红三叶异黄酮对去卵巢大鼠钙磷代谢及VDR和CaBP-9k mRNA表达的影响

【目的】研究岷山红三叶(Trifolium pratense cv.Minshan)异黄酮(isoflavone,ISO)调节动物钙、磷吸收与代谢的作用。【方法】选择80只SD(Sprague-Dawley)雌性大鼠(50~60日龄),随机分为8组(每组10只),其中1~7组为去卵巢(ovariectomized,OVX)+红三叶异黄酮组,分别按320、160、80、40、20、10和0 mg/(kg·d)的量灌胃红三叶异黄酮,第8组为假手术组,灌服等量生理盐水,试验期60 d。【结果】40~320 mg/(kg·d)的灌服量可提高去卵巢大鼠血清钙含量,大鼠胫骨灰分、胫骨钙含量和钙磷比均随灌服量上升而增高;20~40 mg/(kg·d)灌服量上调大鼠小肠VDR mRNA及CaBP-9K mRNA的表达促进小肠对钙的吸收,160~320 mg/(kg·d)灌服量上调大鼠肾脏VDR mRNA的表达促进肾小管对钙、磷的重吸收。【结论】岷山红三叶异黄酮对去卵巢大鼠小肠钙吸收和肾脏钙重吸收及骨的生长、矿化有一定促进作用。

利拉鲁肽对2型糖尿病性骨质疏松大鼠骨钙素、Hedgehog信号通路及CaBp-D9k基因表达的作用机制

目的 研究利拉鲁肽对2型糖尿病性骨质疏松大鼠骨钙素、人类胚胎发育调控因子(Hedgehog)信号通路及钙调节蛋白(CaBp-D9k)基因表达的作用机制。方法 取60只SD大鼠随机分为健康组、糖尿病组、糖尿病+利拉鲁肽组、去势组、糖尿病+去势组、糖尿病+去势+利拉鲁肽组,每组10只。糖尿病组、糖尿病+利拉鲁肽组、糖尿病+去势组、糖尿病+去势+利拉鲁肽组建立糖尿病模型,去势组建立去势模型,糖尿病+去势组、糖尿病+去势+利拉鲁肽组在糖尿病模型建立成功后建立去势模型。采用全自动化学分析仪检测空腹血糖值,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测胰岛素水平,HE染色观察病理形态,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测骨钙素(BGP)mRNA、CaBp-D9k mRNA水平,TUNEL检测成骨细胞凋亡,免疫印迹检测音猬因子(Shh)、细胞表面受体(Ptch)1、锌指蛋白(Gli)1蛋白表达。结果 HE染色结果显示:与健康组相比,糖尿病组和去势组中骨小梁排列紊乱,数量减少,变细,发生断裂,空洞增多,成骨细胞数量显著减少,糖尿病+去势组中这种病理变化更加严重;在经过利拉鲁肽干预后,糖尿病+利拉鲁肽组和糖尿病+去势+利拉鲁肽组新生骨量及成骨细胞增多。与健康组相比,糖尿病组、去势组、糖尿病+去势组空腹血糖值、成骨细胞凋亡指数升高,胰岛素水平、BGP、CaBp-D9k、Shh、Ptch1、Gli1水平降低,且以去势组与糖尿病+去势组水平变化最显著(P<0.05),经过利拉鲁肽干预后,与糖尿病组、去势组及糖尿病+去势组相比,糖尿病+利拉鲁肽组、糖尿病+去势+利拉鲁肽组空腹血糖值、成骨细胞凋亡指数显著降低,胰岛素水平、BGP、CaBp-D9k、Shh、Ptch1、Gli1显著升高(P<0.05)。结论 利拉鲁肽通过激活Hedgehog信号通路、提高骨钙素及CaBp-D9k水平,降低血糖水平,减少成骨细胞凋亡,促进骨形成,改善糖尿病骨质疏松病情严重程度。

