抑制HIF-1α表达对糖尿病小鼠RhoA/ROCK信号转导通路的影响

目的探讨抑制缺氧诱导因子1(HIF-1)α表达对糖尿病小鼠RhoA/Rho相关卷曲螺旋形成的蛋白激酶(ROCK)信号转导通路的影响。方法糖尿病小鼠33只随机数字表法分为3组-模型组、NC组与抑制组,每组各11只小鼠。NC组与抑制组在玻璃体腔分别注射含siRNA NC序列、HIF-1α序列和转染试剂的混合液,模型组注射等剂量的磷酸盐缓冲液。建模后12周,测定3组小鼠的血糖水平、体重、心脏重量、心脏重量/体重比;采用黄嘌呤氧化法测超氧化物歧化酶(SOD)含量,采用硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量;用Image-Pro图像分析软件计算RhoA、ROCK蛋白的相对表达量。结果建模后12周,抑制组小鼠的血糖水平、体重、心脏重量、心脏重量/体重比、SOD含量、MDA含量、RhoA、ROCK蛋白相对表达量分别为(16.83±1.22)mmol/L、(30.11±2.13)g、(0.09±0.02)g、(2.99±0.12)mg/g、(294.29±12.40)U/mgprot、(1.30±0.22)nmol/mgprot、(0.77±0.09)、(0.87±0.10)。NC组分别为(16.29±1.44)mmol/L、(23.98±1.11)g、(0.12±0.01)g、(5.00±0.14)mg/g、(176.88±14.85)U/mgprot、(2.70±0.42)nmol/mgprot、(2.39±0.15)、(2.48±0.17)。模型组分别为(8.22±0.33)mmol/L、(23.10±0.32)g、(0.12±0.02)g、(5.19±0.26)mg/g、(178.09±16.02)U/mgprot、(2.68±0.87)nmol/mgprot、(2.37±0.16)、(2.45±0.22)。抑制组小鼠的血糖水平、心脏重量、心脏重量/体重比、MDA含量、RhoA、ROCK蛋白相对表达水平低于NC组与模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。抑制组小鼠体重、血清SOD含量高于NC组与模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。NC组与模型组各指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论抑制HIF-1α表达在糖尿病小鼠的应用能抑制RhoA/ROCK信号转导通路的激活,降低血清MDA表达,促进SOD的释放,从而降低糖尿病小鼠的血糖水平与心脏重量、心脏重量/体重比,促进恢复正常体重。

RhoA/ROCK信号转导通路介导高糖诱导的大鼠肝星状细胞的增殖和胶原合成

目的探讨RhoA/ROCK信号转导通路在高糖诱导大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)增殖和胶原合成中的作用。方法将SD大鼠肝星状细胞株HSC-T6在1640培养基中培养24 h,实验设置对照组(含5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(含25 mmol/L葡萄糖)、高渗透压组(5.5 mmol/L葡萄糖+19.5 mmol/L甘露醇)、高糖+法舒地尔(12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L)组。采用MTS法检测细胞增殖率;采用羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)试剂盒测定细胞上清中Hyp水平;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQPCR)测定Ⅰ和Ⅲ型前胶原mRNA的相对表达量;采用Western blot检测肌球蛋白磷酸酶靶亚基1(myosin phosphatase target subunit 1,MYPT1)、细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinases,JNK)和p38MAPK的磷酸化和总体水平。结果与对照组相比,高糖组MYPT1(0.270±0.007 vs 0.090±0.008,P<0.001)、ERK(0.851±0.027 vs 0.175±0.038,P<0.001)、JNK(0.869±0.037 vs 0.488±0.022,P<0.001)和p38MAPK(0.498±0.020 vs 0.144±0.011,P<0.001)磷酸化水平显著增高,HSC增殖率(A值)(2.372±0.098 vs 1.588±0.087,P<0.001)和Hyp水平(27.924±1.069 vs 17.643±0.112,P<0.001)显著增高,Ⅰ型前胶原mRNA(2.783±0.167 vs 1.004±0.008,P<0.001)和Ⅲ型前胶原mRNA(4.958±0.143 vs 1.098±0.014,P<0.001)表达显著上调。与高糖组相比,高糖+法舒地尔(25μmol/L、50μmol/L)组MYPT1(0.110±0.007,P<0.001;0.101±0.006,P<0.001)、ERK(0.473±0.025,P<0.001;0.223±0.031,P<0.001)、JNK(0.688±0.024,P=0.019;0.576±0.035,P<0.001)和p38MAPK(0.350±0.021,P=0.012;0.305±0.015,P=0.019)磷酸化水平显著降低,HSC增殖率(A值)(1.819±0.104,P<0.001;1.613±0.103,P<0.001)和Hyp水平(21.430±0.714,P<0.001;18.574±0.825,P<0.001)显著降低,Ⅰ型前胶原mRNA(1.580±0.154,P<0.001;1.167±0.157,P<0.001)和Ⅲ型前胶原mRNA(3.166±0.073,P<0.001;2.524±0.085,P<0.001)表达显著下调。高糖+法舒地尔12.5μmol/L组MYPT1、ERK、JNK和p38MAPK磷酸化水平及Hcy水平均显著高于高糖+法舒地尔25μmol/L组和高糖+法舒地尔50μmol/L组(P均<0.001),高糖+法舒地尔25μmol/L组显著高于高糖+法舒地尔50μmol/L组(P均<0.001)。结论RhoA/ROCK信号转导通路可能通过激活下游的MAPKs介导了高糖诱导的肝HSC的增殖和胶原合成,ROCK可能是防治糖尿病肝纤维化的新靶点。

