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腺病毒介导microRNA-99a过表达抑制肝癌细胞生长 被引量:4
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作者 张敬磊 金华君 +5 位作者 刘辉 吕赛群 杨远 傅思源 钱其军 周伟平 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期267-271,共5页
目的:利用腺病毒介导microrRNA-99a(miR-99a)的过表达,观察miR-99a对肝癌细胞生长的抑制作用,探讨一种腺病毒介导miRNA治疗肿瘤的新方法。方法:qRT-PCR检测正常肝细胞系L-02和肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721、Hep3B和Huh7细胞中miR-99a的表... 目的:利用腺病毒介导microrRNA-99a(miR-99a)的过表达,观察miR-99a对肝癌细胞生长的抑制作用,探讨一种腺病毒介导miRNA治疗肿瘤的新方法。方法:qRT-PCR检测正常肝细胞系L-02和肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721、Hep3B和Huh7细胞中miR-99a的表达,构建含miR-99a的重组5型腺病毒Ad5-miR-99a。用空载腺病毒Ad-blank和Ad5-miR-99a分别感染Huh7细胞,MTT法和集落形成实验检测miR-99a过表达对Huh7细胞生长的抑制作用。结果:与正常肝细胞L02和其他肝癌细胞相比,miR-99a在肝癌Huh7细胞中表达量相对最低(P<0.01)。成功构建重组腺病毒Ad5-miR-99a,Ad5-miR-99a感染Huh7细胞后,miR-99a可在Huh7细胞中稳定高表达。集落形成实验和MTT实验显示,相对于Ad-blank组,Ad5-miR-99a可显著抑制Huh7细胞的生长和集落形成(P<0.01)。结论:成功构建重组腺病毒Ad5-miR-99a,miR-99a能有效抑制肝癌细胞的增殖,Ad5-miR-99a有可能成为治疗肝癌的新药物。 展开更多
关键词 miRNA-99a 5型腺病毒 肝细胞癌 靶向基因治疗
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苏木乙酸乙酯提取液靶向调控miRNA-99a抑制动脉粥样硬化的作用机制研究 被引量:8
2
作者 于玲 曹丽娟 +1 位作者 孙静 周亚滨 《中国中医急症》 2019年第4期585-589,共5页
目的研究苏木乙酸乙酯提取液(SAEE)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、凋亡的机制及miRNA-99a在其中的可能作用。方法 ox-LDL诱导VSMC模型,分别将SAEE(200μg/mL)、miRNA-99a模拟剂、miRNA-99a抑制剂作用于... 目的研究苏木乙酸乙酯提取液(SAEE)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、凋亡的机制及miRNA-99a在其中的可能作用。方法 ox-LDL诱导VSMC模型,分别将SAEE(200μg/mL)、miRNA-99a模拟剂、miRNA-99a抑制剂作用于细胞。采用MTT法检测各组VSMC的增殖,流式细胞学检测其凋亡水平,Western blotting法检测细胞中Ki-67、PCNA、Bax、Bcl-2、MMP-1、TIMP-1蛋白的表达,RT-PCR检测细胞中miRNA-99a的表达。结果与空白组相比,ox-LDL能显著增加VSMC细胞增殖、晚期凋亡和总凋亡率,上调细胞中Ki-67、PCNA、Bax、MMP-1蛋白的表达及Bax/Bcl-2、MMP-1/TIMP-1的比值,下调Bcl-2、TIMP-1蛋白和miRNA-99a的表达,差异均具有显著统计学意义(P <0.01);SAEE能够抑制VSMC细胞增殖、晚期凋亡和总凋亡率,上调Bcl-2、TIMP-1蛋白和mi R-99a的表达,下调细胞中Ki-67、PCNA、Bax、MMP-1蛋白的表达及Bax/Bcl-2、MMP-1/TIMP-1的比值,与模型组比较,差异均具有统计学意义(P <0.01)。结论 SAEE能够通过上调细胞中miRNA-99a的表达,抑制VSMC细胞增殖、凋亡和细胞外基质的降解,促进斑块的稳定和防止纤维帽的破裂,发挥抗动脉粥样硬化的作用。 展开更多
关键词 动脉粥样硬化 苏木乙酸乙酯提取液 血管平滑肌细胞 增殖 凋亡 miRNA-99a 大鼠
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MicroRNA-99a促进结肠癌细胞的增殖和迁移及其可能机制 被引量:3
3
作者 宋军 汤黎明 +2 位作者 刘坤 刘寒旸 周艳 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期880-883,共4页
