子宫动脉超声血流参数、血清LncRNA FAM99A、CCL21水平与妊娠期高血压疾病患者病情程度及预后的相关性分析

目的:探讨妊娠期高血压疾病(hypertensive disorders of pregnancy,HDP)患者子宫动脉超声血流参数、血清长链非编码RNA家族成员A序列相似性99(LncRNA FAM99A)、CC趋化因子配体21(CCL21)水平变化,并分析其与病情程度相关性及其对预后的评估价值。方法:回顾性选取2021年1月至2023年12月于开封市第三人民医院诊治的126例HDP患者作为研究组,另选取健康孕产妇42例作为对照组。比较两组不同病情程度者子宫动脉超声血流参数[子宫动脉收缩期/舒张期血流最大速度(systolic/diastolic,S/D)、子宫动脉阻力指数(resistance index,RI)、子宫动脉搏动指数(pulsation index,PI)]、血清LncRNA FAM99A、CCL21水平。分析子宫动脉超声血流参数、血清LncRNA FAM99A、CCL21与病情程度相关性。依据预后情况分为预后不良亚组27例、预后良好亚组99例,比较其子宫动脉超声血流参数、血清LncRNA FAM99A、CCL21水平。分析预后不良的影响因素。评价子宫动脉超声血流参数、血清LncRNA FAM99A、CCL21对预后不良的评估价值。结果:研究组S/D、RI、PI及血清CCL21水平高于对照组,血清LncRNA FAM99A水平低于对照组(P<0.05);S/D、RI、PI、CCL21与病情程度呈正相关(r=0.526、0.418、0.509、0.624,P<0.05),LncRNA FAM99A与病情程度呈负相关(r=-0.637,P<0.05);预后不良亚组S/D、RI、PI及血清CCL21水平高于预后良好亚组,血清LncRNA FAM99A水平低于预后良好亚组(P<0.05);S/D、RI、PI、CCL21为预后不良的危险因素,LncRNA FAM99A为预后不良的保护因素(P<0.05);S/D、RI、PI、LncRNA FAM99A、CCL21联合评估预后的AUC大于单项指标评估(P<0.05)。结论:HDP患者S/D、RI、PI及血清CCL21水平升高,血清LncRNA FAM99A水平降低,且与病情程度及预后密切相关,联合检测其水平对预后具有一定评估价值。

非小细胞肺癌血清sMICA、microRNA-99a、DJ-1表达及临床意义

目的 分析血清可溶性MHCⅠ类链相关分子A(sMICA)、microRNA-99a、DJ-1蛋白(DJ-1)对非小细胞肺癌(NSCLC)诊断及预后评估价值。方法 收集2019年6月至2022年6月本院收治的NSCLC患者90例(NSCLC组),另选取本院同期健康体检志愿者90例(对照组)。对患者进行为期6个月随访,随访截止至2023年1月。采用ROC曲线评估sMICA、microRNA-99a、DJ-1对NSCLC诊断价值。采用多元Logistic回归分析影响NSCLC患者预后的关系。结果 NSCLC组sMIC、DJ-1表达水平高于对照组,microRNA-99a表达水平低于对照组(P<0.05);ROC曲线结果显示:sMICA、microRNA-99a、DJ-1对NSCLC诊断AUC值分别为0.742(95%CI:0.642~0.842)、0.759(95%CI:0.660~0.859)、0.789(95%CI:0.698~0.901)。90例患者中预后良好69例,预后不良21例。预后不良者sMIC、DJ-1表达水平高于预后良好组,microRNA-99a表达水平低于预后良好组(P<0.05);预后不良者TNM分期(III-IV期)、低分化占比高于预后良好组(P<0.05);两组在年龄、性别、肿瘤直径、病理类型中比较差异无统计学意义(P>0.05)。经多元Logistic回归分析:临床分期、分化程度、sMICA、microRNA-99a、DJ-1为影响NSCLC患者预后不良的危险因素(P<0.05)。结论 相对健康人群,NSCLC患者sMICA、DJ-1水平高,microRNA-99a水平低;三指标水平与患者预后密切相关,通过检测血清三者水平可为患者后续诊疗、预后评估提供参考资料。

