TNBS/乙醇溃疡性结肠炎大鼠模型差异表达 miRNA 与 mRNA 共表达分析

目的 研究2,4,6-三硝基苯磺酸（ TNBS）/乙醇溃疡性结肠炎（ UC）大鼠中,UC相关miRNA的调控作用,即miRNA与mRNA互作关系. 方法 用TNBS/乙醇灌肠,诱导UC大鼠模型.经过造模与14 d生理盐水灌胃后,解剖处死. 留取正常组与模型组大鼠相应的结肠组织. 通过大体及镜下观察,验证造模效果. 同时对相应结肠组织进行miRNA芯片检测,根据芯片结果及相关文献报道,筛选出与UC发病密切相关的miRNA并对其进行RT-PCR验证. 另外,利用miRWalk数据库对差异miRNA的靶基因进行预测. 为了验证预测结果与实际情况的相符度,又同步进行了mRNA水平的表达谱芯片实验,筛选出与差异miRNA确有互作作用的mRNA. 为了更好地说明miRNA与mRNA的互作关系,又利用David数据库对靶基因进行注释,最终形成miRNA与mRNA共表达网络. 结果模型组大鼠结肠大体及镜下表现均符合UC 的发病特征. 通过 miRNA芯片筛选出了68 个差异miRNA[倍数变化（fold change）〉2, P〈0.05,表达值（expression mean）〉7],结合相关文献报道,筛选出6个与UC发病密切相关的miRNA. 同时对这6个miRNA进行了RT-PCR实验,结果提示,与正常组相比,4个差异miRNA（ miR-146a-5p、miR-146b-5p、miR-126a-3p和miR-21-5p）表达明显上调（ P〈0.01,P〈0.05）,2个差异miRNA（miR-200b-3p、miR-145-5p）表达明显下调（P〈0.01）. 结合miRWalk数据库对这6个差异miRNA的靶基因预测结果和表达谱芯片结果,本研究发现IL-6、Ccl5、Mapk3、Smad7这4个mRNA与上述6个miRNA有互作关系. 最终通过David数据库对这种互作关系进行注释,以阐明其在UC发病中的重要作用. 结论 一个miRNA可以调控多条信号通路,而一条信号通路又受到多个miRNA的调控. 如果仅仅单纯抑制某条信号通路,可能并不能从根本上抑制炎症的发生. 而从其上游出发,研究miRNA作用,阐明相互关系,并调控mRNA的作用,可能可以从根本上逆转疾病的进程.

乙醇对脑缺血再灌注大鼠海马凋亡诱导因子和胱天蛋白酶-3表达的影响

目的探讨乙醇对脑缺血再灌注大鼠海马区凋亡诱导因子（apoptosis inducing factor，AIF）和胱天蛋白酶．3表达的影响。方法68只健康成年雄性Wistar大鼠，随机分为假手术组（4只）、生理盐水对照组以及小剂量（1．0g／kg）、中剂量（1．5g／kg）和大剂量（2．0g／kg）乙醇组，生理盐水对照组和各剂量乙醇组再分别按干预时间点分为缺血再灌注0h、1h、2h和3h亚组（每组4只）。采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。各剂量乙醇组和生理盐水对照组在缺血2h再灌注0h、1h、2h和3h时腹腔注射相应剂量乙醇或等体积生理盐水。脑缺血2h再灌注24h时采用行为学评分评价大鼠神经功能缺损。采用免疫组织化学法检测脑缺血2h再灌注24h时缺血侧海马区AIF和胱天蛋白酶．3表达。结果行为学评价显示，假手术组神经功能缺损评分均为0分；不同剂量乙醇组神经功能缺损评分均显著性低于相同干预时间点的生理盐水对照组（P均=0．000），且不同剂量乙醇组相同干预时间点之间均存在显著性差异（P均=0．000），大剂量乙醇组均最低；相同剂量乙醇组不同干预时间点之间无显著性差异（P均〉0．05）。免疫组织化学显示，假手术组AIF和胱天蛋白酶-3阳性细胞数量分别为（17．21±2．86）个和（20．60±4．39）个，均显著性少于缺血再灌注0h时的生理盐水对照组和各剂量乙醇组（P均=0．000）；不同剂量乙醇组海马区AIF和胱天蛋白酶-3阳性细胞数量均显著性少于相同干预时间点的生理盐水对照组（P均=0．000），且不同剂量乙醇组相同干预时间点之间均存在显著性差异（P均=0．000），大剂量乙醇组均最少；相同剂量乙醇组不同干预时间点之间均无显著性差异（P均〉0．05）。结论乙醇对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织具有保护作用，其机制可能与抑制AIF和胱天蛋白酶-3表达有关。