荷淋巴瘤裸鼠放射免疫治疗^(99m)Tc-Annexin Ⅴ凋亡显像的研究

探讨99mTc-Annexin Ⅴ凋亡显像在评价淋巴瘤131I-Rituximab放射免疫治疗疗效中的价值及其最佳显像时间。荷淋巴瘤裸鼠经肿瘤间质、尾静脉注射131I-Rituximab治疗后不同时间点进行99mTc-Annexin Ⅴ凋亡显像,并分离解剖肿瘤组织进行流式细胞术和免疫组织化学检查,根据其与凋亡显像的吻合程度确定显像最佳时间。结果显示:131I-Rituximab经肿瘤间质注射后24h、36h、48h、96h99mTc-Annexin Ⅴ凋亡显像肿瘤/非肿瘤组织摄取比(T/NT)分别为6.0±1.08、8.4±1.68、8.1±1.89、7.0±0.95,高于相同时间点静脉注射组(3.4±0.27、5.1±0.82、6.7±0.58、5.8±0.91),且均与相同时间点细胞凋亡率、bax/bcl-2变化基本一致。结论:99mTc-Annexin Ⅴ凋亡显像作为无创性手段,能有效监测淋巴瘤131I-Rituximab放射免疫治疗后细胞凋亡情况,且放射免疫治疗后36h^48h是凋亡显像较佳时间。

葡萄糖负荷对细菌性兔骨关节炎动物模型摄取^(99)Tc^m(Ⅴ)-DMSA及其生物分布的影响

目的 探讨葡萄糖负荷影响99Tcm(Ⅴ ) 二巯基丁二酸 (DMSA)在细菌性骨关节炎症处浓集的可能机制。方法 自制细菌性兔骨关节炎动物模型 ,葡萄糖负荷下分别用感兴趣区技术和百分注射量分析法 ,分析葡萄糖负荷对99Tcm(Ⅴ ) DMSA生物分布及骨关节炎症处摄取和滞留99Tcm(Ⅴ ) DMSA的影响。结果 葡萄糖负荷对99Tcm(Ⅴ) DMSA全身生物分布没有明显影响 ,明显提高细菌性骨关节炎症区99Tcm(Ⅴ ) DMSA摄取水平 ,其 6h患侧与健侧比值 :显像分析法为对照组 2 882± 0 52 5,实验组 3 487± 0 53 5(P <0 0 5) ;百分注射量分析法为对照组 3 153± 0 3 3 4 ,实验组 5 0 71± 1 780 (P <0 0 5)。结论 葡萄糖负荷可提高骨组织炎症区99Tcm(Ⅴ )

^(99)Tc^m-枸橼酸盐和^(99)Tc^m(Ⅴ)-DMSA显像诊断急性化脓性骨关节炎

目的 探讨99Tcm 枸橼酸盐和99Tcm(Ⅴ ) 二巯基丁二酸 (DMSA)显像对急性化脓性骨关节炎的诊断价值。方法 17例急性化脓性骨关节炎患者和 19例非化脓性骨关节病患者分别行99Tcm 亚甲基二膦酸盐 (MDP)、99Tcm 枸橼酸盐和99Tcm(Ⅴ ) DMSA显像 ,行半定量分析。结果 3种显像剂在急性化脓性骨关节炎病灶处均有明显趋骨性浓集 ;非化脓性骨关节病病灶处99Tcm MDP和99Tcm(Ⅴ ) DMSA有明显趋骨性浓集 ,99Tcm 枸橼酸盐仅有轻度趋骨性浓集 ,后者还可见周围软组织放射性浓集。半定量分析示 ,急性化脓性骨关节炎99Tcm 枸橼酸盐显像靶与非靶组织 (L N)比值 (2 30 0± 0 0 94 )明显高于非化脓性骨关节病 (1 2 98± 0 0 5 4 ,P <0 0 1) ;99Tcm(Ⅴ ) DMSA显像L N比值分别为 3 4 95±0 180和 3 0 91± 0 0 91,差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论 联合应用99Tcm 枸橼酸盐和99Tcm(Ⅴ ) DMSA或99Tcm MDP显像能无创地评估骨组织炎症的病理生理状态。99Tcm 枸橼酸盐显像可显示骨组织炎症累及范围 ,而后两者可显示炎症所致骨组织代谢增高范围。