长链非编码RNA FAM99A在妊娠期高血压疾病中的表达及其意义

目的探讨妊娠期高血压疾病(HDP)患者长链非编码RNA FAM99A(LncRNA FAM99A)的表达及其临床意义。方法选取183例HDP患者为HDP组和50例健康孕妇为对照组,检测所有研究对象血清LncRNA FAM99A及白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平。根据HDP患者病情严重程度分为妊娠期高血压(GH)48例、轻度子痫前期(MPE)74例和重度子痫前期(SPE)61例,根据HDP患者出现不良妊娠结局情况分为不良妊娠结局组68例和妊娠结局良好组115例。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清LncRNA FAM99A表达水平预测SPE及不良妊娠结局的价值,分析HDP患者血清LncRNA FAM99A表达水平与IL-6、TNF-α及hs-CRP的相关性。结果HDP组血清LncRNA FAM99A表达水平(0.94±0.26 vs.2.37±0.85)明显低于对照组(P<0.001),而血清IL-6[(158.24±16.73)pg/mL vs.(91.28±8.16)pg/mL]、TNF-α[(20.96±3.27)pg/mL vs.(8.40±1.25)pg/mL]及hs-CRP[(9.05±2.16)mg/L vs.(2.71±0.28)mg/L]水平均明显高于对照组(P<0.001)。随着HDP患者病情程度加重,血清LncRNA FAM99A表达水平逐渐降低(SPE组<MPE组<GH组),而血清IL-6、TNF-α及hs-CRP水平逐渐升高(SPE组>MPE组>GH组)。不良妊娠结局组血清LncRNA FAM99A表达水平(0.19±0.03 vs.1.35±0.46)明显低于妊娠结局良好组(P<0.001),而血清IL-6[(210.24±25.13)pg/mL vs.(136.20±15.37)pg/mL]、TNF-α[(34.72±7.05)pg/mL vs.(17.80±2.64)pg/mL]及hs-CRP[(16.30±5.17)mg/L vs.(7.95±2.08)mg/L]水平均明显高于妊娠结局良好组(P<0.001)。ROC曲线显示,LncRNA FAM99A≤0.65预测SPE发生的曲线下面积(AUC)最大(0.877,95%CI:0.814~0.936),敏感度为87.4%,特异度为85.0%;LncRNA FAM99A≤0.48预测HDP患者不良妊娠结局的AUC最大(0.870,95%CI:0.808~0.930),敏感度为85.2%,特异度为85.6%。相关分析显示,HDP患者血清LncRNA FAM99A表达水平与IL-6(r=-0.826,P<0.001)、TNF-α(r=-0.803,P<0.001)及hs-CRP(r=-0.715,P<0.001)均呈负相关。结论LncRNA FAM99A在HDP患者中呈低表达,与疾病严重程度及不良妊娠结局密切相关,LncRNA FAM99A对预测SPE发生及不良妊娠结局具有较好的价值。

miR-99a-3p对中波紫外线影响系统性红斑狼疮B淋巴细胞自噬作用的研究

目的探讨中波紫外线(UVB)加重系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者自噬进而导致疾病进展的潜在机制,有望为SLE的靶向治疗提供新的思路。方法免疫磁珠法分离正常人外周血B淋巴细胞(B细胞),流式细胞仪读取B细胞比例,miR-99a-3p激动剂、拮抗剂、阴性对照转染Ball-1及B细胞,50 mJ/cm^(2)的UVB照射转染后细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-99a-3p、真核翻译起始因子4E结合蛋白1(EIF4EBP1)、微管相关蛋白1轻链3 B(LC3B)、溶酶体相关膜蛋白2A(LAMP-2A)mRNA表达水平。结果转染miR-99a-3p激动剂可以降低靶基因EIF4EBP1及自噬相关基因LC3B、LAMP-2A的表达,转染拮抗剂可以提高EIF4EBP1及LC3B、LAMP-2A的表达,UVB可引起Ball-1和B细胞miR-99a-3p表达减少,而EIF4EBP1、LC3B、LAMP-2A的表达升高。结论强紫外线辐射可通过降低miR-99a-3p表达,加重SLE患者自噬,进而导致SLE进展。

