Aβ_(1-42)寡聚体诱导的AD模型大鼠行为学观察与NALP1/Caspase-1表达分析

目的研究Aβ1-42寡聚体诱导的阿尔茨海默病(AD)模型大鼠认知功能损害,NALP1、细胞凋亡蛋白酶-1(Caspase-1)在AD模型大鼠大脑皮质和海马的表达。方法将Morris水迷宫初筛后的60只大鼠随机均分为:D-半乳糖组、Aβ1-42纤维组、Aβ1-42寡聚体组、假手术组。分别以Aβ1-42纤维和Aβ1-42寡聚体双侧海马注射建立AD大鼠模型,D-半乳糖组腹腔注射D-半乳糖,假手术组海马注射等量生理盐水。经Morris水迷宫检测其行为学变化,采用免疫组化法、RT-PCR法观察NALP1、Caspase-1在大鼠海马的表达。结果与假手术组相比,其余3组大鼠学习记忆能力明显下降(P<0.05),以Aβ1-42寡聚体组最明显;免疫组化法显示Aβ1-42寡聚体组海马Caspase-1免疫反应阳性神经元数目显著增加,RT-PCR法显示与Aβ1-42纤维组、D-半乳糖组和假手术组比较,Aβ1-42寡聚体组海马Caspase-1和NALP1 mRNA表达增强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Aβ1-42寡聚体海马注射可导致大鼠认知功能障碍,上调NALP1及Caspase1表达。NALP1及Caspase1可能在Aβ1-42寡聚体介导的大鼠认知功能障碍起重要作用,其作用机制有待进一步研究。

Aβ1-42寡聚体对AD大鼠大脑皮质Bcl-2、Caspase-3表达的影响

目的探讨Aβ1-42寡聚体侧脑室灌注对大鼠大脑皮质Bcl-2、Caspase-3表达的影响。方法采用Morris水迷宫法筛选出逃避潜伏期少于60 s的60只雄性大鼠随机均分为4组:正常组、PBS对照组、Aβ1-42纤维组、Aβ1-42寡聚体组。右侧脑室注射Aβ1-42纤维体或Aβ1-42寡聚体复制阿尔茨海默病(AD)模型;PBS对照组注射等量的PBS;正常组不作任何处理。模型建立后第4周,采用Morris水迷宫测试大鼠学习记忆能力的变化,用RT-PCR法检测大鼠皮质Bcl-2、Caspase-3 mRNA的表达,用Western blot法检测AD大鼠皮质Bcl-2蛋白表达以及Caspase-3活性。结果造模后,与正常组和PBS对照组相比,Aβ1-42纤维组、Aβ1-42寡聚体组逃避潜伏期较造模前均延长(P<0.05),Aβ1-42寡聚体组大鼠逃避潜伏期长于Aβ1-42纤维组大鼠的逃避潜伏期;Aβ1-42纤维组及Aβ1-42寡聚体组脑组织中Bcl-2表达均下调(P<0.05),Caspase-3表达均上调(P<0.05),以Aβ1-42寡聚体组较为显著。结论 Aβ1-42纤维、Aβ1-42寡聚体均可导致大鼠认知功能障碍,抑制大鼠皮质Bcl-2 mRNA表达,上调Caspase-3 mRNA表达,活化Caspase-3,其中,Aβ1-42寡聚体对Bcl-2 mRNA和Caspase-3 mRNA表达影响较大。

Aβ_(1-42)对大鼠脑组织SOD、GSH-Px活性及MDA含量的影响

目的探究Aβ1-42寡聚体对大鼠大脑的氧化应激损伤的影响。方法经过Morris水迷宫实验,挑选出逃避潜伏期少于60s的60只实验大鼠随机等分为4组,设为正常组、PBS对照组、Aβ1-42纤维组、Aβ1-42寡聚体组。将Aβ1-42纤维或Aβ1-42寡聚体注射于大鼠右侧脑室制成实验动物模型;PBS对照组采用同样的方法给予注射等量的PBS;正常组不作任何处理。使用可见分光光度计检测大鼠脑组织的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性变化及丙二醛(MDA)的含量水平变化情况。借助于光学显微镜观察苏木精-伊红(HE)染色的各组大鼠海马组织的形态学变化。结果与正常组及PBS组比较,Aβ1-42纤维组和Aβ1-42寡聚体组大鼠皮质MDA含量(分别为7.826±1.696、11.247±1.948)及海马MDA(分别为9.818±1.900、15.090±2.425)含量增加(P<0.05),皮质SOD(分别为29.829±6.340、18.649±6.070)和海马SOD(分别为51.097±8.381、31.634±8.680)活性下降(P<0.05),皮质GSH-Px(分别为133.113±17.506、79.503±19.936)和海马GSH-Px(分别为154.819±23.688、102.800±28.332)活性下降(P<0.05),其中,以Aβ1-42寡聚体组的变化更明显。HE染色可知,Aβ1-42纤维体及Aβ1-42寡聚体可使大鼠大脑海马区的神经元损伤,其中,Aβ1-42寡聚体对神经元的毒性损伤作用更严重。结论 Aβ1-42纤维、Aβ1-42寡聚体都可通过氧化应激损伤引起大鼠脑组织神经元的损伤,以Aβ1-42寡聚体氧化损伤作用更大。

金丝桃苷对Aβ_(1-42)介导的血脑屏障体外模型损伤的影响

目的:探讨金丝桃苷(hyperoside,Hyp)对淀粉样蛋白(Aβ_(1-42))介导的血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)体外模型损伤的影响。方法:本研究以Hyp干预纤维状Aβ_(1-42)介导的b End.3细胞与原代星形胶质细胞(astrocytes,As)BBB体外共培养模型的损伤,通过检测各培养组荧光素钠的通透性,比较各组BBB渗透性的变化,评价Hyp对Aβ_(1-42)介导的BBB的通透性的影响;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测Hyp对Aβ_(1-42)介导的b End.3细胞损伤的细胞活力影响;再以蛋白免疫印迹法(Western blot)检测相关凋亡蛋白,初步探索其保护机制。结果:与模型组比较,Hyp低、中、高浓度组均能降低BBB的通透性(P<0.05,P<0.01);Hyp中、高浓度组能显著提高b End.3细胞活性(P<0.05);Western blot结果显示,经Hyp预处理的组别中,Bax/Bcl-2,cleaved半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)/Caspase-3的及细胞色素-C(Cyt-C)的表达量均明显下降,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:Hyp通过保护脑微血管内皮细胞抑制纤维状Aβ_(1-42)诱导的BBB通透性增加。