毛蕊花糖苷抑制Erastin诱导的多巴胺能神经细胞系MN9D细胞铁死亡

背景:近年越来越多的研究证实多巴胺能神经元细胞铁死亡参与了帕金森病的发病,毛蕊花糖苷目前被证实具有抗氧化、抗炎和神经保护作用。目的:探讨毛蕊花糖苷对Erastin诱导的MN9D细胞铁死亡的保护效果及作用机制。方法:以MN9D细胞为研究对象,分为对照组、模型组(20μmol/L Erastin组)、Erastin+1μg/mL毛蕊花糖苷组、Erastin+5μg/mL毛蕊花糖苷组、Erastin+10μg/mL毛蕊花糖苷组。MN9D细胞在CO_(2)恒温培养箱中培养24 h,然后用不同质量浓度毛蕊花糖苷预处理8 h,再加入20μmol/L Erastin诱导24 h后,采用ELISA法检测还原型谷胱甘肽、超氧化物歧化酶、总铁离子、丙二醛水平,免疫组织化学法检测酪氨酸羟化酶的表达,Western blot法检测酪氨酸羟化酶、核因子红细胞-2相关因子2、血红素加氧酶1、谷胱甘肽过氧化物酶4蛋白表达。结果与结论:(1)与对照组相比,模型组还原型谷胱甘肽、超氧化物歧化酶水平明显减少(P<0.05),丙二醛和总铁离子水平明显增加(P<0.05);与模型组相比,毛蕊花糖苷1,5,10μg/mL组还原型谷胱甘肽、超氧化物歧化酶水平明显增加(P<0.05),丙二醛和总铁离子水平明减少(P<0.05);(2)与对照组相比,模型组酪氨酸羟化酶阳性细胞面积明显减少(P<0.05);与模型组相比,毛蕊花糖苷1,5,10μg/mL组酪氨酸羟化酶阳性细胞面积明显增加(P<0.05);(3)与对照组相比,模型组酪氨酸羟化酶、核因子红细胞-2相关因子2、血红素加氧酶1、谷胱甘肽过氧化物酶4的蛋白表达明显减少(P<0.05);与模型组相比,毛蕊花糖苷1,5,10μg/mL组酪氨酸羟化酶、核因子红细胞-2相关因子2、血红素加氧酶1、谷胱甘肽过氧化物酶4的蛋白表达明显增加(P<0.05)。结果提示:毛蕊花糖苷对Erastin诱导的MN9D细胞铁死亡具有明显的抑制作用,其机制可能通过作用于核因子红细胞-2相关因子2/血红素加氧酶1/谷胱甘肽过氧化物酶4通路实现的。

Long non-coding RNA VPS9D1-AS1对乳腺癌细胞恶性行为的影响和机制

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)VPS9D1-AS1对乳腺癌细胞恶性行为的影响和机制。方法收集49例接受手术的乳腺癌患者的乳腺癌组织和癌旁组织,体外培养人正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞系MCF-7、T47D、BT549,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-4695-5p及LncRNA VPS9D1-AS1表达水平;选择MCF-7细胞分别转染si-NC、si-LncRNA VPS9D1-AS1、pcDNA、pcDNA-LncRNA VPS9D1-AS1、miR-NC、miR-4695-5p模拟物、anti-miR-NC+si-LncRNA VPS9D1-AS1、anti-miR-4695-5p+si-LncRNA VPS9D1-AS1,采用RT-qPCR检测MCF-7细胞中LncRNA VPS9D1-AS1、miR-4695-5p表达水平,CCK-8和Transwell实验评估细胞存活率和迁移侵袭数,蛋白质印记法检测IL-6、MMP2、MMP9蛋白水平;双荧光素酶实验证实LncRNA VPS9D1-AS1与miR-4695-5p的靶向关系。结果LncRNA VPS9D1-AS1在乳腺癌组织和MCF-7、T47D、BT549细胞系中表达上调(P<0.05),miR-4695-5p表达下调(P<0.05),MCF-7细胞中LncRNA VPS9D1-AS1、miR-4695-5p变化最明显,选择MCF-7细胞进行后续实验;转染LncRNA VPS9D1-AS1后,MCF-7细胞存活率、细胞迁移和侵袭数以及IL-6、MMP2、MMP9蛋白水平降低(P<0.05);转染miR-4695-5p模拟物后,miR-4695-5p表达升高(P<0.05),MCF-7细胞存活率、细胞迁移和侵袭数及IL-6、MMP2、MMP9蛋白水平降低(P<0.05);转染pcDNA-LncRNA VPS9D1-AS1后,MCF-7细胞中miR-4695-5p表达下降(P<0.05);共转染anti-miR-4695-5p+si-LncRNA VPS9D1-AS1后,MCF-7细胞存活率、迁移数和侵袭数及IL-6、MMP2、MMP9蛋白水平升高(P<0.05)。结论干扰LncRNA VPS9D1-AS1通过靶向上调miR-4695-5p抑制促炎因子IL-6表达,进而抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移及侵袭。