妊娠期高血压患者血清lncRNA FAM99A与不良妊娠结局

目的:探究长链非编码RNA家族成员A序列相似性99(lncRNA FAM99A)在妊娠期高血压(HDCP)患者血清中的表达及其与妊娠结局的相关性。方法:收集2019年9月-2021年9月本院接诊的HDCP患者120例临床资料,其中妊娠期高血压组40例、轻度子痫前期组29例、重度子痫前期组51例,正常产前检查孕妇120例为对照组,收集基线资料,荧光定量PCR法检测血清lncRNA FAM99A水平;Spearman相关分析法分析lncRNA FAM99A表达与妊娠结局的相关性,根据HDCP患者妊娠结局分为妊娠结局不良组(33例)和妊娠结局良好组(87例),绘制受术者工作特征曲线评价lncRNA FAM99A水平对HDCP孕妇不良妊娠结局的预测价值。结果:随着HDCP病情加重lncRNA FAM99A表达降低,有指征的剖宫产、产后出血、早产或过期产、新生儿窒息发生率HDCP组高于对照组(均P<0.05);HDCP患者妊娠结局不良组血清lncRNA FAM99A(0.34±0.09)低于妊娠结局良好组(0.77±0.20)(P<0.05);血清lncRNA FAM99A预测HDCP患者不良妊娠结局的曲线下面积为0.797,截断值0.61,灵敏度84.9%、特异性70.1%。结论:HDCP患者血清lncRNA FAM99A表达下调,下调的lncRNA FAM99A与不良妊娠结局有关。

腺病毒介导microRNA-99a过表达抑制肝癌细胞生长

目的:利用腺病毒介导microrRNA-99a(miR-99a)的过表达,观察miR-99a对肝癌细胞生长的抑制作用,探讨一种腺病毒介导miRNA治疗肿瘤的新方法。方法:qRT-PCR检测正常肝细胞系L-02和肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721、Hep3B和Huh7细胞中miR-99a的表达,构建含miR-99a的重组5型腺病毒Ad5-miR-99a。用空载腺病毒Ad-blank和Ad5-miR-99a分别感染Huh7细胞,MTT法和集落形成实验检测miR-99a过表达对Huh7细胞生长的抑制作用。结果:与正常肝细胞L02和其他肝癌细胞相比,miR-99a在肝癌Huh7细胞中表达量相对最低(P<0.01)。成功构建重组腺病毒Ad5-miR-99a,Ad5-miR-99a感染Huh7细胞后,miR-99a可在Huh7细胞中稳定高表达。集落形成实验和MTT实验显示,相对于Ad-blank组,Ad5-miR-99a可显著抑制Huh7细胞的生长和集落形成(P<0.01)。结论:成功构建重组腺病毒Ad5-miR-99a,miR-99a能有效抑制肝癌细胞的增殖,Ad5-miR-99a有可能成为治疗肝癌的新药物。

苏木乙酸乙酯提取液靶向调控miRNA-99a抑制动脉粥样硬化的作用机制研究

目的研究苏木乙酸乙酯提取液(SAEE)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、凋亡的机制及miRNA-99a在其中的可能作用。方法 ox-LDL诱导VSMC模型,分别将SAEE(200μg/mL)、miRNA-99a模拟剂、miRNA-99a抑制剂作用于细胞。采用MTT法检测各组VSMC的增殖,流式细胞学检测其凋亡水平,Western blotting法检测细胞中Ki-67、PCNA、Bax、Bcl-2、MMP-1、TIMP-1蛋白的表达,RT-PCR检测细胞中miRNA-99a的表达。结果与空白组相比,ox-LDL能显著增加VSMC细胞增殖、晚期凋亡和总凋亡率,上调细胞中Ki-67、PCNA、Bax、MMP-1蛋白的表达及Bax/Bcl-2、MMP-1/TIMP-1的比值,下调Bcl-2、TIMP-1蛋白和miRNA-99a的表达,差异均具有显著统计学意义(P <0.01);SAEE能够抑制VSMC细胞增殖、晚期凋亡和总凋亡率,上调Bcl-2、TIMP-1蛋白和mi R-99a的表达,下调细胞中Ki-67、PCNA、Bax、MMP-1蛋白的表达及Bax/Bcl-2、MMP-1/TIMP-1的比值,与模型组比较,差异均具有统计学意义(P <0.01)。结论 SAEE能够通过上调细胞中miRNA-99a的表达,抑制VSMC细胞增殖、凋亡和细胞外基质的降解,促进斑块的稳定和防止纤维帽的破裂,发挥抗动脉粥样硬化的作用。