锝化学研究 Ⅸ.脑显像剂Tc^(Ⅴ)ON_2S_2类配合物结构稳定性和价态的研究

采用改进的ＣＮＤＯ／２法模拟了ＢＡＴ类脑显像剂Ｔｃ（Ⅴ）Ｏ配合物价态的转换过程，发现Ｎ２Ｓ２类配体与Ｔｃ（Ⅴ）Ｏ核配位时，可能存在配位平衡离子Ｘ。在溶液中由于Ｘ离子的优先解络，瞬间存在＋１价对称性９９Ｔｃｍ配合物，并且，它又自动向相对稳定的０价不对称性９９Ｔｃｍ配合物转换，在动态转换过程中，将导致仅有一个配位Ｎ原子保留一个质子，这与实验结果一致。采用键级削弱百分数概念，表征配位过程的二个配位Ｎ原子上保留程度，解释了Ｔｃ（Ⅴ）Ｏ核、Ｔｃ（Ⅴ）≡Ｎ核Ｎ２Ｓ２类配合物两个Ｎ－Ｈ键上质子保留程度不同的原因，为今后设计不同价态锝配合物结构提供理论依据。

^(99m)Tc-NOET和^(99m)Tc-MIBI门控心肌灌注显像在冠状动脉性心脏病诊疗和预后中的价值

目的评价99mTc-NOET静息门控断层心肌灌注显像(GSPECT)对冠状动脉性心脏病(CAD)的诊断价值和对经皮冠状动脉腔内成形术(PTCA)及支架置入术后疗效的临床价值。方法首先,对70例疑似CAD的受检者行99mTc-NOET(NOET组1)或99mTc-MIBI(MIBI组1)静息GSPECT,并于1周内行冠状动脉造影;然后,对确诊的53例CAD患者PTCA及支架置入术前、术后1、3、6个月分别行NOET(NOET组2)或MIBI(MIBI组2)静息GSPECT。结果NOET组1和MIBI组1诊断CAD的灵敏度、特异性差异无统计学意义。NOET组2和MIBI组2比较:①NOET组2PTCA术后1、3、6个月心肌血流改善分别为59.29%、64.60%和66.37%,MIBI组2为20.35%、55.10%和61.22%;②PTCA术前、术后两组间心功能参数、临床事件的发生率之间差异无统计学意义。结论同99mTc-MIBI比较,99mTc-NOET对CAD的诊断、PTCA术后疗效的判定及观察临床事件发生率均有较大临床应用价值。