电针对绝经后骨质疏松症模型大鼠肠黏膜钙结合蛋白-D9kmRNA和蛋白表达的影响

目的观察电针对去卵巢大鼠模型肠黏膜钙结合蛋白-D9k(CaBP-D9K)mRNA和蛋白表达的影响,探讨针灸治疗绝经后骨质疏松症可能机制。方法将60只3月龄SD健康雌性大鼠随机分为手术组和假手术组,3个月造模成功后将手术组随机分为模型组、假电针组、电针组、药物组。干预治疗12星期后,测定腰椎及股骨骨密度(BMD),然后处死大鼠,提取小肠黏膜,采用荧光实时定量PCR和Western blotting检测CaBP-D9K mRNA和蛋白表达。结果成功复制绝经后骨质疏松症模型,经电针组和药物组干预治疗12星期后,其大鼠骨密度与模型组相比均有明显提高,荧光实时定量PCR和Western blotting检测结果显示电针组和药物组大鼠小肠黏膜CaBP-D9K mRNA和蛋白表达上调,但电针组上调CaBP-D9K mRNA的水平不及药物组。结论针灸治疗绝经后骨质疏松症机制之一可能与上调小肠黏膜CaBP-D9K mRNA和蛋白表达量,从而增强肠钙吸收有关。

利用透明颤菌血红蛋白基因vgb改造毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K的研究

为了解决酵母发酵时贫氧限制目的蛋白表达量,利用透明颤菌血红蛋白基因vgb设计毕赤酵母分泌 型表达载体pPIC9K-vgb,并以人乳铁蛋白基因为目的基因转入毕赤酵母GS115。研究结果表明,该表达载体具 有转化操作简单、后期工程菌筛选简便、菌体耐低氧能力强、目的蛋白摇瓶表达量高等优点。该表达载体也可 以通过直接替换目的基因而用于其他蛋白表达系统的开发研究。

大容量存储器K9K8G08U0A及其在定点垂直升降剖面测量系统中的应用

介绍了新型大容量存储器K9K8G08U0A的基本组织结构,重点讲述了存储器与ATmega128L单片机外部存储器接口的硬件连接方式以及存储器的主要操作流程和部分C语言代码。

毕赤酵母中抗癌镇痛肽肺靶向融合体表达载体——穿梭质粒pPIC9K-RGD-4C-His Tag-AGAP的构建

采用PCR的方法对AGAP(anti-cancer analgesic peptide,抗癌镇痛肽)的N端进行了基因改造,保留了Kex2初步切割信号序列,去除了Ste13的切割序列,加入了对蝎毒蛋白抗癌镇痛活性无影响的氨基酸作为linker。通过构建辅助质粒pPIC6K,避免了kan基因内部的Xho I酶切位点对基因克隆的影响,构建了中介质粒pPIC6K-RGD-4C-His Tag-AGAP,该质粒经BamH I和EcoR I双酶切取得所需DNA片段,与同样经过双酶切的质粒pPIC9K进行连接,最终成功构建了酵母表达质粒pPIC9K-RGD-4C-His Tag-AGAP,测序结果表明,抗癌镇痛肽肺靶向融合体基因已成功插入到酵母表达载体pPIC9K中。

大容量闪存器件K9KAG08U0M与DSP的接口设计

大容量闪存器件以其体积小、容量大、易于扩展等优点在存储器领域得到广泛应用,介绍2G字节容量NAND Flash K9KAG08U0M的特点和使用方法,并以某激光惯导计算机板设计为例,重点阐述其与数字信号处理器(DSP)TMS320C6713B的硬件接口和软件设计方法。湖试和海试试验结果表明该接口设计方法可靠性高,可扩展能力强,易于编程,具有较高的实用价值。