MicroRNA-99a促进结肠癌细胞的增殖和迁移及其可能机制

目的:探讨结肠癌患者组织中microRNA-99a表达水平以及对结肠癌细胞增殖和迁移的影响。方法:取南京医科大学附属常州二院胃肠病中心49例结肠癌患者肿瘤组织、癌旁组织(癌旁5cm)标本以及结肠癌细胞HCT-116、HT-29、SW-480、Caco-2和正常结肠上皮细胞HCoe Pic,采用实时荧光定量PCR检测结肠癌患者肿瘤组织和结肠癌细胞中microRNA-99a表达水平;结肠癌细胞株HT-29转染microRNA-99a抑制剂后,CCK-8法检测microRNA-99a对结肠癌细胞增殖的变化;transwell法观察microRNA-99a对结肠癌细胞迁移的影响;Western blotting检测了HT-29中FGFR-3的表达水平。结果:microRNA-99a表达在结肠癌组织中明显高于癌旁组织(6.27±0.48 vs 1.34±0.54,P<0.05)、在肿瘤细胞中明显高于正常结肠上皮细胞(5.48±0.34,7.67±0.24,5.78±0.22,6.28±0.44 vs 1.45±0.37,P<0.05)。转染microRNA-99a抑制剂后,HT-29细胞的增殖和迁移能力均明显下降(P<0.05);同时,HT-29中FGFR-3显著降低(P<0.05)。结论:microRNA-99a在结肠癌组织中高表达,低表达microRNA-99a可减弱结肠癌细胞的增殖和迁移能力,且可能通过FGFR-3信号通路发挥作用。

高柱头外露率中粳不育系春江99A的选育和利用

春江99A是中国水稻研究所利用滇型粳稻不育系春江16A为母本,以粳稻保持系春江99B(春江19B×春江099)作父本杂交,经连续多代选择回交和育性鉴定,转育成的中粳不育系,2014年9月通过浙江省农作物品种审定委员会组织的不育系鉴定。春江99A育性稳定,柱头外露率高,花时较早,异交结实率高,株型好,叶色浅绿,配合力好。利用春江99A配制的籼粳亚种间杂交稻组合表现出杂种优势强,叶色较淡,抗倒性好,全生育期短,后期转色好等特点。

款冬花多糖通过调控miR-99a/PI3K/Akt通路影响食管癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探索款冬花多糖通过miR-99a/PI3K/Akt通路影响食管癌细胞增殖、迁移和侵袭。方法MTT检测款冬花多糖(10、20、40、80、160 mg/L)对食管癌细胞Eca109细胞存活的影响;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭;Western blot检测MMP2、MMP9、Cyclin D1、p-PI3K和p-Akt蛋白表达;RT-PCR检测miR-99a表达。在Eca109细胞中转染miR-99a、anti-miR-99a并使用80 mg/L款冬花多糖进行处理,观察其在细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。结果款冬花多糖抑制Eca109细胞增殖、迁移、侵袭及MMP2、MMP9、CyclinD1、p-PI3K、p-AKT蛋白表达(P<0.05),促进miR-99a表达(P<0.05)。过表达miR-99a抑制Eca109细胞中Cyclin D1、MMP2、MMP9蛋白表达,减少细胞存活率、迁移细胞数和侵袭细胞数(P<0.05)。低表达miR-99a部分逆转款冬花多糖对细胞增殖、迁移、侵袭、CyclinD1、MMP2、MMP9、p-PI3K和p-AKT蛋白表达的抑制作用。结论款冬花多糖通过调控miR-99a/PI3K/Akt通路抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭。

