病鸡泄殖腔样品,经鸡胚尿囊腔接种分离病毒,采用RT-PCR方法对CK/GS/2/99株的8个分节段基因进行扩增,分别将其克隆到pGEM-T easy载体后进行序列测定与同源性分析。结果CK/GS/2/99株PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M、NS基因的开放阅读框分别由2280、2274、2151、1683、1497、1401、759、864个碱基组成,分别编码759、757、716、560、498、466、252/97、231/122个氨基酸残基。该毒株HA上HA1和HA2裂解位点序列为PARSSR↓GLF,具有典型的低致病性禽流感病毒的特征。同源性分析显示,CK/GS/2/99株与1998-2002年间大部分中国大陆分离株遗传关系较近,尤其与CK/NX/4/99和CK/HB/31/00株遗传关系密切。结论CK/GS/2/99与大部分流行于中国内陆的H9N2亚型毒株均来源于共同的祖先毒株CK/BJ/1/94,这为了解中国H9N2亚型禽流感病毒的分子流行病学提供了资料。

小鼠B淋巴瘤A20细胞株mCD99L2基因表达检测及真核表达载体构建

目的检测及克隆小鼠B淋巴瘤A20细胞株mCD99L2基因,构建真核表达载体。方法设计寡核苷酸探针,应用原位分子杂交方法检测A20细胞中mCD99L2基因的mRNA表达,RT-PCR法从A20细胞总RNA中获取mCD99L2 基因含编码区全长cDNA,克隆入T载体,筛选阳性克隆、酶切鉴定并经序列测定;设计含酶切位点的PCR引物,PCR 获取含mCD99L2基因编码区片段,用限制性内切酶EcoR I和Xho I双酶切取所需目的片段,利用分子克隆技术与 pcDNA3．1／MycHis C(+)质粒重组,对产生的重组子进行PCR、双酶切鉴定,并经过测序证实。结果原位杂交方法检测 A20细胞中mCD99L2基因mRNA呈阳性表达;RT-PCR法成功获得mCD99L2基因编码区全长cDNA序列,DNA序列测序结果与GenBank提供的已知序列(NM-138309)比较,结果完全一致;重组质粒pcDNA3．1-mCD99L2中的插入片段经DNA测序后与GenBank中mD99L2基因相应序列比较,100％同源。结论小鼠B淋巴瘤A20细胞株存在 mCD99L2基因,采用RT-PCR和T-A技术克隆了A20细胞的mCD99L2基因,成功构建了pcDNA3．1-mCD99L2真核表达载体,为下一步探索mCD99L2基因在小鼠B淋巴瘤A20细胞株中的功能奠定了实验基础。

BNi2+TiH_2复合钎料钎焊C/C复合材料与GH99镍基高温合金

采用BNi2+TiH2复合粉末钎料成功实现C/C复合材料与GH99镍基高温合金的钎焊,对焊后接头界面组织及力学性能进行了分析.结果表明,焊后接头典型界面结构为C/C复合材料/Cr3C2+MC+Ni(s,s)/MC+Ni(s,s)/Ni3Si+Ni(s,s)/Cr3C2+MC+Ni(s,s)/GH99高温合金.钎料中加入TiH2,可促进C/C复合材料母材的溶解,并在钎缝中部形成MC碳化物颗粒.随着TiH2含量的增加,钎缝中部MC形态由细小弥散向大片状转变.当TiH2含量为3%时,接头室温及800,1 000℃高温抗剪强度最高,分别可达40,19及10 MPa,接头强度高于BNi2钎料钎焊接头强度,并可有效保证接头高温使用性能.

^(99)Tc^(m)标记多巴胺D_(2)受体配体的合成,标记及生物分布研究

首次合成了 3种苯酰胺类D2 受体配体 :N [(2 巯基 )乙基 ] 2 ,3 二甲氧基苯甲酰胺 (MEDM BZM) ,N [(2 巯基 )乙基 ] 5 溴 2 ,3 二甲氧基苯甲酰胺 (MEBDM BZM ) ,N [(2 巯基 )乙基 ] 3 乙氧基苯甲酰胺 (MEE BZM) ,光谱数据与结构相符。用配体交换法与 3 硫杂 1,5 戊二硫醇共同配位合成了中性脂溶性的“3+ 1”型混配99Tcm 螯合物 ,标记率大于 85 %。