目的:探讨结肠癌患者组织中microRNA-99a表达水平以及对结肠癌细胞增殖和迁移的影响。方法:取南京医科大学附属常州二院胃肠病中心49例结肠癌患者肿瘤组织、癌旁组织(癌旁5cm)标本以及结肠癌细胞HCT-116、HT-29、SW-480、Caco-2和正常... 目的:探讨结肠癌患者组织中microRNA-99a表达水平以及对结肠癌细胞增殖和迁移的影响。方法:取南京医科大学附属常州二院胃肠病中心49例结肠癌患者肿瘤组织、癌旁组织(癌旁5cm)标本以及结肠癌细胞HCT-116、HT-29、SW-480、Caco-2和正常结肠上皮细胞HCoe Pic,采用实时荧光定量PCR检测结肠癌患者肿瘤组织和结肠癌细胞中microRNA-99a表达水平;结肠癌细胞株HT-29转染microRNA-99a抑制剂后,CCK-8法检测microRNA-99a对结肠癌细胞增殖的变化;transwell法观察microRNA-99a对结肠癌细胞迁移的影响;Western blotting检测了HT-29中FGFR-3的表达水平。结果:microRNA-99a表达在结肠癌组织中明显高于癌旁组织(6.27±0.48 vs 1.34±0.54,P<0.05)、在肿瘤细胞中明显高于正常结肠上皮细胞(5.48±0.34,7.67±0.24,5.78±0.22,6.28±0.44 vs 1.45±0.37,P<0.05)。转染microRNA-99a抑制剂后,HT-29细胞的增殖和迁移能力均明显下降(P<0.05);同时,HT-29中FGFR-3显著降低(P<0.05)。结论:microRNA-99a在结肠癌组织中高表达,低表达microRNA-99a可减弱结肠癌细胞的增殖和迁移能力,且可能通过FGFR-3信号通路发挥作用。 展开更多
关键词 microRNA-99a 结肠癌 增殖 迁移 FGFR3
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高柱头外露率中粳不育系春江99A的选育和利用 被引量:9
4
作者 林建荣 吴明国 宋昕蔚 《中国稻米》 北大核心 2016年第1期87-89,共3页
春江99A是中国水稻研究所利用滇型粳稻不育系春江16A为母本,以粳稻保持系春江99B(春江19B×春江099)作父本杂交,经连续多代选择回交和育性鉴定,转育成的中粳不育系,2014年9月通过浙江省农作物品种审定委员会组织的不育系鉴定。春江... 春江99A是中国水稻研究所利用滇型粳稻不育系春江16A为母本,以粳稻保持系春江99B(春江19B×春江099)作父本杂交,经连续多代选择回交和育性鉴定,转育成的中粳不育系,2014年9月通过浙江省农作物品种审定委员会组织的不育系鉴定。春江99A育性稳定,柱头外露率高,花时较早,异交结实率高,株型好,叶色浅绿,配合力好。利用春江99A配制的籼粳亚种间杂交稻组合表现出杂种优势强,叶色较淡,抗倒性好,全生育期短,后期转色好等特点。 展开更多
关键词 水稻 中粳不育系 春江99a 柱头外露率 选育
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款冬花多糖通过调控miR-99a/PI3K/Akt通路影响食管癌细胞增殖、迁移和侵袭 被引量:11
5
作者 刘宜峰 杨华 +1 位作者 曹磊 郑杨杨 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期2161-2165,共5页
目的探索款冬花多糖通过miR-99a/PI3K/Akt通路影响食管癌细胞增殖、迁移和侵袭。方法MTT检测款冬花多糖(10、20、40、80、160 mg/L)对食管癌细胞Eca109细胞存活的影响;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭;Western blot检测MMP2、MMP9、C... 目的探索款冬花多糖通过miR-99a/PI3K/Akt通路影响食管癌细胞增殖、迁移和侵袭。方法MTT检测款冬花多糖(10、20、40、80、160 mg/L)对食管癌细胞Eca109细胞存活的影响;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭;Western blot检测MMP2、MMP9、Cyclin D1、p-PI3K和p-Akt蛋白表达;RT-PCR检测miR-99a表达。在Eca109细胞中转染miR-99a、anti-miR-99a并使用80 mg/L款冬花多糖进行处理,观察其在细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。结果款冬花多糖抑制Eca109细胞增殖、迁移、侵袭及MMP2、MMP9、CyclinD1、p-PI3K、p-AKT蛋白表达(P<0.05),促进miR-99a表达(P<0.05)。过表达miR-99a抑制Eca109细胞中Cyclin D1、MMP2、MMP9蛋白表达,减少细胞存活率、迁移细胞数和侵袭细胞数(P<0.05)。低表达miR-99a部分逆转款冬花多糖对细胞增殖、迁移、侵袭、CyclinD1、MMP2、MMP9、p-PI3K和p-AKT蛋白表达的抑制作用。结论款冬花多糖通过调控miR-99a/PI3K/Akt通路抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭。 展开更多
关键词 款冬花多糖 食管癌 miR-99a PI3K/AKT信号通路
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肿瘤相关巨噬细胞相关性miR-99a对子宫内膜癌细胞生长和侵袭的调控作用 被引量:3
6