肿瘤相关巨噬细胞相关性miR-99a对子宫内膜癌细胞生长和侵袭的调控作用

背景与目的:肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophage,TAM)浸润与肿瘤进展密切相关,但作用机制尚不明确,因此,探索miR-99a对单核巨噬细胞极化的影响及其对子宫内膜癌(endometrial cancer,EC)细胞生长、侵袭的影响。方法:检测EC组织中巨噬唾液酸蛋白(macrosialin)CD68表达并分析其与临床病理学特征之间的关系;运用人EC细胞系HEC-1B、RL95-2培养上清液诱导人单核细胞U937向TAM(M2型巨噬细胞)分化;将人工合成的miR-99a模拟物片段转染至诱导后的巨噬细胞,转染后运用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)及流式细胞术检测巨噬细胞相关因子CD68、CD163以及巨噬细胞甘露糖受体(mcrophage mannose receptor)CD206表达量变化,并运用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测巨噬细胞分泌相关细胞因子IL-12、IL-4和IL-10分泌量变化;将转染miR-99a的诱导后巨噬细胞与EC细胞共培养,运用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和transwell法检测其对EC细胞增殖和侵袭能力的影响,并初步分析其可能的作用机制。结果:EC组织CD68高表达并与肿瘤肌层浸润及血管生成呈正相关;肿瘤细胞培养上清液成功诱导单核细胞向M2型TAM极化。转染miR-99a后单核细胞组CD68及CD163表达较对照组下降(P<0.01),而CD206表达差异无统计学意义(P>0.05),流式细胞术进一步证实上述表达变化;ELISA结果发现,转染miR-99a诱导后巨噬细胞中IL-12分泌增多(P<0.01),而IL-4、IL-10分泌减少(P<0.01),提示巨噬细胞向M2型极化受抑制。将诱导后巨噬细胞与EC细胞共培养,共培养后EC细胞增殖侵袭能力较对照组增加,而转染miR-99a模拟片段至诱导后巨噬细胞能够抑制其对增殖(P<0.01)及侵袭能力的促进作用(P<0.05)。诱导后巨噬细胞中过表达miR-99a后细胞中mTOR及其通路受到抑制。结论:EC间质巨噬细胞浸润与肿瘤肌层浸润及血管新生相关,miR-99a能够逆转单核细胞向M2表型极化,并抑制EC细胞介导TAM的促EC细胞生长和侵袭作用,其作用可能通过调控mTOR通路产生。

miRNA-99a对过氧化氢诱导neuro-2a细胞氧化损伤的影响

目的研究microRNA-99a(miR-99a)对过氧化氢所诱导神经细胞neuro-2a氧化损伤的影响。方法常规培养neuro-2a细胞并分为3组:正常对照组,过氧化氢100μmol/L刺激组,miR-99a预处理组(转染miRNA-99a mimics+过氧化氢100μmol/L刺激),用CCK-8试剂盒检测细胞存活率,生化试剂盒检测还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NADH)含量和总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)、锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,MnSOD)活性,Western blotting检测突触小体相关蛋白(synaptosoma associated protein of molecular mass 25 000,SNAP25)及Mn-SOD、细胞外超氧化物歧化酶(extracellular SOD,EC-SOD)的蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,过氧化氢刺激的2组细胞存活率明显下降,分别为85%和89%(P<0.05),但miR-99a预处理组的细胞存活率下降程度较小仅为11%(P<0.05)。进一步研究发现,过氧化氢刺激引起细胞T-SOD、Mn-SOD活性降低(P<0.05),转染miR-99a mimics不但能增强T-SOD和Mn-SOD的活性,还能促进Mn-SOD和EC-SOD的表达(P<0.05)。过氧化氢导致细胞中NADH含量降低(P<0.05),miR-99a能够增加NADH含量甚至高于正常细胞水平(P<0.05)。miR-99a还有增加neuro-2a细胞表达SNAP25的趋势。结论 miR-99a对过氧化氢诱导neuro-2a细胞引起的氧化损伤具有保护作用。

miR-99a对乳腺癌细胞侵袭和迁移的负向调控机制研究

目的探讨miR-99a对乳腺癌细胞侵袭及迁移的影响,并初步分析其影响乳腺癌细胞侵袭及迁移的可能分子机制。方法利用荧光实时定量PCR检测乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF-7中miR-99a的表达。运用脂质体介导的转染方法分别将miR-99a模拟物(miR-99a mimics)、miR-99a抑制物(miR-99a inhibitors)以及相应对照miRNA转染MDA-MB-231和MCF-7细胞,通过Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭力;采用Transwell迁移实验及划痕实验检测细胞的迁移能力;利用生物信息学方法预测miR-99a的靶基因,并对靶基因进行验证。结果(1)高转移潜能的MDA-MB-231细胞中miR-99a表达明显低于低转移潜能的MCF-7细胞,划痕实验中转染miR-99a mimics的与转染control mimics的MDA-MB-231细胞比较迁移能力显著减弱(P<0.05),而MCF-7细胞转染miR-99a inhibitors后迁移能力明显增强(P<0.01)。(2)Transwell的侵袭及迁移实验显示,转染miR-99a mimics后MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移能力明显减弱(P<0.01);MCF-7细胞转染miR-99a inhibitors后迁移能力增强(P<0.01),而侵袭能力基本不变(P>0.05)。(3)生物信息学方法预测徼管相关蛋白(MTMR3)是miR-99a的靶点,实时定量PCR和3'UTR荧光素酶报告基因实验验证了该靶点。(4)干扰了MTMR3后MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力明显减弱。结论(1)miR-99a对乳腺癌细胞的侵袭及迁移发挥负向调控作用。(2)miR-99a可能通过靶向于MTMR3发挥其对乳腺癌细胞迁移和侵袭的调控作用。