人参皂苷通过JAK激酶/信号转导和转录激活因子信号通路抑制慢性心衰大鼠心肌自噬的机制研究

目的:探讨人参皂苷通过Janus激酶/信号转导和转录激活因子(JAK/STAT)信号通路抑制慢性心力心衰(CHF)大鼠心肌自噬的机制研究。方法:选取65只雄性SD大鼠,随机分为对照组、模型组、人参皂苷Rb1低、中、高剂量组,建立大鼠CHF模型,排除死亡大鼠后,每组12只。对照组、模型组以10 ml/kg蒸馏水灌胃,其余三组分别以30、50、70 mg/kg人参皂苷Rb1灌胃,1次/d,连续给药8周。以超声仪器测各组大鼠心功能及血流动力学,以苏木精-伊红(HE)染色和TUNEL法分别测各组大鼠观察心肌组织结构及细胞凋亡情况,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测心肌组织中JAK/STAT通路及自噬效应蛋白(Beclin1)、微管相关蛋白1轻链(LC3-Ⅱ)蛋白表达。结果:模型组与对照组比较,心功能、血流动力学下降,人参皂苷Rb1低、中、高剂量组与模型组比较,心功能、血流动力学提升(均P<0.05)。模型组心肌组织结构不完整,细胞肿胀变形,界限模糊,间隙增大,可见脱落的细胞核,并有少量炎性细胞浸润。人参皂苷Rb1低、中、高剂量组心肌结构、细胞界限和大小及排列形态逐渐改善,好于模型组。对照组、模型组、人参皂苷Rb1低、中、高剂量组凋亡率依次为(3.12±1.01)%、(34.04±8.76)%、(28.06±7.24)%、(18.05±5.13)%、(15.17±4.52)%(均P<0.05)。模型组与对照组比较,心肌组织JAK1、STAT3、Beclin1、LC3-Ⅱ蛋白表达升高,人参皂苷Rb1低、中、高剂量组与模型组比较,心肌组织JAK1、STAT3、Beclin1、LC3-Ⅱ蛋白表达依次降低(均P<0.05)。结论:人参皂苷Rb1可保护CHF大鼠心功能,调节心肌细胞自噬,其机制可能与抑制JAK/STAT信号通路有关。