作者 文静 黄洁 +2 位作者 李云云 张中卒 周勤 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期561-569,共9页
背景与目的:肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophage,TAM)浸润与肿瘤进展密切相关,但作用机制尚不明确,因此,探索miR-99a对单核巨噬细胞极化的影响及其对子宫内膜癌(endometrial cancer,EC)细胞生长、侵袭的影响。方法:检测EC组... 背景与目的:肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophage,TAM)浸润与肿瘤进展密切相关,但作用机制尚不明确,因此,探索miR-99a对单核巨噬细胞极化的影响及其对子宫内膜癌(endometrial cancer,EC)细胞生长、侵袭的影响。方法:检测EC组织中巨噬唾液酸蛋白(macrosialin)CD68表达并分析其与临床病理学特征之间的关系;运用人EC细胞系HEC-1B、RL95-2培养上清液诱导人单核细胞U937向TAM(M2型巨噬细胞)分化;将人工合成的miR-99a模拟物片段转染至诱导后的巨噬细胞,转染后运用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)及流式细胞术检测巨噬细胞相关因子CD68、CD163以及巨噬细胞甘露糖受体(mcrophage mannose receptor)CD206表达量变化,并运用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测巨噬细胞分泌相关细胞因子IL-12、IL-4和IL-10分泌量变化;将转染miR-99a的诱导后巨噬细胞与EC细胞共培养,运用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和transwell法检测其对EC细胞增殖和侵袭能力的影响,并初步分析其可能的作用机制。结果:EC组织CD68高表达并与肿瘤肌层浸润及血管生成呈正相关;肿瘤细胞培养上清液成功诱导单核细胞向M2型TAM极化。转染miR-99a后单核细胞组CD68及CD163表达较对照组下降(P<0.01),而CD206表达差异无统计学意义(P>0.05),流式细胞术进一步证实上述表达变化;ELISA结果发现,转染miR-99a诱导后巨噬细胞中IL-12分泌增多(P<0.01),而IL-4、IL-10分泌减少(P<0.01),提示巨噬细胞向M2型极化受抑制。将诱导后巨噬细胞与EC细胞共培养,共培养后EC细胞增殖侵袭能力较对照组增加,而转染miR-99a模拟片段至诱导后巨噬细胞能够抑制其对增殖(P<0.01)及侵袭能力的促进作用(P<0.05)。诱导后巨噬细胞中过表达miR-99a后细胞中mTOR及其通路受到抑制。结论:EC间质巨噬细胞浸润与肿瘤肌层浸润及血管新生相关,miR-99a能够逆转单核细胞向M2表型极化,并抑制EC细胞介导TAM的促EC细胞生长和侵袭作用,其作用可能通过调控mTOR通路产生。 展开更多
关键词 肿瘤相关巨噬细胞 miR-99a 子宫内膜癌 细胞增殖 细胞侵袭
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miRNA-99a对过氧化氢诱导neuro-2a细胞氧化损伤的影响 被引量:3
7
作者 陶真 王荣亮 +1 位作者 赵海苹 罗玉敏 《首都医科大学学报》 CAS 2014年第3期305-309,共5页
目的研究microRNA-99a(miR-99a)对过氧化氢所诱导神经细胞neuro-2a氧化损伤的影响。方法常规培养neuro-2a细胞并分为3组:正常对照组,过氧化氢100μmol/L刺激组,miR-99a预处理组(转染miRNA-99a mimics+过氧化氢100μmol/L刺激),用CCK-8... 目的研究microRNA-99a(miR-99a)对过氧化氢所诱导神经细胞neuro-2a氧化损伤的影响。方法常规培养neuro-2a细胞并分为3组:正常对照组,过氧化氢100μmol/L刺激组,miR-99a预处理组(转染miRNA-99a mimics+过氧化氢100μmol/L刺激),用CCK-8试剂盒检测细胞存活率,生化试剂盒检测还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NADH)含量和总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)、锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,MnSOD)活性,Western blotting检测突触小体相关蛋白(synaptosoma associated protein of molecular mass 25 000,SNAP25)及Mn-SOD、细胞外超氧化物歧化酶(extracellular SOD,EC-SOD)的蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,过氧化氢刺激的2组细胞存活率明显下降,分别为85%和89%(P<0.05),但miR-99a预处理组的细胞存活率下降程度较小仅为11%(P<0.05)。进一步研究发现,过氧化氢刺激引起细胞T-SOD、Mn-SOD活性降低(P<0.05),转染miR-99a mimics不但能增强T-SOD和Mn-SOD的活性,还能促进Mn-SOD和EC-SOD的表达(P<0.05)。过氧化氢导致细胞中NADH含量降低(P<0.05),miR-99a能够增加NADH含量甚至高于正常细胞水平(P<0.05)。miR-99a还有增加neuro-2a细胞表达SNAP25的趋势。结论 miR-99a对过氧化氢诱导neuro-2a细胞引起的氧化损伤具有保护作用。 展开更多