^(99)Tc^(m)-3PRGD_(2)单光子发射计算机断层显像在大鼠乳腺癌骨移植瘤放疗疗效评价中的价值观察

目的观察^(99)Tc^(m)-3PRGD_(2)单光子发射计算机断层(SPECT)显像在大鼠乳腺癌骨移植瘤放疗疗效评价中的价值。方法50只Wistar大鼠通过骨髓腔内注入含有大鼠乳腺癌细胞的腹水混悬液建立胫骨移植瘤模型,最终成瘤30只。将30只乳腺癌骨移植瘤大鼠按随机数字表法分为对照组、低剂量放疗组、高剂量放疗组各10只,分别于骨移植瘤部位行0 Gy、5 Gy、25 Gy的单次大剂量直线加速器放疗,各组分别于放疗前及放疗结束后第10天尾静脉注射^(99)Tc^(m)-3PRGD_(2),1 h后行SPECT显像并计算骨移植瘤部位放射性计数与对侧相应部位同等大小区域的放射性计数比值(T/NT)。显像结束后处死大鼠,采用HE染色观察大鼠胫骨组织病理改变,采用免疫组织化学法观察骨移植瘤组织整合素αⅤβ_(3)受体表达情况。采用Spearman相关性分析T/NT与整合素αⅤβ_(3)受体阳性细胞表达的关系。结果各组放疗前行^(99)Tc^(m)-3PRGD_(2)SPECT显像,骨移植瘤部位均可见显像剂浓聚影,浓聚程度无明显差异;各组放疗前T/NT比较无统计学差异。各组放疗后行^(99)Tc^(m)-3PRGD_(2)SPECT显像,显像剂浓聚程度对照组>低剂量放疗组>高剂量放疗组;各组放疗后T/NT对照组>低剂量放疗组>高剂量放疗组(P均<0.05)。HE染色可见各组胫骨组织均有骨结构破坏,对照组内肿瘤细胞密度高于高、低剂量放疗组,高、低剂量放疗组内有大量肿瘤细胞坏死,其中以高剂量放疗组肿瘤细胞坏死最多。对照组、低剂量放疗组、高剂量放疗组骨移植瘤组织整合素αⅤβ_(3)受体阳性率对照组>低剂量放疗组>高剂量放疗组(P均<0.05)。Spearman相关性分析显示,T/NT与αⅤβ_(3)受体阳性细胞表达呈正相关(r=0.847,P<0.01)。结论^(99)Tc^(m)-3PRGD_(2)SPECT显像指标变化与骨移植瘤病理改变一致,用于大鼠乳腺癌骨移植瘤放疗疗效评价的效果良好。

单次化疗后荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡显像研究

目的探讨活体肿瘤细胞凋亡监测作为评价肿瘤对化疗反应的一种新方法的可行性.方法细胞凋亡分子探针99Tcm-HYNIC-Annexin Ⅴ经化学和放射化学合成获得.20～25 g昆明种小白鼠右前腋下皮下组织接种S-180肉瘤,建立荷肿瘤小鼠模型.荷瘤小鼠在环磷酰胺腹腔内给药化疗8 h、24 h、48 h、72 h后,分别尾静脉注射99Tcm-HYNIC-Annexin Ⅴ,1 h后进行单光子发射型计算机断层显像(SPECT)和体内生物分布测定,并与对照组进行比较.根据化疗后显像的最佳时间,给荷瘤小鼠尾静脉注射99Tcm-DTPA-HSA,测定体内各组织器官的血流分布情况.所有体内生物分布的实验结果应用SPSS 10.0统计学软件进行统计学分析.结果荷瘤小鼠在环磷酰胺腹腔内给药化疗后72 h进行SPECT显像时,肿瘤的显像效果最明显,且体内生物分布测定显示在化疗后72 h的肿瘤组织的放射性摄取值(1.87±0.58)最高,是对照组(1.18±0.128)的1.58倍(二者比较,P<0.05),与显像结果具有一致性.肿瘤/肌肉(T/M)放射性摄取率之比为5.83±0.799,肿瘤/血液(T/B)为1.03±0.258,与对照组比较均为P<0.05.化疗组和对照组的肿瘤组织对99Tcm-DTPA-HSA的摄取无明显差异(P>0.05).结论在进行单次环磷酰胺腹腔内给药化疗后72 h,荷瘤小鼠的肿瘤组织对 99Tcm-HYNIC-Annexin Ⅴ的摄取显著增加,细胞凋亡体内显像作为一种评价肿瘤对化疗反应的无创性的监测方法是有效、可行的.

荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡显像的实验研究

目的研究细胞凋亡显像剂99Tcm-HYNIC-AnnexinⅤ的制备及其在荷瘤小鼠体内的生物分布特性和活体显像。方法采用双功能螯合剂HYNIC法锝[99Tcm]标记AnnexinⅤ,经高效液相色谱仪分离纯化并检测标记产物。建立荷肿瘤小鼠模型,在20~25 g昆明种小白鼠右前腋下皮下接种S-180肉瘤,生长1周。荷瘤小鼠在环磷酰胺腹腔内给药化疗72 h后,尾静脉注射99Tcm-HYNIC-AnnexinⅤ,分别于5 min3、0 min、1 h、3 h、6 h后进行SPECT显像和体内生物分布测定。实验结果应用SPSS 12.0统计学软件进行统计学分析。结果99Tcm-HYNIC-AnnexinⅤ的标记率达到95%,放射性化学纯度为99%。荷瘤小鼠在环磷酰胺腹腔内给药化疗后72 h显像可见:注射99Tcm-HYNIC-AnnexinⅤ后6 h肿瘤组织呈明显异常放射性浓聚灶。体内生物分布实验观察到,注射显像剂后6 h肿瘤组织的放射性摄取值(1.59±0.44)最高,与其他时相的肿瘤组织放射性摄取值比较P<0.05。99Tcm-HYNIC-AnnexinⅤ主要聚集在肾脏、肺脏和肝脏等,从肾脏排泄,其血流清除速度快,在注射后30 min,血液放射性摄取值(1.59±0.50)仅为5 min时(8.85±2.65)的20%(P<0.05)。注射显像剂后6 h,肿瘤/肌肉放射性摄取率比值(3.73±1.42)高于肿瘤/血液放射性摄取率比值(2.80±0.54)。结论99Tcm-HYNIC-Annexin V有望成为一种富有应用前景的活体细胞凋亡分子探针。

荷肉瘤小鼠肿瘤细胞凋亡显像实验研究

目的制备细胞凋亡显像剂99mTc-annexinⅤ,并在荷肉瘤小鼠体内对凋亡肿瘤组织进行活体显像。方法利用硫酸铵沉淀和Octyl-Sepharose疏水层析纯化来源于毕赤酵母重组表达、带有内在螯合位点的annexinⅤ。通过葡庚糖酸盐配体在annexinⅤ上直接标记放射性核素99mTc,SephadexG-25脱盐处理制备99mTc-annexinⅤ。在Balb/C小鼠右侧腋下接种肉瘤株S-180,1周后荷肉瘤小鼠经腹腔注射化疗药物环磷酰胺诱导肉瘤细胞凋亡。化疗18h后经小鼠尾静脉注射99mTc-annexinⅤ,扫描6h后肿瘤组织的SPECT图像。分别于放射性药物注射后0.5、1、3、6h处死动物,测定各脏器、组织的放射性计数,分析99mTc-annexinⅤ在荷肉瘤小鼠体内的生物分布。结果经过硫酸铵沉淀和Octyl-Sepharose疏水层析纯化,annexinⅤ纯度达到95%。直接标记和脱盐处理制备出的99mTc-annexinⅤ放射性化学纯度为90%。将99mTc-annexinⅤ注射到环磷酰胺处理的荷肉瘤小鼠体内,肿瘤组织能够显像。结论我们标记合成了99mTc-annexinⅤ,该探针可以活体显示肿瘤组织的凋亡情况,可能为临床应用和药物开发提供了一种手段。