miR-99a表达调控机制及抑制LPS所致内皮细胞炎症作用

研究炎症相关转录因子NFκB对miR-99a生成的调控作用,并进一步研究miR-99a对LPS所致内皮炎症的保护作用及机制,为动脉粥样硬化疾病的抗炎治疗提供依据.采用PROMO软件对miR-99a的启动子进行分析.构建不同长度的miR-99a启动子区段载体,并将这些载体与NF-κB共转染,双荧光报告基因检测NF-κB对报告基因表达的影响.采用EMSA法和ChIP法进行验证.采用ELISA法对炎症相关因子TNF-α、IL-6、IL-1β和MCP-1进行检测,Westernblot法对NF-κB、IκB、β-actin、HistonH1和mTOR蛋白进行检测.结果表明,NF-κB可直接作用于miR-99a启动子的-1643至-1652位点,促进miR-99a的表达.在内皮细胞中,LPS（10mg·L-1）可明显抑制miR-99a的表达（降低为正常对照组的10.4%）.MiR-99a过表达可明显抑制LPS导致的炎性因子表达升高,抑制mTOR的上调、NF-κB的核易位.miR99a对LPS损伤的内皮细胞具有保护作用,为动脉粥样硬化抗炎治疗的潜在靶点.

microRNA-99a在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:探讨microRNA-99a在非小细胞肺癌(NSCLC)患者与正常人血清中的表达情况并分析其表达与临床病理特征及预后的关系。方法:收集70例非小细胞肺癌患者和60例正常人血清总RNA采用RTPCR方法检测microRNA-99a的相对表达量,并分析其与临床病理资料和预后的相关性。结果:与正常人比较,血清microRNA-99a在非小细胞肺癌患者血清中表达下调,其表达与非小细胞肺癌患者的淋巴结转移、分化程度和TNM分期有显著相关性(P<0.05),非小细胞肺癌血清中microRNA-99a低表达者生存时间明显低于高表达者(P<0.05)。结论:非小细胞肺癌患者血清中microRNA-99a的表达下调与病情进展具有一定的相关性,可能作为肺癌治疗的新靶点。

miR-99a对高胰岛素诱导小鼠主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响及机制研究

目的观察mi R-99a对高浓度胰岛素诱导小鼠主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖的影响及可能机制。方法原代培养小鼠主动脉血管平滑肌细胞,用超生理浓度剂量胰岛素(100 nmol/L)作用于血管平滑肌细胞,用荧光实时定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)检测mi R-99a表达变化情况。Brdu法检测转染mi R-99a对高胰岛素促细胞增殖的影响。q RT-PCR及Western blot检测转染mi R-99a组及阴性对照组哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)m RNA及蛋白变化情况,并检测转染mi R-99a对高胰岛素促进m TOR表达及对其下游通路激活的影响。Western blot检测转染mi R-99a组及阴性对照组细胞周期素D1(Cyclin D1)的变化。结果高浓度胰岛素显著降低mi R-99a的表达。转染mi R-99a mimic后可减少基础的及胰岛素促进的VSMC增殖作用。mi R-99a负向调节m TOR m RNA及蛋白,转染mi R-99a mimic可显著削弱高胰岛素促进的m TOR/P70S6K1通路激活作用,而转染mi R-99a inhibitor可增加高胰岛素促进m TOR/p70s6k1通路激活作用。转染mi R-99a mimic后可减少基础的及胰岛素促进的Cyclin D1表达。结论 mi R-99a可通过负向调节m TOR抑制高胰岛素诱导的VSMC细胞增殖作用。