关键词 miR-99a neuro-2a 过氧化氢 氧化损伤
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miR-99a对乳腺癌细胞侵袭和迁移的负向调控机制研究 被引量:5
8
作者 张玮 陈罗泉 +1 位作者 叶治国 王青青 《浙江医学》 CAS 2016年第5期317-321,335,I0001,共7页
目的探讨miR-99a对乳腺癌细胞侵袭及迁移的影响,并初步分析其影响乳腺癌细胞侵袭及迁移的可能分子机制。方法利用荧光实时定量PCR检测乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF-7中miR-99a的表达。运用脂质体介导的转染方法分别将miR-99a模拟物(miR-... 目的探讨miR-99a对乳腺癌细胞侵袭及迁移的影响,并初步分析其影响乳腺癌细胞侵袭及迁移的可能分子机制。方法利用荧光实时定量PCR检测乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF-7中miR-99a的表达。运用脂质体介导的转染方法分别将miR-99a模拟物(miR-99a mimics)、miR-99a抑制物(miR-99a inhibitors)以及相应对照miRNA转染MDA-MB-231和MCF-7细胞,通过Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭力;采用Transwell迁移实验及划痕实验检测细胞的迁移能力;利用生物信息学方法预测miR-99a的靶基因,并对靶基因进行验证。结果(1)高转移潜能的MDA-MB-231细胞中miR-99a表达明显低于低转移潜能的MCF-7细胞,划痕实验中转染miR-99a mimics的与转染control mimics的MDA-MB-231细胞比较迁移能力显著减弱(P<0.05),而MCF-7细胞转染miR-99a inhibitors后迁移能力明显增强(P<0.01)。(2)Transwell的侵袭及迁移实验显示,转染miR-99a mimics后MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移能力明显减弱(P<0.01);MCF-7细胞转染miR-99a inhibitors后迁移能力增强(P<0.01),而侵袭能力基本不变(P>0.05)。(3)生物信息学方法预测徼管相关蛋白(MTMR3)是miR-99a的靶点,实时定量PCR和3'UTR荧光素酶报告基因实验验证了该靶点。(4)干扰了MTMR3后MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力明显减弱。结论(1)miR-99a对乳腺癌细胞的侵袭及迁移发挥负向调控作用。(2)miR-99a可能通过靶向于MTMR3发挥其对乳腺癌细胞迁移和侵袭的调控作用。 展开更多
关键词 乳腺癌 miR-99a侵袭 迁移 MTMR3
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miR-99a表达调控机制及抑制LPS所致内皮细胞炎症作用 被引量:2
9
作者 鲍美华 李广意 +4 位作者 曾杰 张青松 董丽萍 项炬 李建明 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第B11期149-149,共1页
研究炎症相关转录因子NFκB对miR-99a生成的调控作用,并进一步研究miR-99a对LPS所致内皮炎症的保护作用及机制,为动脉粥样硬化疾病的抗炎治疗提供依据.采用PROMO软件对miR-99a的启动子进行分析.构建不同长度的miR-99a启动子区段载体,... 研究炎症相关转录因子NFκB对miR-99a生成的调控作用,并进一步研究miR-99a对LPS所致内皮炎症的保护作用及机制,为动脉粥样硬化疾病的抗炎治疗提供依据.采用PROMO软件对miR-99a的启动子进行分析.构建不同长度的miR-99a启动子区段载体,并将这些载体与NF-κB共转染,双荧光报告基因检测NF-κB对报告基因表达的影响.采用EMSA法和ChIP法进行验证.采用ELISA法对炎症相关因子TNF-α、IL-6、IL-1β和MCP-1进行检测,Westernblot法对NF-κB、IκB、β-actin、HistonH1和mTOR蛋白进行检测.结果表明,NF-κB可直接作用于miR-99a启动子的-1643至-1652位点,促进miR-99a的表达.在内皮细胞中,LPS(10mg·L-1)可明显抑制miR-99a的表达(降低为正常对照组的10.4%).MiR-99a过表达可明显抑制LPS导致的炎性因子表达升高,抑制mTOR的上调、NF-κB的核易位.miR99a对LPS损伤的内皮细胞具有保护作用,为动脉粥样硬化抗炎治疗的潜在靶点. 展开更多
关键词 动脉粥样硬化 内皮细胞 miR-99a MTOR NF-κB 启动子