^(89)SrCl_2与^(99)Tc-MDP联合治疗转移性骨肿瘤的临床研究

目的:评价氯化锶(89SrCl2)与99锝-二甲基二磷酸盐(99Tc-MDP)联合治疗转移性骨肿瘤的临床疗效及不良反应发生情况。方法:将转移性骨肿瘤患者126名随机分为89Sr Cl2联合99Tc-MDP治疗组及89Sr Cl2单项治疗组进行治疗,比较两组疼痛反应情况、骨转移灶的治疗情况以及不良反应的发生率。结果:对于转移性骨肿瘤的镇痛效果,联合治疗组患者中,有效率为23.81%,显效率61.90%,无效率14.29%;单项治疗组患者有效率为12.70%,显效率58.73%,无效率28.57%,两组患者镇痛疗效的差异具有统计学意义(P<0.01)。对于转移性骨肿瘤骨转移灶的治疗效果和不良反应发生率,联合治疗组患者中和单项治疗组患者的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:氯化锶(89SrCl2)与99锝-二甲基二磷酸盐(99Tc-MDP)联合治疗转移性骨肿瘤疼痛具有明显的效果,也可消退部分转移病灶,不良反应发生率较低,临床效果优于89SrCl2单项治疗效果。

单次化疗后肿瘤内^99Tc^m-Annexin V的分布与bcl-2、bax蛋白表达的相关性研究

采用^99Tc^m-rh-Annexin V作为核素凋亡显像示踪剂，观察小鼠单次化疗后肿瘤内bcl-2与bax蛋白的表达。结果显示，单次化疗后化疗组肿瘤组织的放射性摄取百分数（％／g）、阳性细胞数及bax蛋白表达均明显多于对照组（P〈0．01）；bcl-2蛋白表达两组间差异无显著性（P=0．220）；化疗组bcl-2／bax明显高于对照组（P〈0．01）。相关性研究表明，对照组与化疗组肿瘤组织的放射性摄取百分数与TUNEL阳性细胞数均呈明显正相关（r=0．801，r=0．769）。对照组肿瘤组织内bax蛋白表达与放射性摄取及TUNEL阳性细胞数均呈明显正相关（r=0．849、0．652），bcl-2／bax比值与放射性摄取百分数及TUNEL阳性细胞数均呈明显负相关（r=-0．820、-0．694）。以上结果提示，肿瘤组织内^99Tc^m-rh-Annexin V的分布可以反映化疗后早期肿瘤组织细胞凋亡的状况以及凋亡调控蛋白bax表达水平的变化。

^(99m)Tc-DTPA肾动态显像联合尿β_2-MG测定评估妇科肿瘤患者化疗肾功能损伤的应用价值

目的探讨应用99mTc-亚锡喷替酸(99mTc-DTPA)肾动态显像测定肾小球滤过率(GFR)、高峰时间(Tb)和半排时间(C1/2)联合尿β2-微球蛋白(β2-MG)含量测定,评估其在妇科肿瘤顺铂(DDP)化疗时肾功能早期损伤的诊断价值。方法用自身对照法对98例妇科肿瘤患者在首次化疗前与化疗2周期后行99mTc-DTPA肾动态显像,测定GFR、Tb、C1/2,同期测定血尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)以及血、尿β2-MG含量。应用配对t检验对比观察。结果 98例患者化疗2周期后较化疗前GFR明显下降(P<0.05),而Tb、C1/2显著延长(P<0.01);尿β2-MG含量明显升高(P<0.01),而血中BUN、SCr、β2-MG变化均不明显。结论与测定血BUN、SCr、β2-MG含量比较,99mTc-DTPA肾动态显像测定GFR、Tb、C1/2及尿β2-MG含量,能发现含DDP化疗患者肾功能早期的损伤,对于临床合理用药、观察和保护肾功能有一定的参考价值。