白藜芦醇通过阻断JAK激酶2/信号转导及转录活化因子3信号通路抑制食管癌细胞增殖和迁移并诱导其凋亡的作用研究

目的探究白藜芦醇对人食管癌细胞增殖、凋亡、迁移及JAK激酶2/信号转导及转录活化因子3(JAK2/STAT3)信号通路的调控作用。方法2021年7月至2022年7月,体外培养人食管癌OE19细胞,将细胞分为对照组(不做干预)和实验组(15、30、60、90和120μmol/L白藜芦醇干预24 h)进行预实验,根据细胞计数试剂盒(CCK-8)预实验结果,筛选有显著作用且细胞活力高于50%的30、60、90μmol/L白藜芦醇进行后续的实验,后续实验又分为对照组(不做干预)、30、60、90μmol/L白藜芦醇组(30、60和90μmol/L白藜芦醇)和30μmol/L白藜芦醇+抑制剂组(30μmol/L白藜芦醇+10μmol/L JAK2/STAT3通路抑制剂AG490),干预24 h。用5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)、Hoechst 33258染色、Transwell、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及蛋白质印迹法对细胞增殖率、凋亡情况、迁移数及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、胱天蛋白酶-3(caspase-3)和JAK2/STAT3相关因子表达水平进行分析。结果不同浓度实验组的细胞活力与对照组相比逐渐降低,其中30、60、90和120μmol/L白藜芦醇差异有统计学意义(P<0.05),但120μmol/L白藜芦醇组细胞活力低于50%,所以本研究选择30、60和90μmol/L白藜芦醇继续后续实验;60μmol/L白藜芦醇组细胞增殖率(41.49±5.06)%、迁移细胞数(36.67±2.52)个显著低于对照组(53.34±1.99)%、(58.00±2.00)个,凋亡细胞数(7.67±1.53)个显著高于对照组(2.50±0.71)个,且cyclin D1、p-JAK2和p-STAT3表达量也低于对照组,caspase-3 mRNA和蛋白表达水平高于对照组(P<0.05);30、90μmol/L白藜芦醇组以上各指标与对照组比较同样如此。与30μmol/L白藜芦醇组相比,30μmol/L白藜芦醇+抑制剂组以上各指标变化更显著(P<0.05)。结论白藜芦醇可通过抑制JAK2/STAT3通路抑制人食管癌OE19细胞的增殖和迁移并诱导凋亡。

吗啡预处理对心力衰竭大鼠p38MAPK信号转导通路的影响

目的 探讨吗啡预处理对心力衰竭大鼠p38MAPK信号转导通路的影响。方法 选取30只体重200~220 g的SD健康SPF级实验大鼠,适应环境1周后,用盐酸阿霉素(ADR)腹腔注射造模心力衰竭(除对照组给生理盐水外,其余按1.5 ml/kg注射,1次/周,共6周,8 d后左心室短轴缩短率(LVFS)<30%表示模型建立成功)。40只大鼠中,20只造模,10只为正常对照,第8周将造模成功的20只大鼠随机分为模型组和吗啡预处理组,每组各10只,正常对照组和模型组不干预,吗啡预处理组灌注吗啡0.050 mg/kg,输注5 min,停5 min,重复3次。实验完成后,处死大鼠并进行腹腔静脉采血,随后通过离心分离上清液,用ELISA方法测定血浆中的BNP、ET-1和IL-6含量;同时,使用生理记录仪测量左心室的收缩末压(LVSP)、舒张末压(LVEDP),以及其内压的最大上升(+dp/dtmax)和下降(-dp/dtmax)速度;取大鼠心肌组织进行Western blot检测p38MAPK、p-p38MAPK蛋白表达;用RT-PCR检测p38MAPK mRNA的表达。结果 模型组和吗啡预处理组的左心室收缩压(LVSP)明显低于对照组,而左心室舒张末期压力(LVEDP)则高于对照组。左心室内压的最大上升速率(+dp/dtmax)在这两个组中均低于对照组,最大下降速率(-dp/dtmax)则高于对照组。吗啡预处理组的这些指标介于模型组和对照组之间,所有差异均具有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,模型组、吗啡预处理组血清BNP、ET-1和IL-6含量均升高,与模型组比较,吗啡预处理组上述指标降低(P<0.05)。与对照组相比,模型组与吗啡预处理组大鼠心肌组织中p38MAPK、p-p38MAPK的表达显著升高,吗啡预处理组表达介于两组之间,差异有统计学意义(P<0.05)。mRNA表达实验表明,模型组与吗啡处理组的心肌p38MAPK mRNA表达高于正常对照组,模型组高于其他两组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 本研究成功构建了心力衰竭大鼠模型。结果显示,吗啡预处理对部分心功能指标有显著改善,同时能降低血清中相关因子的浓度,并调节心肌组织中的关键蛋白和mRNA表达。这些发现表明,吗啡可能通过影响p38MAPK信号传导通路来发挥保护作用。