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miR-99a对高胰岛素诱导小鼠主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响及机制研究 被引量:2
10
作者 张紫微 杨丽霞 +4 位作者 郭瑞威 吕晋琳 陆霓虹 王先梅 石燕昆 《解放军医学院学报》 CAS 2016年第11期1164-1168,共5页
目的观察mi R-99a对高浓度胰岛素诱导小鼠主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖的影响及可能机制。方法原代培养小鼠主动脉血管平滑肌细胞,用超生理浓度剂量胰岛素(100 nmol/L)作用于血管平滑肌细胞,用荧光实时... 目的观察mi R-99a对高浓度胰岛素诱导小鼠主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖的影响及可能机制。方法原代培养小鼠主动脉血管平滑肌细胞,用超生理浓度剂量胰岛素(100 nmol/L)作用于血管平滑肌细胞,用荧光实时定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)检测mi R-99a表达变化情况。Brdu法检测转染mi R-99a对高胰岛素促细胞增殖的影响。q RT-PCR及Western blot检测转染mi R-99a组及阴性对照组哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)m RNA及蛋白变化情况,并检测转染mi R-99a对高胰岛素促进m TOR表达及对其下游通路激活的影响。Western blot检测转染mi R-99a组及阴性对照组细胞周期素D1(Cyclin D1)的变化。结果高浓度胰岛素显著降低mi R-99a的表达。转染mi R-99a mimic后可减少基础的及胰岛素促进的VSMC增殖作用。mi R-99a负向调节m TOR m RNA及蛋白,转染mi R-99a mimic可显著削弱高胰岛素促进的m TOR/P70S6K1通路激活作用,而转染mi R-99a inhibitor可增加高胰岛素促进m TOR/p70s6k1通路激活作用。转染mi R-99a mimic后可减少基础的及胰岛素促进的Cyclin D1表达。结论 mi R-99a可通过负向调节m TOR抑制高胰岛素诱导的VSMC细胞增殖作用。 展开更多
关键词 微小RNA 99a 胰岛素 血管平滑肌细胞
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microRNA-99a在非小细胞肺癌中的表达及临床意义 被引量:4
11
作者 徐小峰 夏春伟 陈文萍 《现代肿瘤医学》 CAS 2014年第10期2312-2314,共3页
目的:探讨microRNA-99a在非小细胞肺癌(NSCLC)患者与正常人血清中的表达情况并分析其表达与临床病理特征及预后的关系。方法:收集70例非小细胞肺癌患者和60例正常人血清总RNA采用RTPCR方法检测microRNA-99a的相对表达量,并分析其与临床... 目的:探讨microRNA-99a在非小细胞肺癌(NSCLC)患者与正常人血清中的表达情况并分析其表达与临床病理特征及预后的关系。方法:收集70例非小细胞肺癌患者和60例正常人血清总RNA采用RTPCR方法检测microRNA-99a的相对表达量,并分析其与临床病理资料和预后的相关性。结果:与正常人比较,血清microRNA-99a在非小细胞肺癌患者血清中表达下调,其表达与非小细胞肺癌患者的淋巴结转移、分化程度和TNM分期有显著相关性(P<0.05),非小细胞肺癌血清中microRNA-99a低表达者生存时间明显低于高表达者(P<0.05)。结论:非小细胞肺癌患者血清中microRNA-99a的表达下调与病情进展具有一定的相关性,可能作为肺癌治疗的新靶点。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 microRNA-99a 预后
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MicroRNA-99a促进新生小鼠心肌细胞增殖 被引量:2
12
作者 顾蓉 李巧玲 +1 位作者 牡丹 徐标 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1195-1200,共6页
目的有效地促进心肌细胞增殖为亟待发展的治疗策略。本研究拟观察高表达microRNA-99a(miR-99a)对体外培养心肌细胞增殖的影响并对其相关机制进行探讨。方法利用高表达miR-99a的慢病毒载体转染体外培养的乳鼠心肌细胞,诱导其在乳鼠心肌... 目的有效地促进心肌细胞增殖为亟待发展的治疗策略。本研究拟观察高表达microRNA-99a(miR-99a)对体外培养心肌细胞增殖的影响并对其相关机制进行探讨。方法利用高表达miR-99a的慢病毒载体转染体外培养的乳鼠心肌细胞,诱导其在乳鼠心肌细胞中高表达。采用噻唑蓝法、EDU法检测乳鼠心肌细胞增殖能力;Western blot检测乳鼠心肌细胞ERK1/2蛋白表达及其蛋白磷酸化水平。结果 miR-99a在乳鼠心肌细胞高表达后,噻唑蓝法、EDU法检测结果均表明:miR-99a转染组细胞增殖能力明显高于空病毒转染对照组(P<0.05)。Western blot检测发现miR-99a病毒转染组ERK1/2蛋白磷酸化水平较对照组明显升高(P<0.05)。结论 miR-99a高表达能促进乳鼠心肌细胞增殖,其机制可能部分通过激活Erk1/2通路。 展开更多