山萘酚调控VPS9D1-AS1/miR-377-3p对人宫颈癌细胞系SiHa增殖和凋亡的影响

目的探讨山萘酚调控长链非编码RNAVPS9D1反义RNA 1(VPS9D1-AS1)/miR-377-3p对人宫颈癌细胞系增殖和凋亡的影响。方法将人宫颈癌细胞系SiHa分为对照组、山萘酚低、中和高剂量组(5、10和20μmol/L山萘酚)、si-NC组(转染si-NC)、si-VPS9D1-AS1组(转染si-VPS9D1-AS1)、山萘酚+pcDNA-VPS9D1-AS1组(20 mg/L山萘酚+转染pcDNA-VPS9D1-AS1)、山萘酚+anti-miR-377-3p组(20 mg/L山萘酚+转染anti-miR-377-3p)。RT-qPCR、MTT法和集落形成实验分别测定VPS9D1-AS1、miR-377-3p表达、细胞活性和集落形成;流式细胞测量术、划痕试验、Transwell小室法和Western blot分别测定细胞凋亡、迁移、侵袭和Bax及Bcl-2表达;荧光素酶活性检测分析VPS9D1-AS1对miR-377-3p的靶向作用。结果与对照相比,低、中和高剂量山萘酚降低SiHa细胞中VPS9D1-AS1表达水平,集落形成数、细胞活性、Bcl-2蛋白表达水平、迁移距离和侵袭细胞数,且提高了miR-377-3p表达水平、凋亡率和Bax蛋白表达水平;作用均呈浓度依赖性(P<0.05)。SiHa细胞中沉默VPS9D1-AS1后,miR-377-3p表达水平、凋亡率和Bax蛋白表达水平高于si-NC组,且集落形成数、Bcl-2蛋白表达水平、细胞活性、迁移距离和侵袭细胞数低于si-NC组(P<0.05)。VPS9D1-AS1能靶向miR-377-3p。山萘酚处理的SiHa增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响能被过表达VPS9D1-AS1或抑制miR-377-3p所逆转。结论山萘酚通过靶向miR-377-3p下调VPS9D1-AS1,减轻宫颈癌细胞系增殖、迁移和侵袭,以及加速凋亡。