肺肿瘤^(99)Tc^m-N(NOEt)_2SPECT显像研究

目的 探讨^(99)Tc^m-氮-二(N-乙基-N-乙氧基二硫代氨基甲酸盐)[N(NOEt)_2]SPECT显像诊断肺肿瘤的临床价值。方法 对38例临床疑肺肿瘤患者行^(99)Tc^m-N(NOEt)_2 SPECT显像,并与手术、病理检查结果对照。结果 38例疑肺肿瘤患者经病理检查或临床随访证实肺恶性肿瘤29例,肺良性肿瘤或病变9例。29例肺恶性肿瘤有31个病灶,^(99)Tc^m-N(NOEt)_2 SPECT显像示异常28个,正常3个;9例肺良性肿瘤或病变有9个病灶,显像示异常3个,正常6个。^(99)Tc^m-N(NOEt)_2 SPECT显像诊断肺恶性肿瘤的灵敏度为90.32％,特异性为66.67％,阳性预测值为90.32％,阴性预测值为66.67％,假阳性率为33.33％,假阴性率为9.68％,准确性为85.00％,阳性似然比为2.71,阴性似然比为0.15。9例肺良性肿瘤或病变患者病变部位与对侧对应正常肺组织放射性比值(T/N)为1.08±0.08,明显低于29例肺恶性肿瘤(1.30±0.19,t=3.38,P<0.01)。结论 ^(99)Tc^m-N(NOEt)_2 SPECT显像在肺肿瘤显像诊断中有一定的临床价值。

电沉积LEU UO_2靶件生产医用^(99)Mo的工艺研究

^(99)Mo是一种重要的医用放射性同位素。采用低浓铀(LEU)靶件生产裂变^(99)Mo是发展趋势。本工作进行了电沉积UO_2靶件制备、靶件溶解以及99Mo化学分离等工艺研究,确定了电沉积LEU UO_2靶件制备医用裂变99Mo的工艺流程。研究表明,于不锈钢管内壁上电沉积UO_2,在p H=7、电流0.5~2 m A/cm2、温度75~90℃、镀液中U浓度5 mg/mL条件下,经过约210 h电沉积,不锈钢管内壁上UO_2沉积层质量达到42 mg/cm^2;采用6 mol/L HNO_3溶解UO_2镀层。采用α-安息香肟沉淀法实现^(99)Mo与大量裂变产物的初步分离,采用阴离子交换法与活性炭色层法联用实现99Mo的纯化;纯化后的99Mo溶液中,杂质^(131)I、^(90)Sr、^(95)Zr、^(103)Ru、^(238)U活度与^(99)Mo活度比值分别为4.47×10^(-6)%、7.40×10^(-7)%、8.67×10^(-7)%、2.57×10^(-6)%、1.69×10^(-14)%,均小于《欧洲药典》规定值,满足医用要求。本工作建立了电沉积LEU UO_2靶件生产高纯医用裂变99Mo的工艺流程,为今后采用LEU技术生产医用裂变99Mo,进而实现其自主规模化生产打下了基础。

As_2O_3联合FP99诱导骨肉瘤细胞MG-63凋亡的初步研究

采用噻唑蓝(MTT)法发现FP99能够协同三氧化二砷(As2O3)抑制人骨肉瘤细胞MG-63的生长,并采用流式细胞计数进一步证实FP99加强As2O3对MG-63细胞凋亡的诱导作用;进而检测了Caspase-3的活性,发现As2O3联合FP99作用MG-63细胞后,Caspase-3的活性显著提高,提示我们As2O3联合FP99增加MG-63细胞的凋亡率的机制可能是通过提高Caspase-3激酶活性,从而促进了整个凋亡通路的激活,最终导致细胞凋亡的增加。

7种席夫碱对Zn^(2+)的现场配位吸收光谱和^(99m)Tc现场配位法标记

通过电子吸收光谱研究了 7种水杨醛氨基酸席夫碱配体与Zn2 +离子在水溶液中现场配位的浓度下限、pH下限和配合的物稳定存在时间 .初步探索了在生理盐水中 7种水杨醛氨基酸席夫碱的99mTc现场标记 .