甲状旁腺素、维生素D_3对Caco-2细胞钙结合蛋白D9k mRNA表达的影响

目的 探讨甲状旁腺素（PTH）对小肠细胞钙结合蛋白（CaBP）D9k mRNA表达的影响以及探讨PTH是否影响1，25-（OH）2-D3，对Caco-2细胞钙结合蛋白D9k mRNA表达的促进作用。方法 以人结肠癌上皮细胞株caco-2细胞作为小肠细胞体外模型，PTH分三个剂量：10^-8、10^9和10^-12。mol／L分别干预Caco-2细胞5、10、20、40和80min；10^-8mol/L 1，25-（OH）2，-D3，干预Caco-2细胞2、4、8、16和24h，溶剂时照为0．1％乙醇；10^-8mol／L 1，25-（OH）2，-D3，联合以上三剂量PTH干预Caco-2细胞2、4、8、16和24h，溶剂对照亦为0．1％乙醇。运用RT-PCR方法 进行CaBP-D9k mRNA测定，以GAPDH作为内对照。结果 10^-8mol／LPTH作用20rain，10^12mol／L作用10min，CaBP-D9k mRNA表达量高于空白组，其余时间点低于空白组；10^-8mol／L 1，25-（OH）2．D，干预Caco-2细胞2、4、8、16和24h，CaBP．D9kmRNA的表达均高于溶剂对照（0、1％乙醇）；与10^-8mol／L1，25．（OH）2-D3单独作用比较，10^-8mo/L 1，25-（OH）2-D3，联合以上三剂量PTH作用，CaBP-D9k mRNA相对表达量均低于单独作用的表达量。结论 10^-8mol／L、10^-12mol/L PTH可能促进Caco-2细胞CaBP-D9k mRNA瞬时（1～20min）合成增加；10^-8mol／L 1，25-（OH）2，-D3，可明显诱导Caco-2细胞CaBP-D9k mRNA的表达；PTH可能抵消或者抑制1，25-（OH）2，-D3，促进Caco-2细胞CaBP-D9k mRNA表达的作用。

钙结合蛋白D-9K基因原核表达载体的构建、表达产物纯化及其多克隆抗体的制备

本研究构建了pBV220/CabpD-9k-βhCG表达质粒,在大肠杆菌TG-1中进行表达,得到了CabpD-9k-βhCG融合蛋白。SDS-PAGE分析显示融合蛋白的分子量约为34.5KD。West-ern blot结果表明,融合蛋白与兔抗人hCGIgG特异结合。用纯化的融合蛋白免疫C57BL小鼠,制备了多克隆抗体,这为进一步研究钙结 合蛋白D-9k在着床中的功能和子宫内膜Ca^(2+)信号转导奠定了基础。

重组质粒pPIC9K-pZP3α-hCGβCTP^(109～145)的构建

目的 :为发展多特异性避孕疫苗 ,制备重组抗原pZP3α -hCGβCTP10 9～ 14 5,用基因工程技术构建重组质粒pPIC9K -pZP3α -hCGβCTP10 9～ 14 5.方法 :根据pZP3α全长和hCGβCTP10 9～ 14 5编码的DNA列设计两对引物 ,通过部分重叠聚合酶链式反应 (overlappingPCR) ,扩增出pZP3α -hCGβ -CTP10 9～ 14 5DNA片断 ,克隆到载体质粒pPIC9K中 ,然后导入大肠杆菌DH5α ,用PCR和双酶切反应鉴定重组质粒 ,并用DNA测序仪对重组质粒测序 .结果 :3步PCR扩增出pZP3α -hCGβ -CTP10 9～ 14 5DNA片段 ,插入到载体质粒pPIC9K的克隆位点 ,获得重组pPIC9K -pZP3α -hCGβ -CTP10 9～ 14 5表达质粒 ,测序结果显示插入序列与设计预期完全一致 .结论 :重组质粒pPIC9K -pZP3α -hCGβ -CTP10 9～ 14 5构建成功 ,为表达重组抗原pZP3α -hCGβ -CTP10 9～ 14 5。

新型大容量闪存芯片-K9K2GXXU0M

K9K2GXXU0M是三星公司生产的大容量闪存芯片 ,它的单片容量可高达256M。文中主要介绍了K9K2GXXU0M的特性、管脚功能和操作指令 ,重点说明了K9K2GXXU0M闪存的各种工作状态 。