褪黑素通过上调泛醌―细胞色素C还原酶核心蛋白1抑制MPP^(+)诱导的MN9D细胞凋亡和线粒体损伤

目的探讨褪黑素(melatonin,MT)在1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium ion,MPP^(+))诱导的帕金森病体外模型中的作用及分子机制。方法将MN9D细胞分为对照组、MPP^(+)组、MT组、治疗组。采用细胞计数试剂盒8检测MT和MPP^(+)对细胞活力的影响;采用线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)评价线粒体功能;Hoechst/PI双染法检测细胞凋亡;通过免疫荧光蛋白质印迹法(Western blotting)检测凋亡相关蛋白[Cleaved-Caspase 3和细胞色素C(cytochrome C,CytC)]以及泛醌―细胞色素C还原酶核心蛋白1(ubiquinol-cytochrome C reductase core protein 1,UQCRC1)蛋白的表达;采用干扰RNA技术沉默MN9D细胞中UQCRC1的表达,然后采用Western blotting检测凋亡相关蛋白表达。结果MT可以减轻MPP^(+)诱导的细胞活力下降(P<0.05);恢复MPP^(+)造成的线粒体膜电位下降(P<0.05);减少MPP^(+)诱导的凋亡细胞数量(P<0.05);抑制凋亡蛋白(CytC和Cleaved-Caspase3)的表达(P<0.05);上调UQCRC1的表达(P<0.05)。沉默UQCRC1后,MT组和治疗组的UQCRC1表达均下降(P<0.05);MT对MPP^(+)诱导细胞凋亡的保护作用下降(P<0.05);凋亡蛋白(CytC和Cleaved-Caspase3)的表达增加(P<0.05)。结论MT对MPP^(+)诱导的多巴胺能神经元损伤具有保护作用,其机制可能是通过上调UQCRC1抑制神经元凋亡。

Forskolin上调MN9D细胞Nurr1的表达及Nurr1过表达对酪氨酸羟化酶的影响

目的寻找能激活MN9D细胞内源性孤儿核受体(Nurrl)表达的信号分子,研究Nurrl表达增高对酪氨酸羟化酶(TH)表达的影响,探讨激活Nurrl表达的信号机制。方法用蛋白激酶A激动剂Forskolin或蛋白激酶C激动剂PMA作用于MN9D细胞,用免疫荧光细胞化学及Westernblot方法检测MN9D细胞内源性Nurrl表达的变化,以及Nurrl表达增加对TH表达的影响。利用PKA信号转导通路的特异性抑制剂H89探讨激活Nurrl表达的信号机制。结果1·从加入Forskolin1h起,直至6h,MN9D细胞Nurrl表达比未加Forskolin组明显增加(P<0·05);Forskolin主要增加MN9D细胞核内Nurrl含量,而细胞浆内Nurrl含量变化不明显;Forskolin作用后MN9D细胞TH表达无明显变化。2·用蛋白激酶A的特异性抑制剂H89预处理后,Forskolin仍具有增加Nurrl表达的作用。结论Forskolin可增加MN9D细胞内源性Nurrl表达及核转位,单纯Nurrl表达及核转位增加不影响MN9D细胞TH的表达,TH表达的激活可能还需要其他特殊的细胞(或神经元)环境或共激活因子的共同作用。Forskolin增加MN9D细胞内源性Nurrl表达及核转位的作用不是主要通过激活PKA信号转导通路完成的。

小鼠Q9D3J8(釉成熟蛋白)基因在磨牙牙胚中的表达

目的:报道一新发现的成熟期成釉细胞特异性表达蛋白:釉成熟蛋白(MASP,m ature am elob last-spec ificprote in)。方法:利用生物信息学工具和基因数据库分析位于人4号染色体4q13.3区域的新基因UNQ689;小鼠Q9D3 J8基因为UNQ689的同源基因。根据小鼠Q9D3 J8的基因序列设计引物,扩增长度为982bp的基因片段:分离小鼠下颌第一磨牙牙胚及周围组织,采用RT-PCR技术观察小鼠Q9D3 J8基因在小鼠下颌磨牙组织中的表达。制备D igoxygen in标记的小鼠Q9D3 J8 cRNA探针,以小鼠下颌第一磨牙及其周围组织为研究标本,采用原位杂交技术对Q9D3 J8基因表达进行组织学定位。结果:利用生物信息学工具和基因数据库,发现am elob lastin基因上游一未报道的新基因UNQ689/Q9D3 J8。在染色体基因图谱位置关系上,UNQ689/Q9D3 J8,am elob lastin和enam elin基因紧密相连。RT-PCR产物的琼脂糖电泳显示Q9D3 J8基因在出生后10d和15d的小鼠磨牙组织中表达明显。原位杂交研究显示Q9D3 J8基因仅在小鼠磨牙成熟期成釉细胞中呈特异性表达。结论:本研究提示UNQ689/Q9D3 J8基因为成熟期成釉细胞特异性表达蛋白基因;在染色体DNA上,UNQ689/Q9D3 J8,am elob lastin和enam elin共同组成一个成釉细胞特异性表达蛋白基因串。根据UNQ689/Q9D3 J8基因在组织中的分布和表达,我们暂时将UNQ689/Q9D3 J8基因命名为MASP(釉成熟蛋白)基因。