神经肌肉电刺激通过调控白细胞介素6/信号转导子及转录激活子3信号通路促进脊髓损伤后小鼠运动功能恢复

目的观察神经肌肉电刺激(NMES)对脊髓损伤后小鼠白细胞介素6(IL-6)/STAT3信号通路的影响,探讨其对运动功能恢复的机制。方法选取SPF级小鼠72只随机分成假手术(sham)组、脊髓损伤组(SCI)和NMES组。利用BMS评分、斜坡实验与电生理(EMG)评估小鼠脊髓损伤后肢体运动恢复情况。Western blotting和Real-time PCR检测各组小鼠脊髓组织中相关炎症因子、IL-6/STAT3信号通路与胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。HE染色观察各组小鼠脊髓形态结构。结果NMES组BMS评分和小鼠斜坡实验均高于SCI组(P<0.05);NMES组小鼠运动诱发电位(MEP)最大振幅高于SCI组(P<0.05);NMES组脊髓组织TNF-α、IL-12A与GFAP表达量均低于SCI组(P<0.05),TGF-β、IL-10与BDNF表达量均高于SCI组(P<0.05);与SCI组相比,NMES组小鼠脊髓空洞较少,脊髓形态修复较好;与SCI组相比,NMES组IL-6/STAT3信号通路蛋白表达均低于SCI组(P<0.05)。结论神经肌肉电刺激通过抑制IL-6/STAT3信号通路发挥抗炎作用,从而促进脊髓损伤后小鼠后肢运动功能的恢复。

电针内关穴通过抑制RhoA/ROCK信号通路活化减轻脂多糖诱导脓毒症小鼠心功能障碍

【目的】观察电针内关穴减轻脂多糖(LPS)诱导的脓毒症模型小鼠心功能障碍的作用机制。【方法】将48只雄性C57BL/6小鼠随机分为4组,即正常对照组、生理盐水+电针组、脓毒症模型组、脓毒症+电针组。脓毒症模型组及脓毒症+电针组小鼠给予腹腔注射LPS(5 mg/kg)诱导脓毒症心肌损伤模型。LPS注射后立即对小鼠实施电针治疗。于LPS处理后6 h,采用彩色超声心动图监测小鼠左心室短轴收缩末期内径(LVIDs)和短轴缩短率(FS)。酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测心脏组织中Rho激酶(ROCK)1、ROCK2蛋白表达水平及肌球蛋白磷酸酶底物1(MYPT1)、肌球蛋白轻链2(MLC2)磷酸化水平。【结果】与正常对照组比较,脓毒症模型组小鼠LVIDs增加(P<0.05),FS下降(P<0.05),血清中TNF-α、IL-6含量均升高(P<0.001),心脏组织MYPT1磷酸化水平显著升高(P<0.05);与脓毒症模型组比较,脓毒症+电针组LVIDs降低(P<0.05),FS升高(P<0.05),血清中TNF-α、IL-6含量下降(P<0.05或P<0.01),MYPT1磷酸化水平显著降低(P<0.05)。各组ROCK1、ROCK2蛋白表达水平以及MLC2的磷酸化水平无显著性差异(P>0.05)。【结论】电针内关穴可能通过抑制心脏组织RhoA/ROCK信号通路活化,减轻脓毒症模型小鼠全身和局部炎性反应水平,改善心功能,产生心肌保护效应。

化瘀通络灸对血管性痴呆大鼠RhoA/ROCK轴突生长抑制性信号通路相关蛋白表达的影响

目的:观察化瘀通络灸对血管性痴呆大鼠Ras同源物基因组成员A(Ras homolog gene family member A,RhoA)/Rho激酶(Rho associated protein kinase, ROCK)轴突生长抑制性信号通路相关蛋白的影响,探讨其治疗血管性痴呆的机制。方法:使用Morris水迷宫筛除贴壁、原地旋转或溺水的Wistar大鼠,将符合条件大鼠分为假手术组、造模组。假手术组暴露大鼠颈总动脉;造模组用改良的双侧颈总动脉永久结扎术制备血管性痴呆大鼠模型,术后3 d用水迷宫对大鼠进行模型鉴定,将合格者随机分为模型组、艾灸组和西药组。于鉴定次日对大鼠进行治疗,艾灸组悬灸百会、大椎、神庭,20 min/次,1次/d, 1周为1疗程,2个疗程间休息1 d,共3个疗程;西药组用吡拉西坦溶液灌胃,2次/d;假手术组、模型组行灸架固定。治疗结束,取大鼠脑组织,用免疫荧光单染法、蛋白免疫印迹法检测其脑内目的蛋白RhoA、Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶Ⅱ(Rho protein-related curl spiral kinase-Ⅱ,ROCKⅡ)、肌球蛋白轻链磷酸化(Phosphorylation of myosin light chain, P-MLC)的阳性表达。结果:模型组大鼠海马、皮质RhoA、ROCKⅡ、P-MLC蛋白表达高于假手术组(P<0.01);艾灸组、西药组海马和皮质RhoA、ROCKⅡ、P-MLC蛋白表达较模型组低(P<0.05);艾灸组皮质ROCKⅡ蛋白表达较西药组稍低(P<0.05);艾灸组与西药组海马ROCKⅡ、海马与皮质RhoA、P-MLC蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:化瘀通络灸可能是通过下调RhoA/ROCK轴突生长抑制性信号通路相关蛋白的表达提高血管性痴呆大鼠的记忆力,从而发挥治疗血管性痴呆的作用。