关键词 microRNA-99a 心肌细胞 细胞增殖
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miR-99a模拟物提高膀胱癌细胞化疗药物敏感性的机制研究 被引量:1
13
作者 奉友刚 刘军 +4 位作者 梁博 姜明东 刘泓建 康永明 杨平 《海南医学院学报》 CAS 2016年第24期2940-2943,共4页
目的:研究miR-99a模拟物对膀胱癌细胞增殖及化疗药物敏感性的影响及相关分子机制。方法:培养膀胱癌BIU-87细胞株,随机分为对照组、吡柔比星组、miR-99a组、吡柔比星+miR-99a组,分别采用不含血清的培养基、1.0μg/mL的吡柔比星、miR-99a... 目的:研究miR-99a模拟物对膀胱癌细胞增殖及化疗药物敏感性的影响及相关分子机制。方法:培养膀胱癌BIU-87细胞株,随机分为对照组、吡柔比星组、miR-99a组、吡柔比星+miR-99a组,分别采用不含血清的培养基、1.0μg/mL的吡柔比星、miR-99a的模拟物以及miR-99a的模拟物联合1.0μg/mL的吡柔比星进行处理,处理后12、24、48h时分别测定细胞活力以及PI3K、AKT、ABCE1、MRPS5的表达量。结果:吡柔比星组、miR-99a组、吡柔比星+miR-99a组的细胞活力值以及PI3K、AKT、ABCE1、MRPS5的表达量均显著低于对照组,吡柔比星+miR-99a组的细胞活力值以及PI3K、AKT、ABCE1、MRPS5的表达量均显著低于吡柔比星组和miR-99a组。结论:miR-99a模拟物能够通过靶向抑制PI3K/AKT信号通路及下游ABCE1、MRPS5基因表达的方式抑制膀胱癌细胞增殖、增加膀胱癌细胞对化疗药物的敏感性。 展开更多
关键词 膀胱癌 miR-99a 吡柔比星 磷脂酰肌醇3激酶 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶
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优质早籼不育系“99A”的选育及其配组优势表现 被引量:1
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作者 邬文昌 熊伟 +4 位作者 陈大洲 肖叶青 胡兰香 徐华 吴小燕 《江西农业学报》 CAS 2006年第3期6-9,21,共5页
用“1504”(赣早籼49号)作母本,“IR58025B”作父本进行杂交,在F2代中选择优良早熟单株与野败型不育系“G4A”进行测交并回交,经10代回交转育,育成了优质籼型不育系“99A”。2006年3月通过了江西省农作物品种审定委员会审定。“99A”不... 用“1504”(赣早籼49号)作母本,“IR58025B”作父本进行杂交,在F2代中选择优良早熟单株与野败型不育系“G4A”进行测交并回交,经10代回交转育,育成了优质籼型不育系“99A”。2006年3月通过了江西省农作物品种审定委员会审定。“99A”不育性稳定,不育率高,农艺性状、异交结实率、稻米品质、抗性和配合力等方面都达到了实用不育系的要求。 展开更多
关键词 优质早籼 不育系 99a 选育 配组优势
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腺病毒介导miR-99a过表达抑制人结肠癌HCT-8细胞的生长抑制及其作用机制 被引量:3
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作者 罗玉政 李铁军 王佾 《兰州大学学报(医学版)》 CAS 2016年第3期22-28,共7页
目的探讨miR-99a过表达对人结肠癌HCT-8细胞的生长抑制及其作用机制。方法构建miR-99a的重组腺病毒Ad5-miR-99a,并感染人结肠癌HCT-8细胞。采用甲基化特异性PCR检测miR-99a、抑癌基因SOCS1和P16的甲基化水平;采用实时荧光定量PCR和Weste... 目的探讨miR-99a过表达对人结肠癌HCT-8细胞的生长抑制及其作用机制。方法构建miR-99a的重组腺病毒Ad5-miR-99a,并感染人结肠癌HCT-8细胞。采用甲基化特异性PCR检测miR-99a、抑癌基因SOCS1和P16的甲基化水平;采用实时荧光定量PCR和Western Blot检测miR-99a、DNAC5胞嘧啶甲基转移酶、SOCS1和P16的表达情况;采用MTT法、细胞集落形成和流式细胞术检测HCT-8细胞的体外增殖凋亡情况;采用裸鼠体内荷瘤实验检测HCT-8细胞体内成瘤性。结果成功构建miR-99a腺病毒载体Ad5-miR-99a。Ad5-miR-99a感染HCT-8细胞后,Ad5-miR-99a组细胞中miR-99a表达显著高于空载腺病毒组和空白对照组(P<0.05),而其甲基化水平显著低于空载腺病毒组和空白对照组(P<0.05);Ad5-miR-99a组细胞中DNAC5胞嘧啶甲基转移酶表达显著低于空载腺病毒组和空白对照组(P<0.05);Ad5-miR-99a组细胞中SOCS1和P16表达显著高于空载腺病毒组和空白对照组(P<0.05),而其甲基化水平显著低于空载腺病毒组和空白对照组(P<0.05)。MTT法、细胞集落形成、流式细胞术和裸鼠体内荷瘤实验显示,Ad5-miR-99a组细胞的体外增殖和体内成瘤能力显著低于空载腺病毒组和空白对照组(P<0.05)。结论 miR-99a可显著抑制人结肠癌HCT-8细胞的体外增殖和体内成瘤能力,其机制可能与miR-99a过表达导致DNMT1表达升高,降低抑癌基因SOCS-1和P16甲基化程度,使得SOCS-1和P16高表达,从而发挥抑制肿瘤细胞生长的作用。 展开更多