人DAT基因的克隆及其对MN9D细胞多巴胺代谢的影响

目的:探讨人多巴胺(DA)转运体(dopamine transporter,DAT)基因过表达对单胺类递质代谢的效应。方法:从人胎脑中提取总RNA,RT-PCR方法扩增DAT cDNA片段,重组于pGEM-T-EASY载体中并进行全序列测定。重组真核表达载体pLNCX2-DAT转染MN9D细胞,Western Blot检测DAT的表达,高压液相(high-performance liquid chromatography,HPLC)法检测细胞内外DA含量的变化。结果:RT-PCR方法扩增得到1981bp的cDNA片段,测序结果表明所得到的片段与DAT序列完全一致;Westein Blot证实转染后的MN9D细胞(实验组)内DAT基因表达明显高于对照组(P<0.05);HPLC结果表明实验组中细胞内外的DA含量明显高于对照组(P<0.05)。结论:DAT高表达明显促进DA的循环和利用,为帕金森病的基因治疗提供了理论依据。

α-突触核蛋白各结构域与MN9D细胞线粒体的关系

目的探讨α-突触核蛋白（α-synuclein）各结构域与MN9D细胞线粒体的关系。方法用PCR方法获得α-synuclein/1~65（N），α-synuclein/61~95（A）及α-synuclein/96~140（C）基因片段，克隆入真核表达质粒pLNCX2，经测序正确后以脂质体转染PT-67细胞，挑取单克隆并扩增，收集上清感染MN9D细胞，分别用Real Time PCR检测细胞基因表达水平，免疫组织化学染色检测蛋白表达，激光扫描共焦显微镜检测蛋白与线粒体共定位，流式细胞术检测细胞状态及线粒体膜电位状态。结果成功构建了pLNCX2/N、pLNCX2/NAC及pLNCX2/C基因片段的重组真核表达质粒，获得了可稳定表达α-synuclein各基因片段的MN9D细胞株。通过激光扫描共焦显微镜观察，可见α-synuclein/N端与线粒体存在共定位关系；α-synuclein/NAC主要在核内聚集表达；α-synuclein/C端在胞质和胞核内均有表达。JC1染色流式细胞术检测显示，过表达α-synuclein/N实验组细胞线粒体膜电位降低。结论α-synuclein的N端可能定位于线粒体，并参与调节线粒体功能；α-synuclein/NAC虽具有疏水性但却能穿过核膜，聚集在核仁周围；α-synuclein的C端定位于胞质和核内可能参与多种细胞功能。

Nurr1在MN9D细胞中的过表达及其对酪氨酸羟化酶的影响

目的 :观察MN9D细胞中Nurr1的表达和分布及Nurr1过表达对酪氨酸羟化酶的影响。 方法 :应用高压液相色谱、免疫细胞化学、转基因、Westernblot和Northernblot等方法检测了MN9D细胞中多巴胺及其代谢物的水平和Nurr1蛋白在细胞中的分布 ,建立了过表达Nurr1的细胞株并观察了Nurr1过表达对TH基因的影响。结果 :MN9D细胞裂解液中含有大量多巴胺及其代谢物 ;Nurr1蛋白主要分布在MN9D细胞的胞质中 ,尤以核周最多 ;MN9D细胞中有Nurr1的mRNA存在和蛋白质的表达 ;过表达Nurr1的MN9D细胞A1株酪氨酸羟化酶表达增高。结论 :Nurr1与多巴胺能神经元发育有关 ,有可能用于帕金森病的基因治疗。