参附注射液通过NgR1/Lingo-1/p75NTR复合物及RhoA/ROCKⅡ信号通路减轻心肺复苏脑损伤机制的研究

目的观察参附注射液对心脏骤停后脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用,研究其是否通过调控NgR1/RhoA/ROCKⅡ信号通路及其上游因子Nogo受体相互作用蛋白1(Lingo-1)和p75神经营养因子受体(p75NTR),减轻脑损伤并促进神经轴突再生。方法制备心脏骤停/心肺复苏大鼠模型,将大鼠分为模型组、参附组、拮抗剂组及参拮组。通过ELISA检测各组脑组织中NgR1、p75NTR、Lingo-1、RhoA和RockⅡ的表达水平,并通过HE染色观察脑组织损伤情况。结果ELISA结果显示,心脏骤停后大鼠脑皮层中,模型组的各指标表达在特定时间点显著升高,尤其在3 d时NgR1、p75NTR、RhoA和ROCKⅡ达到峰值,显著高于空白组(P<0.01);参附组、拮抗剂组及参拮组的各指标表达水平均显著低于模型组(P<0.01),其中参拮组在所有时间点均表现出较低的NgR1、p75NTR、Lingo-1、RhoA及ROCKⅡ水平,尤其在3 d和7 d的ROCKⅡ和RhoA表达方面,显著低于模型组(P<0.01),RhoA在7 d时显著低于空白组(P<0.01)。HE染色结果表明,参附组和参拮组在各时间点的脑组织结构恢复效果优于模型组,细胞排列改善,水肿减轻。结论参附注射液通过调控NgR1/RhoA/ROCKⅡ信号通路及其上游因子,减轻了心脏骤停后脑缺血再灌注损伤,促进了神经轴突再生与功能恢复。

Janus激酶/信号转导与转录激活因子信号通路在肠缺血再灌注损伤中的研究进展

缺血再灌注(I/R)是指组织因各种原因引起缺血,一段时间后恢复血供,引起组织细胞再次损伤的临床症状。肠道是I/R损伤发生的常见器官,其发生具有突然性及多样性,临床难以精准预测及有效预防,因此目前研究多集中于再灌注期的症状缓解及组织保护策略上。多种信号通路参与肠I/R损伤的过程,本研究综述Janus激酶/信号转导与转录激活因子(JAK-STAT)信号通路在肠I/R损伤过程中的作用,以期为肠I/R相关治疗提供思路。

电针对肌萎缩侧索硬化症小鼠TDP-43及RhoA/ROCK2信号通路的影响

目的观察电针对肌萎缩侧索硬化症(ALS)小鼠大脑皮层RhoA/ROCK2信号通路的影响,探讨电针改善ALS小鼠运动功能的作用机制。方法将雄性hSOD1G93A小鼠随机分为模型组和电针组,同窝野生雄性小鼠作为空白组,每组12只。小鼠60日龄开始,电针组取“百会”及双侧“天柱”“天枢”,每日电针10 min,连续5 d休息2 d,共3周。采用转棒实验和旷场实验评估小鼠运动功能,尼氏染色观察大脑皮层神经元损伤情况,Western blot检测大脑皮层Tar DNA结合蛋白-43(TDP-43)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、RhoA、ROCK2蛋白表达,免疫荧光染色检测大脑皮层离子钙结合衔接分子1(Iba-1)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性表达。结果与空白组比较,模型组小鼠转棒潜伏期和旷场运动总距离缩短(P<0.01),大脑皮层神经元损伤明显,尼氏体固缩、数量减少(P<0.01),大脑皮层TDP-43、TNF-α、IL-1β、RhoA、ROCK2蛋白表达升高(P<0.01),Iba-1、GFAP阳性表达升高(P<0.01);与模型组比较,电针组小鼠转棒潜伏期和旷场运动总距离延长(P<0.05),大脑皮层神经元损伤程度减轻,尼氏体数量增加(P<0.05),大脑皮层TDP-43、TNF-α、IL-1β、RhoA、ROCK2蛋白表达降低(P<0.05),Iba-1、GFAP阳性表达降低(P<0.05)。结论电针可改善ALS模型小鼠运动功能,其作用机制可能与抑制大脑皮层RhoA/ROCK2信号通路活性进而缓解神经炎性有关。