关键词 腺病毒 mir-99a 结肠癌 HCT-8细胞 作用机制
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miR-99a对口腔鳞癌增殖能力的影响 被引量:1
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作者 王科 彭国光 +2 位作者 谭玉莲 何善志 罗翠芬 《上海口腔医学》 CAS 北大核心 2021年第1期44-49,共6页
目的:探讨miR-99a在口腔鳞状细胞中的表达及对口腔鳞癌细胞生物学行为的影响。方法:检索GEO数据库中与口腔鳞癌相关的miRNA芯片进行二次分析。检测63例口腔鳞癌组织和口腔鳞癌细胞株内miR-99a的表达,分析其与临床病理指标及患者预后之... 目的:探讨miR-99a在口腔鳞状细胞中的表达及对口腔鳞癌细胞生物学行为的影响。方法:检索GEO数据库中与口腔鳞癌相关的miRNA芯片进行二次分析。检测63例口腔鳞癌组织和口腔鳞癌细胞株内miR-99a的表达,分析其与临床病理指标及患者预后之间的关系。上调miR-99a的表达,检测其对口腔鳞癌细胞生长和克隆形成的影响,并通过Targetscan等软件预测其靶基因。采用SPSS 19.0软件包对数据进行统计学分析。结果:GSE103931芯片显示,miR-99a在口腔鳞癌中下调最显著,且miR-99a也在口腔鳞癌细胞株内显著低表达。miR-99a的表达与患者T分期、病理分级和预后密切相关。上调miR-99a的表达可抑制口腔鳞癌细胞增殖;而抑制miR-99a的表达,则促进口腔鳞癌细胞增殖。通过Targetscan等软件发现,mTOR是miR-99a的靶基因,且与miR-99a的表达呈负相关。结论:miR-99a在口腔鳞癌组织和细胞系中低表达。上调miR-99a能抑制口腔鳞癌细胞株SCC25和SCC9的增殖能力,其机制是通过调控mTOR的表达而实现。 展开更多
关键词 miR-99a 口腔鳞状细胞癌 MTOR 细胞增殖
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MiR-99a调控CTDSPL影响儿童急性髓性白血病细胞增殖及凋亡 被引量:1
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作者 张丽丹 林文浩 +4 位作者 程玉才 张祖涵 唐燕来 罗学群 黄礼彬 《中国小儿血液与肿瘤杂志》 CAS 2015年第5期232-236,250,共6页
目的探讨miR-99a对儿童急性髓性白血病(AML)的影响及其作用机制,为寻找新的靶向治疗方法提供理论依据。方法用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测57例AMLL患儿及10例对照患儿的骨髓标本中miR-99a的表达;在细胞系水平通过对miR-99a... 目的探讨miR-99a对儿童急性髓性白血病(AML)的影响及其作用机制,为寻找新的靶向治疗方法提供理论依据。方法用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测57例AMLL患儿及10例对照患儿的骨髓标本中miR-99a的表达;在细胞系水平通过对miR-99a过表达或抑制表达,利用MTT细胞增殖及双染凋亡试验研究miR-99a对AML细胞增殖、凋亡的影响。用在线软件预测miR-99a可能的靶基因,并通过双荧光报告及蛋白印迹技术对其靶基因进行验证。结果miR-99a在AML患儿初诊时高表达,在完全缓解(CR)时低表达;miR-99a促进AML细胞的增殖,抑制其凋亡;采用双荧光报告及蛋白印迹技术在细胞系中验证出CTDSPL可能是miR-99a的靶基因;并通过蛋白印迹技术在AML患儿标本中验证出miR-99a抑制CTDSPL蛋白的表达。结论miR-99a通过靶向负调控CTDSPL基因影响AML细胞增殖及凋亡,靶向抑制miR-99a表达可能成为治疗AML的一个新策略。 展开更多
关键词 miR-99a CTDSPL 急性髓性白血病 儿童
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优质粳稻不育系辽99A的选育与应用 被引量:1
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作者 苏玉安 王彦荣 +5 位作者 李全英 郝宪彬 李如海 姚继攀 张忠旭 华泽田 《杂交水稻》 CSCD 北大核心 2009年第4期7-8,11,共3页
辽99A是北方杂交粳稻工程技术中心通过多元复合杂交及多代回交筛选培育而成的BT型粳稻不育系,具有育性稳定、柱头外露率高、株叶形态理想、米质优、抗病、配合力强等特点。该不育系于2008年9月通过辽宁省种子管理局成果鉴定,所配组合辽... 辽99A是北方杂交粳稻工程技术中心通过多元复合杂交及多代回交筛选培育而成的BT型粳稻不育系,具有育性稳定、柱头外露率高、株叶形态理想、米质优、抗病、配合力强等特点。该不育系于2008年9月通过辽宁省种子管理局成果鉴定,所配组合辽优9573(辽99A/C73)于2009年1月通过辽宁省品种审定。 展开更多