稳定表达GDNF基因的MN9D细胞可保护多巴胺能神经元

目的：建立一种可同时分泌多巴胺（DA）和GDNF的工程细胞，并研究其在帕金森病（PD）基因治疗中的可能作用。方法：克隆携带Kozak序列的GDNFcDNA，转染至可分泌DA的MN9D细胞系，将此工程细胞和大鼠原代多巴胶能神经元共培养，免疫组化检测DA能神经元。结果：发现该工程细胞可防止DA能神经元退变死亡，并有助于DA能神经元抵抗MPP+的毒性损伤。结论：本文首次将PD防治兼顾策略结合起来构建MN9D工程细胞，结果表明其在PD的基因治疗中可能具有重要的应用价值。

白介素-1β对MN9D细胞Nurr1及酪氨酸羟化酶表达的影响

利用具有未成熟特性的多巴胺(DA)合成细胞系MN9D,观察白介素-1beta(IL-1β)对MN9D细胞内源性孤儿核受体Nurr1表达的作用,并研究Nurr1表达增高对MN9D细胞酪氨酸羟化酶(TH)表达的影响,探讨Nurr1调控DA能神经元发育的机制。用20 ng/ml的IL-1β作用于MN9D细胞,于IL-1β作用的2、4、6 h用相差显微镜观察细胞形态的变化,并采用免疫细胞化学染色及Western blot方法检测IL-1β作用后MN9D细胞内源性Nurr1蛋白表达的变化,以及Nurr1表达变化对MN9D细胞TH表达的影响。结果显示:经20 ng/ml的IL-1β作用2、4、6 h,MN9D细胞的形态与未经IL-1β作用的细胞相比没有明显改变。从加入IL-1β2 h起,直至6 h,MN9D细胞Nurr1免疫荧光染色强度比未加IL-1β作用的正常对照组细胞明显增强,但此时MN9D细胞中TH阳性细胞的百分比与正常对照组相比没有明显改变(P>0.05)。Western blot结果显示:20 ng/ml的IL-1β作用2、4、6 h,MN9D细胞Nurr1蛋白表达分别为233%、232%和254%,经统计学检验,与正常对照组相比具有显著性差异(P<0.05)。而IL-1β作用2、4、6 h,MN9D细胞TH蛋白的表达分别为97%、107%和105%,但经统计学检验,与正常对照组相比没有显著性差异(P>0.05)。本研究结果表明,IL-1β在2～6 h可迅速明显激活MN9D细胞内源性Nurr1的表达,但此时单纯Nurr1表达增加并不影响MN9D细胞TH的表达;TH的表达激活可能还需要除Nurr1外的其它特殊的细胞(或神经元)的环境或因子的共同作用。