白芍总苷对木瓜蛋白酶诱导的膝骨性关节炎模型Rho/Rock信号转导通路的调控作用

目的探讨白芍总苷对木瓜蛋白酶诱导的膝骨性关节炎模型Ras同源基因(Rho)/Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(Rock)信号转导通路的调控作用。方法选取清洁级健康雄性SD大鼠90只,随机分为对照组15只及造模组75只。采用木瓜蛋白酶关节腔注射法建立膝骨性关节炎模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、白芍总苷低、中、高浓度组及双醋瑞因组,各15只。比较各组软骨细胞凋亡指数(AI)、关节液白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,以及关节软骨组织RhoA、ROCK1、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)表达水平。结果与模型组比较,关节软骨组织Bcl-2表达水平较高,且白芍总苷低浓度组<白芍总苷中浓度组<白芍总苷高浓度组和双醋瑞因组(P<0.05)。与模型组比较,关节液IL-1β、TNF-α水平较低,关节软骨组织RhoA、Rock1表达水平较低,且白芍总苷低浓度组>白芍总苷中浓度组>白芍总苷高浓度组和双醋瑞因组(P<0.05)。结论白芍总苷能剂量依赖性的抑制木瓜蛋白酶诱导的膝骨性关节炎模型大鼠软骨细胞凋亡,其作用可能与减少炎症因子IL-1β、TNF-α分泌,抑制Rho/Rock信号通路活性有关。

TRIMs家族蛋白在结直肠癌发病相关信号转导通路中的研究进展

结直肠癌(CRC)是人类第三大高发恶性肿瘤,也是常见的癌症相关死亡原因之一,2020年全球CRC新发病例193.16万,死亡病例93.52万,分别位于所有恶性肿瘤的第3位和第2位。CRC的发病机制主要归因于维持上皮完整性稳态的相关信号转导通路失调。目前研究表明CRC组织中许多TRIMs家族蛋白的高表达与病人的低生存率密切相关,并认为参与了CRC的发病机制。大多数TRIMs家族成员可通过直接干扰细胞周期调控、细胞凋亡、上皮间质转化(EMT)以及炎症反应,进而影响CRC的发生和发展。值得注意的是,在特定的肿瘤类型和微环境下,部分TRIMs家族成员被发现具有转录因子活性和RNA稳定的复杂生物学活性。该文通过文献回顾,研究和总结TRIMs家族蛋白在CRC发生发展过程中通过信号转导通路的靶向调控。

Ras同源基因家族成员A/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶信号转导通路在膝骨性关节炎软骨组织中的表达及意义

目的:探究Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)信号转导通路在膝骨性关节炎软骨组织中的表达及意义。方法:将取自因原发性膝骨性关节炎(KOA)行全膝关节置换术(TKA)去除的30例患者的膝关节软骨组织设为观察组,将同期行下肢离断术去除的25例患者的膝关节软骨组织设为对照组。比较两组标本外观形态,HE染色、番红O-固绿染色、电镜扫描结果。通过免疫组织化学(IHC)染色、免疫印迹(Western blot)及实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测RhoA和ROCK蛋白及mRNA的表达变化。结果:观察组股骨髁软骨表面粗糙,缺损明显,呈溃疡状,染色不均匀,潮线不完整。对照组软骨面光滑平整,组织分层明显,颜色均匀。电镜扫描结果显示,观察组软骨组织毁损严重,结构不清;对照组表面光洁,软骨间质均匀。与对照组比较,观察组关节软骨组织中RhoA、ROCK蛋白及mRNA表达量高于对照组(均P<0.05)。结论:RhoA/ROCK信号转导通路中的RhoA、ROCK蛋白及mRNA在KOA患者关节软骨组织中表达明显高于行下肢离断术患者,提示RhoA/ROCK信号转导通路与KOA软骨退变具有相关性,可能对KOA的发生与发展起到了重要作用。

右美托咪定经STAT3/FoxO3a信号转导通路对减轻H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的作用