活体细胞凋亡检测筛选肝癌敏感化疗药物的实验研究

目的:通过动物实验探讨99 Tcm-HYNIC-Annexin V活体细胞凋亡检测筛选肝癌敏感化疗药物的可行性。方法:20只VX-2荷瘤免随机分为4组,通过治疗剂量的紫杉醇(PAC,n=6),5-氟尿嘧啶(5-FU,n=5),表柔比星(EPI,n=5)分组干预治疗,同时建立对照组(C,n=4)。分别予化疗前2h、化疗后46h静脉注射99 Tcm-HYN-IC-Annexin V,2h后再以单光子发射计算体层摄影(SPECT)成像,选取肿瘤部位放射性计数(T)及腿部非肿瘤区部位放射性计数(NT),计算其比值(T/NT),进行半定量分析,确定敏感化疗药物。取肿瘤组织,分别予免疫组化(Tunel)和流式细胞仪(FCM)分析组织细胞凋亡率,放射性核素聚集显像与肿瘤细胞凋亡进行相关性分析。实验数据以SPSS 17.0软件分析。结果:99 Tcm-HY-NIC-Annexin V放射显像显示,化疗前各组肿瘤部位均无明显显像(F=0.025,P=0.980),放射性核素分布主要聚集在肾脏及膀胱区。药物干预48h后,对照组仍无显像,而药物干预组显像清楚,放射性计数显著高于对照组(F=16.52,P<0.001)及化疗前(P<0.01)。药物干预组中,PAC组肿瘤组织放射性显像显著高于5-FU组和EPI组(P值分别为0.042和0.003),而5-FU组与EPI组间放射性显像差异无统计学意义(P=0.224)9。9 Tcm-HYNIC-Annexin V活体细胞凋亡检测结果与免疫组化及流式细胞检测结果一致(R2=0.537 7,P=0.002;R2=0.695 4,P<0.001)。结论9:9 Tcm-HYNIC-Annexin V核素显像检测能够反映活体组织细胞凋亡情况,该方法能够在活体状态下筛选敏感化疗药物。

电针足三里对严重烫伤致大鼠急性肺损伤的影响

目的 探讨电针足三里对严重烫伤致大鼠急性肺损伤的影响.方法 雄性SD大鼠40只,体重200～250 g,随机分为5组（n=8）：对照组、烫伤组、足三里组、非经非穴组和α-银环蛇毒素组（α-BGT组）.对照组尾静脉注射生理盐水1 ml.烫伤组、足三里组、非经非穴组和α-BGT组先制备30%总体表面积Ⅲ度烫伤模型,然后烫伤组尾静脉注射生理盐水1 ml;足三里组于双侧足三里穴垂直进针7 mm,给予脉冲电流（电压3V,电流2ms,频率3 Hz）持续刺激12 mim,间隔8 h刺激1次,持续2 d;非经非穴组于双侧足三里穴旁5mm处给予脉冲刺激,方法同足三里组;α-BGT组尾静脉注射α-BGT 1.0 μg/kg,再于双侧足三里穴给予脉冲刺激,方法同足三里组.各组处理结束后,处死大鼠,取肺组织,光镜下观察病理学结果,电镜下观察超微结构,采用ELISA法测定肺组织高迁移率族蛋白B1（HMGBl）含量,采用免疫组化法测定HMGBl蛋白表达,采用RT-PCR法测定HMGBl mRNA表达.结果 烫伤组肺组织光镜下可见肺泡壁崩解,泡内大量渗出液,间质水肿、肥厚和增生,伴大量炎性细胞浸润;电镜下可见细胞核形态不规则,核膜僵硬,部分凸凹不平和核溶解,胞质内板层小体明显减少,肺组织病理损伤程度较对照组减轻.与对照组比较,烫伤组、非经非穴组和α-BGT组肺组织HMGBl含量升高,HMGBl蛋白及其mRNA的表达上调（P〈0.05）,足三里组各指标差异无统计学意义（P〉0.05）;与烫伤组比较,足三里组肺组织HMGBl含量降低,HMGBl蛋白及其mRNA的表达下调,非经非穴组和α-BGT组肺组织HMGBl mRNA表达下调（P〈0.05）;与足三里组比较,非经非穴组和α-BGT组肺组织HMGBl含量升高,HMGBl蛋白及其mRNA的表达上调（P〈0.05）.结论 电针足三里可减轻严重烫伤致大鼠急性肺损伤,其机制与激活含α7亚基N型胆碱能受体介导的胆碱能抗炎通路,抑制肺组织HMGBl的表达有关.