褐藻多糖硫酸酯对1-甲基4-苯基吡啶离子损伤的MN9D细胞内氧化应激及组织蛋白酶D-单克隆凋亡相关蛋白的作用

目的探讨褐藻多糖硫酸酯(FUC)对1-甲基4-苯基吡啶离子(MPP+)损伤的MN9D细胞内氧化应激及组织蛋白酶D(CatD)单克隆凋亡相关蛋白的作用。方法采用100 mol/L MPP+损伤MN9D细胞制备帕金森病(PD)细胞模型。观察FUC预处理后PD细胞模型的细胞存活率。采用荧光检测法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽还原酶(GSH)抑制率。采用Western blot法检测CatD、自噬相关蛋白(LC3-Ⅱ)及Bax蛋白表达。结果与MPP^+组比较,1×10^(-6)、10^(-5)、10^(-4)mol/L FUC预处理细胞存活率均显著升高(均P<0.01)。与对照组比较,MPP^+组SOD、GSH抑制率显著降低(均P<0.05)。与MPP+组比较,FUC预保护组及SEL预保护组SOD、GSH抑制率显著升高(均P<0.01)。FUC预保护组与SEL预保护组SOD、GSH抑制率比较差异无统计学意义。MPP^+组CatD蛋白、LC3-Ⅱ蛋白及Bax蛋白水平表达显著高于对照组(均P<0.001)。FUC预保护组、SEL预保护组及CatD抑制剂组CatD蛋白、LC3-Ⅱ蛋白及Bax蛋白水平显著低于MPP+组(均P<0.001)。FUC预保护组、SEL预保护组及CatD抑制剂组CatD蛋白、LC3-Ⅱ蛋白及Bax蛋白水平差异无统计学意义。结论 FUC对PD细胞模型有保护作用,其机制可能为保护细胞溶酶体,抑制CatDBax的表达,抗氧化应激,抑制细胞凋亡。

帕金森病基因治疗的理论:VMAT_2基因的表达及其对MN9D细胞多巴胺代谢的影响

目的:获得人Ⅱ型囊泡单胺转运体(vesicularmonoaminetransporter-2,VMAT2)基因,转染至MN9D细胞,通过检测细胞内外单胺类递质含量的变化评价VMAT2基因促进单胺类递质循环利用的效应。方法:从人胎脑中提取总RNA,RT-PCR方法扩增目的cDNA片段并将其重组于pGEM-Easy-T载体中,进行全序列测定。重组真核表达载体pBK-RSV-VMAT2,转染MN9D细胞,免疫细胞化学检测VMAT2的表达,HPLC检测细胞内外单胺类递质含量的变化。结果:RT-PCR扩增到1637bp的带有Kozak序列的cDNA片段。原位杂交证实pAAV-VMAT2能在COS7细胞表达;免疫组化证实转基因的MN9D细胞(实验组)VMAT2免疫着色明显高于对照组。HPLC结果表明实验组中细胞内外的多巴胺含量分别升高至(227.2±20.8)%和(302.6±15.7)%(P<0.01),而细胞外HVA、DOPAC分别降低至(48.1±5.3)%和(55.7±4.9)%(P<0.05),细胞内HVA,DOPAC分别升高至(332.1±28.2)%和(1176.8±82.5)%(P<0.01)。结论:克隆了VMAT2cDNA片断,可在真核细胞中表达。该基因的过表达可促进多巴胺的循环利用,有望用于帕金森病的基因治疗。

MN9D多巴胺能细胞损伤模型的建立

目的建立离体多巴胺(dopamin,DA)能神经细胞系MN9D细胞损伤模型。方法离体细胞培养条件下,于培养液中加入不同浓度6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)作用于MN9D细胞30 min。24 h后,MTT比色法检测MN9D细胞的存活率、Hoechst 33258核染色和流式细胞仪检测MN9D细胞的凋亡变化。结果6-OHDA以浓度依赖性的方式引起MN9D细胞的凋亡,导致细胞存活率降低。200μmol/L浓度的6-OH-DA作用30 min、培养24 h后,MN9D细胞的存活率降低至68.8%左右,凋亡率增高至约37.8%。结论6-OH-DA能够引起MN9D细胞的存活率降低,而凋亡率增高,产生类似帕金森病时的DA能神经细胞损伤的表现。

稳定表达GDNF的MN9D/GDNF工程细胞可明显改善帕金森病模型大鼠的旋转行为

目的：观察稳定表达ＧＤＮＦ的ＭＮ９Ｄ／ＧＤＮＦ工程细胞对６羟基多巴胺损毁所致帕金森病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｄｉｓｅａｓｅ，ＰＤ）模型大鼠旋转行为有无治疗作用。方法：用６羟基多巴胺损毁大鼠单侧中脑黑质多巴胺能神经元、２周后腹腔注射阿朴吗啡诱导大鼠出现偏侧旋转行为的方法制备ＰＤ模型大鼠。通过脑立体定位技术，将稳定表达ＧＤＮＦ的ＭＮ９Ｄ／ＧＤＮＦ工程细胞注入模型鼠损毁侧纹状体，１周后观察阿朴吗啡诱导的旋转行为有无改善。结果：稳定表达ＧＤＮＦ的ＭＮ９Ｄ／ＧＤＮＦ工程细胞可明显降低ＰＤ模型大鼠的异常旋转行为，治疗作用达１０周之久。结论：运用ｅｘｖｉｖｏ方法和防治兼顾的策略对于ＰＤ基因治疗的基础研究及临床应用具有重要意义。