目的建立大鼠心肌细胞系H9C2细胞缺氧/复氧模型,探究STAT3/FoxO3a信号转导通路在右美托咪定(Dex)保护心肌缺氧/复氧损伤中的作用。方法实验时间:2023年7月至11月,地点:香港大学深圳研究院实验室。使用对数生长期的H9C2心肌细胞进行实验,将其分为不同组别:对照组(C组)、缺氧/复氧组(H/R组,缺氧6 h/复氧12 h)、Dex预处理后缺氧/复氧组(D组),以及添加STAT3抑制剂Stattic+Dex预处理后缺氧/复氧组(S组)。通过CCK8试剂盒检测细胞活力,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞损伤,丙二醛(MDA)试剂盒检测氧化应激水平,使用蛋白免疫印迹法检测相关蛋白的表达。统计学方法采用单因素方差分析。结果H/R组H9C2细胞活力、Bcl-2和P62蛋白水平均低于C组,LDH、MDA、Bax、CC-3、LC3和Beclin-1蛋白水平均高于C组(均P<0.05)。Dex组细胞活力、P-STAT3/STAT3比值及Bcl-2、P62、FoxO3a蛋白水平均高于H/R组,LDH、MDA含量及Bax、CC-3、LC3、Beclin-1蛋白水平均低于H/R组(均P<0.05)。STAT3抑制剂可减弱Dex对心肌细胞损伤的保护作用。结论Dex预处理通过STAT3/FoxO3a信号转导通路,抑制心肌细胞的凋亡和自噬,降低氧化应激水平,减轻缺氧/复氧H9C2细胞损伤,从而减轻心肌缺血再灌注损伤。

hnRNPK调控Wnt/β-catenin信号转导通路抑制乳腺癌细胞铁死亡

背景与目的:核内不均一核糖核蛋白K(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K,hnRNPK)是一种调控基因表达和蛋白翻译的RNA结合蛋白,已被发现与多种肿瘤恶性进展密切相关,但其在乳腺癌中的作用尚未明确。本研究旨在探讨hnRNPK对乳腺癌细胞铁死亡的影响及其作用机制。方法:基于癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)和基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库,联合生信分析hnRNPK在乳腺癌组织及正常组织中的表达及与临床预后的关系;采用实时定量逆转录聚合酶链反应(real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)、免疫组织化学法检测hnRNPK在乳腺癌细胞及组织中的表达;将乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞进行siRNA转染,设置分组为对照组(control)、空载体组(NC)、干扰载体组(si-hnRNPK),采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和平板克隆实验检测细胞增殖能力;高通量RNA测序(RNA-sequencing,RNA-seq)分析hnRNPK富集的生物学功能及信号转导通路,Western blot及活性氧(reactive oxygen species,ROS)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、Fe2+试剂盒检测hnRNPK对铁死亡表型的影响,并利用铁死亡抑制剂(ferrostatin-1,Fer-1)检测敲低hnRNPK对铁死亡的回复作用;通过Western blot检测hnRNPK对Wnt/β-catenin通路蛋白表达的影响。结果:数据库结合生物信息学分析结果显示,hnRNPK在乳腺癌组织中表达上调(P<0.01),hnRNPK高表达组患者总生存期OS低于hnRNPK低表达组(P<0.05);hnRNPK在乳腺癌组织及细胞中呈高表达,敲低hnRNPK后乳腺癌细胞增殖能力减弱(P<0.05);RNA-seq分析发现hnRNPK显著富集铁死亡、凋亡、Wnt/β-catenin信号转导通路;敲低hnRNPK通过促进脂质ROS和MDA产生、Fe2+富集促进乳腺癌细胞铁死亡(P<0.05),且联合Fer-1有效抑制敲低hnRNPK对铁死亡的促进作用(P<0.05);hnRNPK下调导致Wnt/β-catenin信号转导通路中β-catenin、c-Myc表达降低,CK1α、APC、GSK-3β复合物表达升高(P<0.05)。结论:hnRNPK在乳腺癌中呈高表达,敲低hnRNPK通过抑制Wnt/β-catenin信号转导通路促进乳腺癌细胞铁死亡,抑制乳腺癌恶性进展。