低表达mCD99L2鼠B淋巴瘤细胞亚系的建立及鉴定

目的:建立和鉴定稳定的低表达mCD99L2鼠B淋巴瘤细胞亚系,以探究mCD99L2基因在Hodgkin′s淋巴瘤H/RS细胞形成中的作用。方法:对前期构建的慢病毒质粒稳定干扰的A20-LV-mCD99L2克隆株进行体外培养,分别选择第10、20、30、40代细胞,DNA-PCR检测shRNA干扰载体的整合,RT-PCR及荧光定量PCR检测目的基因mCD99L2的表达水平,倒置显微镜观察A20-LV-mCD99L2细胞的形态变化并进行计数,免疫荧光观察H/RS样大细胞mCD30分子的表达。结果:第10、20、30、40代A20-LV-mCD99L2细胞(1)抽提DNA进行PCR均能检测出shRNA干扰载体稳定整合至A20细胞基因组;(2)RT-PCR及荧光定量PCR检测目的基因mCD99L2均较A20细胞呈低水平表达;(3)各代A20-LV-mCD99L2细胞中均发现有类似人H/RS细胞的大细胞(A20-H/RS);(4)免疫荧光检测H/RS样细胞mCD30呈阳性表达。结论:鉴定和建立了低表达mCD99L2基因的A20细胞亚系,该细胞亚系中存在类似人H/RS细胞的大细胞。

mic2/CD99基因克隆及在霍奇金淋巴瘤L428细胞株中表达

目的克隆mic2/CD99基因并表达于L428细胞株。方法通过PCR及双酶切方法,从Jurkat细胞基因组RNA中获得mic2/CD99全长基因编码序列,克隆到pcDNA3.1(+)质粒载体上,构建包含mic2/CD99全长基因载体;用脂质体转染法将mic2/CD99全长基因载体转染至L428细胞系;并从分子水平验证其存在。结果RT-PCR方法扩增出大小为558bp片段,序列测定其编码序列正确,酶切鉴定亚克隆序列正确。结论成功构建了mic2/CD99全长基因载体,并稳定转染于L428细胞株中。

N_2S_2或N_3S型配体的合成、^(99)Tc^m标记及生物分布研究

以MAG3为基本分子骨架 ,根据构效关系 ,分别引入合适的天然氨基酸 ,设计合成了 4种N2 S2 或N3S型小分子多肽新配体 ,并通过了IR ,1HNMR ,13CNMR ,MS谱学鉴定和元素分析表征。采用葡庚糖酸钙(GH)交换法对 4个配体进行了99Tcm 标记 ,研究了配合物在小鼠体内的生物分布特征。结果表明 ,99Tcm MVGG肾摄取较高 ,滞留时间较长 ,血清除快 ,且肾与其它组织的活度比值高 ,具备成为肾功能显像剂的条件 ;99Tcm MPGG肾初始摄取较高 ,R(肾 /血 )活度比值高 ,但肾清除较快 ,R(肾 /肝 )活度比值较低 ;99Tcm MVTC和99Tcm MPTC心肌初始摄取均较高 。

地高辛标记斑马鱼cd99l2基因RNA探针的制备

目的制备用于斑马鱼胚胎早期cd99l2基因时空表达检测的地高辛标记RNA探针。方法设计引物,构建cd99l2/pGM-T重组质粒,用SacII和SalI分别进行酶切得到线性化DNA片段,以Sp6RNA聚合酶和T7RNA聚合酶转录合成地反义和正义地高辛标记的RNA探针,用整体原位杂交法检测斑马鱼胚胎早期cd99l2基因的表达。结果成功构建了cd99l2/pGM-T重组质粒,体外转录获得反义和正义RNA探针,反义探针杂交检测证实cd99l2基因在斑马鱼胚胎早期发育过程中中枢神经系统呈现高表达,正义探针未检测到表达信号。结论本研究制备的反义cd99l2RNA探针,兼顾了特异性和敏感性,能有效检测斑马鱼胚胎早期cd99l2基因的定位表达,而正义探针可以作为阴性对照,为进一步探究cd99l2基因在斑马鱼发育过程中的作用机制奠定了基础。

用^(99)Tc^m-DTPA肾动态显像判断2型糖尿病肾小球功能

目的 探讨用99Tcm DTPA肾动态显像判断 2型糖尿病患者肾小球功能的临床价值。方法正常对照者 12例 ,2型糖尿病患者 5 1例 ,根据尿微量白蛋白测定结果分组 ,分别行99Tcm DTPA肾动态显像测定总肾与分肾肾小球滤过率 (GFR)。结果 ① 2型糖尿病各组总肾及分肾GFR均低于对照组。②总肾及分肾GFR与尿微量白蛋白呈显著负相关 ,r分别为 - 0 4 5 7,- 0 4 12和 - 0 4 2 4 (P均 <0 0 1)。③ 5 1例 2型糖尿病患者中有 5例总肾GFR正常 ,而分肾GFR异常。结论 用99Tcm DTPA肾动态显像判断 2型糖尿病患者早期肾小球功能损害有一定价值。