甲氧滴滴涕对小鼠着床期子宫钙结合蛋白D9k基因表达的影响

目的:研究甲氧滴滴涕(MXC)对小鼠着床期子宫钙结合蛋白D9k(Calbindin-D9k)基因表达的影响.方法:将真孕及假孕小鼠于孕1～3 d(发现阴栓为孕0日)每日给予不同剂量的MXC(0,100,250,500 mg/kg)灌胃,对照组(MXC 0mg/kg)只给芝麻油溶剂.采用RT-PCR检测各组孕鼠子宫Calbindin-D9k基因mRNA的表达;免疫组化染色和图像分析技术检测Calbindin-D9k蛋白表达.结果:①孕鼠经MXC染毒3 d后,250,500 mg/kg MXC组孕鼠子宫Calbindin-D9kmRNA的表达量与对照组相比有显著降低(P<0.05),然而,100 mg/kg MXC组Calbindin-D9k mRNA的表达与对照组相比虽有所减低,但无统计学意义(P>0.05);②Calbindin-D9k蛋白在孕5日主要表达在子宫内膜上皮细胞和腺上皮细胞.与mRNA的表达水平一致,250,500 mg/kg MXC组孕鼠子宫Calbindin-D9k蛋白的表达量与对照组相比显著降低(P<0.05),而100 mg/kg MXC组Calbindin-D9k蛋白的表达与对照组相比无明显差异(P>0.05).结论:MXC可以降低小鼠着床期子宫Calbindin-D9k基因的表达,这可能是其干扰胚胎着床的一个毒性机制.

64M闪速存贮器K9K1208UOM及其应用

K9K1208UOM是SAMSUNG公司生产的大容量非易失性闪速存贮器 ,本文介绍了K9K1208UOM的性能、结构、工作原理 ,并重点介绍了该闪速存储器的使用方法。最后给出了K9K1208UOM的各状态寄存器的定义和命令集。

64M闪速存贮器K9K1208UOM及其应用

文中介绍了SAMSUNG的K9K1208UOM大容量非易失闪速存贮器的性能、结构、工作原理和使用方法。

飞利浦Xenium 9@9k手机 待机王重现

虽然一些国产手机在电视购物节目中频频创造了一个又一个不知所云的待机神话,甚至还出现了永不断电的手机,但在众多手机迷心目中,真正的待机王还是属于飞利浦闻名遐迩的Xenium系列机型。在成功推出Xenium系列9@9w和9@9z两款超长待机时间的直板手机之后,飞利浦又一款同样采用直板设计的Xenium系列新品9@9k出现在我们面前,官方宣称它拥有长达两个月待机时间,让飞利浦手机爱好者很是激动。

雌激素及雌激素受体拮抗剂ⅡCI 182780对大鼠垂体泌乳素GH3细胞Calbindin-D9k表达的影响

目的 探讨17β-雌二醇（17β-estradiol,E2）对大鼠泌乳素腺瘤细胞株GH3细胞Calbindin-D9k（CaBP-9k）表达的影响,并探讨选择性雌激素受体拮抗剂ⅡCI 182780是否能够拮抗雌激素对CaBP-9k表达的诱导作用.方法 以GH3细胞作为垂体泌乳素腺瘤的体外模型,通过免疫荧光法观察CaBP-9k在GH3细胞的表达情况;E2分3个剂量：10-8、10-9、10-10 M对GH3细胞作用24h,分别以RT-PCR法及Western blot法检测CaBP-9k基因和蛋白的表达水平;E2以10-8 M的剂量对GH3细胞作用24 h,同时设ⅡCI 182780拮抗组（10-6M）,被用于研究ER介导的通路对CaBP-9k表达的影响;用免疫共沉淀法检测CaBP-9k与ERα的相互作用关系.结果 在GH3细胞中,CaBP-9k的表达水平随E2给药浓度的增高而增加.当同时给予ⅡCI 182780时,E2诱导CaBP-9k表达的作用被拮抗,其表达水平显著降低.进一步通过免疫共沉淀法证实,在GH3细胞中,CaBP-9k与ERα能够直接结合,E2能够上调2者的相互作用.结论 雌激素可能通过ERα途径诱导GH3细胞CaBP-9k的表达,且CaBP-9k与ERα能够直接结合相互作用.提示CaBP-9k可能参与GH3细胞ER途径相关的生物学效应.

