Fmoc固相直接法合成Aβ_(1-15)肽疫苗及其免疫活性

【目的】探讨实验室合成Aβ1-15肽疫苗的方法,并对其进行鉴定。【方法】选取Aβ42主要包含B细胞抗原决定簇的片段Aβ1-15,采用8分支多重抗原肽系统,以Fmoc固相直接法合成MAPAβ1-15;用MAPAβ1-15疫苗免疫接种C57BL/6小鼠,ELISA检测血清特异性抗Aβ抗体。【结果】用Fmoc法直接合成方法成功制备MAPAβ1-15疫苗,质谱检测其主要离子峰的相对分子质量为15458,与理论相对分子质量15451十分接近,但还有其它不同分子质量的离子峰存在。以合成的MAPAβ1-15免疫C57BL/6小鼠后,可产生高滴度的特异性抗Aβ42抗体,第3次接种后抗体平均滴度为1:467±196,第5次免疫接种后,平均滴度为1∶4367±1120。对照组的血清抗体检测基本无明显变化。【结论】Fmoc固相直接法可成功合成出MAPAβ1-15,合成出的MAPAβ1-15具有很好免疫活性。

重组四价Aβ_(1-15)腺病毒疫苗接种BALB/c小鼠的免疫量效关系

目的以不同剂量重组四价Aβ1-15腺病毒疫苗(Ad-4×Aβ15)接种于BALB/c鼠,寻求Ad-4×Aβ15疫苗的最佳免疫剂量并观察免疫效果,为疫苗的临床应用奠定基础。方法不同剂量Ad-4×Aβ15鼻黏膜途径接种BALB/c鼠,间接ELISA法检测血清中抗体的滴度的变化情况。Western blot法及Tg2576鼠脑切片免疫组化检测血清中抗体特异性,并对疫苗安全性进行评价。结果109pfu组和108pfu组两者平均抗体滴度差异无统计学意义(P>0.05)。109pfu组及108pfu组与107pfu组的抗体滴度相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。BALB/c小鼠血清中产生的抗体能与Aβ42及Tg2576转基因鼠脑组织内老年斑特异性结合。疫苗接种后未导致小鼠脑、肝、肾病理损害。结论从首次免疫开始,109pfu组和108pfu组两者抗体平均滴度差异无统计学意义(P>0.05),但均与107pfu组差异有统计学意义(P<0.05)。从安全性上,108pfu为小鼠最合适免疫剂量。

间接偶联法合成Aβ_(1-15)多重抗原肽疫苗及其免疫学活性

目的探索合成Aβ1-15重抗原肽疫苗的方法,并对其免疫学活性进行鉴定。方法采用间接偶联法合成8分支Aβ1-15重抗原肽（MAP）,通过高效反相液相色谱（RP-HPLC）、SDS-PAGE以及氨基酸成分分析对其进行初步鉴定。以合成的MAP Aβ1-15C57BL/6小鼠,用ELESA法检测血清特异性抗Aβ抗体。结果间接偶联法合成的MAP Aβ1-15RP-HPLC层析后,呈现为一宽大主峰。SDS-PAGE检测显示,共有8条蛋白带,条带梯度比较均匀,分别为1～8分支的MAP Aβ1-15基酸组份及含量基本与Aβ1-15肽的序列一致。以合成的MAP Aβ1-15免疫C57BL/6小鼠后,可产生高滴度的特异性抗Aβ抗体。结论间接偶联法可成功地合成MAP Aβ1-15,且具有很好的免疫学活性,但合成的MAP产物难以纯化。