^(89)SrCl_2与^(99)Tc-MDP联合治疗转移性骨肿瘤的疗效观察

目的:探讨氧化锶(89SrCl2)与99锝-二甲基二膦酸盐(99Tc-MDP)联合治疗转移性骨肿瘤的临床效果。方法:108例转移性骨肿瘤患者分为2组,单项治疗组51例,用89SrCl2治疗;联合治疗组57例,用89SrCl2与99Tc-MDP治疗,观察2组疗效。结果:89SrCl2单项治疗组51例患者,治疗后疼痛反应显效27.4%(14/51),有效49.0%(25/51),无效23.5%(12/51);骨转移灶治疗后显效5.9%(3/51),有效27.4%(14/51),无效66.7%(34/51)。89SrCl2与99Tc-MDP联合治疗组57例患者,治疗后疼痛反应显效38.6%(22/57),有效50.9%(29/57),无效10.5%(6/57)。骨转移灶治疗后显效8.8%(5/57),有效29.8%(17/57),无效61.4%(35/57)。联合治疗组止痛的疗效高于单项治疗组(P<0.05),消退转移灶的疗效与单项治疗组无显著差异(P>0.05)。结论:89SrCl2联合99Tc-MDP对转移性骨肿瘤所致疼痛有明显疗效,同时还可部分消退转移病灶,联合治疗效果优于89SrCl2单项治疗。

^(89)SrCl_2加^(99)Tc-MDP(云克)联合治疗转移性骨癌骨痛的疗效分析

采用89SrCl2加99Tc-MDP(云克)联合治疗与89SrCl2单项治疗方法,分别对106例骨转移癌患者进行治疗。结果表明,2种方法疗效均较好,但两者相比,联合治疗法治疗骨转移癌导致的骨痛总有效率达88.2%,明显高于89SrCl2单项治疗组(65.4%),两组相比P<0.05。原发灶中以乳癌疗效最佳,总有效率达100%,按组织学类型分析,其疗效依序为浸润性癌>腺癌>鳞癌。因此,联合治疗应以乳癌(尤其是乳腺浸润性癌)转移性骨癌导致的骨痛为首选病例。联合治疗产生的毒副作用并不多于89SrCl2单项治疗;对生存质量及体力状况的改善,联合治疗组亦明显高于89SrCl2单项治疗组。

mic2/CD99在经典型霍奇金淋巴瘤H/RS细胞中的表达及与Eber-1/LMP-1相关性的研究

目的:检测mic2基因与CD99蛋白和Eber-1基因与潜伏膜蛋白-1(LMP1)在经典型霍奇金淋巴瘤(cHL)H/RS细胞中的表达,探讨mic2/CD99表达与Eber-1/LMP-1的相关性。方法:采用分子原位杂交和免疫组化技术并结合组织芯片技术检测59例石蜡包埋淋巴瘤组织标本[43例cHL,16例非霍奇金淋巴瘤(NHL)]mic2/CD99和Eber-1/LMP-1的表达,比较分析mic2/CD99在两组中的表达及与Eber-1/LMP-1的关系。结果:cHL组CD99蛋白表达阳性率为2·3%,mic2基因表达为55·8%,LMP1表达为58·1%,Eber-1表达为53·5%;NHL组CD99蛋白与mic2基因表达高于cHL组(P<0·05);LMP1和Eber-1的表达低于cHL组(P<0·05);mic2基因的表达高于CD99蛋白的表达(P<0·05);Eber-1与LMP1的表达无统计学意义(P>0·05)。CD99蛋白与LMP1的表达呈负相关(P<0·05),各项指标的表达与性别无关。CD99蛋白与LMP1的表达与年龄呈负相关(P<0·05),mic2与Eber-1的表达与年龄无关(P>0·05)。结论:CD99蛋白在cHL H/RS细胞中低表达,并与LMP1的表达呈负相关。