K9光学元件的锥形约束射流抛光流场与加工实验研究

提出了锥形约束射流抛光的加工方法,将原本垂直的细小射流约束成几乎平行于工件表面的环形射流。使用Fluent软件对抛光流场进行数值分析,根据Preston方程建立了材料去除函数模型;并以K9玻璃为加工对象,利用自主设计的锥形约束射流抛光平台进行加工实验。结果表明,锥形约束射流抛光方法法向最大速度比切向最大速度小63.9%,从而减少射流在垂直于工件表面方向的冲击损伤;锥形约束射流抛光后,K9玻璃表面粗糙度在加工区域内呈“V”型分布,其算数平均粗糙度(Ra)值从95.40 nm降至14.52 nm,表面质量得到明显提高。锥形约束射流抛光主要依靠射流沿工件表面的剪切力,不仅有效减小了射流法向冲击力,对射流的约束还减小了射流束的发散;确定的表面去除函数表明该方法有望实现确定性抛光;另外,环形的射流出口提高了射流抛光的效率。

巴戟天多糖对大鼠骨质疏松的作用机制研究

目的:探讨巴戟天多糖对大鼠骨质疏松的疗效。方法:通过将30只大鼠分为正常组、模型组和不同剂量的巴戟天多糖组,进行相关实验研究。结果:与正常组相比,模型组大鼠血清中TNF-α、IL-6水平升高,骨小梁分离度增加,并且骨密度、骨钙、骨磷、ALP含量、废用残根骨体积分数、骨小梁厚度和数量、最大载荷、最大桡度、弹性载荷、刚性系数、CaBp-D9k和CaBp-D28k蛋白表达降低。与模型组相比,巴戟天多糖组的血清TNF-α、IL-6水平降低,骨小梁分离度减少,且骨密度、骨钙、骨磷、ALP含量、废用残根骨体积分数、骨小梁厚度和数量、最大载荷、最大桡度、弹性载荷、刚性系数、CaBp-D9k和CaBp-D28k蛋白表达增加。结论:巴戟天多糖能提高骨密度、骨钙、骨磷和ALP含量,抑制炎症因子分泌,增加CaBp-D9k蛋白表达,改善废用残根咀嚼功能,且对骨质疏松的改善具有积极作用。

高温胁迫下刺参H3K9ac特征及HATs、HDACs的表达

为了探索高温胁迫下刺参(Apostichopus japonicus)H3K9乙酰化水平的变化,研究组蛋白乙酰转移酶(Histone acetyltransferases,HATs)和去乙酰化酶(Histone deacetylases,HDACs)对刺参H3K9乙酰化的影响。本研究通过Western Blot技术研究高温胁迫条件下刺参肠道组织H3K9乙酰化特征,并对刺参基因组中4种组蛋白乙酰转移酶基因ajKAT2B、ajKAT5、ajKAT7、ajKAT8和4种组蛋白去乙酰化酶基因ajSIRT1、ajHDAC1、ajHDAC3、ajHDAC4进行结构解析和系统进化树分析;利用qRT-PCR定量研究在高温胁迫后刺参的8种基因表达量的变化模式。研究表明,通过Western Blot发现,在26℃胁迫下,H3K9ac水平在胁迫48 h后明显上升(P<0.05),在96 h后又迅速下降(P<0.05),表明其在高温胁迫下调控基因转录可能起到重要作用。基因结构解析发现HATs和HDACs含有保守的结构域,通过构建基因系统进化树发现其与物种进化树呈一致的趋势,也表现出功能上的高度保守。qRT-PCR结果表明:4种HATs基因在高温胁迫48 h后均有显著的上升(P<0.05),在胁迫96 h后,ajKAT2B和ajKAT8降低至对照组的表达水平,ajKAT5迅速下降至显著低于对照组水平,ajKAT7稍有降低但仍显著高于对照组。4种HDACs基因中,ajSIRT1在高温胁迫6 h后有明显的上升,在胁迫48 h后显著高于对照组(P<0.05),在胁迫96 h后降低至对照组的表达水平;ajHDAC1在高温胁迫6 h后有明显下降(P<0.05),在胁迫48 h后迅速上升至显著高于对照组水平(P<0.05),然后降低至对照组水平;ajHDAC3和ajHDAC4在高温胁迫6 h后均显著上升(P<0.05),在胁迫48 h后降至对照组水平并继续下降。研究结果表明,刺参H3K9ac乙酰化水平在高温胁迫下表现出明显动态变化,多种HATs和HDACs在mRNA水平上均有明显响应,这可能是导致H3K9ac变化的因素之一。