关键词 杂交水稻 粳稻不育系 99a 优质 选育
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肿瘤抑制因子miR-99a对口腔鳞状细胞癌细胞迁移、增殖和凋亡的影响 被引量:3
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作者 梁源 张珊 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2020年第11期2406-2410,共5页
目的探讨肿瘤抑制因子miR-99a对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞迁移、增殖和凋亡的影响。方法逆转录-定量聚合酶链反应分析miR-99a在OSCC细胞系中的表达水平。CCK-8试验评估细胞增殖,细胞划痕和Transwell试验检测细胞迁移和侵袭能力。流式细... 目的探讨肿瘤抑制因子miR-99a对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞迁移、增殖和凋亡的影响。方法逆转录-定量聚合酶链反应分析miR-99a在OSCC细胞系中的表达水平。CCK-8试验评估细胞增殖,细胞划痕和Transwell试验检测细胞迁移和侵袭能力。流式细胞仪检测miR-99a对HN4细胞周期和凋亡的影响。结果 miR-99a的上调抑制了HN4和SCC6细胞增殖,miR-99a的上调抑制了HN4和SCC6细胞侵袭和迁移能力。流式细胞仪分析证实,miR-99a的上调促进了HN4和SCC6细胞的凋亡,细胞周期中G1期的百分比明显升高,在G2期和S期的百分比明显降低。结论 miR-99a可能是OSCC肿瘤发生中的肿瘤抑制因子。 展开更多
关键词 MICRORNA miR-99a 口腔鳞状细胞癌
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子宫动脉超声血流参数、血清LncRNA FAM99A、CCL21水平与妊娠期高血压疾病患者病情程度及预后的相关性分析
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作者 袁梅 刘芳 孙改艳 《黑龙江医药科学》 2024年第4期24-28,共5页
目的:探讨妊娠期高血压疾病(hypertensive disorders of pregnancy,HDP)患者子宫动脉超声血流参数、血清长链非编码RNA家族成员A序列相似性99(LncRNA FAM99A)、CC趋化因子配体21(CCL21)水平变化,并分析其与病情程度相关性及其对预后的... 目的:探讨妊娠期高血压疾病(hypertensive disorders of pregnancy,HDP)患者子宫动脉超声血流参数、血清长链非编码RNA家族成员A序列相似性99(LncRNA FAM99A)、CC趋化因子配体21(CCL21)水平变化,并分析其与病情程度相关性及其对预后的评估价值。方法:回顾性选取2021年1月至2023年12月于开封市第三人民医院诊治的126例HDP患者作为研究组,另选取健康孕产妇42例作为对照组。比较两组不同病情程度者子宫动脉超声血流参数[子宫动脉收缩期/舒张期血流最大速度(systolic/diastolic,S/D)、子宫动脉阻力指数(resistance index,RI)、子宫动脉搏动指数(pulsation index,PI)]、血清LncRNA FAM99A、CCL21水平。分析子宫动脉超声血流参数、血清LncRNA FAM99A、CCL21与病情程度相关性。依据预后情况分为预后不良亚组27例、预后良好亚组99例,比较其子宫动脉超声血流参数、血清LncRNA FAM99A、CCL21水平。分析预后不良的影响因素。评价子宫动脉超声血流参数、血清LncRNA FAM99A、CCL21对预后不良的评估价值。结果:研究组S/D、RI、PI及血清CCL21水平高于对照组,血清LncRNA FAM99A水平低于对照组(P<0.05);S/D、RI、PI、CCL21与病情程度呈正相关(r=0.526、0.418、0.509、0.624,P<0.05),LncRNA FAM99A与病情程度呈负相关(r=-0.637,P<0.05);预后不良亚组S/D、RI、PI及血清CCL21水平高于预后良好亚组,血清LncRNA FAM99A水平低于预后良好亚组(P<0.05);S/D、RI、PI、CCL21为预后不良的危险因素,LncRNA FAM99A为预后不良的保护因素(P<0.05);S/D、RI、PI、LncRNA FAM99A、CCL21联合评估预后的AUC大于单项指标评估(P<0.05)。结论:HDP患者S/D、RI、PI及血清CCL21水平升高,血清LncRNA FAM99A水平降低,且与病情程度及预后密切相关,联合检测其水平对预后具有一定评估价值。 展开更多
关键词 妊娠期高血压疾病 子宫动脉超声血流参数 长链非编码RNA家族成员A序列相似性99 CC趋化因子配体21 预后
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