小G蛋白Rho/Rock信号转导通路与肾小管上皮细胞转分化

上皮细胞在特定生理和病理情况下向间充质细胞转分化的现象是肿瘤及慢性炎症性疾病中的重要细胞生物学现象。近年来研究发现,细胞内信号转导途径中的MAPK通路、RhoGTP酶/Rho激酶系统(Rho/Rock信号转导通路)、Src激酶、PI3激酶和Smad通路参与调控上皮细胞转分化过程。肾小管上皮细胞在病理条件下可转分化为肌成纤维细胞,其细胞内信号转导机制虽已有初步研究,但尚所知甚少。本文就Rho/Rock信号转导通路在肾小管上皮细胞转分化过程中的作用进行综述。

CD226分子的信号转导通路及功能研究进展

CD226分子属于免疫球蛋白超家族成员,广泛表达于T细胞、自然杀伤(NK)细胞、单核细胞、巨噬细胞等细胞表面。CD226胞外结构域与配体CD155、CD112结合后,激活细胞膜内侧的Src家族激酶Fyn、Src等,进而活化下游PI3K-AKT和VAV-1-ERK通路,调控T细胞的分化、增殖和细胞因子分泌,增强CD8^(+)T细胞、NK细胞的杀伤功能。CD226胞内结构域的S329位点磷酸化后结合淋巴细胞功能相关抗原1,协同促进T细胞、NK细胞免疫突触的形成。临床疾病相关研究发现,CD226促进抗肿瘤免疫应答,CD226^(+)CD8^(+)T细胞的存在是免疫检查点阻断治疗有效的前提。此外,CD226参与1型糖尿病、系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病的发生和发展。深入理解CD226信号转导机制及其介导的功能,可为靶向CD226的肿瘤免疫治疗和自身免疫性疾病治疗提供坚实的理论基础。

JAK2/STAT3信号转导通路与男性不育IVF-ET/ICSI-ET妊娠结局的关系及预测价值

目的分析Janus激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号转导通路与男性不育体外受精-胚胎移植/卵胞质内单精子注射-胚胎移植(IVF-ET/ICSI-ET)妊娠结局的关系及预测价值。方法选取2022年10月至2023年10月成都市锦江区妇幼保健院收治的105例男性不育患者作为研究对象,根据IVF-ET/ICSI-ET临床妊娠结局分为成功组(n=79)和未成功组(n=26)。比较两组基线资料、JAK2/STAT3信号转导通路指标,采用Logistic回归模型分析患者IVF-ET/ICSI-ET结局,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析其预测价值。结果未成功组前向运动精子总数、正常形态精子百分率均低于成功组(P<0.05)。未成功组JAK2、STAT3蛋白表达量均低于成功组(P<0.05)。前向运动精子总数、正常形态精子百分率、JAK2、STAT3均为男性不育患者IVF-ET/ICSI-ET结局成功的保护因素(P<0.05)。ROC曲线显示,联合预测因子预测男性不育患者IVF-ET/ICSI-ET结局成功的曲线下面积大于各协变量(P<0.05)。结论前向运动精子总数、正常形态精子百分率、JAK2和STAT3与男性不育IVF-ET/ICSI-ET临床妊娠结局密切相关,且联合预测效能较高。

动脉瘤性蛛网膜下腔出血患者TGF-β/Smads信号转导通路与认知功能障碍的关系

目的探讨动脉瘤性蛛网膜下腔出血(aneurysmal subarachnoid hemorrhage,aSAH)患者外周血内转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)/苏氨酸激酶受体(aerine-threonine kinase receptors,Smads)信号转导通路相关因子与认知功能障碍的关系。方法回顾性选取2018年10月至2022年3月崇左市人民医院收治的100例aSAH患者的临床资料,根据患者蒙特利尔认知评估量表(montreal cognitive assessment scale,MoCA)评分分组,其中存在认知功能障碍54例,无认知功能障碍46例。比较2组临床资料、外周血TGF-β、Smad1、Smad3及Smad7 mRNA表达水平;多因素分析通路相关因子与aSAH患者认知功能障碍的关系;采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)评估通路相关因子对aSAH患者认知功能障碍的预测价值。结果认知功能障碍组患者外周血TGF-β、Smad1、Smad3、Smad7 mRNA表达水平较无认知功能障碍组高(P<0.05);多因素显示,通路相关因子与aSAH患者认知功能障碍显著相关(P<0.05);ROC显示,通路相关因子联合预测aSAH患者认知功能障碍的曲线下面积(area under the curve,AUC)优于单独预测(P<0.05)。结论aSAH患者外周血内TGF-β/Smads信号转导通路相关因子高表达,提示该通路可能与患者认知功能障碍有关。