MicroRNA-99a促进新生小鼠心肌细胞增殖

目的有效地促进心肌细胞增殖为亟待发展的治疗策略。本研究拟观察高表达microRNA-99a(miR-99a)对体外培养心肌细胞增殖的影响并对其相关机制进行探讨。方法利用高表达miR-99a的慢病毒载体转染体外培养的乳鼠心肌细胞,诱导其在乳鼠心肌细胞中高表达。采用噻唑蓝法、EDU法检测乳鼠心肌细胞增殖能力;Western blot检测乳鼠心肌细胞ERK1/2蛋白表达及其蛋白磷酸化水平。结果 miR-99a在乳鼠心肌细胞高表达后,噻唑蓝法、EDU法检测结果均表明:miR-99a转染组细胞增殖能力明显高于空病毒转染对照组(P<0.05)。Western blot检测发现miR-99a病毒转染组ERK1/2蛋白磷酸化水平较对照组明显升高(P<0.05)。结论 miR-99a高表达能促进乳鼠心肌细胞增殖,其机制可能部分通过激活Erk1/2通路。

miR-99a模拟物提高膀胱癌细胞化疗药物敏感性的机制研究

目的:研究miR-99a模拟物对膀胱癌细胞增殖及化疗药物敏感性的影响及相关分子机制。方法:培养膀胱癌BIU-87细胞株,随机分为对照组、吡柔比星组、miR-99a组、吡柔比星+miR-99a组,分别采用不含血清的培养基、1.0μg/mL的吡柔比星、miR-99a的模拟物以及miR-99a的模拟物联合1.0μg/mL的吡柔比星进行处理,处理后12、24、48h时分别测定细胞活力以及PI3K、AKT、ABCE1、MRPS5的表达量。结果:吡柔比星组、miR-99a组、吡柔比星+miR-99a组的细胞活力值以及PI3K、AKT、ABCE1、MRPS5的表达量均显著低于对照组,吡柔比星+miR-99a组的细胞活力值以及PI3K、AKT、ABCE1、MRPS5的表达量均显著低于吡柔比星组和miR-99a组。结论:miR-99a模拟物能够通过靶向抑制PI3K/AKT信号通路及下游ABCE1、MRPS5基因表达的方式抑制膀胱癌细胞增殖、增加膀胱癌细胞对化疗药物的敏感性。

优质早籼不育系“99A”的选育及其配组优势表现

用“1504”(赣早籼49号)作母本,“IR58025B”作父本进行杂交,在F2代中选择优良早熟单株与野败型不育系“G4A”进行测交并回交,经10代回交转育,育成了优质籼型不育系“99A”。2006年3月通过了江西省农作物品种审定委员会审定。“99A”不育性稳定,不育率高,农艺性状、异交结实率、稻米品质、抗性和配合力等方面都达到了实用不育系的要求。

腺病毒介导miR-99a过表达抑制人结肠癌HCT-8细胞的生长抑制及其作用机制

目的探讨miR-99a过表达对人结肠癌HCT-8细胞的生长抑制及其作用机制。方法构建miR-99a的重组腺病毒Ad5-miR-99a,并感染人结肠癌HCT-8细胞。采用甲基化特异性PCR检测miR-99a、抑癌基因SOCS1和P16的甲基化水平;采用实时荧光定量PCR和Western Blot检测miR-99a、DNAC5胞嘧啶甲基转移酶、SOCS1和P16的表达情况;采用MTT法、细胞集落形成和流式细胞术检测HCT-8细胞的体外增殖凋亡情况;采用裸鼠体内荷瘤实验检测HCT-8细胞体内成瘤性。结果成功构建miR-99a腺病毒载体Ad5-miR-99a。Ad5-miR-99a感染HCT-8细胞后,Ad5-miR-99a组细胞中miR-99a表达显著高于空载腺病毒组和空白对照组(P<0.05),而其甲基化水平显著低于空载腺病毒组和空白对照组(P<0.05);Ad5-miR-99a组细胞中DNAC5胞嘧啶甲基转移酶表达显著低于空载腺病毒组和空白对照组(P<0.05);Ad5-miR-99a组细胞中SOCS1和P16表达显著高于空载腺病毒组和空白对照组(P<0.05),而其甲基化水平显著低于空载腺病毒组和空白对照组(P<0.05)。MTT法、细胞集落形成、流式细胞术和裸鼠体内荷瘤实验显示,Ad5-miR-99a组细胞的体外增殖和体内成瘤能力显著低于空载腺病毒组和空白对照组(P<0.05)。结论 miR-99a可显著抑制人结肠癌HCT-8细胞的体外增殖和体内成瘤能力,其机制可能与miR-99a过表达导致DNMT1表达升高,降低抑癌基因SOCS-1和P16甲基化程度,使得SOCS-1和P16高表达,从而发挥抑制肿瘤细胞生长的作用。