褐藻多糖硫酸酯对MPP^+损伤的MN9D细胞氧化应激及凋亡的保护作用

目的探讨褐藻多糖硫酸酯(FUC)对帕金森病(PD)细胞模型的保护作用及机制。方法采用100μmol/L MPP+损伤的MN9D细胞制作PD模型,用MTS检测FUC预处理后PD细胞模型的细胞存活率。荧光检测法测定细胞内活性氧(ROS),荧光素酶法检测细胞内Caspase-3的活性变化,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax及Bcl-2的变化。结果 FUC 100μmol/L作用24 h明显增加了MPP+损伤的MN9D细胞存活率,差异有高度统计学意义(P<0.01);FUC预保护明显降低了MPP+损伤3 h的MN9D细胞内ROS活性及6 h时Caspase-3的表达,差异有高度统计学意义(P<0.01);FUC、司来吉兰预保护后MN9D细胞凋亡相关蛋白Bax表达明显下降,而Bcl-2表达明显增加,差异有高度统计学意义(P<0.01)。结论褐藻多糖硫酸酯可能通过抗氧化、降低Caspase-3表达、抑制细胞凋亡来保护PD细胞模型。

效应性T细胞促进MN9D细胞的凋亡

目的:利用多巴胺合成细胞系MN9D,观察活化的效应性T(effector T,Teff)细胞对MN9D细胞活力和凋亡的影响,探讨Teff细胞对MN9D细胞的损伤作用。方法:免疫磁珠分选获得Teff细胞,经体外活化后,与MN9D细胞株共培养,然后用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测MN9D细胞的活性;TUNEL和Hoechst染色观察MN9D细胞的凋亡及细胞数目的变化;Western Blot法检测MN9D细胞中活化的caspase-3和caspase-9的表达。结果 :经体外活化的Teff细胞与MN9D细胞共培养后,MN9D细胞的活性明显降低,MN9D细胞的数目显著降低、凋亡率明显增加;且MN9D细胞中促凋亡酶caspase-3和caspase-9的活化水平升高。结论:活化的Teff细胞促进了MN9D细胞的凋亡,具有损伤作用。

低温钢06Ni9D大截面锻件工艺研发

对低温钢06Ni9D大截面锻件进行工艺研发,通过合理的回火温度和保温时间,促进回转奥氏体的生成与弥散,提高低温稳定性问题,各项性能指标超过钢板的性能。

基于SuperMap 9D技术修补模型中水体面的构建方法

倾斜摄影三维模型技术成为测绘数字化过程中不可或缺的重要环节,而使用APhotoscan、Smart3D capture等相关软件,在有无控制点的情况下建立模型时,数据本身或程序并行算法会遇到一些问题。为了达到良好的应用效果,基于SuperMapidesktop9D技术在osjb数据模型中,使用层面上做一些覆盖性操作达到修复水体漏洞的效果,从而在一定程度上为倾斜侧影三维模型修补水体面提供了技术参考和方法。

基于CC3200及MT9D111的嵌入式无线图像采集系统设计

基于CC3200无线Wi Fi微控制器及MT9D111摄像头设计了嵌入式无线图像采集系统,给出了系统的总体设计思路;对系统的硬件组成进行了分析,并对各个功能模块进行了简单说明;还对系统的软件设计进行了详细的介绍,给出了各模块的初始化及系统总体运行流程;最后给出系统测试结果,表明此系统能够稳定运行。